专利名称：一种乙酰氧基苯并酮类化合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种天然化合物，更具体地说，本发明涉及一种从木芙蓉中提取分离得到的新颖的乙酰氧基苯并酮类化合物。同时，本发明还涉及所述化合物的制备方法及其在药品中的应用。
背景技术：
木芙蓉07办AsY^y"wA ^7^)为落叶灌木或小乔木，属于锦葵科木槿属植物，主要产于我国黄河流域及华东、华南、西南各地。其花(芙蓉花)、叶(芙蓉叶)和根均可入药。具有清热解毒，消肿排脓，凉血止血等活性。内用
于肺热咳嗽，月经过多，白带；外用治痈肿疮疖，乳腺炎，淋巴结炎，腮腺炎，烧烫伤，毒蛇咬伤，趺打损伤等；植物化学研究表明木芙蓉的主要化学成分为三萜、黄酮、甾醇、酚性物质等。
苯丙素类0 /^/7//;^0/7<3卯/&)是指基本母核具有一个或几个C6 - C3单元
的天然有机化合物类群，广泛存在于天然植物中。已知苯丙素类化合物具有抗菌消炎、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、保肝护肝和碱基修复等作用，对于糖尿病及相关疾病，以及对由于身心压力所致的性功能障碍，学习、记忆能力低下等都具有明显的改善作用。
发明内容
本发明是基于这样一种发现而完成的，即通过对木芙蓉的化学成分进行深入研究，获得一种结构新颖的化合物，并进行了抗HIV-1活性和抗氧化活性筛选，发现了其药用价值。
因此，本发明的目的在于提供一种新的具有药用价值的苯并素类化合物。本发明的另一目的是提供一种所述新化合物的制备方法。本发明进一步的目的是提供所述新化合物在制备抗爱滋病(HIV)和抗氧化的药物方面的用途。
本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。A.本发明从木芙蓉中分离出了一种新化合物，该化合物用下述结构式
其中，MeO-表示甲氧基。
该化合物被命名为3-乙酰氧基-1-(3， 4, 5-三甲氧基苯基)-1-丙酮;
英文名3—acetoxy-l-(3， 4， 5-trimethoxyphenyl)-l-propanone
B.本发明提供了 一种所述的乙酰氧基苯并酮的制备方法，该方法釆用下述步骤
(1) 以木芙蓉为原料，将其全株晾干，粉碎至20 - 30目；
(2) 以乙酸乙脂为溶剂用超声提取3-5次，每次30 - 60分钟，提取液合并、过滤，减压浓缩提取液得到浸膏；
(3 )浸膏用95 %的乙醇溶解，用MCI柱脱去色素和脂肪酸，然后再经过大孔树脂柱脱糖；
(4 )纯化后的提取物用80 ~ 200目的硅胶干法装柱进行硅胶柱层析粗分，将氯仿丙酮按20:1-7:3的配比，进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液；洗脱液的8:2部分进一步用高效液相色谱法分离纯化，流速为2. 5~3. 5mL/min，以甲醇/水为流动相，逐步调整二者比例逐级细分，即得到所需的乙酰氧基苯并酮。
C. 对该化合物进行了抗HIV-1活性筛选，化合物显示出良好的抗HIV-1活性，其治疗指数为86.5。
D. 对该化合物进行了抗氧化活性筛选，化合物显示出良好的抗氧化活性。其半数清除浓度IC50测定结果为10.6 pg/L。
与现有技术相比，本发明具有以下突出优点(l)木芙蓉在我国分布广泛，原料丰富、价格便宜；而且本发明化合物的乙酰氧基苯并酮在木芙蓉中含量相对较高，容易得到。(2)釆用了常规柱层析和高效液相色谱结合的制备方法，化合物制备操作流程简单，所获得的本发明化合物纯度高，后续的工业化生产容易实现。(3)本发明化合物展现出良好的抗艾滋病和抗氧化活性，可为医药工业提供有药用价值的新化合物或先导化合物。
图1是本发明化合物高分辨质谱(HRESIMS);图2是本发明化合物的核磁共振氢谱('H蘭R);图3是本发明化合物的核磁共振炭谱(13C丽R)。
具体实施例方式
通过下面的实施例可以使本专业的技术人员更全面地理解本发明，但并不是对本发明保护范围的限定。实施例1
以云南省大理州的木芙蓉为原料。将其全株(包括根、茎、叶)晾千，粉碎到20目，粉碎后的样品用乙酸乙脂超声提取4次(植物原料和乙酸乙脂的重量比为1:5)，每次40分钟；提取液合并、过滤，减压浓缩提取液得浸膏，浸膏用MCI柱脱色、大孔树脂柱脱糖，然后用粗硅胶(80目)拌样，用100目的硅胶干法装柱进行硅胶柱层析粗分，用氯仿丙酮(20:1 —7:3)进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液。洗脱液的8:2部分用高效液相色谱法分离纯化，流速为3 mL/min,以甲醇/水为流动相，逐步调整二者比例逐级细分，即得到所需乙酰氧基苯并酮化合物。
实施例2
重复实施例1的过程，但有以下不同将原料粉碎到30目；粉碎后的样品用乙酸乙脂超声提取3次(植物原料和乙酸乙脂的重量比为1:6)，每次30min;用150目的硅胶干法装柱进行硅胶柱层析粗分，用氯仿丙酮(20:1-7:3)进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液。洗脱液的8:2部分用高效液相色谱法分离纯化，流速为2.5 mL/min，以甲醇/水为流动相，逐步调整二者比例逐级细分，即得到所需乙酰氧基苯并酮化合物。
实施例3
重复实施例1的过程，但有以下不同将原料粉碎到25目；粉碎后的样品用乙酸乙脂超声提取5次(植物原料和乙酸乙脂的重量比为1:3)，每次50min;提取液合并、过滤，减压浓縮提取液得浸膏，用200目的硅胶干法装柱进行硅胶柱层析粗分，用氯仿丙酮(20:1 —7:3)进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液。洗脱液的8:2部分用高效液相色谱法分离纯化，流速为3.5mL/min,以甲醇/水为流动相，逐步调整二者比例逐级细分，即得到所需乙酰氧基苯并酮化合物。实施例4一一对本发明化合物结构的鉴定
该化合物为无色液体；紫外光谱(溶剂为甲醇)，/U(logs) 275 (3.87),204 (4.86) nm;红外光谱(溴化钾压片)v固2947, 2864, 1755, 1641 ， 1562,1548, 1505, 1450, 1406, 1168， 1138, 1022, 982, 872 cnT；HRESIMS (附图-1)显示其准分子离子峰m/z 305.1004 [M+Na]+ ( calcd 305.1001 ),结合NMR谱确定其分子式为C14H1806，不饱和度为6。 'H和"C丽R谱(见附图-2和附图-3，数据归属见表-l)显示分子中有1个苯环(苯环上有3个甲氧基，2个次甲基双键碳)，l个羰基，l个乙酰基，l个亚甲基，l个氧化的亚甲基，HMBC(附图-4)相关谱可证实该化合物的结构，通过SCIFINDER查询和文献检索证实该化合物为新化合物。
表-l化合物的'H和l3C NMR数据(CDC13)
Mo._4 (mult, J, Hz) 5C (mult.) No._4t (mult, 乂 Hz) 5C (mult.)
"1 133.6 s § 3.46 m t
2 6,79 s106.3 d 9 4.48 m 63.31
3 150.5 s OMe-3 3,86 s 55.9 q
4 143.3 s OMe-4 3.85 s 60.9 q
5 150.5 s OMe-5 3.86 s 55.9 q
6 6.79 s 106.3 d 1' 170.1s_J_199.9 s_^_2.03 s_20.3 q
实施例5
一一对本发明化合物的抗HIV活性检测
1. HIV-1感染性滴定
按Johnson & Byington所述方法改良进行滴定；按Reed&Muench方法计算病毒的TCID5。 (50% Tissue Culture Infection Dose)。
2. 样品对C8166宿主细胞的细胞毒性检测
4 x 107ml C8166细胞悬液100 ul与待测化合物溶液混合，设三个重复孔。同时设置不含化合物的对照孔，温度37。C, 5%(:02培养三天，采用MTT比色法检测细胞毒性。ELx800 ELISA仪测定OD值，测定波长为595nm,参考波长为630 nm。计算得到CCs。值(50% Cytotoxic Concentration),即对50%的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的化合物浓度。3.样品对HIV-lmB诱导C8166细胞病变(CPE)的抑制试验将8xio7mL C8166细胞50 jxL/孔接种到含有100 mL/孔倍比稀釋化合物的96孔细胞培养板上，然后加入50 mL的HIV-lmB稀释上清(M.O. I.0.0016)。设三个重复孔。同时设置不含化合物的正常细胞对照孔。37°C， 5%c02培养三天，倒置显微镜下(100 x )计数合胞体的形成。EC5。(50%
Effective Concentration)为抑制合胞体形成50%时的化合物浓度。
4. 样品对HIV感染细胞的保护作用试验
将8xl0Vml ML细胞50ul/孔接种到含有100 ju 1/孔倍比稀释化合物的96孔细胞培养板上，培养板的一半孔加入50 pi的HIV-1，稀释(M. 0. I. 0. 006)，另一半孔加入50pl培养基。每个浓度梯度2个重复孔，同时设置不含化合物的对照孔和空白对照孔，37°C， 5。/。c02培养，第三天每孔补加100jul新鲜培养基，第五天或第六天釆用MTT比色法检测细胞存活率。ELx800 ELISA仪测定OD值，测定波长为595nm,参考波长为630 nm。用公式计算出化合物对正常细胞的毒性和对HIV-l，感染细胞的保护作用。
5. 计算公式
根据实验结果绘制剂量反应曲线，按Reed&Muench法计算出化合物抑制病毒的50%有效浓度(EC5。)， 50%抑制细胞生长浓度(CC5。)及抗HIV-1活性的治疗指数TI值(Therapeutic index)为TI = CC5()/EC5。。
细胞生长存活率(W =实验孔OD值/对照孔OD值x 100细胞生长抑制率(W = (1-实验孔OD值/对照孔OD值)x 100HIV-1致细胞病变的抑制率W) = (l-实验孔合胞体数/对照孔合胞体数)x 100感染细胞的保护率(％)=
(实验孔OD值-阳性对照孔OD值)/ (阴性对照孔OD值-阳性对照孔OD值)"00
6. 实验结果
实验结果清楚地表明，该化合物显示出一定的抗HIV-1活性，其治疗指数为86.5,揭示了本发明的化合物在制备抗爱滋病的药物中有良好的应用前景。
实施例6一一化合物抗氧化活性检测
抗氧化活性以清除DPPH自由基能力的大小表示；以50)ig/mL为初筛浓度，测定其清除脂性自由基DPPH的活性。取一块costar 96孔板，加入新鲜配制的DPPH乙醇溶液(6. 5 x10 5mol/L) 190^L/孔，加入待测样品10 |aL/孔，空白孔加lOiiL生理盐水，充分混匀，用封板膜封板后室温下避光静置30分钟，于UV2401分光光度计上测定仪上测定各孔吸光度值，测定波长为517 mn;样品对脂性自由基DPPH清除率按下式计算
DPPH清除率( = (A空白-A样品)/ A空白xlOO%A空白空白对照组吸光度值；A样品加样品组吸光度值。
样品平行5次检测，计算半数清除浓度IC50, IC50测定结果为10.6网/L,表明化合物具有良好的抗氧化活性。
权利要求
1.具有下述结构式的乙酰氧基苯并酮化合物其中，MeO-表示甲氧基。
2.—种权利要求l所述化合物的制备方法，其特征在于，该方法采用 以下步骤(1) 以木笑蓉为原料，将其全株晾干，粉碎到20 - 30目；(2) 以乙酸乙脂为提取剂用超声提取3-5次，每次30~60分钟；提取 液合并、过滤，减压浓缩提取液得浸膏；.(3)浸膏用95%的乙醇溶解，用MCI柱脱去色素和脂肪酸，然后再过大 孔树脂柱脱糖；(4 )纯化后得提取物用80 ~ 200目的硅胶干法装柱进行硅胶柱层析粗分， 将氯仿丙酮按20:1-7:3的配比，进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液； 洗脱液的8:2部分用高效液相色谱法分离纯化，流速为2.5-3. 5mL/min,以 甲醇/水为流动相，逐步调整二者比例逐级细分，即得到所需的乙酰氧基苯 并酮。
3. 权利要求1所述的乙酰氧基苯并酮化合物在制备治疗或预防爱滋病的 药物中的应用。
4. 权利要求1所述的乙酰氧基苯并酮化合物在制备抗氧化的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种乙酰氧基苯并酮化合物及其制备方法和应用。该化合物具有右下述结构式本发明将木芙蓉全株晾干粉碎，粉碎后以乙酸乙脂分次用超声提取，合并提取液，过滤，将萃取液浓缩成浸膏，浸膏用MCI柱脱去色素和脂肪酸，然后再过大孔树脂柱脱糖；然后用硅胶柱层析初分，采用高效液相半制备色谱进一步分离，即可获得所需化合物，对该化合物进行了抗HIV-1活性筛选，实验结果显示化合物显示出良好的抗HIV-1和抗氧化活性，其HIV-1治疗指数为86.5，抗氧化半数清除浓度IC50为10.6μg/L。
文档编号B01D15/08GK101597229SQ20091009450
公开日2009年12月9日 申请日期2009年5月22日 优先权日2009年5月22日
发明者徐祎然, 云 戴, 李干鹏, 志 杨, 杨丽娟, 杨海英 申请人:云南民族大学