专利名称：贴壁培养细胞层作为固定相的毛细管及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及毛细管及其制备方法和应用，尤其涉及内壁贴附有作为固定相的活细胞的毛细管色谱柱、其制备方法以及所述毛细管色谱柱通过毛细管电泳在生物医药领域例如药物筛选方面的用途。
背景技术：
大多数生物分子在发挥其生理功能时，都和其目标分子发生特异性相互作用，例如酶和底物、凝集素和多糖蛋白、受体和激素、抗原和抗体、调节蛋白和DNA等。这些特异性相互作用是产生生命现象的基础，是化学和生物化学体系中广泛存在的现象。无论是生物化学的循环级联反应与酶的高选择催化特性，遗传信息的传递、表达与调控，还是细胞增殖、分化与衰老，免疫中的信号、物质传递与调控，均离不开生物分子间的相互作用。对生物分子及其功能配体相互作用的表征已成为生物化学研究的重点之一，这有助于深入认识生物大分子间各种功能的结构基础及作用机制，并有助于新药的发现。目前开发的一些临床使用的新药就是建立在对药物-受体相互作用相当清楚的基础之上。因此，研究生物分子间相互作用的方法至关重要。研究生物分子间相互作用的方法可分为两大类一类是直接测定法，包括UV吸收、荧光强度、核磁共振(NMR)、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、质谱(MQ、拉曼光谱、电位法、 热分析法、表面等离子共振(SPR)等；另一类是分离分析法，包括滤膜分析法、超滤法、超速离心法、色谱法(液相色谱法和薄层色谱法)、电泳法(平板电泳法和毛细管电泳)。后者的优点是能同时提供相互作用的两种分子以及复合物的信息，避免了共存物质的干扰。分离分析法所包括的滤膜分析法、超滤法、超速离心法、色谱法和平板电泳法常常用来研究配体-受体的相互作用，但它们存在一些问题，比如体积改变、Dorman效应、非特异性吸附、结合分子从膜上渗漏、分析时间长、样品消耗大以及由沉淀、后溶解和粘度引起的误差；而以毛细管电泳为基础的技术则是近年来用得较多的一种。用于研究生物分子间相互作用，毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)具有以下优点分离效率高，效率为IO5-IO6板/米；分析时间短，几十秒至十几分钟就可以完成分离；样品消耗量少，进样所需体积可小到ι μ L，消耗体积在l-50nL之间；可以同时研究多种分子对一种分子的结合行为；而且能够在生理条件或者接近生理条件的缓冲液中运行，可以得到较为真实的生物分子相互作用的信息；可通过选用不同的分离模式来适用不同的分离对象，运用灵活；经济，操作费用低；洁净，通常使用水溶液，对环境无害；自动化程度较高。其中，高效毛细管电泳(High Performance CapillaryElectrophoresis,HPCE) 用于研究相互作用的形式有预平衡区带电泳、动力学平衡区带电泳和毛细管电色谱。近几年又陆续出现毛细管内细胞固定化的方法，使得无法分离的受体能够固定于毛细管内，用于配体筛选。趋化因子受体是七次跨膜G蛋白偶联受体(GPCR)，当它与配体相结合时会引起一系列信号途径的激活，促使细胞形成伪足并参与细胞的游走与活化。CC趋化因子受体4(CC Chemokine Receptor 4，CCR4)的配体属于CC趋化因子亚家族，主要有 CCL22/MDC(MacrophageDerived Chemokine) \)XR CCL 17/TARC(Thymus and Activation RelatedChemokine)。在外周血T细胞，自然杀伤细胞，单核巨噬细胞及嗜碱性粒细胞表面均有表达。鉴于CCR4在各种变态反应性炎症和T细胞淋巴瘤中的不良作用，人们寻找CCR4 拮抗剂，如小分子拮抗剂，细胞因子修饰物以及抗体。作为一种新型的拮抗剂，内酰胺类化合物(化合物A)
权利要求
1.一种毛细管，其内壁上具有细胞层，其中所述细胞层表面的受体保持天然构象和生物活性。
2.根据权利要求1的毛细管，其中所述细胞层作为固定相牢固地贴附于所述毛细管的内壁。
3.根据权利要求2的毛细管，其中所述细胞层通过涂层贴附于所述毛细管的内壁。
4.根据权利要求1的毛细管，其中所述细胞为CCR4超表达细胞。
5.根据权利要求1的毛细管，其中所述毛细管为熔融石英毛细管。
6.一种制备权利要求1-5中任一项所述毛细管的方法，包括以下步骤 对毛细管进行前处理；对细胞进行培养，并将经过培养的所述细胞注入所述毛细管； 对所述细胞在所述毛细管内进行培养； 将所述细胞贴附于所述毛细管的内壁；以及对贴附于所述毛细管的所述细胞进行固定处理使得所述细胞牢固地贴附于所述毛细管的内壁，并且使得所述细胞表面表达的受体保持天然构象和生物活性。
7.根据权利要求6的方法，其中所述前处理步骤包括在无菌条件下对所述毛细管进行涂层、冲洗及冲干的处理。
8.根据权利要求6的方法，其中所述固定处理步骤包括对所述细胞采用多聚甲醛进行处理。
9.一种毛细管电泳系统，包括权利要求1-5中任一项所述的毛细管； 用于将样品导入所述毛细管的装置； 对导入所述毛细管的所述样品进行电泳操作的装置；以及对所述样品进行检测的装置。
10.一种毛细管电泳的方法，包括 提供权利要求1-5中任一项所述的毛细管； 提供电泳装置；将样品导入所述毛细管； 对所述样品进行电泳分析；以及对所述样品进行检测分析。
11.一种权利要求1-5中任一项所述毛细管在生物技术领域的用途，其中包括使用所述毛细管进行电泳分析。
12.根据权利要求11的用途，其中所述生物技术包括药物筛选、生物活性大分子与活性配体相互作用或与化合物相互作用、药物成分分析、药物活性成分纯化及鉴定。
13.根据权利要求11的用途，其中所述电泳分析为毛细管电泳或阵列毛细管电泳。
全文摘要
本发明提供了一种将细胞贴附培养于毛细管内壁作为固定相的毛细管、其制备方法以及通过毛细管电泳方法在药物筛选中的用途。针对某些生物活性大分子从细胞中分离纯化时会引起其天然构象的改变，本发明开发了将生物活性大分子超表达的细胞培养在毛细管色谱柱内，细胞贴壁生长后，经固定作为固定相用于研究生物活性大分子与活性配体或化合物相互作用以及药物筛选的毛细管电泳方法。
文档编号B01J20/281GK102380357SQ20101026799
公开日2012年3月21日 申请日期2010年8月31日 优先权日2010年8月31日
发明者凌笑梅, 帕孜来提·亚库甫, 张颖妹, 王应, 綦辉 申请人:北京大学