一种葛根素的分离纯化方法
【专利摘要】本发明公开了一种葛根素的分离纯化方法。本发明提供了一种葛根素的分离纯化方法，其包括以下步骤：以乙酸乙酯、正丁醇和水组成的三元溶剂体系为分离溶剂体系，采用高速离心分配色谱法对葛根素提取物进行分离纯化得到葛根素即可；所述的高速离心分配色谱法在高速离心分配色谱仪中进行。本发明的葛根素的分离纯化方法步骤简单、分离时间短、分离能力强、分离到的葛根素纯度高（HPLC纯度大于99%）、回收率高（大于65%），具有良好的市场开发前景。
【专利说明】一种葛根素的分离纯化方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种葛根素的分离纯化方法。
【背景技术】
[0002]葛根为豆科植物葛Pueraria lobata (Wi I Id.) Ohwi的干燥根，习称野葛，系常用中药，具有解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络，解酒毒之功效。葛根含有多种有效成分，异黄酮类化合物是葛属植物的主要成分之一，其中葛根素(Puerarin)是本属植物的主要有效成分。葛根素的药理作用十分广泛，具有降血脂，抗炎，抗心律失常、对心肌缺血的保护作用、肾保护、抗氧化、抗缺血再灌注损伤、抗肝缺血再灌注损伤、抗酒精中枢抑制、调控骨代谢、降血糖、利尿等作用。
[0003]随着葛根素的药理作用的研究深入，葛根素的分离纯化也越来越受到人们的重视。目前葛根素纯化方法主要有:大孔吸附树脂法、柱层析、酸水解有机溶剂萃取法及金属离子络合法等。如专利CN1154849A采用正丁醇萃取后经三氧化二铝柱脱色得到纯度97%以上的葛根素产品；专利CN1927876A经过离子交换大孔树脂层析再经过大孔树脂层析可以获得葛根素含量很高的葛根素提取物；专利CN1398872A通过大孔吸附树脂及硅胶柱层
析可得到高纯度葛根素。葛根素的化学结构式如下式所示:
[0004]
【权利要求】
1.一种葛根素的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤:以乙酸乙酯、正丁醇和水组成的三元溶剂体系为分离溶剂体系，采用高速离心分配色谱法对葛根素提取物进行分离纯化得到葛根素即可；所述的高速离心分配色谱法在高速离心分配色谱仪中进行。
2.如权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的高速离心分配色谱仪为厂家为法国Rousselet Robatel，型号为FCPC A或FCPC C的高速离心分配色谱仪。
3.如权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的高速离心分配色谱仪的转速为1800r/min~2300r/min。
4.如权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的三元溶剂体系中乙酸乙酯、正丁醇和水的体积比为(3~8):2:(6~10)，优选2:1:3。
5.如权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的高速离心分配色谱法采用的三元溶剂体系充分混合后分层，取下层溶液为固定相，上层溶液为流动相。
6.如权利要求5所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的固定相和流动相过滤后超声备用，所述的超声的频率为16KHz~28KHz。
7.如权利要求5所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的高速离心分配色谱法，将葛根素提取物溶解于所述的固定相和流动相形成的混合溶液中，过滤后上样；所述的固定相和流动相形成的混合溶液中所述的流动相与所述的固定相的体积比优选1:1~1:5。
8.如权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的葛根素提取物为采用普通超声提取法、循环超声提取法或者回流提取法得到的葛根素提取物；所述的葛根素提取物的纯度为11%~18%，所述的纯度是指葛根素的质量占葛根素提取物总质量的百分比。
9.如权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的高速离心分配色谱仪的流速为 2.0mT,/min ~7.0mL/min,优选 2.0mT,/min ~3.0mT,/min。
10.如权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的高速离心分配色谱仪的上样浓度为10mg/mL~30mg/mL ;所述的上样浓度是指葛根素提取物的质量与流动相的体积的比例。
11.如权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:所述的 葛根素分离纯化方法，包括以下步骤: 步骤1:将三元溶剂体系充分混合后分层，取下层溶液为固定相、上层溶液为流动相；将葛根素提取物溶解于固定相与流动相的混合溶液中，形成葛根素提取物的溶液； 步骤2:高速离心分配色谱仪在descending模式下充满固定相；转换成ascending模式，后再将流动相泵入色谱柱；待体系平衡完毕后，由进样阀注入步骤I中制得的葛根素提取物的溶液，然后根据检测器图谱接收目标组分即可。
12.如权利要求11所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于:步骤2中，所述的在高速离心分配色谱仪在descending模式下充满固定相,在高流速和低转速下进行,所述的高流速是指流速在5mL/min~10mL/min ;所述的低转速是指转速在600r/min~800r/min ； 步骤2中，所述的转换成ascending模式，后再将流动相泵入色谱柱中，转换成ascending 模式后提高转速至 1800r/min ~2300r/min。
【文档编号】B01D15/10GK103709152SQ201310729209
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年12月25日 优先权日:2013年12月25日
【发明者】杨义芳, 孙百玲, 谢欣辛 申请人:上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院