本发明涉及蛋黄磷脂组合物及其制造方法、以及使用该蛋黄磷脂组合物的脂肪乳剂及脂解制剂。
背景技术：
蛋黄磷脂在例如化妆品领域、药品领域被广泛用作脂肪乳剂、脂解制剂等乳化剂(专利文献1)。近年来，寻求使用了蛋黄磷脂的、高纯度且稳定性优异的乳化剂。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:国际公开第wo2009/093650号说明书
技术实现要素：
发明要解决的问题
本发明提供用于制造高纯度且稳定性优异的乳化物的蛋黄磷脂组合物及其制造方法、以及使用了该蛋黄磷脂组合物的脂肪乳剂及脂解制剂。
用于解决问题的方案
本申请的发明人发现，通过将蛋黄磷脂中的溶血磷脂酰乙醇胺的含量及氨基酸的含量调节为规定量，能够制造高纯度且稳定性优异的乳化物，从而完成了本发明。
1.本发明的一方式的蛋黄磷脂组合物，其溶血磷脂酰乙醇胺的含量为1质量％以下、并且氨基酸的含量为50mg/100g以上且500mg/100g以下。
2.根据上述1所述的蛋黄磷脂组合物，其中，在将该氨基酸的总量设为100质量份时，所述氨基酸中的丝氨酸及苏氨酸的合计比例可以为10质量份以上。
3.根据上述1或2所述的蛋黄磷脂组合物，其中，在将该氨基酸的总量设为100质量份时，所述氨基酸中的丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸及精氨酸的合计比例可以为10质量份以上。
4.根据上述1～3中任一项所述的蛋黄磷脂组合物，其中，在将该蛋黄磷脂的总量设为100质量份时，所述氨基酸的含量相对于所述蛋黄磷脂的含量可以为0.06质量份以上且0.6质量份以下。
5.根据上述1～4中任一项所述的蛋黄磷脂组合物，其中，可以含有磷脂酰胆碱，并且在将所述磷脂酰胆碱的含量设为100质量份时，所述氨基酸的含量相对于该磷脂酰胆碱为0.1质量份以上且0.8质量份以下。
6.根据上述1～5中任一项所述的蛋黄磷脂组合物，其中，可以含有磷脂酰乙醇胺，并且在将所述磷脂酰乙醇胺的含量设为100质量份时，上述氨基酸的含量相对于该磷脂酰乙醇胺的含量为0.2质量份以上且10质量份以下。
7.根据上述1～6中任一项所述的蛋黄磷脂组合物，其中，可以含有磷脂酰胆碱65质量％以上，并且含有磷脂酰乙醇胺5质量％以上。
8.根据上述1～7中任一项所述的蛋黄磷脂组合物，其中，可以含有磷脂酰乙醇胺，并且在将所述磷脂酰乙醇胺的含量设为100质量份时，上述溶血磷脂酰乙醇胺的含量相对于该磷脂酰乙醇胺的含量为3质量份以上且15质量份以下。
9.根据上述1～8中任一项所述的蛋黄磷脂组合物，其中，胆甾醇的含量可以为1.5质量％以下。
10.根据上述1～9中任一项所述的蛋黄磷脂组合物，其中，游离脂肪酸的含量可以为1.0质量％以下。
11.本发明的一方式的脂肪乳剂，其包含：含有上述1～10中任一项所述的蛋黄磷脂组合物的乳化颗粒、和分散有该乳化颗粒的水相。
12.本发明的一方式的脂解制剂，其包含：含有上述1～10中任一项所述的蛋黄磷脂组合物和药剂的乳化颗粒、以及分散有该乳化颗粒的水相。
13.本发明的一方式的蛋黄磷脂组合物的制造方法，其包含如下工序：将第一蛋黄磷脂组合物与第二蛋黄磷脂组合物混合，得到最终蛋黄磷脂组合物，所述第一蛋黄磷脂组合物的溶血磷脂酰乙醇胺的含量为1质量％以下、并且氨基酸的含量为0mg/100g以上且250mg/100g以下，所述第二蛋黄磷脂组合物的溶血磷脂酰乙醇胺的含量超过1质量％、并且氨基酸的含量为250mg/100g以上且500mg/100g以下，所述最终蛋黄磷脂组合物的溶血磷脂酰乙醇胺的含量为1质量％以下且氨基酸的含量为50mg/100g以上且700mg/100g以下。
14.本发明的一方式的蛋黄磷脂组合物的制造方法，其包含如下工序：第一树脂处理工序，使用第一离子交换树脂对溶血磷脂酰乙醇胺的含量超过1质量％且3质量％以下、并且氨基酸的含量超过500mg/100g的第一原料蛋黄磷脂组合物进行树脂处理，由此得到溶血磷脂酰乙醇胺的含量为1质量％以下且氨基酸的含量为0mg/100g以上且小于250mg/100g的第一蛋黄磷脂组合物；第二树脂处理工序，使用第二离子交换树脂对溶血磷脂酰乙醇胺的含量超过1质量％且3质量％以下、并且氨基酸的含量超过500mg/100g的第二原料蛋黄磷脂组合物进行树脂处理，由此得到溶血磷脂酰乙醇胺的含量超过1质量％且氨基酸的含量为250mg/100g以上且500mg/100g以下的第二蛋黄磷脂组合物；以及，将所述第一蛋黄磷脂组合物与所述第二蛋黄磷脂组合物混合，得到溶血磷脂酰乙醇胺的含量为1质量％以下且氨基酸的含量为50mg/100g以上且500mg/100g以下的最终蛋黄磷脂组合物的工序。
15.根据上述14所述的蛋黄磷脂组合物的制造方法，其中，在所述第一树脂处理工序中，蛋黄磷脂组合物中的氨基酸含量的每分钟的减少速度可以为100mg/100g以上且200mg/100g以下，在所述第二树脂处理工序中，蛋黄磷脂组合物中的氨基酸含量的每分钟的减少速度可以为5mg/100g以上且30mg/100g以下。
16.根据上述14或15所述的蛋黄磷脂组合物的制造方法，其中，在所述混合的工序中，所述第一蛋黄磷脂组合物/所述第二蛋黄磷脂组合物(质量比)可以为0.2以上且5以下。
发明的效果
根据上述1～10中任一项所述的蛋黄磷脂组合物，通过使溶血磷脂酰乙醇胺的含量为1质量％以下、并且使氨基酸的含量为50mg/100g以上且500mg/100g以下，从而蛋黄磷脂中的氨基酸量被调节到上述范围，因此使用该蛋黄磷脂组合物可以制造高纯度且稳定性优异的乳化物。
上述11所述的脂肪乳剂通过包含含有上述1～10中任一项所述的蛋黄磷脂组合物的乳化颗粒、和分散有该乳化颗粒的水相，从而为高纯度且乳化稳定性优异。
上述12所述的脂解制剂通过包含含有上述1～10中任一项所述的蛋黄磷脂组合物和药剂的乳化颗粒、以及分散有该乳化颗粒的水相，从而为高纯度且乳化稳定性优异。
根据上述13所述的蛋黄磷脂组合物的制造方法，通过将上述第一蛋黄磷脂组合物和上述第二蛋黄磷脂组合物混合，从而可以用简便且高效的方法得到溶血磷脂酰乙醇胺的含量为1质量％以下、并且氨基酸的含量为50mg/100g以上且700mg/100g以下的最终蛋黄磷脂组合物。
根据上述14～16中任一项所述的蛋黄磷脂组合物的制造方法，通过包含上述第一树脂处理工序、上述第二树脂处理工序、以及得到上述最终蛋黄磷脂组合物的工序，从而可以用简便且高效的方法制造溶血磷脂酰乙醇胺的含量为1质量％以下、并且氨基酸的含量为50mg/100g以上且500mg/100g以下的蛋黄磷脂组合物。
具体实施方式
以下参照附图详细地说明本发明。需要说明的是，本发明中只要没有特别声明则“份”表示“质量份”、“％”表示“质量％”。
本发明的一实施方式的蛋黄磷脂组合物，其溶血磷脂酰乙醇胺(以下也称为“lpe”。)的含量为1质量％以下、并且氨基酸的含量为50mg/100g以上且500mg/100g以下。
根据本实施方式的蛋黄磷脂组合物，lpe的含量为1质量％以下、并且氨基酸的含量为50mg/100g以上且500mg/100g以下，从而使用该蛋黄磷脂组合物可以制造高纯度且稳定性优异的乳化物。
本发明人们发现，用于对使用本实施方式的蛋黄磷脂组合物得到的乳化物进行灭菌的高温处理时所发生的ph降低，起因于除去lpe时与lpe一起被除去的氨基酸的含量。ph降低是使该乳化物的稳定性降低的因素之一。
更具体而言，本实施方式的蛋黄磷脂组合物的lpe的含量抑制为1质量％以下、并且氨基酸的含量调节为50mg/100g以上且500mg/100g以下，因此使用本实施方式的蛋黄磷脂组合物的乳化物为高纯度、即使经过灭菌时的高温处理该乳化物的ph降低也少，稳定性也优异。
(蛋黄磷脂组合物)
本发明中，“蛋黄磷脂组合物”是指含有来自蛋黄的磷脂的组合物。
(磷脂)
作为磷脂，可列举：磷脂酰胆碱(以下也称为“pc”。)、磷脂酰乙醇胺(以下也称为“pe”。)、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰乙二醇及磷脂酰聚乙二醇、磷脂酸、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、它们的溶血化物以及鞘磷脂，可以含有其中的一种或两种以上。这些均为来自蛋黄的磷脂。
本实施方式的蛋黄磷脂组合物中的蛋黄磷脂的含量(总量)为65质量％以上且小于100质量％，通常为99.95质量％以下，从可以制造稳定性更优异的乳化物的观点出发，优选为75质量％以上；另一方面，为99.5质量％以下，更优选为95质量％以下。
其中，本实施方式的蛋黄磷脂组合物例如可以含有pc65质量％以上(优选为68质量％以上，更优选为70质量％以上；另外，优选为99质量％以下，更优选为95质量％以下，更优选为90质量％以下)，可以含有pe5质量％以上(优选为7质量％以上，更优选为10质量％以上；另外，优选为20质量％以下)。
本实施方式的蛋黄磷脂组合物中所含的lpe的含量为1质量％以下，可以为0.8质量％以下。通过使lpe的含量为上述上限以下，可以得到高纯度且稳定性高的蛋黄磷脂组合物。lpe的含量的下限值没有特别限定，通过为0.01质量％以上、进而为0.1质量％以上，容易得到稳定性高的蛋黄磷脂组合物。
另外，从稳定性更优异的角度，本实施方式的蛋黄磷脂组合物含有pe，在将该pe的含量设为100质量份时，上述lpe的含量相对于该pe的含量优选为2质量份以上且15质量份以下，更优选为3质量份以上，更优选为10质量份以下。
(氨基酸)
本实施方式的蛋黄磷脂组合物中含有两种以上氨基酸的情况下，氨基酸的含量为两种以上氨基酸的总量。在本实施方式的蛋黄磷脂组合物中，从可以进一步提高稳定性的观点出发，氨基酸的含量(总量)优选为50mg/100g以上；另外，从可以进一步提高磷脂组合物的纯度的观点出发，更优选为500mg/100g以下；另一方面，优选为100mg/100g以下，更优选为400mg/100g以下。
作为氨基酸，可列举：必需氨基酸(色氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、组氨酸)、非必需氨基酸(精氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、脯氨酸、天冬氨酸、谷氨酸)或上述以外的氨基酸。其中，从可以制造稳定性更优异的乳化物的观点出发，优选含有选自丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸及精氨酸中的至少一种，更优选含有丝氨酸和/或苏氨酸。
在本实施方式的蛋黄磷脂组合物中，从可以制造稳定性更优异的乳化物的观点出发，在将上述氨基酸的总量设为100质量份时，该氨基酸中的丝氨酸与苏氨酸的合计比例更优选为10质量份以上，进而更优选为20质量份以上。另一方面，该氨基酸中的丝氨酸与苏氨酸的合计比例的上限没有特别限制，例如，从难以得到与含量相匹配的效果的角度出发，可以设为50质量份以下。
另外，在本实施方式的蛋黄磷脂组合物中，从可以制造稳定性更优异的乳化物的观点出发，在将上述氨基酸的总量设为100质量份时，该氨基酸中的丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸及精氨酸的合计比例优选为10质量份以上，更优选为15质量份以上，进而更优选为20质量份以上。另一方面，该氨基酸中的丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸及精氨酸的合计比例的上限没有特别限制，从难以得到与含量相匹配的效果的角度出发，优选为70质量份以下。
从可以制造稳定性更优异的乳化物的观点出发，在本实施方式的蛋黄磷脂组合物中，在将pc的含量设为100质量份时，上述氨基酸的含量相对于该pc的含量优选为0.1质量份以上且0.8质量份以下，更优选为0.2质量份以上；另一方面，更优选为0.7质量份以下。
从稳定性更优异的角度，本实施方式的蛋黄磷脂组合物含有pe，在将该pe的含量设为100质量份时，上述氨基酸的含量相对于该pe的含量优选为0.2质量份以上且10质量份以下，更优选为0.5质量份以上，更优选为5质量份以下。
另外在这种情况下，从可以制造稳定性更优异的乳化物的观点出发，在本实施方式的蛋黄磷脂组合物中，在将上述蛋黄磷脂(总量)的含量设为100质量份时，上述氨基酸的含量相对于该蛋黄磷脂(总量)的含量优选为0.06质量份以上且0.6质量份以下，更优选为0.1质量份以上，更优选为0.5质量份以下。
(胆甾醇)
在本实施方式的蛋黄磷脂组合物中，从可以制造稳定性更优异的乳化物的观点出发，胆甾醇(以下也称为“ch”。)的含量可以为1.5质量％以下，优选为1.0质量％以下，更优选为0.8质量％以下；另一方面，可以设为0.01质量％以上。
在本发明中，胆甾醇的含量为利用以下的方法测定出的值。
向10ml具塞试管中称量样品0.5g，用氯仿溶解后，定容到10ml。将其用iatroscanth-10按照操作步骤进行展开、测定。由于灵敏度因脂质组成而异，因此对甘油三酯、胆甾醇，将面积值(area)乘以以下的系数而得到修正面积值。
甘油三酯×0.9
胆甾醇×0.5
基于所得到的修正面积值求出胆甾醇的面积百分率，算出胆甾醇的含量。
(游离脂肪酸)
在本实施方式的蛋黄磷脂组合物中，从可以抑制ph降低、由此可以制造稳定性更优异的乳化物的观点出发，游离脂肪酸的含量可以为1.0质量％以下，优选为0.8质量％以下。
本发明中，游离高级脂肪酸不包括构成植物油、磷脂的脂肪酸酯的形态的脂肪酸。高级脂肪酸为例如直链状或支链状的碳数6-22个(优选为12-20个)的饱和或不饱和脂肪酸。作为高级脂肪酸，可列举例如油酸、硬脂酸、亚油酸、棕榈酸、亚麻酸、肉豆蔻酸，优选油酸。
本发明中，游离脂肪酸的含量通过以下的方法来确认。向样品1.0g中加入异丙醇并溶解，准确地制备25ml试样溶液。另外，将棕榈酸溶解于庚烷而制备含有棕榈酸1.0质量％或0.8质量％的标准溶液。从上述制备的试样溶液及标准溶液中量取1ml至试管中，用吸量管向其中加入将异丙醇：庚烷：0.5mol/l硫酸按照40：10：1混合而得的混合液5.0ml，振荡混合1分钟后放置10分钟。然后，向试样溶液中加入庚烷3ml和蒸馏水3ml，向标准溶液中加入庚烷2ml和蒸馏水4ml，密闭并混合，放置15分钟以上使其分层。准确量取各上层液3ml至具塞试管中，加入尼罗蓝试剂1ml。立即吹入氮气将试管内用氮气置换，然后用0.01mol/l氢氧化钠溶液滴定至液体变为紫色为止。通过滴定试样溶液所需的氢氧化钠溶液的量比滴定标准溶液所需的氢氧化钠溶液的量少，由此确定样品中的脂肪酸含量为1.0质量％或0.8质量％。
从稳定性更优异的角度，本实施方式的蛋黄磷脂组合物的ph优选为6.5以上且10以下，更优选为7.0以上；另一方面，更优选为9.5以下。
(作用效果)
使用本实施方式的蛋黄磷脂组合物制备的脂肪乳剂具有灭菌时ph不易降低的性质。本发明人们发现，含有lpe的含量为1质量％以下、并且氨基酸的含量为50mg/100g以上且500mg/100g以下的蛋黄磷脂组合物的脂肪乳剂在灭菌时不易发生ph降低。
我们推测，含有本实施方式的蛋黄磷脂组合物的脂肪乳剂在灭菌时不易发生ph降低是由于该蛋黄磷脂组合物中所含的氨基酸。更具体而言，我们推测通过含有上述所规定的量的该氨基酸，该氨基酸抑制该脂肪乳剂的ph降低，由此可以保持该脂肪乳剂的乳化稳定性。
2.蛋黄磷脂组合物的制造方法
本发明的一实施方式的蛋黄磷脂组合物的制造方法包含如下工序：
将lpe的含量为1质量％以下、并且氨基酸的含量为0mg/100g以上且250mg/100g以下的第一蛋黄磷脂组合物(以下也简称为“第一蛋黄磷脂组合物”。)和lpe的含量超过1质量％、并且氨基酸的含量为250mg/100g以上且700mg/100g以下的第二蛋黄磷脂组合物(以下也简称为“第二蛋黄磷脂组合物”。)混合，得到溶血磷脂酰乙醇胺的含量为1质量％以下、并且氨基酸的含量为50mg/100g以上且500mg/100g以下的最终蛋黄磷脂组合物(“上述实施方式的蛋黄磷脂组合物”、以下也简称为“最终蛋黄磷脂组合物”。)。
需要说明的是，也可以将第一蛋黄磷脂组合物和后述的第一原料蛋黄磷脂组合物混合来得到最终蛋黄磷脂组合物。
另外，除了上述第一蛋黄磷脂组合物和上述第二蛋黄磷脂组合物以外，也可以在不损害本发明的效果的范围内进一步混合另行处理过的蛋黄磷脂组合物、氨基酸等其它成分而得到最终磷脂组合物。
根据本实施方式的蛋黄磷脂组合物的制造方法，通过包含将上述第一蛋黄磷脂组合物与上述第二蛋黄磷脂组合物混合而得到上述最终蛋黄磷脂组合物的工序，可以用简便且高效的方法制造含有微量的(即，氨基酸的含量为50mg/100g以上且500mg/100g以下)氨基酸且lpe的含量降低至1质量％以下的、灭菌时ph不易降低的最终蛋黄磷脂组合物。
上述第一蛋黄磷脂组合物既可以通过将市售的氨基酸和市售的蛋黄磷脂混合来制备，或者也可以通过后述的第一树脂处理工序来制备。
其中，从使lpe的含量及氨基酸的含量降低到规定的范围内方面出发，上述第一蛋黄磷脂组合物优选通过后述的第一树脂处理工序来制备。
另外，上述第二蛋黄磷脂组合物既可以通过将市售的氨基酸和市售的蛋黄磷脂混合来制备，或者，也可以通过后述的第二树脂处理工序来制备，或者，还可以通过将利用后述的第二树脂处理工序制备的物质和市售的氨基酸和/或市售的蛋黄磷脂混合来制备。
从使lpe的含量及氨基酸的含量降低到规定的范围内方面出发，上述第二蛋黄磷脂组合物优选通过后述的第二树脂处理工序来制备。
(使用树脂处理的本实施方式的蛋黄磷脂组合物的制造方法的一例)
本实施方式的蛋黄磷脂组合物的制造方法的一例包含如下工序：后述的第一树脂处理工序、后述的第二树脂处理工序、以及将上述第一蛋黄磷脂组合物和上述第二蛋黄磷脂组合物混合而得到最终蛋黄磷脂组合物(上述实施方式的蛋黄磷脂组合物)的工序(以下也简称为“混合的工序”。)。
本发明人们发现：使用了通过树脂处理而lpe减少的蛋黄磷脂组合物的脂肪乳剂在灭菌时ph容易降低、降低的原因是在树脂处理时蛋黄磷脂组合物中的氨基酸与lpe一起被除去、以及在树脂处理时有氨基酸与lpe相比被优先除去的倾向。
与此相对地，根据本例的蛋黄磷脂组合物的制造方法，通过包含上述第一树脂处理工序、上述第二树脂处理工序和上述得到最终蛋黄磷脂组合物的工序，可以用简便且高效的方法制造含有微量的氨基酸且lpe的含量降低至1质量％以下的、灭菌时ph不易降低的最终蛋黄磷脂组合物。
即，利用上述第一树脂处理工序得到氨基酸(例如氨基酸及lpe)的含量相对少的第一蛋黄磷脂组合物，利用上述第二树脂处理工序得到氨基酸(例如氨基酸及lpe)的含量相对多的第二蛋黄磷脂组合物，通过将该第一蛋黄磷脂组合物与该第二蛋黄磷脂组合物混合，可以用简便且高效的方法制造最终蛋黄磷脂组合物。
(第一树脂处理工序)
上述第一树脂处理工序为如下工序：使用第一离子交换树脂对lpe的含量超过1质量％且3质量％以下、并且氨基酸的含量超过500mg/100g的第一原料蛋黄磷脂组合物进行树脂处理，由此得到上述第一蛋黄磷脂组合物。
在上述第一树脂处理工序及后述的第二树脂处理工序中，对树脂处理的方法没有特别限定，例如，既可以通过将树脂和原料蛋黄磷脂组合物的溶液在溶剂中混合来进行，或者也可以通过将树脂填充于筒状的容器并使原料蛋黄磷脂组合物的溶液在该容器中通过来进行。
上述第一树脂处理的时间为例如1～30分钟，优选为1分钟以上且小于10分钟，该第一树脂处理的时间优选比后述的第二树脂处理的时间短。另外就上述第一树脂处理的温度而言，例如在20～40℃下进行。
根据上述第一树脂处理工序，由于与后述的第二树脂处理工序相比氨基酸(以及lpe)的除去能力高，因此可以在短时间内得到减少了氨基酸(以及lpe)的第一蛋黄磷脂组合物。
(第二树脂处理工序)
上述第二树脂处理工序为如下工序：通过使用第二离子交换树脂对lpe的含量超过1质量％且3质量％以下、并且氨基酸的含量超过500mg/100g的第二原料蛋黄磷脂组合物进行树脂处理，由此得到上述第二蛋黄磷脂组合物。
上述第二树脂处理的时间为例如10分钟～1小时，优选为20分钟以上且小于40分钟。另外就上述第二树脂处理的温度而言，例如在20～40℃下进行。
根据上述第二树脂处理工序，由于与上述第一树脂处理工序相比氨基酸以及lpe的除去能力低，因此可以得到与第一蛋黄磷脂组合物相比氨基酸(以及lpe)的含量多的第二蛋黄磷脂组合物。
(原料蛋黄磷脂组合物)
(第一及第二)原料蛋黄磷脂组合物通常含有蛋黄磷脂(总量)80质量％以上且99质量％以下，例如，原料蛋黄磷脂组合物中，蛋黄磷脂(总量)中的pc的含有比例为60质量％以上且80质量％以下，pe的含有比例为5质量％以上且20质量％以下。
另外，原料蛋黄磷脂组合物中的lpe的含量优选超过1质量％；另一方面，优选为3质量％以下；另外，氨基酸的含量通常超过500mg/100g。如果在上述范围内，则第一原料蛋黄磷脂组合物和第二原料蛋黄磷脂组合物可以使用相同原料，另外也可以使用不同原料。
需要说明的是，原料蛋黄磷脂组合物优选含有选自丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸及精氨酸中的至少一种，更优选含有丝氨酸和/或苏氨酸。需要说明的是，本实施方式的蛋黄磷脂组合物中所含的氨基酸既可以是原料蛋黄磷脂组合物原本含有的，或者也可以是添加到用离子交换树脂进行处理而得的蛋黄磷脂组合物中的，可以设为原料蛋黄磷脂组合物原本含有的。
(原料蛋黄磷脂组合物的制造)
在本实施方式的蛋黄磷脂组合物的制造方法中，上述原料蛋黄磷脂组合物是对蛋黄进行醇提取后除去该醇、然后添加上述蛋黄磷脂的18倍以上的体积的丙酮后除去该丙酮而得到的。
作为醇提取中所使用的醇，没有特别限定，可列举例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、2-丁醇、叔丁醇，其中优选使用碳原子数为1以上且3以下的低级醇。通过该醇提取而得到蛋黄的醇提取物。另外，从lpe的除去效率更优异的角度，提取溶剂中的醇浓度优选设为超过95质量％，更优选设为96质量％以上。
另外，在从蛋黄的醇提取物中除去醇后，添加上述原料蛋黄磷脂组合物的18倍以上的体积的丙酮，除去该丙酮，由此可以得到降低了胆甾醇含量的蛋黄磷脂组合物。该情况下，从进一步降低胆甾醇含量的角度，所添加的丙酮的量优选为20倍以上。
(离子交换树脂)
作为上述第一树脂处理工序及上述第二树脂处理工序中所使用的第一及第二离子交换树脂，可列举例如强酸性或弱酸性的阳离子交换树脂(amberliteir120b、ir124、200ct、252、fpc3500、irc76)、或强碱性或弱碱性的阴离子交换树脂(ira400j、ira402bl、ira404j、ira458rf、ira67)。这些可以单独使用或将多种组合使用，优选将阳离子交换树脂和阴离子交换树脂组合使用，更优选将阳离子交换树脂和阴离子交换树脂以超过1/1(v/v)且1/3(v/v)以下的比例来使用。
(氨基酸的减少速度)
上述第一树脂处理工序与上述第二树脂处理工序相比，蛋黄磷脂组合物中的氨基酸(以及lpe)的减少速度高。因此，上述第一树脂处理工序中得到的上述第一蛋黄磷脂组合物与上述第二树脂处理工序中得到的上述第二蛋黄磷脂组合物相比氨基酸(例如氨基酸及lpe)的含量少。即，通过上述第一树脂处理工序，可以得到与上述第二蛋黄磷脂组合物相比氨基酸(例如氨基酸及lpe)的含量少的上述第一蛋黄磷脂组合物。
更具体而言，在上述第一树脂处理工序中，蛋黄磷脂组合物中的氨基酸含量的每分钟的减少速度优选为100mg/100g以上且250mg/100g以下，更优选为150mg/100g以上；另一方面，更优选为200mg/100g以下。
另外，在上述第二树脂处理工序中，蛋黄磷脂组合物中的氨基酸含量的每分钟的减少速度为3mg/100g以上且30mg/100g以下，更优选为5mg/100g以上；另一方面，更优选为25mg/100g以下。
例如，优选按照使上述第一树脂处理工序及上述第二树脂处理工序中的氨基酸(以及lpe)的减少速度在上述范围的方式来调节上述离子交换树脂的种类及量，以便得到上述第一蛋黄磷脂组合物及上述第二蛋黄磷脂组合物。
在上述第一树脂处理工序及上述第二树脂处理工序中使用离子交换树脂来处理原料蛋黄磷脂组合物时，可列举例如以下方法：在为原料蛋黄磷脂组合物的1～5倍量的极性溶剂(例如甲醇、乙醇等醇、水)或上述极性溶剂与上述极性溶剂以外的溶剂的混合溶剂(例如二氯甲烷，氯仿等卤素系溶剂、丙酮、甲基乙基酮等酮系溶剂、乙酸乙酯等酯系溶剂、正己烷、正戊烷等烃系溶剂、二乙基醚等醚系溶剂)中溶解该原料蛋黄磷脂，使该溶解液与离子交换树脂接触后，将该溶剂减压蒸馏除去。该情况下，可以单独使用上述极性溶剂及混合溶剂或将多种组合使用。
离子交换树脂为具有在交联的三维的高分子母体中导入了磺酸基、季铵基之类的官能团的结构的合成树脂。为了进行高效的树脂处理，通常用水等使树脂本身含水，从而在结构中形成间隙而增大树脂的比表面积后使用。
另一方面，在使用离子交换树脂处理原料蛋黄磷脂组合物的情况下，使原料蛋黄磷脂组合物如上述那样溶解于极性溶剂或混合溶剂。根据经验可知，当暴露于这种极性溶剂或混合溶剂时，离子交换树脂会经时地脱水。
一旦离子交换树脂脱水，则含水时所存在的间隙缩小或关闭，导致特别是lpe之类分子量较大的成分与存在于离子交换树脂的间隙中的官能团不能有效地接触而lpe除去能力降低。因此在离子交换树脂经时脱水的条件下，在以lpe之类分子量较大的成分为对象时，期望使用存在足够的间隙的状态的、即体积更大的离子交换树脂。
另外，离子交换树脂的体积通常受到与官能团成对的离子的种类的左右。具体而言，在阴离子交换树脂的情况下可见到如下倾向：与oh-相比，cl-越多则体积变得越小。
鉴于以上的内容，在上述第一树脂工序中，从为了提高lpe的除去能力而优选使用体积更大的离子交换树脂的观点出发，作为上述第一树脂处理工序中所使用的阴离子交换树脂，与官能团结合的阴离子中的cl-的比例优选为0.2当量％以下；另一方面，在上述第二树脂工序中，从为了控制lpe的除去效率而优选使用体积小于上述第一树脂处理工序的离子交换树脂的观点出发，作为上述第二树脂处理工序中所使用的阴离子交换树脂，优选与官能团结合的阴离子中的cl-的比例超过0.2当量％。
需要说明的是，上述第一树脂处理工序及上述第二树脂处理工序中，也可以使用氧化铝来代替上述离子交换树脂、或者将氧化铝与上述离子交换树脂一起使用。
(混合的工序)
上述混合的工序为如下工序：将上述第一蛋黄磷脂组合物与上述第二蛋黄磷脂组合物混合，得到上述最终蛋黄磷脂组合物(上述实施方式的蛋黄磷脂组合物)。
在上述混合的工序中，从能容易得到上述实施方式的蛋黄磷脂组合物(最终蛋黄磷脂组合物)的角度出发，上述第一蛋黄磷脂组合物/上述第二蛋黄磷脂组合物(质量比)通常为0.2以上且5以下，优选为0.5以上；另一方面，优选为4以下。
3.脂肪乳剂
本发明的一实施方式的脂肪乳剂包含：含有上述实施方式的蛋黄磷脂组合物的乳化颗粒、和分散有该乳化颗粒的水相。
本实施方式的脂肪乳剂通过包含：含有上述实施方式的蛋黄磷脂组合物的乳化颗粒、和分散有该乳化颗粒的水相，从而为高纯度且乳化稳定性优异。
(平均粒径)
在本实施方式的脂肪乳剂中，乳化颗粒的平均粒径通常为0.1μm以上且0.5μm以下，从稳定性更优异的观点出发，优选为0.3μm以下。
(油相)
在本实施方式的脂肪乳剂中，构成乳化颗粒的油相可列举例如大豆油、芝麻油、菜籽油、红花油、橄榄油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、米油、葵花籽油、葡萄籽油、小麦胚芽油等植物油以及中链脂肪酸甘油三酯(mct)。植物油优选为纯化植物油。
(脂肪乳剂的组成)
本实施方式的脂肪乳剂例如优选为水相为65质量％以上且90质量％以下与油相为10质量％以上且30质量％以下的乳化物。
(脂肪乳剂的制造)
例如，用常用的均质器在规定量的油相中混合蛋黄磷脂及其它添加剂(例如甘油)等并均质化，然后向其中加入必要量的水后，用上述均质器再次进行均质化而转变为水包油型乳剂(乳化物)，由此可以制造本实施方式的脂肪乳剂。
(脂解制剂)
上述实施方式的脂解制剂通过包含含有上述实施方式的蛋黄磷脂组合物和药剂的乳化颗粒、以及分散有该乳化颗粒的水相，由此为高纯度且乳化稳定性优异。
本实施方式的脂解乳剂中，乳化颗粒的平均粒径通常为0.1μm以上且0.5μm以下，从稳定性更优异的观点出发，优选为0.3μm以下。
作为构成本实施方式的脂解制剂的油相，例如可以使用作为构成上述实施方式的乳化颗粒的油相所例示的油相。
作为构成本实施方式的溶血化乳剂的药剂，没有限定，例如优选为亲油性的药剂，作为现已上市的产品，可列举前列腺素(pge1)、甾类化合物(地塞米松棕榈酸酯)、nsaids(氟比洛芬酯)、丙泊酚，此外更具体地列举例如地西泮、丁酸氯维地平、吲哚美辛等。
本实施方式的脂解制剂例如优选为水相为65质量％以上且90质量％以下、与油相为10质量％以上且30质量％以下的乳化物，药剂的含量为例如5μg/ml以上且10质量％以下。
(脂解制剂的制造)
例如，用常用的均质器向规定量的油相中混合蛋黄磷脂、药剂及其它添加剂(例如甘油)等并均质化，然后向其中加入必要量的水后，用上述均质器再次进行均质化而转变为水包油型乳剂(乳化物)，由此可以制造本实施方式的脂解制剂。
实施例
4.实施例
以下通过实施例进一步详细说明本发明，但本发明不受实施例限定。
[实施例1]
由干燥蛋黄进行醇(含96质量％乙醇的乙醇-水混合液)提取后，在减压下除去溶剂，再用20倍量的丙酮进行处理，得到具有下述组成的原料蛋黄磷脂组合物(第一原料蛋黄磷脂组合物/第二原料蛋黄磷脂组合物)。
将上述原料蛋黄磷脂组合物100g溶解于溶剂(己烷-甲醇(80：20)300ml，然后添加到装有第一离子交换树脂(制品名：amberliteir120b(阳离子交换树脂：h型)12ml、amberliteira400(阴离子交换树脂：oh型)24ml)的容器中，进行搅拌，由此进行树脂处理(温度：20～40℃、时间：4分钟)。由此得到lpe的含量为0.5质量％、且氨基酸的含量为10mg/100g的第一蛋黄磷脂组合物(第一树脂处理工序)。在上述第一树脂处理工序中，蛋黄磷脂组合物中的氨基酸含量的每分钟的减少速度为150mg/100g。
将上述原料蛋黄磷脂组合物100g溶解于溶剂(己烷-甲醇(80：20)300ml，然后添加到装有第二离子交换树脂(制品名：amberliteir120b(阳离子交换树脂：h型)6ml、amberliteira404(阴离子交换树脂：oh型)10ml)的容器中，进行搅拌，由此进行树脂处理(温度：20～40℃、时间：20分钟)。由此得到lpe的含量为1.5质量％、且氨基酸的含量为400mg/100g的第二蛋黄磷脂组合物(第二树脂处理工序)。在上述第二树脂处理工序中，蛋黄磷脂组合物中的氨基酸含量的每分钟的减少速度为10mg/100g。
然后按照上述第一蛋黄磷脂组合物/上述第二蛋黄磷脂组合物(质量比)为1/1的方式进行混合，得到具有下述组成的实施例1的最终蛋黄磷脂组合物。需要说明的是，得到的蛋黄磷脂组合物中的游离脂肪酸的含量为0.2质量％。
[实施例2]
在上述实施例1的第二树脂处理工序中，使用氧化铝100g(制品名：活性氧化铝(和光纯药工业制))代替离子交换树脂，除此以外进行与上述实施例1同样的处理，由此得到具有下述组成的实施例2的蛋黄磷脂组合物。需要说明的是，得到的蛋黄磷脂组合物中的游离脂肪酸的含量为0.2质量％。
[试验例1]
在上述的实施例1中改变树脂的量及反应时间而制备氨基酸含量不同的5种蛋黄磷脂组合物(试验编号1～5)(表1)。对于各磷脂，使用高压匀浆器制造脂肪乳剂。
试验例1的各脂肪乳剂的ph为6.5以上且10以下，平均粒径为0.1μm以上且0.5μm以下。需要说明的是，本实施例中，平均粒径的测定使用了beckmancoulter制粒度分布测定装置(型号：n4plus)。
将这些试样用氢氧化钠水溶液调节为ph9.5，在121℃灭菌20分钟，测定ζ电位及ph。将其结果示于表1。
需要说明的是，本实施例中，脂肪乳剂的ζ电位使用malvern制zetasizernanoz测定，脂肪乳剂的ph使用株式会社堀场制作所制ph计(型号f-52)测定。
[表1]
根据表1可以理解，通过使用本实施例的蛋黄磷脂组合物(试验编号2～5)，可以得到ph降低少(具体为2.5以下的降低)、稳定性优异的脂肪乳剂。
另外，试验编号2～5的ζ电位保持较低，因此认为加热灭菌时的ph降低小。
而且根据实施例2可以理解，使用氧化铝时也得到同样的效果。
[试验例2]
对于上述试验例1中制备的试验编号1的蛋黄磷脂组合物，在添加丝氨酸(ser)、苏氨酸(thr)、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸后进行冷冻干燥，用超声波匀浆器制备脂肪乳剂(试验编号6～8)。将这些试样用氢氧化钠水溶液调节为ph9.5，在121℃下灭菌20分钟，测定ph。将其结果示于表2。试验例2的各脂肪乳剂的ph为6.5以上且10以下，平均粒径为0.1μm以上且0.5μm以下。
[表2]
根据表2可以理解，在将该氨基酸的总量设为100质量份时，氨基酸中的丝氨酸与苏氨酸的合计比例为10质量份以上则可以容易地得到加热灭菌后的ph降低较少、稳定性优异的脂肪乳剂。
[试验例3]
对于上述试验例1中制备的试样1，在添加丝氨酸(ser)、苏氨酸(thr)、精氨酸(arg)、赖氨酸(lys)、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸后进行冷冻干燥，用超声波匀浆器制备脂肪乳剂。将这些试样用氢氧化钠水溶液调节为ph9.5，在121℃灭菌20分钟，测定ph。将其结果示于表3。试验例3的各脂肪乳剂的ph为6.5以上且10以下，平均粒径为0.1μm以上且0.5μm以下。
[表3]
根据表3可以理解，在将该氨基酸的总量设为100质量份时，氨基酸中的丝氨酸、苏氨酸、精氨酸及赖氨酸的合计比例为10质量份以上，则可以容易地得到加热灭菌后的ph降低较少、稳定性优异的脂肪乳剂。
[试验例4]
在对实施例1的蛋黄磷脂组合物6g及大豆油100g进行高速搅拌、分散，在中途添加蒸馏水384g及甘油10g后进行粗乳化(搅拌速度：10000rpm、搅拌时间：40分钟)后，进行精乳化(高压乳化：500kg/cm2，反复通液10～20次。)。然后，进行ph调节及过滤后填充到玻璃制小瓶中，由此得到试验例4的脂肪乳剂(含20质量％大豆油的o/w乳液)。
将得到的脂肪乳剂在121℃灭菌20分钟后，将瓶开封并测定该脂肪乳剂的平均粒径及ph，结果试验例4的脂肪乳剂在灭菌前后的平均粒径的变化少，灭菌后的ph降低得到抑制，稳定性高。
[试验例5]
在对实施例1的蛋黄磷脂组合物6g、大豆油50g及药剂(吲哚美辛)10g进行高速搅拌、分散，在中途添加蒸馏水424g及甘油10g后进行粗乳化(搅拌速度：10000rpm、搅拌时间：40分钟)后，进行精乳化(高压乳化：500kg/cm2，反复通液10～20次。)。然后，进行ph调节及过滤后填充到玻璃制小瓶中，得到试验例5的脂解制剂(含有10质量％大豆油的o/w乳液)。
将得到的脂解制剂在121℃灭菌20分钟后，将瓶开封并测定脂解制剂的平均粒径及ph，结果试验例5的脂解制剂在灭菌前后的平均粒径的变化少，灭菌后的ph降低得到抑制，稳定性高。