一种新型药物手性拆分纳米色谱柱及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析技术领域，涉及一种药物手性拆分纳米色谱柱的制备。
【背景技术】
[0002] 在分析化学领域，手性药物的分析是一个重要的研宄课题。手性分离的方法有多 种，如手性超临界流体色谱法，已成为制药行业的首选技术分析，因为其速度快，效率高。逆 流色谱法也是一种新型的、高效拆分手性药物的方法，它的高效是基于连续液-液色谱技 术。但高效液相色谱仍是一种传统的手性分离方法，负载能力很高，人们常用，可需要一个 高效的手性色谱柱。
[0003] 1-甲基-3-苯基丙胺和2-羟基-3-甲氧基-3, 3-二苯基丙酸手性化合物，前者主 要用于合成柳胺苄心定盐酸盐中间体，柳胺苄心定盐酸盐是一种治疗原发性高血压、继发 性高血压、妊娠期高血压和其他类型的高血压的紧急理想抗高血压药物；后者主要用于达 卢生坦和安倍生坦重要中间体的合成，达卢生坦和安倍生坦是内皮素受体拮抗剂，用于治 疗高血压和顽固性高血压，如心力衰竭。据报道，在达卢生坦和安倍生坦结构中因为其手性 中心的存在是有治疗效果的主要原因。所以建立高效拆分手性药物的色谱柱非常必要。
【发明内容】
[0004] 为了解决液相色谱法拆分手性药物的技术问题，本发明提供了一种药物手性拆分 纳米色谱柱及其制备方法，采用该法制备的纳米色谱柱，能有效地拆分1-甲基-3-苯基丙 胺和2-羟基-3-甲氧基-3, 3-二苯基丙酸手性化合物，该方法制备的纳米色谱柱具有操作 简单、重现性好、灵敏度高和准确度的优点。
[0005] 本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
[0006] 一种新型药物手性拆分纳米色谱柱，该纳米色谱柱包括装入色谱柱的修饰纳米二 氧化娃填料，所述的修饰纳米二氧化娃填料由下述步骤制得：
[0007] ①称取一定量纳米二氧化硅，依次用NaOH、去离子水、HC1、去离子水冲洗，取出冲 洗后的纳米二氧化硅干燥；
[0008] ②向干燥后的纳米二氧化硅中加入硅烷化试剂，电磁搅拌，再加入乙二醛甲醇溶 液，电磁搅拌，过滤，用去离子水冲洗后干燥，待用；
[0009] ③（1R，3S)樟脑酸的修饰：称取一定量（1R，3S)樟脑酸和醋酸酐，常温电磁搅拌回 流，冷却过滤，再用无水甲醇冲洗，真空干燥，得到纯樟脑酸酐，待用；
[0010] ④称取一定量上述③中得到的樟脑酸酐溶解于干燥的二氯甲烷中，待用；
[0011] ⑤称取一定量3-(氨甲基）吡啶溶解在另一份干燥的二氯甲烷中，待用；
[0012] ⑥将④与⑤混合，电磁搅拌回流，冷却过滤，再用去离子水冲洗，真空干燥，得到纯 中间体I ;
[0013] ⑦称取一定量纯中间体I溶解于甲醇中，依次滴加二氯草酸和二甲基甲酰胺，电 磁搅拌回流，冷却过滤，再用去离水冲洗，真空干燥，得到纯中间体II ;
[0014] ⑧将一定量纯中间体II溶解于甲醇中，加入上述步骤②中所获得的物质，电磁搅 拌回流，冷却过滤，再用去离水冲洗，真空干燥，得到修饰好的纯纳米二氧化硅。
[0015] 优选地，步骤①中所述的纳米二氧化娃粒径为40-60nm ;所述的纳米二氧化娃依 次用1.0 mol/L NaOH冲洗20分钟，去离子水冲洗20分钟，1.0 mol/L HCl冲洗40分钟，去离 子水冲洗20分钟，取出冲洗后的纳米二氧化硅在110°C下干燥10小时。
[0016] 优选地，步骤②中所述的硅烷化试剂由体积比为1 :1的3-氨丙基三乙氧基硅烷与 甲醇配制而成，加入硅烷化试剂后，恒温55°C，以300转/分钟转速电磁搅拌24小时；所述 的乙二醛甲醇溶液由体积比为1 :1的乙二醛与甲醇配制而成，加入乙二醛甲醇溶液后，恒 温60°C下，以300转/分钟转速电磁搅拌24小时；干燥条件为：在100°C下干燥2小时。
[0017] 优选地，步骤③中所述的电磁搅拌回流2小时，转速200转/分钟，冷却到0°C，过 滤。
[0018] 优选地，步骤⑥中所述的电磁搅拌条件为：恒温55°C，转速200转/分钟，回流8小 时，冷却到室温。
[0019] 优选地，步骤⑦中所述的电磁搅拌条件为：常温，转速200转/分钟，回流2小时， 冷却到0°C。
[0020] 优选地，步骤⑧中所述的电磁搅拌条件为：恒温70°C，转速300转/分钟，回流6小 时，冷却到室温。
[0021] 本发明还提供了一种新型药物手性拆分纳米色谱柱的制备方法，包括下述顺序的 步骤：
[0022] ①称取一定量纳米二氧化硅依次用1.0 mol/L NaOH冲洗20分钟，用去离子水冲洗 20分钟，用1.0 mol/L HCl冲洗40分钟，用去离子水冲洗20分钟，取出干净的纳米二氧化 硅，在110°C下干燥10小时；
[0023] ②向干燥后的纳米二氧化硅加入硅烷化试剂，恒温55°C，电磁搅拌24小时，再加 入乙二醛甲醇溶液，恒温60°C，电磁搅拌24小时，过滤，用去离子水冲洗，在100°C下干燥2 小时；
[0024] ③（1R，3S)樟脑酸的修饰：称取一定量（1R，3S)樟脑酸和醋酸酐，常温电磁搅拌回 流2小时，冷却到0°C，过滤，用无水甲醇冲洗，真空干燥，得到纯樟脑酸酐；
[0025] ④称取一定量樟脑酸酐溶解于干燥的二氯甲烷中；
[0026] ⑤称取一定量3_(氨甲基）吡啶溶解在40.0 mL干燥的二氯甲烷中；
[0027] ⑥将④与⑤混合，恒温55°C，电磁搅拌回流8小时，冷却到室温，过滤，再用去离子 水冲洗，真空干燥，得到纯中间体I ;
[0028] ⑦称取纯中间体I溶解于甲醇中，滴加二氯草酸和二甲基甲酰胺，常温电磁搅拌 回流2小时，冷却到0°C，过滤，再用去离水冲洗，真空干燥，得到纯中间体II ;
[0029] ⑧将纯中间体II溶解于甲醇中，加入步骤②所获得的物质，恒温70°C，电磁搅拌回 流6小时，冷却到室温，过滤，再用去离水冲洗，真空干燥，得到修饰好的纯纳米二氧化硅；
[0030] ⑨将制备好的修饰纳米二氧化硅填料，用色谱柱填装泵装入准备好的色谱柱即 可。
[0031] 本发明的有益效果：
[0032] 本发明制备的纳米色谱柱具有操作简单、重现性好、灵敏度高和准确度的优点；
[0033] 本发明方法制备的修饰纳米二氧化硅填料性能优越，可有效地拆分1-甲基-3-苯 基丙胺和2-羟基-3-甲氧基-3, 3-二苯基丙酸手性化合物。
【具体实施方式】
[0034] 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细描述。
[0035] 为了检验本发明制备的纳米二氧化硅色谱柱的可行性和优越性，我们拆分了 1-甲基-3-苯基丙胺和2-羟基-3-甲氧基-3, 3-二苯基丙酸手性化合物，根据检测结果， 对该方法制备的纳米色谱柱可行性和优越性进行了评价。
[0036] 实施例1
[0037] 1)修饰纳米二氧化硅色谱柱的制备
[0038] ①称取5g纳米二氧化硅（40-60nm)放入玻璃沙芯漏斗中，用1.0 mol/L NaOH冲洗 20分钟，再用去离子水冲洗20分钟，然后用1.0 mol/L HCl冲洗40分钟，最后用去离子水冲 洗20分钟，取出干净的纳米二氧化硅，放入干净、干燥的烧杯中，在IKTC下干燥10小时。
[0039] ②向1中加入硅烷化试剂3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTS)甲醇溶液（1 :1，V/ V) 21mL，电磁搅拌（转速300转/分钟）恒温55°C，24小时。然后，加入IOmL乙二醛甲醇 溶液（1 :1，V/V)，电磁搅拌（转速300转/分钟）恒温60°C，24小时，过滤，用去离子水冲 洗，在100°C下干燥2小时。
[0040] ③（1R，3S)樟脑酸的修饰：称取5. 0g(lR，3S)樟脑酸和3. OmL醋酸酐放入150mL 园底蒸馏烧瓶中，常温电磁搅拌（转速200转/分钟）回流2小时，冷却到0°C，过滤，再用 无水甲醇冲洗，真空干燥，得到纯樟脑酸酐。
[0041] ④称取2. 7g樟脑酸酐溶解于25. OmL干燥的二氯甲烷中。
[0042] ⑤称取I. 6g 3-(氨甲基）吡啶溶解在20.0 mL干燥的二氯甲烷。
[0043] ⑥将④与⑤混合，恒温55°C，电磁搅拌（转速200转/分钟）回流8小时，然后冷 却到室温，过滤，再用去离子水冲洗，真空干燥，得到纯中间体。
[0044] ⑦称取⑥纯中间体3. 2g使其溶解于25. OmL甲醇中，然后滴加5. OmL二氯草酸和 1滴二甲基甲酰胺，常温电磁搅拌（转速200转/分钟）回流2小时，冷却到0°C，过滤，再 用去离水冲洗，真空干燥，得到纯中间体。
[0045] ⑧将⑦得到的中间体3. 5g溶解于25. OmL甲醇中，然后加入6. Og②所获得的物 质，恒温70°C，电磁搅拌（转速300转/分钟）回流6小时，冷却到室温，过滤，再用去离水 冲洗，真空干燥，得到修饰好的纯纳米二氧化硅。
[0046] ⑨将制备好的修饰纳米二氧化硅填料，用色谱柱填装泵装入准备好的色谱柱即 可。
[0047] 2)对上述制备的修饰纳米二氧化硅色谱柱进行评价
[0048] 将1-甲基-3-苯基丙胺㈧和2-羟基-3-甲氧基-3, 3-二苯基丙酸⑶溶液分 别进行测定。所得测定结果见下表。从表中可以看出，相对标准偏差小于0.44%。
[0049]
[0050] 实施例2
[0051] 1)修饰纳米二氧化硅色谱柱的制备
[0052] ①称取IOg纳米二氧化硅（40-60nm)放入玻璃沙芯漏斗中，用1.0 mol/L NaOH冲 洗20分钟，再用去离子水冲洗20分钟，然后用1.0 mol/L HCl冲洗40分钟，最后用去离子 水冲洗20分钟，取出干净的纳米二氧化硅，放入干净、干燥的烧杯中，在IKTC下干燥10小 时。
[0053] ②向1中加入硅烷化试剂3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTS)甲醇溶液（1 :1，V/ V)42mL，电磁搅拌（转速300转/分钟）恒温55°C，24小时。然后，加入IOmL乙二醛甲醇 溶液（1 :1，V/V)，电磁搅拌（转速300转/分钟）恒温60°C，24