充气微泡的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及新的充气微泡，其制备W及在诊断和治疗方法中的用途。
【背景技术】
[0002] 造影剂的在近几年快速发展已经产生了许多不同的组合物和制剂，它们在人体或 动物体的器官和组织中的造影增强成像中和在治疗性处理中是有用的。
[0003] -类造影剂，特别是用于超声造影成像的造影剂，包括分散在水性介质中的纳米 和/或微米尺寸的气体泡悬浮液。该气体通常是被夹带或包封在稳定化薄膜层中，所述稳 定薄膜层包括，例如，乳化剂，油类，增稠剂或糖类。运些稳定化的气泡（分散在适宜的生 理溶液中）通常设及本领域中的各种术语，典型地取决于用于其制备的稳定化材料；运些 术语包括，例如，"微球"，"微泡"，"微胶囊"或"微球"，在此全部被称为"充气微泡"（或"微 泡"）。
[0004] 特别令人感兴趣的是充气微泡的水悬浮液，其中气体的气泡通过非常薄的包络 (膜）而被限定于气/液界面，该包络（膜）设及配置在气液界面上稳定化两亲性材料（通 常为憐脂）。运些悬浮液通过粉末状的两亲性材料接触空气或其它气体而有利的制备，例如 冷冻干燥制备的脂质体或冷冻干燥或喷雾干燥的脂质溶液，然后接触含水的载体，同时揽 拌W产生可W随后给药的充气微泡的悬浮液，优选在其制备后不久给药。充气微泡的水性 悬浮液及其制备的实施例已经被公开，例如，US5, 271，928,US5, 445, 813,US5, 413, 774， US5,556,610,US5,597,549,US5,827,504,W097/29783 和W02004/069284,其通过参考 而全文引入到本文中。稳定化层可W包含，除了上述所提及的憐脂类，还有其它的两亲性材 料，如脂肪酸。例如，Sonovue? (由化accoSuisseS.A.制造的商业化的超声造影剂） 包括作为成膜稳定层的憐脂和脂肪酸的混合物。
[0005] 最近，已经注意到所谓的"分子成像"，其中，适于祀点的特定成分被用在进行器官 或组织选择性造影增强成像的造影剂的制剂中。此外，造影剂制剂的治疗性应用，任选与分 子成像相联合，也已经被描述。
[0006] 充气微泡的制剂可W被适当地修饰，或用于提高诊断效果（例如，通过分子成像） 和/或用于治疗目的，例如药物递送和/或超声介导的溶栓治疗。例如，微泡可W与治疗剂 和/或与特定的成分相关联（例如通过包含在它们边界外膜之中），其能够连接患者身体内 确定的目标（称为"祀向配体"）。祀向配体的实例包括，例如，能够与在致病过程中由器官 或组织表达的特异性受体结合的肤类，蛋白质，抗体，适体或碳水化合物，所述致病过程例 如，血管生成，炎症或血栓形成。
[0007] 本申请人现已发现，有可能通过在制剂的稳定层中包括饱和和不饱和脂肪酸的混 合物，提高基于憐脂的充气微泡的某些特性。特别的是，已经观察到所述饱和/不饱和脂肪 酸混合物的存在出人意料地增加了充气微泡的稳定性，相对于在形成稳定层的制剂中仅分 别含有一种饱和或不饱和脂肪酸的相应微泡。
[0008] 发巧简沐
[0009] 因此，本发明的一个方面设及在生理上可接受液体载体中的充气微泡的悬浮液， 所述具有稳定化外膜的微泡含有憐脂、饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸，其中饱和和不饱和脂 肪酸的摩尔比是从2.5 : 1至1 : 8。
[0010] 优选饱和和不饱和脂肪酸的摩尔比是从1.5 : 1至1 : 7.5,更优选从1 : 1至 1 : 6,甚至更优选从1 : 1.5至1 : 4,特别优选的是从1 : 2至1 : 3的摩尔比。
[0011] 根据优选的实施方案，憐脂与饱和/不饱和脂肪酸混合物的摩尔比是从3 : 7至 4 : 1，优选从2 : 3至7 : 3,和甚至更优选从2.5 : 3至3 : 2。
[0012] 在一个优选实施方案中，在生物相容性气体存在下，包括上述量的憐脂和脂肪酸 的制剂（优选W冻干形式）与生理上可接受的液体载体混合而获得所述悬浮液。
[0013] 本发明的另一个方面设及一种密封小瓶，其含有药物制剂和生物相容性气体，所 述制剂包含如上述定义的憐脂、饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸。该制剂任选地还包含药学上 可接受的添加剂和/或赋形剂。在一个优选实施方案中，所述制剂是在冷冻干燥（冻干） 形式。
[0014] 发巧详沐
[0015] 本发明的制剂包含饱和和不饱和脂肪酸的混合物W及憐脂，其可W用于制造用于 诊断成像和/或作为治疗剂的充气微泡。
[0016] 本发明的制剂是特别有益于形成一个层，该层使在液体悬浮液中的气体的气泡稳 定（稳定层）。该制剂可W包括额外的两亲性材料，W及通常是冷冻干燥（冻干）制剂的形 式，优选包含冻干添加剂。本发明的充气微泡可W通过在生理上可接受的气体存在下，混合 所述制剂与生理上可接受的液体载体而制备。
[0017] 胎化酸
[0018] 术语"脂肪酸"包括在其含义范围的簇酸，该簇酸包含一个相对长的脂肪族链，例 如从10至28个碳原子（Cl。CJ。脂肪族链优选是直链（直）链。用于根据本发明组合物 的脂肪酸优选包括Cw-C24脂肪族链，更优选C14-C22脂肪族链并且甚至更优选通过簇基封端 的Cie-Cw脂肪族链。
[0019] 脂肪酸可W是饱和的或不饱和的（即含有一个或多个不饱和度，通常是双键）。
[0020] 饱和脂肪酸包括在脂肪族链中无不饱和度的脂肪酸，如，例如：羊蜡酸（正-癸 酸），月桂酸（正-十二烧酸），肉豆違酸（正-十四烧酸），栋桐酸（正-十六烧酸），硬脂 酸（正-十八烧酸），花生酸（正-二十烧酸），山斋酸（正-二十二烧酸）和正-二十四 烧酸。优选的饱和脂肪酸是肉豆違酸，栋桐酸，硬脂酸和花生酸。
[0021] 不饱和脂肪酸可W包括在脂肪族链上有一个，两个，=个，四个或五个不饱和度 (特别是双键）。优选的不饱和度是处于顺式构型。优选地，不饱和脂肪酸包括=个或更低 的不饱和度，更优选的是两个或更低的不饱和度；特别优选的是包括在脂肪族链中单不饱 和度的不饱和脂肪酸。为简便起见，不饱和脂肪酸有时用下列的烷基链中碳原子数和在链 中不饱和度的位置表示；例如栋桐油酸，即顺式-9-十六碳締酸，被称为Cw顺式-A9 (或简 单地：CwA9)。不饱和脂肪酸的实例包括，例如，癸締酸，十二碳締酸，十四碳締酸，十六碳 締酸，十六碳二締酸，十八碳締酸，十八碳二締酸，十八碳立締酸，十八碳四締酸，二十碳締 酸，二十碳二締酸，二十碳=締酸，二十碳四締酸，二十碳五締酸，二十二碳締酸，二十二碳 二締酸，二十二碳立締酸，二十二碳四締酸，二十二碳五締酸和二十四碳締酸。优选的不饱 和脂肪酸包括肉豆違締酸（顺式-9-十四碳締酸），栋桐油酸（顺式-9-十六碳締酸），栋 桐酸（顺式-6-十六碳締酸），油酸（顺式-9-十八締酸），亚油酸（顺式-9,12-十八碳二 締酸），亚麻酸（顺式-9,12,15-十八碳=締酸），巨头嫁鱼酸（顺式-11-二十碳締酸）， 顺式-11，14-二十碳二締酸，顺式-5,8,11-二十碳S締酸，顺式-8,11，14-二十碳S締酸， 顺式-11，14,17-二十碳=締酸，花生四締酸（顺式-8,11，14,17-二十碳四締酸）和芥酸 (顺式-13-二十二碳締酸），特别优选的是栋桐油酸，油酸和巨头嫁鱼酸。
[0022] 饱和和不饱和脂肪酸的混合物优选包含具有相差至多四个碳原子烷基链长度的 酸；更优选的饱和和不饱和酸在各自的链长度中，相差至多两个碳原子，和甚至更优选相差 至多一个碳原子；特别优选的是包含具有相同烷基链长度的饱和和不饱和脂肪酸的混合物 (例如栋桐酸/栋桐締酸，硬脂酸/油酸，花生酸/巨头嫁鱼酸等）。
[0023]本申请人已经观察到，通过使用包括摩尔比从2.5 : 1至1 : 8的饱和/不饱和 脂肪酸的组合物，相对于仅采用相同浓度的饱和或不饱和脂肪酸的微泡，可W制备具有增 加稳定性的充气微泡。优选的是，组合物中饱和和不饱和脂肪酸的摩尔比是从1.5 : 1至 1:7.5，更优选是从1:1至1:6，甚至更优选是从1:1.5至1:4，特别优选的是从 1 : 2至1 : 3的摩尔比。
[0024]
[00巧]本文所使用的，术语"憐脂"意欲涵盖包含至少一个憐酸基团和至少一个，优选两 个，（C12-C22)控链的两亲性化合物，其能够在最终的微泡悬浮液的气-水边界界面形成稳定 的膜层（通常W单分子层的形式）。因此，运些材料也在本领域中被称为"成膜憐脂"。
[0026] 术语憐脂包括天然存在的，半合成的或合成的产物，其可W单独的或作为混合物 而使用。
[0027]适宜憐脂的实例包括具有一个或优选两个（相同或不同的）脂肪酸残基和憐酸 残基的甘油醋，其中所述憐酸残基依次与亲水基团相结合，亲水基团如，例如，胆碱（憐脂 酷胆碱-PC)，丝氨酸（憐脂酷丝氨酸-P巧，甘油（憐脂酷甘油-PG)，乙醇胺（憐脂酷乙醇 胺-P巧，肌醇（憐脂酷肌醇）。仅具有一个脂肪酸残基的憐脂的醋通常在本领域中被称为 "溶血"形式的憐脂或"溶血憐脂"。在憐脂中存在的脂肪酸残基通常是长链脂肪酸，通常包 括从12到24个，优选从14到22个碳原子；该脂肪族链可W包含一个或多个不饱和度或优 选是完全饱和的。包含在憐脂中的适宜脂肪酸的实例是，例如，月桂酸，肉豆違酸，栋桐酸， 硬脂酸，花生酸，山斋酸，油酸，亚油酸，和亚麻酸。优选地，可W使用饱和脂肪酸，如肉豆違 酸，栋桐酸，硬脂酸和花生酸。
[0028]憐脂的进一步实例是憐脂酸，即甘油憐酸与脂肪酸的二醋；銷脂类，如銷憐脂，即 那些憐脂酷胆碱类似物，其中甘油二醋与脂肪酸的残基被替换为神经酷胺链；屯、憐脂类，即 1,3-双憐脂酷甘油与脂肪酸的醋；糖脂类如神经节巧脂GM1(或GM2)或脑巧脂；糖脂；硫脂 和糖（神经）銷脂类。
[0029] 天然存在的憐脂的实例是天然卵憐脂（憐脂酷胆碱（PC)的衍生物），例如，通常 的，大豆或蛋黄卵憐脂。
[0030] 半合成憐脂的实例是天然存在的卵憐脂的部分或完全氨化的衍生物。优选的憐脂 是憐脂酷胆碱，乙基憐脂酷胆碱，憐脂酷甘油，憐脂酸，憐脂酷乙醇胺，憐脂酷丝氨酸，憐脂 酷肌醇或銷憐脂的脂肪酸二醋。
[0031]憐脂的具体实例是，