专利名称：一种检测尿液中磷酸根的方法
技术领域：
本发明涉及一种磷酸根的检测方法，具体属于一种检测尿液中磷酸根的方法。
背景技术：
磷酸根参与各种重要的生物矿化过程，诸如骨骼的形成以及肾结石的起源等病理过程。因此，生物液体中磷酸根的检测是很重要的。我们知道尿液在临床事件中有很重要的诊断价值，所以检测人体尿液中自由的磷酸根离子是很有必要的。科学上的研究结果表明尿液中含有过多的磷酸镁铵，碳酸磷灰石，羟基磷灰石，二水磷酸氢钙，磷酸三钙等晶体属于造成尿结石的原因之一。我们知道结石病伴随有许多痛苦比如肾绞痛，恶心呕吐，血尿，发热等，甚至引起更大的其它疾病。因此维持尿液中一定浓度的磷酸根很关键。由此看来定期的定量测定尿液中的磷酸根是必不可少的。我们可以通过定期测量尿液中的磷酸根的含量，了解生物体的代谢状况及有关病变状态。
关于测定尿液中的磷酸根，以往国内外对检测尿液中的磷酸根的方法可归纳为以下几种1、使用离子色谱检测尿液中的磷酸根(L.Opliti，R.Chiaraluce，V.Consalvi，N.Cetulli and R.Scandurra，Clinica Chimica Acta，184(1989)155-166；Journal ofChromatography，433(1988)373-376；2、基于磷酸根对碳酸钙晶种的强烈抑制，来测定尿液中的磷酸根(F.Grases andJ.G.March，Analytica Chimica Acta，229(1990)249-254)；3、使用单一的在线校准法和光度测定法通过序列注射分析测定尿液中的磷酸根(D.G.Themelis，A.Economou，a.Tsiomlektsis and p.D.Tzanavaras，AnalyicalBiochemistry 330(2004)193-198)。
但以上的这些方法分别存在一些问题1、许多仪器在临床上测量尿液中的磷酸根由于窄的线性范围，需要很大程度的稀释尿样，才能去测量。
2、许多测量尿液中的磷酸根的方法是通过测尿中的其它某些成份来间接的测量的。比如通过测尿石的碳酸钙晶体生长来确定磷酸根的含量。这样既繁琐，又费工费时，在临床上带来许多不便。
3、许多检测尿液中磷酸根的方法，灵敏度较低，偏差较大，或者给不出一个准确定量的结果。
发明内容
本发明的目的在于突破以往传统的检测尿液中磷酸根的方法，发明一种简单、灵敏、快速的，临床上可以使用的，检测未稀释尿液中磷酸根的方法。
本发明提供一种检测尿液中磷酸根的方法，该方法基于镱离子、以邻苯二酚紫为显色剂在pH为6.5-7.5的HEPES缓冲溶液中直接并定量地检测尿液中的磷酸根，其具体检测步骤如下1、配制pH6.5-7.5的HEPES(10mM)缓冲溶液，并配制2×10-3M的Yb3+溶液和2×10-3M的邻苯二酚紫溶液；2、把2ml的HEPES缓冲溶液加到干净的紫外比色皿中，作为空白，用微量进样器吸取2×10-3M的邻苯二酚紫溶液10-100μl，加到此比色皿中，此时溶液由无色变黄，在紫外可见分光光度仪上检测，443nm有最大吸收；3、在上述的比色皿中，加入摩尔数2倍于邻苯二酚紫溶液的Yb3+溶液，此时溶液由黄变蓝，在紫外可见分光光度仪上检测，发现最大吸收峰由上述的443nm变为623nm；4、取尿样，逐渐用微量进样器加到此比色皿中，边加样边在紫外可见分光光度仪上检测，随着尿样的加入，最大吸收峰又由623nm逐渐向443nm变回，溶液的颜色也逐渐由蓝变回黄色，当吸收峰在443nm达到最大，溶液的颜色完全变黄时，停止加尿样；5、按[Yb3+]×2ml×95/m尿×100％计算出尿液中磷酸根得含量，式中m尿＝V尿。
所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
所述的Yb3+可以用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
本发明具有如下优点1、我们的检测对象是未稀释的尿样，省去预处理程序，在临床上带来很大的很方便；2、在紫外可见分光光度仪上检测，检测过程简单，而且可以用肉眼明显观察到此效应；3、尽管尿液中含有许多其它成份，但我们的检测方法，对磷酸根显示了很好的选择性，也就是说，其它成份的存在并不干扰我们的检测结果；4、我们的检测是定量的，有很大的线性范围，而且误差很小；显然，此发明可以应用到临床上检测尿样。
图1至图9是相应实施例1至实施例9的检测尿液中磷酸根的紫外可见吸收图。
具体实施例方式实施例1.配制pH7.0的HEPES(10mM)缓冲溶液，并配制2×10-3M的YbCl3溶液和2×10-3M的邻苯二酚紫溶液；把2ml的HEPES缓冲溶液加到干净的紫外比色皿中，作为空白，用微量进样器吸取2×10-3M的邻苯二酚紫溶液50μl，加到此比色皿中，此时溶液由无色变黄，在HP8453紫外可见分光光度仪上检测，443nm有最大吸收；在上述的比色皿中，加入2×10-3M的Yb3+溶液100μl，此时溶液由黄变蓝，在紫外可见分光光度仪上检测，发现最大吸收峰由上述的443nm变为623nm；取成人尿样，逐渐用微量进样器加到此比色皿中，边加样边在紫外可见分光光度仪上检测，随着尿样的加入，最大吸收峰又由623nm逐渐向443nm变回，溶液的颜色也逐渐由蓝变回黄色，当吸收峰在443nm达到最大，溶液的颜色完全变黄时，此时尿液加入量为20μl；计算100μl×2ml×95/20g×100％，得尿液中磷酸根含量为0.095％，紫外可见吸收图见图1。
按实施例1测10个健康成人尿样，得尿液中磷酸根含量为0.0863-0.119％。如果按成人24小时尿液的排出量为1L，那么得出成人尿中无机磷酸盐的排出量范围为0.863-1.19g，与医学上尿中统计的无机磷酸盐的正常排出量(0.5～1.5g/24小时)稳合。
实施例2.配制pH6.5的HEPES(10mM)缓冲溶液，其余同实施例1，得尿液中磷酸根含量为0.095％，紫外可见吸收图见图2。
实施例3.取一周岁健康小孩尿液，其余同实施例1，计算100μl×2ml×95/4g×100％，得尿液中磷酸根含量为0.38％，紫外可见吸收图见图3。从上述实施例中，我们看出小孩尿液中的磷酸根含量偏高，这是因为小孩与大人相比而言，由于小孩处于成骨旺盛期，碱性磷酸酶活性较高以及代谢速度相当快等原因所造成。
实施例4.用Yb(ClO4)3的溶液，取另一成人的尿液，其余同实施例1，100μl×2ml×95/16g×100％，得尿液中磷酸根含量为0.119％，紫外可见吸收图见图4。
实施例5.用ErCl3的溶液，其余其余同实施例1，100μl×2ml×95/20g×100％，得尿液中磷酸根含量为0.095％，紫外可见吸收图见图5。
实施例6.用NdClO4)3的溶液，其余同实施例1，100μl×2ml×95/20g×100％，得尿液中磷酸根含量为0.095％，紫外可见吸收图见图6。
实施例7.用SmClO4)3的溶液，其余同实施例1，100μl×2ml×95/20g×100％，得尿液中磷酸根含量为0.095％，紫外可见吸收图见图7。
实施例8.用GdCl3的溶液，其余同实施例1，100μl×2ml×95/16g×100％，得尿液中磷酸根含量为0.095％，紫外可见吸收图见图8。
实施例9.用HoCl3的溶液，其余同实施例1，100μl×2ml×95/16g×100％，得尿液中磷酸根含量为0.095％，紫外可见吸收图见图9。
权利要求
1.一种检测尿液中磷酸根的方法，其特征在于，该方法包括如下检测步骤(1)、配制pH6.5-7.5的HEPES(10mM)缓冲溶液，并配制2×10-3M的Yb3+溶液和2×10-3M的邻苯二酚紫溶液；(2)、把2ml的HEPES缓冲溶液加到干净的紫外比色皿中，作为空白，用微量进样器吸取2×10-3M的邻苯二酚紫溶液10-100μl，加到此比色皿中，此时溶液由无色变黄，在紫外可见分光光度仪上检测，443nm有最大吸收；(3)、在上述的比色皿中，加入摩尔数2倍于邻苯二酚紫溶液的Yb3+溶液，此时溶液由黄变蓝，在紫外可见分光光度仪上检测，发现最大吸收峰由上述的443nm变为623nm；(4)、取尿样，逐渐用微量进样器加到此比色皿中，边加样边在紫外可见分光光度仪上检测，随着尿样的加入，最大吸收峰又由623nm逐渐向443nm变回，溶液的颜色也逐渐由蓝变回黄色，当吸收峰在443nm达到最大，溶液的颜色完全变黄时，停止加尿样；(5)、按[Yb3+]×2ml×95/m尿×100％计算出尿液中磷酸根的含量，式中m尿＝V尿。
2.按权利要求1所述的一种检测尿液中磷酸根的方法，其特征在于所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
3.按权利要求1或2所述的一种检测尿液中磷酸根的方法，其特征在于所述的Yb3+可以用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
全文摘要
本发明使用镱离子、以邻苯二酚紫为显色剂在pH为7.0左右的HEPES缓冲溶液定性、定量的去直接测定未稀释人体尿液中磷酸很的含量，测定过程简单，方便，测量结果准确。此方法灵敏度高，而且不受尿液中其它成分的干扰，可以应用于临床。
文档编号G01N21/33GK1598539SQ200410012448
公开日2005年3月23日 申请日期2004年7月26日 优先权日2004年7月26日
发明者杨频, 阴彩霞, 霍方俊 申请人:山西大学