专利名称：九节茶水提物的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及药品化学分析方法，具体地说是中药材九节茶水提物的质量控制方法。
背景技术：
中成药“清热消炎宁”是由中药材“九节茶”经水提加工制成的中成药，具有清热解毒、消炎止痛、舒筋活络功效，用于流行性感冒、咽喉炎、肺炎、菌痢、急性胃肠炎、阑尾炎、烧伤、疮疡脓肿、蜂窝织炎。由于疗效确切、无不良反应，备受医、患者的欢迎。但是，作为九节茶的水提取物制成的制剂如“清热消炎宁”胶囊的质量控制方法存在着不少的缺点它仅有鉴别反应，仅是一种产品中是否有糖、黄酮的定性鉴别，这种鉴别反应是非专属性反应，不能很好地反映产品是否用了九节茶为原料制成的。为此，有必要寻找一种能控制清热消炎宁产品质量的方法。
指纹图谱是能评价中药制品质量的一种操作简便，稳定、精密度高、重现性好的实际可行的方法。
发明内容
本发明的目的是建立一种方法简便、稳定、精密度高、重现性好的指纹图谱的方法及其标准指纹图谱来控制九节茶的水提取物或用水提物制成的“清热消炎宁”胶囊的质量。
本发明的技术方案是用中药制药工业中常规的水提工艺，取中药材九节茶为原料取九节茶水提物或取九节茶水提物制成的清热消炎宁胶囊采用高效液相色谱法确立的指纹图谱来控制质量，其方法按如下步骤进行步骤一、供试品溶液的制备取九节茶，加水煎煮二次，合并滤液，浓缩成稠膏，低温干燥，粉碎成细粉，取细粉配成每1ml中含10mg细粉的水溶液，或直接取清热消炎宁胶囊的内容物配成每1ml中含10mg细粉的水溶液；步骤二、对照品溶液的制备取异嗪皮啶配成每1ml中含0.1mg浓度的水溶液；步骤三、指纹图谱的建立分别精密取供试品溶液和参照物溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录色谱图，确定标准指纹图谱(见附图1)应有八个以上特征指纹峰，以异嗪皮啶的色谱峰的保留时间为1计算相对相对保留时间，各特征峰相对保留时间分别为0.22+0.01、0.27±0.01、0.49±0.01、0.55±0.01、1.00(S)、1.12±0.03、1.23±0.01、1.45±0.01；供试品指纹图谱与标准指纹图谱的相似度不得小于0.90。
采用不同的高效液相色谱仪及选用色谱条件的不同其标准指纹图谱的八个特征峰的出峰时间、保留时间、峰面积会有所不同，本发明经多次、反复的试验和条件摸索，确立较佳的色谱条件是十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；0.1％乙酸甲醇溶液-0.1％乙酸水溶液为流动相，线性梯度洗脱；流速为0.5ml/min；检测波长340nm；柱温为40℃；以异嗪皮啶计算，理论塔板数不低于20000。
本发明的优越性是建立了九节茶水提物的标准指纹图谱，方便辨别清热消炎宁产品的正假，可以有效地控制产品的质量；该方法重现性、稳定性好，操作方法简便、精密度高。
下面结合实施例及其附图详细阐述本发明的技术方案。
图1、为九节茶水提物的标准指纹图谱。
图2、为参照物异嗪皮啶的高效液相色谱图。
图3、13批供试样品的指纹图谱。
图4、5批供试样品的指纹图谱。
具体实施方案实施例1、标准指纹图谱的建立。
具体操作方法如下步骤一、供试品的溶液制备样品1，取九节茶2192kg，水煎两次，每次两小时，滤过合并滤液，浓缩成稠膏，低温干燥，磨成细粉，得细粉219kg，取细粉0.25g用水溶解后定容至25ml，即得1ml中含10mg细粉的水溶液；样品2～14，取广州敬修堂(药业)股份有限公司生产的13批清热消炎宁胶囊，批号为011114、011241、011242、020101、020102、020103、020104、020105、020106、020107、020108、020109、020110，各取胶囊内容物细粉0.25g用水溶解后定容至25ml，即得；步骤二、参照物溶液的制备精密称取中国生物制品检定所提供的异嗪皮啶标准品1mg，置于10ml量瓶中，用水溶解并稀泽至刻度，即得1ml中含0.1mg浓度的水溶液；步骤三、标准指纹图谱的建立采用Agilent 1100高效液相色谱仪，用Agilent Hypersil ODS柱(5-Micron，4.0mm×250mm)，十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，0.1％乙酸甲醇溶液-0.1％乙酸水溶液为流动相，线性梯度洗脱；流速为0.5ml/min；检测波长340nm；柱温为40℃；以异嗪皮啶计算，理论塔板数为24576。
取参照物溶液10μl注入高效液相色谱仪，得高效液相色谱图，见附图2；
取供试品溶液10μl注入高效液相色谱仪，得高效液相色谱图；用供试品溶液样品1，在一天内连续进样共5次，记录各色谱峰的保留时间和面积，以异嗪皮啶为参照，计算相对保留时间和峰面积比值以及RSD如表1和表2表1相对保留时间变异情况
表2峰面积比值精密度
由表可知，各色谱峰相对保留时间和峰面积比值的RSD均小于2％，说明仪器稳定；供试品溶液在常温下一天之内具有很好的稳定性。
样品2～14的指纹图谱见附图3。指纹峰保留时间见表3；指纹峰的相对保留时间见表4；指纹峰的峰面积值见表5；指纹峰面积比值见表6；
表3清热消炎宁指纹峰保留时间(min)
表4清热消炎宁指纹峰相对保留时间
从13批清热消炎宁产品的分析结果来看，指纹峰保留时间和相对保留时间比较稳定表5清热消炎宁指纹峰面积值
表6清热消炎宁指纹峰面积比值
从上述结果可以知道，相对保留时间、峰面积比值的RSD都较小，说明该方法的重现性良好。
根据上述样品的测试，确定标准指纹图谱，见附图1，有八个以上特征指纹峰，以异嗪皮啶的色谱峰的保留时间为1计算相对相对保留时间，各特征峰相对保留时间分别为0.22±0.01、0.27±0.01、0.49±0.01、0.55±0.01、1.00(S)、1.12±0.03、1.23±0.01、1.45±0.01；13批样品的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，以计算机辅助相似度计算机软件计算，结果如表7表7.13批清热消炎宁指纹图谱相似度计算结果
从表可知，各批次产品指纹图谱整体相似度较高，均在0.9以上。
实施例2、考察5批工业生产样品的指纹图谱的色谱峰相对保留时间和峰面积比值的变异情况及与标准指纹图谱的相似度。
操作方法步骤一、供试品溶液的制备分别取广州敬修堂(药业)股份有限公司生产的批号为C07202、C07203、C08205、C08206、C08207的清热消炎宁，取胶囊内容物细粉0.25g用水溶解后定容至25ml，即得，共配制5份供试品；步骤二和三同实施例15份样品的指纹图谱见附图4，其色谱峰相对保留时间和峰面积比值的变异情况和相似度，如表8～10。
表8相对保留时间重现性
表9峰面积比值重现性
从上述结果可以知道，相对保留时间、峰面积比值的RSD都较小，说明该方法的重现性良好。
相似度结果如下
权利要求
1.一种九节茶水提物的质量控制方法，其特征是采用指纹图谱控制质量，按如下步骤进行步骤一、是供试品溶液的制备取九节茶，加水煎煮二次，合并滤液，浓缩成稠膏，低温干燥，粉碎成细粉，取细粉配成每1ml中含10mg细粉的水溶液，或直接取清热消炎宁胶囊的内容物配成每1ml中含10mg细粉的水溶液；步骤二、是参照物溶液的制备取异嗪皮啶配成每1ml中含0.1mg浓度的水溶液；步骤三、是指纹图谱的建立分别精密取供试品溶液和参照物溶液各10μ1，分别注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录色谱图，确定标准指纹图谱应有八个以上特征指纹峰，以异嗪皮啶的色谱峰的保留时间为1计算相对相对保留时间，各特征峰相对保留时间分别为0.22±0.01、0.27±0.01、0.49±0.01、0.55±0.01、1.00(S)、1.12±0.03、1.23±0.01、1.45±0.01；供试品指纹图谱与标准指纹图谱的相似度不得小于0.90。
2.根据权利要求1所述的九节茶水提物的质量控制方法，其特征是步骤三中的色谱条件是十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；0.1％醋酸甲醇溶液为流动相，线性梯度洗脱；流速为0.5ml/min；检测波长340nm；柱温为40℃；以异嗪皮啶计算，理论塔板数不低于20000。
全文摘要
九节茶水提物的质量控制方法，涉及药品化学分析方法。是一种采用高效液相色谱法建立的指纹图谱控制产品质量，标准指纹图谱应有八个以上特征指纹峰，以异嗪皮啶的色谱峰的保留时间为1计算相对相对保留时间，各特征峰相对保留时间分别为0.22±0.01、0.27±0.01、0.49±0.01、0.55±0.01、1.00(S)、1.12±0.03、1.23±0.01、1.45±0.01；供试品指纹图谱与标准指纹图谱的相似度不得小于0.90。该方法可以有效地控制产品的质量，重现性、稳定性好，操作方法简便、精密度高。
文档编号G01N30/00GK1563975SQ200410026578
公开日2005年1月12日 申请日期2004年3月24日 优先权日2004年3月24日
发明者黄海涛, 彭红英, 陈风庭, 陆颂规, 郑少鑫 申请人:广州敬修堂(药业)股份有限公司