专利名称：测定奶体细胞数的方法
技术领域：
本发明涉及一种测定体细胞数的方法。
背景技术：
奶制品是营养最丰富的食品之一，在我国的发展速度极快，原料奶则是加工一切奶制品的基础。在原料奶的品质指标中，体细胞数是一个重要的品质和卫生指标。原料奶体细胞即白细胞，其在原料奶中的数量直接与原料奶的品质和卫生状态有关，因为，只有在细菌感染或其它刺激的条件下，动物本身会产生应急，产生大量的白细胞，进行抵御。因此，牛奶生产中，原料奶中的体细胞数与奶牛感染乳房炎、特别是隐性乳房炎有直接的关系。同时体细胞数量多的牛奶在加工中处理较一般的奶不一样。因此，世界各国均将奶体细胞数作为原料奶收购的一个重要指标。
体细胞是指每毫升奶中的细胞总数，多数是白细胞(即巨噬细胞、嗜中性白细胞和淋巴细胞)，约占体细胞数的98％～99％，其他1％～2％的体细胞是乳腺组织脱落的上皮细胞。
例如奶牛体细胞数增加将引起奶牛产奶量下降，这是由于侵入乳房的细菌及其分泌的毒素损伤乳腺组织的结果。同时使牛奶中不欢迎脂肪酶及血纤维蛋白酶奶乳酸菌繁殖，并且减少奶品存储时间。血纤维蛋白酶减少牛奶中酪蛋白含量，并且减少干酪产量。即使在冷藏条件下，这些酶仍然发挥作用，影响奶制品的质量。因此，牛奶中体细胞数是奶牛乳房健康状况和牛奶质量的重要指标，目前世界上大部分国家将牛奶体胞数作为牛奶收购标准之一。
因此，牛奶体细胞与奶牛乳房炎密切相关，与牛奶的品质密切相关，这两者足以影响牛奶的质量，同时牛奶体细胞数是奶牛养殖和管理的一个重要指标，目前世界各奶业发达国家都将牛奶体细胞数作为牛奶收购的主要质量指标和诊断隐性乳房炎的指标，其测定技术对于乳品行业的发展十分重要。
目前，测定奶体细胞的方法有显微镜镜检法是测定奶体细胞数的标准方法，但制备样品计数，镜检费时、费力，不适合于作为现场快速、大样品量使用；荧光显微镜计数法的制片、镜检要占许多时间，不适合于大量快速检测应用；加利福尼亚乳房炎试验(CMT)是凭经验，不能得到具体的体细胞数，只能划分出一个大致的范围；高速体细胞计数仪售价极贵，不能普及使用。
发明内容
本发明的目的是提供一种简便易行和快速的测定奶体细胞数的方法。
本发明的目的是通过下述步骤实现的1)取一定量的原料奶；2)在原料奶中加入表面活性剂溶液，搅拌混合均匀后形成凝胶性混合物；3)用粘度计测定凝胶性混合物的粘度；4)根据粘度与体细胞数的线性关系，确定原料奶中的体细胞数。
所述原料奶指生产中作为原料使用的奶，如新鲜的牛奶、羊奶、山牛奶、加防腐剂或冷藏的奶。
所述表面活性剂主要是十二烷基磺酸钠，或以十二烷基磺酸钠为主要原料配制而成的其它表面活性剂。
所述粘度计可以是各种适用的粘度计，如涂-4粘度计、落球粘度计、旋转式粘度计、管径在1-5mm的玻璃毛细管粘度计、超声波粘度计。
原料奶中的体细胞及量娄有数量如下特征1。在乳腺受伤害或感染时大量增加；2。体细胞特别是多形体细胞与乳中的其它的细胞或细菌相比含有大量的脱氧核糖核酸(DNA)；3。牛奶体细胞膜的主要成为的脂质。因此，选择一种表面活性剂将体细胞的膜和细胞核壁溶解，从而释放出DNA，大量的DNA可以自己粘连在一起形成凝胶性物质，混合物的粘度从而增加，其粘度的大小与体细胞数的多少呈正比，因此，测定此混合物的粘度即可准确测定原料奶中体细胞数量。
取一定量的原料奶，并在其中加入与其量相同的浓度为5％的表面活性剂溶液，将它们搅拌形成凝胶性混合物后，用3mm的玻璃毛细管粘度计在常温下测出其粘度(秒)，再根据数学统计学中的回归分析方法得出奶体细胞数与粘度呈正相关。其相关方程为y＝3.365x-30.337，R2＝0.9938，y-为体细胞数，x-为粘度(秒)，R2-为相关系数。由相关方程得到奶体细胞数与粘度(秒)的关系图。
本发明由于采用粘度原理测定奶体细胞数，它比公认方法的显微镜镜检法、荧光显微镜计数法的测定速度要快50倍以上，所用的设备和仪器简便易行，价格便宜，便于在收奶站和中小牛奶企业中推广应用。
图1是奶体细胞数与粘度的关系示意图。
具体实施例方式
取25ml新鲜牛奶，在其中加入25ml浓度为5％的十二烷基磺酸钠溶液，将它们搅拌均匀后，形成凝胶性混合物，用3mm的玻璃毛细管粘度计测出其粘度，再根据图1即可确定新鲜牛奶中的体细胞数。
权利要求
1.一种测定奶体细胞数的方法，其步骤如下1)取一定量的原料奶；2)加入表面活性剂溶液，搅拌后形成凝胶性混合物；3)用粘度计测定凝胶性混合物的粘度；4)根据粘度与体细胞数的线性关系，确定原料奶中的体细胞数。
全文摘要
一种测定奶体细胞数的方法，其步骤是取一定量的原料奶；加入表面活性剂溶液，搅拌后形成凝胶性混合物；用粘度计测定凝胶性混合物的粘度；根据粘度与体细胞数的线性关系，确定原料奶中的体细胞数。本发明比公认方法的显微镜镜检法、荧光显微镜计数法的测定速度要快50倍以上，所用的设备和仪器简便易行，价格便宜，便于在收奶站和中小牛奶企业中推广应用。
文档编号G01N11/00GK1587975SQ20041005400
公开日2005年3月2日 申请日期2004年8月23日 优先权日2004年8月23日
发明者叶兴乾, 刘东红, 陈健初, 程文健 申请人:浙江大学