专利名称：用于确定妇产科并发症风险率的酶活性和pH测试方法
技术领域：
总的说来，本发明涉及用于确定妇产科并发症风险的一种酶测试方法和/或两种与pH评估相结合的组合式酶测试方法，具体而言，本发明涉及一种用于选择具有发生与妇产科并发症、泌尿系统紊乱、性传播疾病、病毒感染、和泌尿生殖道中的恶性肿瘤相关病症的高风险的妇女人群的方法。
背景技术：
对医生来说，与妇产科并发症相关的多种病症是众所周知的，例如，低出生体重(出生时＜2500g，LBW)、极低的出生体重(出生时＜1500g，VLBW)、自然早产(妊娠不到37周时的自然分娩，PTD)、包括所有自然或诱发性早产的早期早产(妊娠不到35周、或34周、或32周时的分娩，EPTD)、胎膜早破(PROM)、胎膜早破的早产(PPROM)、自然流产、早期和晚期流产、临床或亚临床绒毛羊膜炎(chorioamnionitis)、内羊膜感染、产后大出血(PPH)、自然流产后感染、产科手术感染、产后或妇产科手术后感染、骨盆手术感染、子宫内膜炎、导致不孕症的上生殖道感染、盆腔炎(PID)、附件炎、子宫颈炎、泌尿系感染、泌尿道紊乱、诸如沙眼衣原体或淋病这样的性传播疾病、包括人乳头状瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)、人体免疫缺损病毒(HIV)的性获得病毒感染、和例如ASCUS和CIN(子宫颈上皮瘤)的恶化前或恶化状态。
具体来说，众所周知，低出生体重包括极低的出生体重，它主要由早产(PTD)引起的，是新生儿发病的主要致病因素，包括产期HIV-1传播、新生儿呼吸窘迫综合症(RDS)，它导致了供新生儿的机械通风的使用、婴儿住院时间的延长、母亲和新生儿的住院费用、婴儿死亡率的增高，以及长期的婴儿神经系统紊乱，它包括脑性麻痹、认知和记忆行为差，在三岁或四岁后变得很明显。大部分的LBW病例都没有公认的病因，这使得目前的预防措施起不到作用。然而，很多调查已经显示，阴道菌群变异尤其是细菌性阴道病(BV)与早产(PTD)、低体重婴儿的早产、LBW、PROM、PPROM、流产、早期流产和晚期流产相关(相应的风险率相对于没有BV时增加了1.4倍到6.9倍)、并且通常与母亲的并发症相关联。总之，只有少部分患有BV的妇女有不良的妊娠结果6.3％产下LBW早产婴儿，3.4％产下LBW足月婴儿。因此，在阴道菌群变异的妇女中，需要用于LBW和早产的更为特异性的预测标记物。
细菌性阴道病由不同的细菌种类所引起，主要是厌氧性、或兼性的细菌，但也可以是好氧性的，包括阴道加特纳菌(G.vaginalis)、类杆菌属、普雷沃菌属及动弯杆菌属、格蓝氏阳性球菌、解脲支原体和人型支原体。细菌性阴道病的发病机理仍不为人所知，而且不是总能很容易地诊断出这种病理性疾病的存在。具体而言，还不知道是什么引起了正常的乳酸杆菌集群转变为变异的阴道菌群，或者，阴道微生物菌群变异对于真实的病理性疾病的指示程度也不清楚。
细菌性阴道病的关键问题在于阴道加特纳菌和厌氧性细菌之间的协同作用。在超过95％的细菌性阴道病病例中，发现阴道加特纳菌具有较高的滴定度，而在没有细菌性阴道病的妇女中，发现阴道加特纳菌群的滴定度较低。然而，阴道加特纳菌和细菌性阴道病状况之间的严格的相关性已经得到了论证。阴道加特纳菌所释放的唯一的完全特异性的毒性因子为分子量约59,000道尔顿的β溶血毒素(Gvh)。此外，研究显示，大约一半的非妊娠妇女针对在阴道粘膜水平诱发IgA抗体(抗-Gvh IgA)的Gvh产生了免疫反应。患有BV的非妊娠妇女缺乏抗-GVh IgA抗体主要是由于IgA的失活引起的，这种现象与高水平阴道水解酶活性的存在有关，具体说来与唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶活性有关。阴道免疫球蛋白的这种失活源于IgA的结构损伤，这很可能是由厌氧性细菌释放的一批因子的水解作用而引起的。
目前还不知道有多少个抗菌宿主的因子和哪些因子受到了损害，或者说，哪些微生物毒性因子诱发了患有细菌性阴道病的妇女人群的IgA分裂。
然而，已经证实，提高阴道IgA水平可以预防LBW和PTD。
作为一种真实的病理性疾病，阴道菌群变异类型的定义仍不确定，这使得临床医生面临这样一个问题，即是否给具有某种程度的已变异阴道菌群或诊断患有细菌性阴道病的妇女实施药物治疗。众所周知，有两种不同的药物用来治疗细菌性阴道病灭滴灵或氯林可霉素。这两种药都显示出一个主要的缺陷，即都具有相应的不良副作用，具体说来，灭滴灵能引起肠胃症状，并被认为是一种致畸剂，因此在妊娠过程中不推荐使用，另一方面，氯林可霉素能引起腹泻和伪膜结肠炎(pseudomembranous colitis)，这可能是致命的。而且这两种抗生素都可能引起酵母阴道炎。
在西欧，在所有的女性人群中，细菌性阴道病的流行程度估计约为10％～20％；在美洲为10％～50％，黑人和美籍西班牙人的发病频率更高；在非洲为30％～60％；在亚洲为20％～50％。由于可能产生的治疗副作用和/或由于成本的原因，不是所有的这种BV阳性妇女都能进行BV的药物治疗，因此，需要更多的预测性标记物来选择真正处于不良并发症危险的妊娠和非妊娠、受孕、近绝经期和绝经后的妇女。
由于上述原因，非常需要开发出一种选择具有高风险病理性并发症的妇女人群的方法，该病理性并发症如上面所确定。
除此之外，所述人群的确定尤其应该在妊娠的最初阶段，或者最好是在妊娠之前识别那些具有高风险并发症的妇女，使得临床医生能够进入最佳状态，从而决定是否以及何时向患者建议上述治疗。这样，能够有利地避免相关的副作用。
同一申请人的WO 02/065122号专利申请公开了一种用于在妇女体液样本中确定与唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶活性存在有关的病症风险的酶检验方法。具体而言，所述测试方法由以下步骤组成a)在该样本中确定唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级；b)将该唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级与前置值范围相比较；c)计算风险因子。接下来，通过对pH值高于或等于4.7的阴道液样本进行考查，计算得到病症风险率。
应该注意的是，该测试方法对于选择具有已确定风险率的特定妇女人群是没有用处的，它通常用来确定风险率。
此外，该测试方法无法对那些在妊娠早期阶段可能产生上述如早期早产等病症的妇女进行区分或识别。
发明内容
本发明的第一个目的在于解决这样的问题，即为了向医生提供一种有价值的工具以确定是否实施药物治疗，而提供一种可靠的方法，用以识别具有发生上述并发症的高危妇女人群。
本发明的第二个目的在于解决这样的问题，即提供一种识别在妊娠初期阶段具有发生上述并发症的高危妇女人群的方法。
为了完成本发明的上述目的，本发明的第一方面提供了一种用于选择具有发生产科或妇科病症的风险的特定妇女人群的方法，该风险用等于或高于5.5的OR值来表示，该值分别以未患有病症的妇女的百分比进行计算，该方法按顺序包括以下步骤a)通过Cauci等人于Am.J.Obstet.Gynecol.1998；vol.178；p511-5所描述的方法，确定体液样本中的唾液酸酶的等级，以及/或者，通过Cauci等人于J.Infect.Dis.1998；vol.178；p1698-706所描述的方法，确定体液样本中的氨酰基脯氨酸二肽酶活性；b)确定该体液样本的pH值；c)选择具有唾液酸酶值等于或高于5.0nmol甲氧基苯酚和/或氨酰基脯氨酸二肽酶等级等于或高于1500mOD和pH≥5.0的样本。
本发明的第二方面提供了一种用于选择具有发生VLBW、妊娠不到37周、妊娠不到35周或妊娠不到32周分娩的风险的特定妇女人群的方法，该方法按顺序包括以下步骤a)通过Cauci等人于Am.J.Obstet.Gynecol.1998；vol.178；p511-5所描述的方法，确定体液样本中的唾液酸酶的等级，以及/或者，通过Cauci等人于J.Infect.Dis.1998；vol.178；p1698-706所描述的方法，确定体液样本中的氨酰基脯氨酸二肽酶活性；
b)确定该体液样本的pH值；c)选择具有pH≥5.0和唾液酸酶值高于0.19nmol甲氧基苯酚和/或氨酰基脯氨酸二肽酶等级值高于22mOD的样本。
本发明的第三方面提供了一种用于确定具有发生产科或妇科病症风险的妇女的试剂盒，该风险用高于5.5的OR值来表示，其优选通过SPSS计算机统计方法进行计算，该试剂盒包括溶液，其用于在溶液中进行唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性分析，该溶液包括在其中接种该生物样本的无色底物(substrate)溶液；显影液，其位于配备有调合器的容器中；第一基准标度，其用来将等于或高于0.19nmol甲氧基苯酚的唾液酸酶活性等级和/或等于或高于22mOD的氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级与该显色强度联系起来；pH指示剂；第二基准标度，其用来将由该指示剂检测得到的pH与pH≥5.0联系起来；以及，说明书，其包含正确使用该试剂盒的用法说明。
本发明的第四方面提供了一种用于确定具有发生LBW、VLBW、PTD、妊娠不到37周、不到35周或不到32周分娩的风险的妇女的试剂盒，该试剂盒包括溶液，其用于在溶液中进行唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性分析，该溶液包括在其中接种该生物样本的无色底物溶液；显影液，其位于配备有调合器的容器中；第一基准标度，其用来将等于或高于0.19nmol甲氧基苯酚的唾液酸酶活性等级和/或等于或高于22mOD的氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级与该显色强度联系起来；pH指示剂；第二基准标度，用来将由所述指示剂检测得到的pH与pH≥5.0联系起来；以及，说明书，其包含正确使用该试剂盒的用法说明。
通过如本申请所要求的保护范围中的一种用于在体液样本中选择具有与唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶和pH水平有关的病症的高危妇女人群的方法，这些问题得以迎刃而解。
本发明的方法的其他目的和优点将通过随后的优选实施例的描述而进行强调，本申请给出的实施例为示例性的，而不是限定性的。
具体实施例方式
通过多个详细的研究，已经惊奇地发现，体液样本中对pH阈值≥5.0结合高唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性进行识别用以选择具有发生上述病症风险的妇女是一个关键问题，这些妇女的风险比普通妇女明显高出20倍甚至30倍。
可以理解，根据本发明，不仅可以确定那些具有发生上述病症风险的妇女，而且更为有利的是还可以确定那些以前从未识别的高危妇女，除此之外，还可以确定在妊娠的最初阶段获得最差的不良结果的风险。
应该注意的是，该方法可应用于妊娠及非妊娠、受孕、近绝经期和绝经后的妇女。
为了建立本发明的方法，对多个临床病例进行了研究，并将其与未患有公认的病理性疾病的妇女的对照标准进行了比较。具体来说，对133位生有低出生体重婴儿(LBW，＜2500g)的妇女测量了唾液酸酶活性，在其中有24位妇女生有极低的出生体重的婴儿(VLBW，＜1500g)，并对467位在妊娠期间生有正常出生体重的婴儿(NTD，新生儿体重＞2500g)的妇女的唾液酸酶活性进行了测量。对131位生有低出生体重婴儿(LBW)的妇女测量了氨酰基脯氨酸二肽酶活性，在其中有23位妇女生有极低的出生体重的婴儿(VLBW)，并对465位在妊娠期间生有正常出生体重的婴儿(NTD，新生儿体重＞2500g)的妇女的氨酰基脯氨酸二肽酶活性进行了测量。
在所有这些妇女的阴道液样本中对唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性的存在进行了检测，而且，对该唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级进行了评估。同样，还对pH水平进行了检测。
唾液酸酶是由细菌产生的酶，其与多种疾病的发病机理直接相关。这些酶引起各种包括IgA的糖蛋白进行唾液酸水解，并激发先天免疫因子，例如白介素、乳铁蛋白、SLPT，因此改变了免疫反应。氨酰基脯氨酸二肽酶是由细菌产生的蛋白水解酶，以促进细胞的浸润。这些酶能活化细胞因子和其他的免疫介体。
利用Cauci等人于Am.J.Obstet.Gynecol.1998；vol.178；p511-5所描述的操作方法，在pH≥5.0条件下，用50μl的底物(substrate)对50μl阴道液样本进行温育，从而确定唾液酸酶的活性。特异活性用从底物转化而得到的甲氧基苯酚的纳摩尔数来表示，并通过将其与纯甲氧基苯酚的标准曲线进行比较而进行计算。唾液酸酶活性等级这样进行评估甲氧基苯酚值低于0.19nmol时不具有活性；甲氧基苯酚值等于或高于0.19nmol时活性为+1临界值；甲氧基苯酚值等于或高于0.38nmol时活性为+2临界值；甲氧基苯酚值等于或高于2.50nmol时活性为+3临界值；以及，甲氧基苯酚值等于或高于5.0nmol时活性为+4临界值。
氨酰基脯氨酸二肽酶活性的确定如Cauci等人于J.Infect.Dis.1998；vol.178；p1698-706所述。氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级这样进行评估氨酰基脯氨酸二肽酶值低于22mOD时不具有活性；氨酰基脯氨酸二肽酶值等于或高于22mOD时活性为+1临界值；其值等于或高于44mOD时活性为+2临界值；其值等于或高于1000mOD时活性为+3临界值；其值等于或高于1500mOD时活性为+4临界值；以及，其值等于或高于2000mOD时活性为+5临界值。
通过将平均值与从健康标准人群中(即，不具有任何的阴道症状，其除了乳酸杆菌外没有微生物阴道集群)测量得到的标准偏差相加，而计算得到唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶活性的+1临界值。将+1临界值乘以2即得到+2临界值。对于唾液酸酶活性，将+4临界值除以2即得到+3临界值。对于氨酰基脯氨酸二肽酶活性，将+5临界值除以2即得到+3临界值。对于氨酰基脯氨酸二肽酶活性，+4临界值为+3和+5临界值的中值。
所附的表1示出的数据是从阴道标记物pH≥5.0自身或者结合唾液酸酶等级(≥+1到≥+4)或氨酰基脯氨酸二肽酶等级(≥+1、≥+3、≥+4、和≥+5)与体重超过2500g(NBW)、LBW、或VLBW的新生婴儿之间的相关性推导获得的。具体说来，在第一条线之上，从左到右，数据示出了pH≥5.0的NBW妇女的百分比、pH≥5.0的LBW妇女的百分比、P值、几率比(OR)和95％置信区间(CI)值。此外，继续在同一条线上，数据示出了pH≥5.0的VLBW妇女的百分比、p值、几率比和95％CI值。在第二条线之上，从左到右，数据示出了pH≥5.0以及遵循上述标准的唾液酸酶等级≥+1的妇女的百分比。同样地，在其余的线上，针对上面确定的其他唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶等级重复了同样的标准。
应该注意的是，加粗数据示出了从LBW妇女或VLBW妇女的百分比分别与NBW妇女的百分比之间的比率推导获得的风险系数(几率比，OR)。选择这种统计方法来对结果的风险率进行评估，是因为它是被普遍接受的方法，用以对例如最近的论文(“PracticalStatistics for Medical Research”，Douglas G.Altman，Chapman andHall Editor，London)的以往的病例对照标准研究中的相对风险率进行评估。具体来说，对几率比进行计算，从而对每一个不良妊娠结果的风险进行评估。可利用已知的统计方法，例如，SPSS计算机统计方法来计算几率比。
还报导了不变的比例比较，其利用X2测试(即Pearson双尾测试，在表中的p值)来实施。所有＜0.05的p值在统计学上都认为是显著的。
最后，对95％置信区间(CIs)进行计算，来估计几率比的置信范围，也就是说，置信值的范围中具有95％的可能性包括真值，OR的统计学上有效的95％CI范围是那些具有下限为1.0的值。
具体来说，阴道液样本从处于妊娠阶段的头三个月或第二个三个月的妇女获得，或者从具有完整胎膜的处于第三个三个月的妇女获得，优选地，从处于妊娠第6整周到第24整周之间阶段范围的妇女获得。
表1中示出的主要结果为OR值，因为它表征了低出生体重(LBW)或极低的出生体重(VLBW)的风险指数。
如果比值低于1，则意味着该妇女没有并发症的危险，或者她针对不良结果得到了保护。比值范围1～2与并发症的中等风险相关联。如果比值在2～5.5之间，则意味着该妇女具有较高的并发症风险。最后，如果比值高于5.5，那么意味着该妇女具有极高的妊娠期不良结果的风险，例如低出生体重或早产。
具体说来，在带有标题的实施例中，相应于OR值等于2的中等风险意味着该患者与普通妇女相比较，具有双倍的并发症风险，也就是说，其风险高出100％。
优选地，该结果可用记号来进行指示-代表低风险或无风险，+代表中等风险；++代表高风险；以及，+++代表极高的风险。
表1强调，对于LBW，pH≥5.0自身与不显著的OR值1.6(p值为0.050，95％CI为0.99～2.4)相对应。当按照临界值≥+1到≥+3、结合唾液酸酶活性对pH≥5.0进行检测时，显著的OR值分别为3.5、3.3、和3.8。然而，pH≥5.0与唾液酸酶活性≥+4相结合时，OR竟然为9.9，也就是说，与其他OR值相比约高达3倍。
对于VLBW，可观察到同样的趋势，其中，具体来说，结合唾液酸酶活性≥+4，与pH≥5.0相关的OR值更高(为22)。
表1的另一半示出了与氨酰基脯氨酸二肽酶等级相关的数据。参照唾液酸酶等级进行的观察同样可用于氨酰基脯氨酸二肽酶等级。具体而言，对于LBW，相对于结合pH≥5.0与氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+1和≥+3所得到的OR值，当结合很高的氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+5，对pH≥5.0(OR＝9.2，95％CI为1.8～48，以及p值＝0.001)进行检测时，OR值令人意外地增加到了3倍多。
此外，出乎意料的是，对于VLBW，在具有很高的氨酰基脯氨酸二肽酶等级(≥+5临界值)和pH≥5.0(OR＝22，95％CI为3.0～164，p＜0.001)的妇女中，观察到了很高的OR值。
换句话说，从上述数据可得出，存在pH≥5.0时，相应于唾液酸酶等级的增加，OR值有本质上的增加。然而，已经发现，当检测到高唾液酸酶等级以及pH≥5.0时，OR值显著增加。这意味着当检测到唾液酸酶等级≥+4以及pH≥5.0时，与VLBW一样，存在着很高的LBW风险。
同样地，相应于氨酰基脯氨酸二肽酶等级的增加，OR值有本质上的增加。然而，当检测到高氨酰基脯氨酸二肽酶等级(≥+4或≥+5)以及pH≥5.0时，OR值显著增加。这意味着当检测到氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+4或≥+5以及pH≥5.0时，与VLBW一样，存在着很高的LBW风险。
在上述临床研究的第二阶段中，为了计算LBW和VLBW婴儿的风险，结合pH≥5.0以及氨酰基脯氨酸二肽酶和唾液酸酶等级，而进行了参照上述表1所披露的同样的方法。具体而言，参照表2，针对四个唾液酸酶等级的每一个，加入了递增的氨酰基脯氨酸二肽酶等级。从数据可以看出，pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+1、≥+2、或≥+3以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+4或≥+5之间的结合，对于LBW及VLBW产生了等于或大于5.5的显著的OR值。除此之外，pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+4以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+1、≥+3、≥+4或≥+5之间的结合，对于LBW及VLBW产生了远大于5.5的显著的OR值(参见表2的最后一组数据)。
在上述研究的第三阶段中，为了计算自然分娩(无需用药的)的风险，包括妊娠37周前的胎膜破裂和阵痛(PTD)的开始，而进行了参照上述表1所披露的同样的方法。具体而言，已经对418位NTD妇女和106位PTD妇女测量了唾液酸酶活性。对416位NTD妇女和104位PTD妇女测量了氨酰基脯氨酸二肽酶活性。
表3示出的数据是从阴道标记物pH≥5.0自身或者结合唾液酸酶等级(≥+1到≥+4)或氨酰基脯氨酸二肽酶等级(≥+1到≥+5)与体重超过2500g(NTD)或PTD的新生婴儿之间的相关性推导获得的。所有所分析的参数都与表1中的相对应。具体说来，表3示出了pH≥5.0自身与任意妊娠不到37周时的早产在统计学上没有关联。然而，pH≥5.0与唾液酸酶等级从≥+1到≥+3相关联，产生了显著的递增OR值，分别为3.4、3.8和4.7。令人惊讶的是，pH≥5.0与唾液酸酶等级≥+4相关联示出了一个显著的OR值34(p值＜0.001，95％CI为4.2～275)。同样地，pH≥5.0与氨酰基脯氨酸二肽酶等级从≥+1到≥+3相关联，产生了统计学上显著的递增OR值，分别为2.2、2.9和4.8。令人惊讶的是，pH≥5.0与氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+4相关联示出了OR值为6.9，并且，当氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+5时，得到一个很大的OR值为17(p值＜0.001，95％CI为4.2～275)。
在上述临床研究的下一个阶段中，为了确定与pH≥5.0以及氨酰基脯氨酸二肽酶和唾液酸酶等级相关的PDT风险，而进行了参照上述表2所披露的同样的方法。具体来说，参照表4，针对四个唾液酸酶等级的每一个，加入了递增的氨酰基脯氨酸二肽酶等级。从数据可以看出，pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+1、≥+2、或≥+3以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+4或≥+5之间的结合，对于PTD产生了大于5.5的显著的OR值。除此之外，pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+4以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+1、或≥+2之间的结合，对于PTD产生了远大于5.5的极高的OR值(参见表4的最后一组数据)。还应该注意的是，对于pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+3以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+5，以及pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+4以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+3、≥+4或≥+5，没有发现可以进行计算的值，因为没有发现具有该相结合的值的NTD。换句话说，这意味着，那些具有该值的患者会早产。
在上述临床研究的另一个阶段中，为了计算所有的在妊娠不到37周(＜37周)、妊娠不到35周(＜35周)、和妊娠不到32周(＜32周)分娩的风险率，而进行了参照上述表1所披露的同样的方法。具体来说，已经对418位NTD妇女、138位在妊娠不到37周分娩的妇女、57位在妊娠不到35周分娩的妇女、和22位在妊娠不到32周分娩的妇女测量了唾液酸酶活性。对416位NTD妇女、136位在妊娠不到37周分娩的妇女、55位在妊娠不到35周分娩的妇女、和21位在妊娠不到32周分娩的妇女测量了氨酰基脯氨酸二肽酶活性。
表5示出了pH≥5.0自身产生一个统计学上不显著的OR值1.3。但是，当pH≥5.0与唾液酸酶等级≥+1、≥+2、≥+3相关联时，对于在妊娠不到37周分娩产生了显著的递增OR值(2.9、3.1、3.5)。对于在妊娠不到35周的分娩已经发现了同样的结果(分别为3.3、3.5、4.8)。对于在妊娠不到32周的分娩可观察到OR更高的增加值(分别为5.2、6.2、10)。引人注目的是，高唾液酸酶等级(≥+4)与pH≥5.0相结合具有统计学上显著的和很大的OR值，具体说来，对于在妊娠不到37周的分娩，OR值为26；对于在妊娠不到35周的分娩，OR值为40；以及对于在妊娠不到32周的分娩，OR值为66。
对于氨酰基脯氨酸二肽酶等级为≥+1、≥+2、或≥+3，针对在妊娠不到37周、妊娠不到35周和妊娠不到32周的分娩，可观察到同样的趋势。具体而言，氨酰基脯氨酸二肽酶等级+4与pH≥5.0相结合，对于在妊娠不到37周的分娩OR值为5.8、在妊娠不到35周的早产OR值为8.2、以及在妊娠不到32周的早产OR值为19。氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+5与pH≥5.0相结合，对于在妊娠不到37周和在妊娠不到35周的早产，所产生的显著的OR值均为16、以及在妊娠不到32周的早产OR值为44。
在上述临床研究的又一个阶段中，为了确定pH≥5.0与氨酰基脯氨酸二肽酶和唾液酸酶等级相结合相关的情况下，在妊娠不到37周、妊娠不到35周、和妊娠不到32周分娩的风险，而进行了参照表2所披露的同样的方法。具体而言，参照表6，针对四个唾液酸酶等级的每一个，加入了递增的氨酰基脯氨酸二肽酶等级。从数据可以看出，pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+1、≥+2、或≥+3中的任意一个以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+4或≥+5之间的结合，对于所有被考查的病例都产生了大于5.5的显著的OR值。除此之外，pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+4以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+1、或≥+2之间的结合，对于所有被考虑的病例都产生了远大于5.5的极高的OR值(参见表6的最后一组数据)。还应该注意的是，对于pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+3以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+5，以及pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+4以及氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+3、≥+4或≥+5，没有发现可以进行计算的值，因为没有发现在妊娠不到37周、妊娠不到35周、或妊娠不到32周的分娩具有所述的相结合的值。换句话说，这意味着，那些具有所述值的患者将会分别在妊娠不到37周、妊娠不到35周、或妊娠不到32周时分娩。
从对上面评述的表格中示出的临床数据进行的分析来看，可以将LBW、VLBW、PTD、在妊娠不到37周、或妊娠不到35周或妊娠不到32周时的分娩，分别与患者体液中的唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级和pH阈值≥5.0联系起来。
在刚才所示结果的基础上，并且根据本发明，已经建立了一种方法，其用于选择具有发生产科或妇科病症风险的特定妇女人群，该风险用等于或高于5.5的风险系数OR值来表示，该方法按顺序包括以下步骤
a)通过Cauci等人于Am.J.Obstet.Gynecol.1998；vol.178；p511-5所描述的方法，确定体液样本中的唾液酸酶的等级，以及/或者，通过Cauci等人于J.Infect.Dis.1998；vol.178；p1698-706所描述的方法，确定体液样本中的氨酰基脯氨酸二肽酶活性；b)确定该体液样本的pH值；c)选择具有唾液酸酶值等于或高于5.0nmol甲氧基苯酚和/或氨酰基脯氨酸二肽酶等级等于或高于1500mOD和pH≥5.0的样本。
具体说来，体液样本可以是例如血液样本，或者，最好是阴道液样本。
步骤c)可通过诸如pH计或反应色带的任意已知方法来实施。具体而言，对pH阈值pH≥5.0和≤7.0进行了检测，优选地，pH为≥5和≤6，更为优选地，pH为≥5.0和≤5.5。而且，氨酰基脯氨酸二肽酶等级最好等于或高于2000mOD。
应该注意的是，本发明的方法不仅对选择具有发生上述病症、OR值等于或高于5.5的高危妇女人群有用，而且对识别具有计算得到的OR值在6.0和66之间的风险率的特定亚人群也有帮助，优选地，风险率在9.0和44之间，更为优选地，风险率在12和20之间。具体说来，对于LBW，该值在5.5和18之间；对于VLBW，该值在7和42之间；对于PTD，该值在6和34之间；对于在妊娠不到37周的分娩，该值在5.5和26之间；对于在妊娠不到35周的分娩，所述值在7.0和40之间；以及，对于在妊娠不到32周的分娩，该值在10和66之间。
考虑到该数据，根据本发明的另一目的，其提供了一种方法，用于选择在妊娠不到37周时具有上述并发症风险的妇女人群，或者优选地，用于选择在在妊娠不到35周时，或者更为优选地，在妊娠不到32周时具有上述并发症风险的妇女人群。
此外，参照表1，应该注意的是，当检测到pH≥5.0和唾液酸酶或氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+3时，对于VLBW也发现了高于5.5的OR值。除此之外，根据表2，对于VLBW，当检测到pH≥5.0、氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+3、和唾液酸酶等级≥+1或≥+2或≥+3时，发现OR值高于5.5。
根据表4，对于PTD，OR值6.2是与pH≥5.0、唾液酸酶等级≥+3、和氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+3的存在有关的。
根据表5，对于在妊娠不到32周的分娩，OR值高于5.5是与pH≥5.0和氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+2或唾液酸酶等级≥+2的存在有关的。
根据表6，对于在妊娠不到35周和不到32周的分娩，OR值高于5.5是与pH≥5.0、氨酰基脯氨酸二肽酶等级≥+3、和唾液酸酶等级≥+1或≥+2或≥+3的存在有关的，这与VLBW是一样的。
因此，根据本发明的另一目的，用于选择具有发生VLBW、在妊娠不到37周、妊娠不到35周、或妊娠不到32周分娩的风险的特定妇女人群的方法，按顺序包括以下步骤a)通过Cauci等人于Am.J.Obstet.Gynecol.1998；vol.178；p511-5所描述的方法，确定体液样本中的唾液酸酶的等级，以及/或者，通过Cauci等人于J.Infect.Dis.1998；vol.178；p1698-706所描述的方法，确定体液样本中的氨酰基脯氨酸二肽酶活性；b)确定该体液样本的pH值；c)选择具有pH≥5.0和唾液酸酶值高于0.19nmol甲氧基苯酚和/或氨酰基脯氨酸二肽酶等级高于22mOD的样本。
优选地，实施该方法用以选择上述人群，其中，用OR值表示的风险等于或高于5.5，用被广泛接受的方法对该OR值进行计算，从而对病例-对照标准研究中的相关风险进行评估，最好通过商业用SPSS计算机统计方法来进行评估。此外，可以对上面确定的同样的特定OR范围进行检测。
根据本发明的另一个目的，步骤c)包括选择具有pH≥5.0、唾液酸酶等级高于2.5nmol甲氧基苯酚或氨酰基脯氨酸二肽酶等级高于1000mOD的样本。
根据本发明的另一目的，步骤c)包括选择具有当所选择的氨酰基脯氨酸二肽酶值高于1000mOD时，pH≥5.0、唾液酸酶值高于0.19nmol或0.38nmol或2.5nmol甲氧基苯酚的样本。
根据本发明的又一目的，步骤c)包括选择具有pH≥5.0、唾液酸酶值为0.38nmol甲氧基苯酚和氨酰基脯氨酸二肽酶值高于22mOD、或高于44mOD、或高于1000mOD、或高于1500mOD、或高于2000mOD的样本。
现在，根据本发明的方法优点已经是很明显的了。
首先，该方法是能够选择具有发生产科或妇科病症风险的特定妇女人群的，该风险用如上所披露和计算的高于5.5的OR值来表示。因此，在医生的关注下，能够在可能发生所述病症的妇女之中进行非常重要的选择。反之，上面已经确定的现有方法就无法进行这样的重要选择。
其次，该方法能够预测风险是否处于妊娠37周之内或者处于妊娠35周之内，或者甚至处于妊娠32周之内。第三，该方法能够预测生出不到1500g的婴儿的风险，这与严重的发病率和高新生儿死亡率有关。这些进一步的数据被认为是非常重要的，这是因为它们给予医生一种工具，以通过最初期就对患者的临床状况进行评估，从而区分具有非常严重的不良后果的风险的患者，使得能在最佳条件下，对母亲和孩子都能进行治疗。
此外，根据上面所介绍的，本发明能够仅仅通过根据上述方法，对唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性和pH值进行检测，而对甚至是未妊娠妇女的非常高的风险进行预测。能够理解，在最后的病例中，该方法变得极其重要，因为它能够给予医生必要的临床数据，从而提出对其适当的治疗方法。
从这里开始，将对阴道液样本中的唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶活性确定的实施例进行陈述式的介绍，并不为本发明的标题所限制。
唾液酸酶活性的确定在室温下，利用50μl溶解在pH＝5的50mM的乙酸钠中的2-(3′-甲氧基苯基) -N-乙酰基-D-神经氨酸(2-(3’-methoxyphenyl)-N-acetyl-D-neuraminic acid)(Sigma公司生产)底物，将50μl阴道液样本在室温下温育90分钟。在加入4mM4-氨基安替比林和6mM铁氰化钾的显影液之后，具有唾液酸酶活性的样本显现出红色，其在492纳米可被测量到。其结果用加入显影液之后样本的吸光率与未加入显影试剂的存验样本的吸光率之间的差值来表示。特异活性通过与纯甲氧基苯酚的标准曲线进行比较来表示。
可选地，唾液酸酶活性的分析可用不同于2-(3′-甲氧基苯基)-N-乙酰基-D-神经氨酸(Sigma公司，M1393)的产色或荧光的底物来实施，例如，2-O-(邻-硝基苯基)-α-D-N-乙酰基神经氨酸(Sigma公司，N1266，N1516)、2′-(4-甲基伞形基)-α-D-N-乙酰基神经氨酸钠盐(2’-(4-methylumbelliferyl)-alfa-D-N-acetyl neuraminic acidsodium salt)(Sigma公司，M8639)、5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-N-乙酰基神经氨酸(X-NeuNAc)(Sigma公司，B4666；或Calbiochem公司203770)。
氨酰基脯氨酸二肽酶活性的确定在37℃下，利用50μl溶解在pH＝5的100mM的乙酸钠中的L-脯氨酸-对-硝基苯胺底物(Sigma公司生产)，将50μl阴道液样本在37℃下温育24小时。具有氨酰基脯氨酸二肽酶活性的样本显现出在405纳米可以测量到的黄色。不含底物的存验样本用来减去样本本底，而用没有阴道液的两个空白的平均值减去底物的自发水解。其结果用毫光学密度单位(mOD)来表示。
可选地，氨酰基脯氨酸二肽酶活性的分析可用不同于L-脯氨酸-对-硝基苯胺(Sigma公司，P5267)的产色或荧光的底物来实施，例如，L-脯氨酸-β-萘胺(L-proline-beta-naphthylamide)(Sigma公司，P1380)、N-苄氧基羰基-L-脯氨酰基-β-萘胺(N-benzyloxycarbonyl-L-prolyl-beta-naphthylamide)、N-苄氧基羰基-L-脯氨酸-对-硝基苯胺酯(Sigma公司，C4877)、羟基-L-脯氨酰基-β-萘胺(hydroxy-L-prolyl-beta-naphthylamide)、L-脯氨酸-7-氨基-4-甲基-香豆素(Sigma公司，P5898)、L-脯氨酸-4-甲氧基-β-萘胺(L-prolyl-4-meyhoxy-beta-naphthylamide)(Sigma公司，P9655)。
pH值的确定阴道液的pH值通过用试纸条(Merck公司，pH范围为4.0～7.0)来获得。
本发明的另一目的在于提供一种试剂盒，用于确定具有发生产科或妇科病症风险的妇女，该风险用如上所描述和计算的高于5.5的OR值来表示，该试剂盒包括溶液，其用于在溶液中进行唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性分析，该溶液包括在其中接种生物样本的无色底物溶液；显影液，其位于配备有调合器的容器中；第一基准标度，其用来将等于或高于0.19nmol、0.38nmol、2.50nmol、或5.0nmol甲氧基苯酚的唾液酸酶活性等级和/或等于或高于22mOD、44mOD、1000mOD、1500mOD、或2000mOD的氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级与显色强度联系起来；pH指示剂；第二基准标度，其用来将由所述指示剂检测得到的pH与pH≥5.0联系起来；以及，说明书，其包含正确使用该试剂盒的用法说明。
根据另一实施例，所述试剂盒还可包括固体支撑物，在其上进行唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性的测试，例如，平台，其由两个支撑在固体框架上的隔膜组成，并且包含酶底物和用于显色的试剂，生物样本通过该固体支撑物上的隔膜；第一基准标度，其通过所显现的颜色的强度来评估酶活性的存在；pH指示剂；第二基准标度，其用来评估pH值；以及，说明书，其包含正确使用该试剂盒的用法说明。
根据另一实施例，该试剂盒还可包括固体支撑物，在其上进行唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性的测试，该固体支撑物包括注入有酶的产色或荧光底物的隔膜和用于显色的试剂，其支撑在惰性条上，并与生物样本相接触。该试剂盒还将装配一个第一基准标度，用来通过所显现颜色的强度来评估酶活性的存在。
pH指示剂优选为pH显色纸，其变色范围为5.0～7.0之间，优选地，为5.0～6.0之间，更为优选地，为5.0～5.5之间。
用于酶活性的第一基准标度可提供标准值，其由例如上述确定的方法来进行计算，并用符号+1、+2、+3、和+4来表示。该标准值与例如酶颜色检测相关联。
同样地，用于pH值的第二基准标度可提供pH值为小于5.0，pH值在5.0～7.0或5.0～6.0或5.0～5.5之间，其与特定颜色或相同颜色的强度相关联。
说明书应该指示酶活性和在体液样本中检测到的pH值之间的关系。因此，举例来说，如果检测到的酶活性为唾液酸酶+4、氨酰基脯氨酸二肽酶+1、以及pH为5.0～5.5之间，那么，该说明书应该指出OR值等于或高于5.5的风险的存在。
现在，很明显的是，参照上面所示表格中包含的评估结果，以及从上述或任意可用的分析测试方法得到的评估结果，能够提供快速确定上述病症风险的试剂盒的主要价值在于，向医生提供有效的工具，用以决定进行药物治疗而向患者用药，并验证治疗的功效。
从以上所述可以知道，本方法可以用来确定具有发生与妇产科并发症相关的病症的高危妇女人群，该妇产科并发症例如，出生体重低(LBW)、出生体重极低(VLBW)、早产(PTD)、早期早产(EPTD)、胎膜早破、内羊膜感染、自然流产、子宫内膜炎、产科手术感染、产后或妇产科手术后感染、骨盆手术感染、导致不孕症的上生殖道感染、盆腔炎(PID)、附件炎、子宫颈炎、泌尿系感染、性传播疾病、以及病毒感染，本方法能够克服上述这些问题。
显然，为了满足应急的和特殊的需求，本领域熟练的操作人员可以在上述方法中引入多种改进和具体实施方式
，但是，所有这些都被涵盖在权利要求书所限定的本发明范围以内。
表1阴道pH水平自身或与递增的唾液酸酶等级相结合，以用于LBW(出生时＜2500g)和VBLW(出生时＜1500g)的预测。对总共467位生有出生时体重＞2500g的新生婴儿(非LBW)的妇女、总共133位生有出生时体重＜2500g的婴儿的妇女(其中有24位妇女生有出生时体重＜1500g的婴儿(VLBW))，测量唾液酸酶活性。递增的氨酰基脯氨酸二肽酶等级与阴道pH水平相结合，以用于LBW(出生时＜2500g)和VLBW(出生时＜1500g)的预测。对总共465位生有出生体重＞2500g的新生婴儿(非LBW)的妇女、总共131位生有出生时体重＜2500g的婴儿(LBW)的妇女(其中有23位妇女生有出生时体重＜1500g的婴儿(VLBW))测量了氨酰基脯氨酸二肽酶活性。
表2pH值≥5.0与相结合的递增的唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶等级之间相结合，以用于LBW(出生时＜2500g)和VBLW(出生时＜1500g)的预测。对总共467位生有出生时体重＞2500g的新生婴儿(非LBW)的妇女、133位生有LBW婴儿的妇女以及24位生有VLBW婴儿的妇女测量了唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶活性以及pH值。
表3阴道pH水平自身与递增的唾液酸酶等级相结合，以用于妊娠不到37周时的自然分娩(PTD)的预测。对总共418位正常分娩(NTD，妊娠超过37周的分娩，婴儿出生时体重＞2500g)的妇女和106位PTD妇女测量了唾液酸酶活性。阴道pH水平自身与递增的唾液酸酶等级相结合，以用于妊娠不到37周时的自然分娩(PTD)的预测。对总共416位正常分娩(NTD，妊娠超过37周的分娩，婴儿出生时体重＞2500g)的妇女和104位PTD妇女测量了氨酰基脯氨酸二肽酶活性。
表4pH值≥5.0与相结合的递增的唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶等级之间相结合，以用于PTD的预测。对总共418位正常分娩(NTD，妊娠超过37周的分娩，婴儿出生时体重＞2500g)的妇女和106位妊娠不到37周的自然分娩(PTD)的妇女测量了唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶活性以及pH值。
*没有可用于计算的值，因为没有具有唾液酸酶＞+3及氨酰基脯氨酸二肽酶＞+5，或唾液酸酶＞+4及氨酰基脯氨酸二肽酶＞+3、＞+4或＞+5的NTD。
表5阴道pH水平自身与递增的唾液酸酶等级相结合，以用于所有的妊娠不到37周、不到35周、和不到32周时的分娩的预测，其与正常分娩(NTD，妊娠超过37周的分娩，婴儿出生时体重＞2500g)相对应。对总共418位NTD妇女、138位妊娠不到37周分娩的妇女、57位妊娠不到35周分娩的妇女和22位妊娠不到32周分娩的妇女测量了唾液酸酶活性。递增的氨酰基脯氨酸二肽酶等级自身或与阴道pH水平相结合，以用于所有的妊娠不到37周、不到35周、和不到32周时的分娩的预测，其与正常分娩(NTD，妊娠超过37周的分娩，婴儿出生时体重＞2500g)相对应。对总共416位NTD妇女、136位妊娠不到37周分娩的妇女、55位妊娠不到35周分娩的妇女和21位妊娠不到32周分娩的妇女测量了氨酰基脯氨酸二肽酶活性。
表6pH值≥5.0与相结合的递增的唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶等级之间相结合，以用于与NTD相对的分娩的预测。对总共418位NTD妇女、138位妊娠不到37周分娩的妇女、57位妊娠不到35周分娩的妇女和22位妊娠不到32周分娩的妇女测量了唾液酸酶和氨酰基脯氨酸二肽酶活性。
*没有可用于计算的值，因为没有具有pH≥5.0和唾液酸酶＞+3及氨酰基脯氨酸二肽酶＞+5，或唾液酸酶＞+4及氨酰基脯氨酸二肽酶＞+3、或＞+4或＞+5的NTD。
权利要求
1.用于选择具有发生产科或妇科病症的风险的特定妇女人群的方法，所述风险用等于或高于5.5的OR值来表示，所述值分别以未患有病症的妇女的百分比进行计算，所述方法按顺序包括以下步骤a)通过Cauci等人于Am.J.Obstet.Gynecol.1998；vol.178；p511-5所描述的方法，确定体液样本中的唾液酸酶的等级，以及/或者，通过Cauci等人于J.Infect.Dis.1998；vol.178；p1698-706所描述的方法，确定体液样本中的氨酰基脯氨酸二肽酶活性；b)确定所述体液样本的pH值；c)选择具有唾液酸酶值等于或高于5.0nmol甲氧基苯酚和/或氨酰基脯氨酸二肽酶等级等于或高于1500mOD和pH≥5.0的样本。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述pH为≥5.0和≤7.0，优选地，pH为≥5.0和≤6.0，更为优选地，pH为≥5.0和≤5.5。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤a)之后确定所述唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级的评分。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法在阴道液样本中实施。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述产科或妇科病症包括低出生体重(LBW)、极低的出生体重(VLBW)、早产(PTD)、早期早产(EPTD)、胎膜早破、内羊膜感染、自然流产、子宫内膜炎、产科手术感染、产后或妇产科手术后感染、骨盆手术感染、导致不孕症的上生殖道感染、盆腔炎(PID)、附件炎、子宫颈炎、性传播疾病、以及泌尿生殖道的感染和恶性肿瘤。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述妇女人群在妊娠期不到37周时，优选地，在妊娠期不到35周时，更为优选地，在妊娠期不到32周时具有所述病症的风险。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法在妊娠妇女的体液样本中实施。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述方法在处于妊娠头三个月或第二个三个月中的妇女的体液样本中实施。
9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述方法在妊娠第6整周到第24整周的妇女的体液样本中实施。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法在未妊娠妇女的体液样本中实施。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述OR值通过SPSS计算机统计方法进行计算，并以标准因子进行校正。
12.用于选择具有发生VLBW、妊娠不到37周、妊娠不到35周或妊娠不到32周分娩的风险的特定妇女人群的方法，所述方法按顺序包括以下步骤a)通过Cauci等人于Am.J.Obstet.Gynecol.1998；vol.178；p511-5所描述的方法，确定体液样本中的唾液酸酶的等级，以及/或者，通过Cauci等人于J.Infect.Dis.1998；vol.178；p1698-706所描述的方法，确定体液样本中的氨酰基脯氨酸二肽酶活性；b)确定所述体液样本的pH值；c)选择具有pH≥5.0和唾液酸酶值高于0.19nmol甲氧基苯酚和/或氨酰基脯氨酸二肽酶等级值高于22mOD的样本。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述步骤c)包括选择具有pH≥5.0、唾液酸酶等级高于2.50nmol甲氧基苯酚或氨酰基脯氨酸二肽酶等级高于1000mOD的样本。
14.根据权利要求12所述的方法，其中，所述步骤c)包括选择具有当所选择的氨酰基脯氨酸二肽酶值高于1000mOD时，pH≥5.0、唾液酸酶值高于0.19nmol或0.38nmol或2.5nmol甲氧基苯酚的样本。
15.根据权利要求12所述的方法，其中，所述步骤c)包括选择所述具有pH≥5.0、唾液酸酶值为0.38nmol甲氧基苯酚和氨酰基脯氨酸二肽酶值高于22mOD、或高于44mOD、或高于1000mOD、或高于1500mOD、或高于2000mOD的样本。
16.根据权利要求12所述的方法，其中，所述风险用等于或高于5.5的OR值表示，所述值优选通过SPSS计算机统计方法进行计算。
17.用于确定具有发生产科或妇科病症风险的妇女的试剂盒，所述风险用高于5.5的OR值来表示，其优选通过SPSS计算机统计方法进行计算，所述试剂盒包括溶液，其用于在溶液中进行唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性分析，所述溶液包括在其中接种所述生物样本的无色底物溶液；显影液，其位于配备有调合器的容器中；第一基准标度，其用来将所述等于或高于0.19nmol甲氧基苯酚的唾液酸酶活性等级和/或等于或高于22mOD的氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级与所述显色强度联系起来；pH指示剂；第二基准标度，其用来将由所述指示剂检测得到的pH与pH≥5.0联系起来；以及，说明书，其包含正确使用所述试剂盒的用法说明。
18.根据权利要求17所述的试剂盒，其中，所述试剂盒用于检测妇女体液样本。
19.根据权利要求17所述的试剂盒，其中，所述体液为阴道液。
20.根据权利要求17所述的试剂盒，其中，所述pH指示剂包括pH显色纸，其变色范围在5.0～7.0之间，优选地，在5.0～6.0之间，更为优选地，在5.0～5.5之间。
21.根据权利要求17所述的试剂盒，其中，所述用于唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性的第二基准标度提供与酶检测的颜色相关联的标准值。
22.根据权利要求21所述的试剂盒，其中，所述用于pH值的第二基准标度将所述变色范围与所述相同颜色的具体颜色强度联系起来。
23.根据权利要求17所述的试剂盒，其中，为了将所述病症风险率评估为无风险或低风险(-)、中等风险(+)、高风险(++)、极高风险(+++)，所述说明书将所述酶活性与所述pH值联系起来。
24.根据权利要求16所述的试剂盒，包括位于固体支撑物之上进行的测试，优选是位于反应条或平台之上的测试，以用于确定所述唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶的活性。
25.根据权利要求17所述的试剂盒，包括诸如产色或荧光的底物，以用于确定唾液酸酶的活性，所述底物试剂选自下列化合物组成的组2-(3′-甲氧基苯基)-N-乙酰基-D-神经氨酸、2-O-(邻-硝基苯基)-α-D-N-乙酰基神经氨酸、2′-(4-甲基伞形基)-α-D-N-乙酰基神经氨酸钠盐、5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-N-乙酰基神经氨酸。
26.根据权利要求25所述的试剂盒，包括诸如产色或荧光的底物，以用于确定氨酰基脯氨酸二肽酶的活性，所述底物试剂选自下列化合物组成的组L-脯氨酸-对-硝基苯胺、L-脯氨酸-β-萘胺、N-苄氧基羰基-L-脯氨酰基-β-萘胺、N-苄氧基羰基-L-脯氨酸-对-硝基苯酯、羟基-L-脯氨酰基-β-萘胺、L-脯氨酸-7-氨基-4-甲基-香豆素、L-脯氨酸-4-甲氧基-β-萘胺。
27.用于确定具有发生LBW、VLBW、PTD、妊娠不到37周、不到35周或不到32周分娩的风险的妇女的试剂盒，所述试剂盒包括溶液，其用于在溶液中进行唾液酸酶和/或氨酰基脯氨酸二肽酶活性分析，所述溶液包括在其中接种所述生物样本的无色底物溶液；显影液，其位于配备有调合器的容器中；第一基准标度，其用来将所述等于或高于0.19nmol甲氧基苯酚的唾液酸酶活性等级和/或等于或高于22mOD的氨酰基脯氨酸二肽酶活性等级与所述显色强度联系起来；pH指示剂；第二基准标度，其用来将由所述指示剂检测得到的pH与pH≥5.0联系起来；以及，说明书，其包含正确使用所述试剂盒的用法说明。
全文摘要
本发明提供了一种用于选择具有发生产科或妇科病症风险的特定妇女人群的方法，该风险用高于5.5的几率比(OR)值来表示，该方法按顺序包括以下步骤a)通过Cauci等人于Am.J.Obstet.Gynecol.1998；vol.178；p511－5所描述的方法，确定体液样本中的唾液酸酶的等级，以及/或者，通过Cauci等人于J.Infect.Dis.1998；vol.178；p1698－706所描述的方法，确定体液样本中的氨酰基脯氨酸二肽酶的活性；b)确定该体液样本的pH值；c)选择具有唾液酸酶值等于或高于5.0nmol甲氧基苯酚和/或氨酰基脯氨酸二肽酶等级等于或高于1500mOD和pH≥5.0的样本。因此，本方法给医生提供了一种有效工具，以决定是否给予处于严重不良结果危险的妇女药物治疗。
文档编号G01N33/68GK1637150SQ200410080999
公开日2005年7月13日 申请日期2004年10月26日 优先权日2003年10月31日
发明者萨比纳·考兹 申请人:尤尼拜尔有限公司