专利名称：一种测定硝酸盐浓度的方法及其专用试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种测定硝酸盐浓度的方法及其专用试剂盒。
背景技术：
目前，实验室常规的硝酸盐浓度测定方法有酚二磺酸比色法、紫外分光光度法、流动注射分析法。酚二磺酸比色法是经典的硝酸盐浓度测定方法，但该方法操作复杂、测定时间长(2-3小时)，现已很少采用；紫外分光光度法、流动注射法是目前实验室常用的硝酸盐浓度测定方法，但这两种方法都需要昂贵的仪器。因此，实验室常规的硝酸盐测定方法很难简便、快速进行室外测定硝酸盐浓度。
发明内容
本发明的目的是提供一种简便快捷、灵敏准确的测定硝酸盐浓度的方法及其专用试剂盒。
本发明所提供的测定硝酸盐浓度的试剂盒，包括试剂A和试剂B，其中，所述试剂A基本由下述重量份数的物质组成柠檬酸30-40，硫酸锰4-6，对氨基苯磺酰胺或对氨基苯磺酸1-3，N-1-萘基乙二胺盐酸盐1-2；所述试剂B基本由下述重量份数的物质组成柠檬酸30-40，锌粉1-2。
应用该试剂盒测定硝酸盐浓度的方法，是向待测液中分别加入试剂A和试剂B，所述试剂A和所述试剂B的终浓度相同，为5-30mg/ml；摇匀，4-6min后于540nm测定吸光值或查对色阶浓度。
其中，所述试剂A和试剂B的终浓度优选为10mg/ml。
采用本发明方法可以测定土壤提取液，所述土壤提取液是将土壤样品浸渍于CaSO4溶液得到的。
所述CaSO4溶液优选为饱和CaSO4溶液，所述土壤样品与饱和CaSO4溶液的重量体积比(克/毫升)为1∶10。测定时，如果显色颜色太深，可以先将进行土壤提取液适当稀释，然后再测定其中硝酸盐浓度。
本发明方法也可以用于测定植物汁液中硝酸盐浓度。测定时，可以先用压汁钳将植物组织液压入小塑料管2滴(0.1ml)，将小塑料管投入盛有100ml纯水的塑料瓶中稀释，然后取样测定。测定时，如果显色颜色太深，也可以先进行适当稀释然后再测定。
本发明所提供的测定硝酸盐浓度的试剂盒灵敏度、准确度高，保存时间长，对于易于发生还原反应的试剂B来说，也至少能保存3个月以上；本发明所提供的测定方法，所能检测的硝酸盐浓度范围广，NO3--N在0.1-2mg/kg范围内均可以直接测定；每次测量试剂用量少，一般仅需0.2克左右，测定成本低；测定结果准确，与紫外分光光度法测定值比较，均达到线性相关的极显著水平，线性相关系数达到0.9000以上；测定时间短，操作简便，5-10分钟内即可完成，可广泛用于硝酸盐的野外测定。
具体实施例方式
实施例1、硝酸盐浓度测定试剂盒的制备该试剂盒包括试剂A和试剂B。
试剂A的组成成分及配比为柠檬酸(分析纯)30克，硫酸锰(分析纯)6克，对氨基苯磺酰胺(分析纯)1克，N-1-萘基乙二胺盐酸盐(分析纯)2克。将柠檬酸先磨细，其它试剂逐次加入、混合、研磨后过0.5mm筛子，装入干燥瓶子密闭避光保存。
试剂B为柠檬酸(分析纯)30克，锌粉(分析纯)2克。柠檬酸先磨细，锌粉后加入、混合、研磨后过0.5mm筛子，装入干燥瓶子密闭避光保存。
实施例2、试剂盒的制备试剂A的组成为柠檬酸(分析纯)40克，硫酸锰(分析纯)4克，对氨基苯磺酸(分析纯)3克，N-1-萘基乙二胺盐酸盐(分析纯)1克。
试剂B的组成为柠檬酸(分析纯)40克，锌粉(分析纯)1克。
试剂A和试剂B的制备方法同实施例1。
实施例3、应用本发明试剂盒测定土壤中硝酸盐含量测定土壤硝酸盐时，取新鲜土样5g于塑料瓶中，加入CaSO4饱和溶液50ml，摇动5分钟，过滤到小烧杯，取10ml滤液于比色管中，分别加入实施例1所得试剂A、试剂B各0.1克，立即摇动，五分钟后用分光光度计在540nm处比色，或查对色阶浓度。若颜色太深可适当稀释后再测定。
对北京地区粮田土壤样品硝酸盐采用本发明方法测定与常规紫外分光光度法测定结果如表1所示，结果表明，发明方法测定值与紫外分光光度法测定值十分吻合，回归方程为y＝0.99x-0.1703(x、y分别为紫外分光光度测定值和本发明方法测定值)，r＝0.9895，达到线性相关的极显著水平。
表1.不同土壤样品采用本发明方法测定值与紫外分光光度法测定值的比较
实施例4、应用本发明试剂盒测定植株中硝酸盐含量测定植株硝酸盐时，用压汁钳将蔬菜叶柄(或果实)压入小塑料管2滴(0.1ml)，然后将小塑料管投入盛有100ml纯水的塑料瓶中，摇匀后取10ml溶液于比色管中，分别加入实施例2所得试剂A、B各0.1克，立即摇动，五分钟后用分光光度计在540nm处比色，或查对色阶浓度。若颜色太深可适当稀释后再测定。
对北京地区蔬菜样品硝酸盐采用本发明方法测定与常规紫外分光光度法测定结果如表2所示，结果表明，发明方法测定值与紫外分光光度法测定值吻合较好，回归方程为y＝1.0601x-294.31(x、y分别为紫外分光光度测定值和本发明方法测定值)，r＝0.9728，达到线性相关的极显著水平。
表2.不同蔬菜壤样品采用本发明方法测定值与紫外分光光度法测定值的比较
权利要求
1.一种测定硝酸盐浓度的试剂盒，包括试剂A和试剂B，其中，所述试剂A基本由下述重量份数的物质组成柠檬酸30-40，硫酸锰4-6，对氨基苯磺酰胺或对氨基苯磺酸1-3，N-1-萘基乙二胺盐酸盐1-2；所述试剂B基本由下述重量份数的物质组成柠檬酸30-40，锌粉1-2。
2.应用权利要求1所述的试剂盒测定硝酸盐浓度的方法，向待测液中分别加入试剂A和试剂B，所述试剂A和所述试剂B的终浓度相同，为5-30mg/ml；摇匀，4-6min后于540nm测定吸光值或查对色阶浓度。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述试剂A和所述试剂B的终浓度为10mg/ml。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于所述待测液为土壤提取液，所述土壤提取液是将土壤样品浸提于CaSO4溶液得到的。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述CaSO4溶液为饱和CaSO4溶液；所述土壤样品与饱和CaSO4溶液的重量体积比克/毫升为1∶10。
6.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于所述待测液为植物汁液。
全文摘要
本发明公开了一种测定硝酸盐浓度的方法及其专用试剂盒。本发明所提供的测定硝酸盐浓度的试剂盒，包括试剂A和试剂B，其中，所述试剂A基本由下述重量份数的物质组成柠檬酸30－40，硫酸锰4－6，对氨基苯磺酰胺或对氨基苯磺酸1－3，N－1－萘基乙二胺盐酸盐1－2；所述试剂B基本由下述重量份数的物质组成柠檬酸30－40，锌粉1－2。应用该试剂盒测定硝酸盐浓度的方法，向待测液中分别加入试剂A和试剂B，所述试剂A和所述试剂B的终浓度相同，为5－30mg/ml；摇匀，4－6min后于540nm测定吸光值或查对色阶浓度。本发明所提供的测定方法，测定结果准确，测定时间短，操作简便，可广泛用于硝酸盐的室内外测定。
文档编号G01N21/33GK1773260SQ200410090618
公开日2006年5月17日 申请日期2004年11月9日 优先权日2004年11月9日
发明者张成军, 孙焱鑫, 刘宝存, 刘善江 申请人:北京市农林科学院植物营养与资源研究所