专利名称：幽门螺旋杆菌检测试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型是一种利用胶体金方法来检测幽门螺旋杆菌，属于胶体金免疫检测领域。
背景技术：
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是人类最常见的致病菌之一，我国普通人群的感染率为50％-80％，并仍以每年1％-2％的速度增长。Hp感染不但与B型胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系，而且与非溃疡性消化不良、MALT淋巴瘤和胃癌也有重要关系，故已被世界卫生组织国际癌症研究机构列入第一类致癌原。
目前公认的细菌培养、呼气试验(UBT)、组织染色等检测方法，虽具有高敏感与特异性，可作为Hp感染诊断标准，但上述方法痛苦大、所需仪器昂贵、操作步骤烦琐费时、需要专业人员。幽门螺旋杆菌在微需氧环境下生长，培养条件要求高，不易存活，对细菌培养做临床诊断造成很大困难，不易推广。而呼气试验对患者和医务人员以及周围环境的污染尚未解决。
利用免疫学方法对于幽门螺旋杆菌的检测有两种途径，一是检测抗体，二是检测抗原。检测抗体需要血清作为检测样品，检测抗原非创伤性方法则可以通过检测粪便抗原作为检测的手段。现已有很多文献对幽门螺旋杆菌粪便抗原进行报道，检测粪便抗原同样具有临床检测意义和价值，可作为临床诊断依据及治疗效果观察。ELISA法检测粪便抗原有较高特异性和敏感性被临床认可，但需专业人员和仪器，操作时间长，成本高，试剂盒需要冷藏，运输不便。
利用免疫胶体金方法来实现对粪便抗原的检测，此方法特异性强，灵敏度高，成本低，操作简便，便于贮存及运输，此方法国内已有专利，专利为01223042幽门螺旋杆菌抗原快速检测盒，而该专利说明书中第3页第10行所述是用多克隆Hp抗体作为固相捕获抗体和检测抗体。本发明是用双抗夹心法原理制成，是利用Hp单克隆抗体作为固相捕获抗体和检测抗体。单克隆抗体具有特异性强，灵敏度高，批间差小等特点。
发明内容
本实用新型的目的是提供一种幽门螺旋杆菌检测试纸，具有快速、灵敏、准确、操作简便的优点，同时具有保存方便，有效期长的特点。
为了解决上述问题，本发明是通过以下技术方案实现的。
一种条型用于检测幽门螺旋杆菌的试纸，它是由试纸底板、硝酸纤维素膜、胶体金标垫制成。其中试纸底板(7)中部为硝酸纤维素膜(2)，硝酸纤维素膜(2)上有两条线，一条幽门螺旋杆菌单克隆抗体反应线(4)和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线(3)，在底板(7)一端端头为吸水层(1)，另一端端头为玻璃纤维样品层(6)，硝酸纤维素膜(2)两端分别与吸水层(1)和幽门螺旋杆菌单抗金标垫(5)相互交叠连接，在幽门螺旋杆菌单抗金标垫(5)上压有玻璃纤维样品层(6)。此检测试纸可制成条式及板式两种，关于胶体金检测试纸的组装已是公知技术，万华普曼生物工程有限公司1998年获得便潜血胶体金检测试纸的国药字批准文号国药准字S19980076号，并将产品投放市场。
一种板型用于检测幽门螺旋杆菌检测盒制作是将条型试纸放入板中制成，它是由有上板、下板及条型检测试纸组成，上板有结果显示窗口及加样口。
用重组的幽门螺旋杆菌抗原进行免疫，最终筛选出两株具有针对Hp抗原不同决定簇的特异性配对单克隆抗体，记为Hp-1及Hp-2。将其中的一个Hp-1单克隆抗体固定于硝酸纤维素膜上的反应线处，将另一个Hp-2单克隆抗体进行胶体金标记，制成Hp金标垫。
硝酸纤维素膜上固定有两条线，一条反应线是Hp-1特异性单克隆抗体制成，另一条是羊抗鼠多克隆抗体制成。将Hp-1特异单克隆抗体和羊鼠抗多克隆抗体分别固定于硝酸纤维素膜上，两条线与金标垫平行放置且Hp特异性单克隆抗体在羊抗鼠多克隆抗体与金标垫之间。
按公知技术将底板，硝酸纤维素膜及单抗金标垫，吸水纸进行组装。检测时，将试纸放入检测样液中，液面不得超过MAX线(8)，按照说明书进行结果判断。
根据上述方案实现的幽门螺旋杆菌检测试纸，具有快速、灵敏、准确、操作简便的优点，同时具有保存方便，有效期长的特点。
图1为幽门螺旋杆菌检测试纸的主视结构图。
图2为图1幽门螺旋杆菌的俯视剖视结构图。
图3为幽门螺旋杆菌检测试纸用于测试时显示为阴性结果图。
图4为幽门螺旋杆菌检测试纸用于测试时显示为阳性结果图。
1.吸水层 2.硝酸纤维素膜 3控制线 4.反应线 5.金标垫 6.玻璃纤维样品层 7.底板8.MAX线。
具体实施情况图1～4详细表示了本实用新型的外观图，它是由试纸底板、硝酸纤维素膜、胶体金标垫制成。其中试纸底板(7)中部为硝酸纤维素膜(2)，硝酸纤维素膜(2)上有两条线，一条幽门螺旋杆菌单克隆抗体反应线(4)和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线(3)，在底板(7)一端端头为吸水层(1)，另一端端头为玻璃纤维样品层(6)，硝酸纤维素膜(2)两端分别与吸水层(1)和幽门螺旋杆菌单抗金标垫(5)相互交叠连接，在幽门螺旋杆菌单抗金标垫(5)上压有玻璃纤维样品层(6)。
1.幽门螺旋杆菌单克隆抗体的制备用重组的幽门螺旋杆菌抗原对小鼠进行免疫，用SP20细胞融合建立瘤株进行筛选，取瘤细胞注射于BALB/c小鼠腹腔，使其产生腹水。提取小鼠腹水纯化筛选，最终筛选出两株具有较强特异性配对Hp单抗，记为Hp-1及Hp-2。
2.胶体金的制备及与幽门螺旋杆菌抗体的结合(1)取双蒸水加适量的氯金酸磁力搅拌加温到90～95℃，加入适量枸橼酸三纳继续加热搅拌至沸腾5分钟，冷却后避光保存备用。
(2)把幽门螺旋杆菌抗体标记的胶体金液，吸附纤维材料上，干燥后备用。
3.制膜机制膜利用电脑控制传动速度，保证每单位膜上包被的抗体量相等。
4.试纸条组合按公知技术组合。
5.将试纸条放入板中制成幽门螺旋杆菌板型检测盒，它是由有上板、下板及检测试纸组成，上板有结果显示窗口及加样口。
6.使用方法采集粪便检测样品，用稀释液进行稀释，将条型试纸的样品吸液端放入稀释液中，液面不得超过MAX线。板式检测盒，用专利为01258826.1的采便器进行采样，将稀释液滴到检测板的加样口处。由于虹吸作用，液体经过金标垫、反应线及控制线向试纸的手柄端移动，5分钟内判断结果。
7.结果判断当粪便中有幽门螺旋杆菌抗原时，试纸的显色区有两条线显出，即反应线及控制线均变为红色，为阳性。当粪便中无幽门螺旋杆菌抗原时，试纸的显色区仅有一条控制线变为红色，为阴性。当试纸的显色区没有颜色显示，则表示操作不当或试纸过期，此结果无效。
权利要求1.一种幽门螺旋杆菌检测试纸，其特征是试纸底板(7)中部为硝酸纤维素膜(2)，硝酸纤维素膜(2)上有两条线，一条幽门螺旋杆菌单克隆抗体反应线(4)和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线(3)，在底板(7)一端端头为吸水层(1)，另一端端头为玻璃纤维样品层(6)，硝酸纤维素膜(2)两端分别与吸水层(1)和幽门螺旋杆菌单抗金标垫(5)相互交叠连接，在幽门螺旋杆菌单抗金标垫(5)上压有玻璃纤维样品层(6)。
2.一种用于检测幽门螺旋杆菌的试纸，其特征在于所用的抗体是利用重组抗原对小鼠进行免疫，筛选出两株特异性的幽门螺旋杆菌配对单抗，记为Hp-1及Hp-2。
3.根据权利要求1或2所述一种用于检测幽门螺旋杆菌的试纸，其特征在于将Hp-1单抗固定于硝酸纤维素膜的反应线处。
4.根据权利要求1或2所述一种用于检测幽门螺旋杆菌的试纸，其特征在于将Hp-2单抗作为金标记抗体，制成Hp金标垫。
5.根据权利要求1所述一种用于检测幽门螺旋杆菌的试纸，其特征在于硝酸纤维素膜上有两条线，一条反应线是幽门螺旋杆菌特异性单克隆抗体制成，另一条控制线是羊抗鼠多克隆抗体制成。
6.根据权利要求1所述一种用于检测幽门螺旋杆菌的试纸，其特征在于将幽门螺旋杆菌特异单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体分别固定于硝酸纤维素膜上，两条线与金标垫平行放置且幽门螺旋杆菌特异性单克隆抗体在羊抗鼠多克隆抗体与金标垫之间。
专利摘要一种幽门螺旋杆菌检测试纸，为利用胶体金方法对粪便幽门螺旋杆菌抗原进行检测，属于胶体金免疫检测领域。本试纸由试纸底板、硝酸纤维素膜、胶体金标垫制成。底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有两条线，一条幽门螺旋杆菌单克隆抗体反应线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水层，另一端端头为玻璃纤维样品层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水层和幽门螺旋杆菌单抗金标垫相互交叠连接，在幽门螺旋杆菌单抗金标垫上压有玻璃纤维样品层。幽门螺旋杆菌单克隆抗体作为固相捕获抗体和检测抗体，所用的抗体是利用重组抗原对小鼠进行免疫，筛选出两株特异性的配对单抗。此方法特异性强，灵敏度高，成本低，操作简便，便于贮存及运输。
文档编号G01N33/52GK2864679SQ200520113520
公开日2007年1月31日 申请日期2005年7月15日 优先权日2005年7月15日
发明者万积成 申请人:万积成