专利名称：缺血修饰白蛋白测定试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种医疗用临床化学体外诊断试剂，尤其是一种用于缺血修饰白蛋白的测定的试剂。
背景技术：
缺血修饰白蛋白(Ischemia-modified albumin，简称IMA)是指在临床缺血或再灌注医疗手段发生时，由于自由基等破坏了血清白蛋白的氨基酸序列而导致白蛋白与过渡金属的结合能力改变，这种因缺血而发生与过渡金属结合能力改变的白蛋白称为缺血修饰白蛋白。
人血清白蛋白(Human serum albumin简称HSA)是一种循环蛋白，由585个氨基酸序列(66500Da)组成，其氨基末端(N-terminus)是人类所特有的一段序列。已有研究证实HSA的氨基末端即为过渡金属钴、铜和镍等离子的结合位点。HSA上这些金属的结合点、位点与其他动物的白蛋白相比容易被生物化学因素降解而破坏。当发生缺血时，细胞内及细胞外氧供给减少、酸性代谢产物增多、细胞膜能量依赖的钠泵破坏、钙泵失控，这些因素将导致HSA氨基末端结构改变，使HSA与金属的结合能力降低。短暂缺血后发生的再灌注会产生大量的自由基，同时游离铜离子和铁离子暴露，将进一步加重HSA这种改变，这是机体“牺牲”白蛋白以对抗缺氧、避免和尽量减少组织损伤的一种机制。
现有技术主要通过测定白蛋白结合钴后，剩余钴的浓度的吸光度的变化，间接计算IMA的浓度，目前，没有一个公认的标准品，因此各生产厂家可有不同的方法来间接测定IMA。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，针对现有技术存在的缺陷，提出一种用于缺血修饰白蛋白测定的试剂，这种试剂性能优越，准确度、精确度好且成本较低廉。
本发明的技术解决方案是，所述缺血修饰白蛋白测定试剂采用如下原料和工艺制得，原料成分是氯化钴0.001～1％，
PH值为7.0～9.0的盐酸三乙醇胺缓冲液99～99.999％。
将上述重量成分的氯化钴溶于上述重量成分的PH值为7.0～9.0的盐酸三乙醇胺缓冲液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白测定试剂。
上述PH值为7.0～9.0的盐酸三乙醇胺缓冲液也可以是PH值为7.0～9.0的磷酸盐缓冲液或PH值为7.0～9.0的三羟基氨基甲烷缓冲液或PH值为7.0～9.0的巴比妥缓冲液。
上述缺血修饰白蛋白测定试剂的设计与使用依据下述原理1)标准品定义每毫升血清结合1μg的二价钴离子为1个单位。标准品配制；2)精确测定钴离子(Co2+)浓度，然后测定标准品的吸光度变化计算每毫升标准品中白蛋白消耗Co2+的μg数，从而获得标准品的值。缺血修饰白蛋白对Co2+结合能力低于正常白蛋白，血清中白蛋白与Co2+结合后，剩余的游离钴离子(Co2+)与二硫苏糖醇(DTT)反应生成红褐色产物，在470～510nm的波长下比色，其吸光度与Co2+浓度成正比，与标准品进行比较，即可计算出样本中ACB(白蛋白钴结合能力)的浓度。
本发明必须符合产品技术标准(注册产品标准号YZB/湘0010-2006)，达到下列技术指标线形范围0～180U/ml批内精密度CV≤4.5％批间精密度CV≤5.0％空白吸光度≥1.0A准确度预期值±10％产品检验方法依据注册产品标准号YZB/湘0010-2006所示内容检验。
本发明的有益效果是1.社会效益缺血修饰白蛋白的测定是临床生化中一个重要指标。缺血修饰白蛋白测定试剂预期用途为对急性心肌缺血的辅助诊断，排除急性冠脉综合症(ACS)以及ACS危险性分层。
2.经济效益随着医疗诊断技术水平的提高和临床需要，产品需求量将大增。一个较高的经济效益是完全可以预期的。
具体实施例方式实施例1本发明的一种实施例产品采用以下原料和工艺制得配方氯化钴0.001kg，盐酸三乙醇胺缓冲液(PH 7.0)99.999kg。
制备将上述0.001kg氯化钴置入盛有上述99.999kg盐酸三乙醇胺缓冲液的罐中溶解，所得混合溶液经过滤即为缺血修饰白蛋白测定试剂。
实施例2本发明的另一种实施例产品采用以下原料和工艺制得配方氯化钴1g，盐酸三乙醇胺缓冲液(PH 9.0)99g。
制备将上述1g氯化钴置入盛有上述99g盐酸三乙醇胺缓冲液的罐中溶解，所得混合溶液经过滤即为缺血修饰白蛋白测定试剂。
本发明遵照卫生主管部门制定之WS/T 124-1999试剂质量检验标准研制开发的缺血修饰白蛋白(IMA)测定试剂达到了设计质量要求。结果表明，可提高急性心肌缺血病人的早期缺血测试灵敏度。该试剂产生了良好的社会效益和经济效益。目前已试采用白蛋白-钴结合试验(Albumin cobalt binding assay，ACB)来检测IMA。本发明研制的缺血修饰白蛋白(IMA)测定试剂通过长期试用，已证明达到设计要求，符合部颁各项指标。产品经中国中南大学湘雅二医院检验科、中国湖南省肿瘤医院检验科采用随机标本200例进行试验，测试结果良好。
权利要求
1.一种缺血修饰白蛋白测定试剂采用如下原料和工艺制得，原料成分是氯化钴 0.001～1％，PH值为7.0～9.0的盐酸三乙醇胺缓冲液 99～99.999％，将上述成分的氯化钴溶于上述成分的PH值为7.0～9.0的盐酸三乙醇胺缓冲液中，所得混合溶液经过滤即为成品。
2.根据权利要求1所述的缺血修饰白蛋白测定试剂，其特征在于，所述PH值为7.0～9.0的盐酸三乙醇胺缓冲液也可以是PH值为7.0～9.0的磷酸盐缓冲液或PH值为7.0～9.0的三羟基氨基甲烷缓冲液或PH值为7.0～9.0的巴比妥缓冲液。
全文摘要
一种缺血修饰白蛋白测定试剂采用如下原料和工艺制得，原料成分是氯化钴 0.001～1％，pH值为7.0～9.0的盐酸三乙醇胺缓冲液 99～99.999％。将上述成分的氯化钴溶于上述盐酸三乙醇胺缓冲液中，所得混合溶液经过滤即得缺血修饰白蛋白测定试剂。该试剂预期用途为对急性心肌缺血的辅助诊断，排除急性冠脉综合症及ACS危险性分层。随着医疗水平的提高和临床需要，产品需求量将大增。一个较高的经济效益是完全可以预期的。
文档编号G01N21/25GK101042336SQ200610031749
公开日2007年9月26日 申请日期2006年5月31日 优先权日2006年5月31日
发明者蒋洪敏, 吴白平, 卿子驹, 张卫华, 邓君虎 申请人:长沙颐康科技开发有限公司