专利名称：氨基酸的paabs－f柱前衍生化方法
技术领域：
本发明涉及化合物的柱前衍生化方法，属于分析化学技术领域。
背景技术：
柱前衍生化是提高氨基酸检测灵敏度常用的方法，但目前已报道的氨基酸的衍生化方法都或多或少地存在一些问题。例如邻苯二甲醛(OPA)[1]只能衍生伯氨基酸，且衍生产物不稳定；氯甲酸芴甲酯(FMOC)[2]是衍生胺类化合物的常用试剂，但是它本身及水解产物均产生与衍生物类似的荧光，从而干扰分离；异硫氰酸苯酯(PITC)与氨基酸衍生后需要真空干燥以除去过量试剂，且PITC损耗色谱柱寿命[3]；二甲氨基萘磺酰氯(Dansyl-Cl)[4]衍生物对光敏感，且该试剂选择性差。对乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)以往主要用于有机合成，未见用于柱前衍生化的报道。因此，有必要开发新型衍生试剂用于氨基酸的柱前衍生，以提高氨基酸的分离检测能力。
发明内容
本发明的目的是要提供一种衍生反应条件简单、温和，能同时衍生一级和二级氨基酸，过量试剂不需预先除去，干扰少，反应后可直接进样进行色谱分析等优良特性氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法。
本发明的目的是这样实现的，氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是将含有氨基酸的样品经过预处理后，加入PAABS-F的乙醇溶液和少量甲醇，混匀，在25-45℃条件下衍生化反应20-40分钟后，进样至高效毛细管电泳或高效液相色谱进行分离和检测，测定氨基酸的浓度。
所述的衍生化反应的最佳温度为30℃，最佳时间为30分钟。为了减少干扰，提高测得氨基酸浓度的准确性，所述的进样前先对待测溶液用0.22μm膜进行过滤。所述的少量甲醇为PAABS-F的乙醇溶液的1/200。
本发明具有衍生反应条件简单、温和，能同时衍生一级和二级氨基酸，过量试剂不需预先除去，干扰少，反应后可直接进样进行色谱分析等优良特性。此外它与氨基酸的衍生产物非常稳定，常温无需避光的条件下能放置7天。最佳衍生反应温度为35℃，特别适合于生物样品的分析。
图1是13种L-氨基酸柱前衍生化后的高效毛细管电泳图，1.Lys；2.Gln；3.Asn；4.Val；5.Ser；6.Met；7.Pro；8.Ala；9.Gly；10.Cys；11.PAABS-CH；12.Asp；13.Arg；14.His；图2是人血清中氨基酸的高效毛细管电泳图，1.Lys；2.Gln；3.Thr；4.Asn；5.Ile；6.Leu；7.Val；8.Ser；9.Met；10.Pro；11.Ala；12.Gly；13.Phe；14.Trp；15.Cys；16.PAABS-CH。
具体实施例方式
实施例1仪器与条件毛细管电泳仪，毛细管总长60cm，有效柱长50cm，内径50μm。13种氨基酸(生化试剂，国药集团)。SDS(生化试剂，AlfaAesar)。
实施步骤定量移取每种氨基酸(0.05mmol/L)40μL至2mL的具塞磨口试管内，并加入PAABS-F的乙醇溶液(0.05mmol/L)200μL和1μL甲醇，混匀，塞紧后将其放入35℃恒温水浴中30min。进样前用0.22μm膜过滤。
实施例2仪器与条件毛细管电泳仪，毛细管总长60cm，有效柱长50cm，内径50μm。13种氨基酸(生化试剂，国药集团)。SDS(生化试剂，AlfaAesar)。
实验步骤取预处理好的血清样品0.8mL，并加入PAABS-F的乙醇溶液(0.05mmol/L)200μL和1μL甲醇，混匀，塞紧后将其放入35℃恒温水浴中30min。进样前用0.22μm膜过滤。
权利要求
1.一种氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是将含有氨基酸的样品经过预处理后，加入PAABS-F的乙醇溶液和少量甲醇，混匀，在25-45℃条件下衍生化反应20-40分钟后，进样至高效毛细管电泳或高效液相色谱进行分离和检测，测得氨基酸的浓度。
2.根据权利要求1所述的氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是所述的衍生化反应的最佳温度为30℃，最佳时间为30分钟。
3.根据权利要求1所述的氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是所述的进样前先对待测溶液用0.22μm膜进行过滤。
4.根据权利要求1所述的氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是所述的少量甲醇为PAABS-F的乙醇溶液的1/200。
全文摘要
氨基酸的PAABS－F柱前衍生化方法，属于分析化学技术领域。将含有氨基酸的样品经过预处理后，加入PAABS－F和少量甲醇，混匀，在25－45℃条件下衍生化反应20－40分钟后，进样至高效毛细管电泳或高效液相色谱进行分离和检测，测得氨基酸的浓度。本发明具有衍生反应条件简单、温和，能同时衍生一级和二级氨基酸，过量试剂不需预先除去，干扰少，反应后可直接进样进行色谱分析等优良特性。此外它与氨基酸的衍生产物非常稳定，常温无需避光的条件下能放置7天。最佳衍生反应温度为35℃，特别适合于生物样品的分析。
文档编号G01N30/02GK1825113SQ20061003907
公开日2006年8月30日 申请日期2006年3月21日 优先权日2006年3月21日
发明者瞿其曙, 汤晓庆, 胡效亚, 刘尹, 陆晓 申请人:扬州大学