专利名称：未沉降物免疫法的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种免疫检测法，特别是用致敏试剂l(溶液试剂或微粒试剂) 与待测物结合或与待测物竞争与配体结合形成免疫复合物I;用致敏试剂2(溶液试剂 或血球、磁性微粒等微粒试剂)与免疫复合物]结合形成免疫复合物1并沉降；再 检测上清液中未沉降物中致敏试剂1显示值的免疫检测法。
背景技术：
现有的免疫浊度检测法是根据免疫微粒与其相应的配体(抗原或抗体)结 合形成凝集颗粒，使反应混合物系统的浊度变小，透射光增强，可用分光光度计测定 (也可用光散射法测定凝集颗粒在某一角度的散射强度改变)，来定量检测。这些方 法未均将凝集颗粒和未凝集微粒分丌，故检测灵敏度受到影响。如果使凝集颗粒沉降， 再检测未沉降微粒的显示值，将可提高灵敏度。现有的微粒固相检测法的原理是以微粒为载体，在液相中捕获待测物，形成微粒 免疫复合物，再使微粒免疫复合物沉淀，检测沉淀物的显示值，测得的显示值与标本 中待测物浓度相关。但该法需离心洗涤以除去h清液中的未沉降物。如果在沉淀后取 上清液检测未沉降物显示值，也可与标本待测物浓度相关，却省去了洗涤等步骤(，本发明的目的是用致敏试剂1 (溶液试剂或微粒试剂)与待测物结合或与待测物竞 争与配体结合形成免疫复合物1:用致敏试剂2(溶液试剂或血球、磁性微粒等微粒试 剂)与免疫复合物I结合形成免疫复合物II并沉降，再检测上清(层)液中未沉降 物中致敏试剂1的显示值，査出待测物含量；建立一种更灵敏、可不用离心洗涤的定 量免疫检测法。本发明的目的是这样实现的，综合现有的免疫浊度法和微粒固相法，主要改进 点1.致敏试剂1 (溶液试剂或胶乳等微粒试剂)与待测物结合或与待测物竞争与配体 结合形成免疫复合物I (形成量与待测物相关)；2.致敏试剂1可用标记物(酶、荧光 素、化学发光物或同位素等)标记；3.用致敏试剂2(溶液试剂或血球、磁性微粒等微 粒试剂)与免疫复合物I结合形成免疫复合物n并沉降，使上清(层)液中致敏试剂l减少(减少量与待测物相关)，检测上清(层)液中未沉降物(致敏试剂l)的显示 值，即可定量检测待测物。本法主要步骤如下用致敏试剂l(已标记的溶液试剂或胶乳等微粒试剂)与待测物结合或与待测物竞争与配体结合，形成免疫复合物I (其中致 敏试剂1含量与待测物有关)；用致敏试剂2(溶液试剂或血球、磁性微粒等微粒试剂) 与免疫复合物I结合形成免疫复合物II并沉降，使上清(层)液中致敏试剂1减少 (减少量与待测物相关)，再检测上清(层)液中未沉降的致敏试剂1显示值，就可 定量检测待测物。以上两步也可合为一歩。本法的原理是免疫复合物I中结合的致敏试剂1量与待测物量有关；致敏试剂2 使免疫复合物I沉降(其中致敏试剂1沉降量与待测物相关)；免疫复合物II比免疫 复合物I更容易沉降。也可检测沉淀中致敏试剂1显示值，或用包被物自身(如DNA)作微粒载体(使 载体和免疫活性物成同一物)。本发明的特点是-种检测上清(层)液未沉降物的液相反应系统，无需离心洗涤就 可分离反应产物，抗原抗体易碰撞，表面吸附面积大，反应快速，灵敏度高，操作简 便。下面结合实施例对本发明进一步说明，以下所说致敏胶乳、致敏血球和致敏磁性 微粒均用通常材料和方法制成。实施例(一)用竞争未沉降物免疫法检测抗双链i)NA抗体(1)加入待测标本、酶标记抗双链DNA抗体，双链DNA试剂，混匀反应；(2) 加入已包被抗双链DNA抗体的血球或磁性微粒，反应后使沉降；(3)取上清液显色检 测OD值，再从反应标准曲线査出标本中抗双链DNA抗体含量。 实施例(二)用竞争未沉降物免疫法检测甲胎蛋白(1)加入待测标本、己包被甲胎蛋白的胶乳(可用辣根过氧化酶标记，粒径约 ().ynr-2um)、抗甲胎蛋白抗体(兔抗人)，混匀反应；(2)加入已包被羊抗兔1gG 的血球或磁性微粒，反应后使沉降；(3)检测上层液的浊度，或取上层液加入显色液、终止液，测定吸光度；(4)再从反应标准曲线査出标本中甲胎蛋白含量。 实施例(三)用未沉降物免疫法检测IgE(1 )加入已包被酶标抗IgE抗体的胶乳(粒径约0. 1 n m 2 y m)、待测标本，混 匀反应；(2)再加入过量的己包被抗IgE抗体的血球或磁性微粒，反应后使沉降；(3)测上层液浊度，或吸取适量上层液于另一微孔板中，加入显色液、终止液，测定吸光 度，再从反应标准曲线査出标本中lg[;含量。实施例(四)用竞争未沉降物免疫法检测尿微量白蛋白(1 )加入待测尿液、胶乳(粒径约0. 1 ii m 2y m，用荧光素标记的人白蛋白致敏)、 兔抗人白蛋白抗体,混匀反应；(2)加入用羊抗兔IgG致敏的血球或磁性微粒，反应 后使沉降；(3)测上层液浊度，或吸取适量上层液丁微孔板中，通过荧光仪测定荧光 强度，再从反应标准曲线査出标本中白蛋白含量。实施例(五)用竞争未沉降物免疫法检测促甲状腺素(1)加入待测标本、已包被促甲状腺素的胶乳(用辣根过氧化酶标记，粒径约 0. inm 2"m)、抗促甲状腺素抗体(兔抗人)，混匀反应；(2)加入已包被羊抗兔 IgG的血球或磁性微粒，反应后使沉降；(3)检测上层液的浊度，或取上层液加入 显色液、终止液，测定吸光度；再从反应标准曲线查出标本中含量。 实施例(六)用未沉降物免疫法测血清中抗双链DNA抗体 将双链DNA制成DNA微粒(粒径约5 u m1 20 u m)。 ( i)加入酶标记金葡萄球菌 菌体试剂、待测标本，混匀反应，使标本中的IgG、抗双链DNA抗体(属于IgG)和 金葡萄球菌上的SPA蛋白结合形成复合物I ; (2)加入I)NA微粒；使DNA微粒和复合 物I上的抗双链DNA抗体(IgG)结合形成复合物II; (3)使复合物II沉降，吸取适 量上层液于另一微孔板中，检测浊度、计数，或加入显色液、终止液，测定吸光度， 测得的吸光度与标本中复合物I或抗双链DNA抗体浓度相关；(4)再从反应标准曲线 查出标本中抗双链DNA抗体含量。
权利要求
1. 一种免疫学检测法和相应试剂盒，其特点是用致敏试剂1(溶液试剂或微粒试剂)与待测物结合或与待测物竞争形成免疫复合物I；用致敏试剂2(溶液试剂或血球、磁性微粒等微粒试剂)与免疫复合物I结合形成免疫复合物II并沉降，再检测上清(层)液中未沉降物的显示值，查出待测物含量。
全文摘要
一种免疫学检测法和相应试剂盒，主要步骤如下用致敏试剂1(已标记的溶液试剂或胶乳等微粒试剂)与待测物结合或与待测物竞争与配体结合，形成免疫复合物I(其中致敏试剂1含量与待测物有关)；用致敏试剂2(溶液试剂或血球、磁性微粒等微粒试剂)与免疫复合物I结合形成免疫复合物II并沉降，使上清(层)液中致敏试剂1减少(减少量与待测物相关)，再检测上清(层)液中未沉降的致敏试剂1显示值，就可定量检测待测物。致敏试剂1可用酶、荧光素、化学发光物或同位素等标记物来标记。微粒试剂可为胶乳、血球、磁性微粒等。
文档编号G01N33/536GK101216487SQ20071000414
公开日2008年7月9日 申请日期2007年1月1日 优先权日2007年1月1日
发明者陈纯美 申请人:陈纯美