专利名称：：适用于茶叶中农药残留快速检测的卡片及其检测方法
技术领域：
：本发明所属的
技术领域：
是食品安全快速检验领域。(二)
背景技术：
中国是一个农业大国，茶叶则是我国农产品中最具文化特色和经济价的农作物之一，随着国内经济的快速发展，我国已闩渐成为世界范围内的茶叶产销大国。然而近年来，茶叶中的农药残留问题R益严重，并且受到国内外各界的广泛关注。茶叶当中的农药残留不仅严重的影响了茶叶的内外贸易，更时时威胁着广大消费者的身体健康。究其原因，农药的不规范、不合理使用是造成茶叶中农药残留居高不下的一个重要原因，而缺乏有效的监管措施是导致农残超标的又一大原因。在我国，茶叶中的农药残留监控大多需要通过专业机构或高等院校等研究单位來进行，此外还需要用到气相色谱、液相色谱、液质联用等大型昂贵的仪器，操作的人员必须具必相当专业技能，检测费用高，周期长，所有这些无疑为茶叶中的农残监控工作设置了难以逾越的门槛。发展快速、准确、方便的茶叶农药残留检测技术，是解决这个问题的一个重要途径。上世纪九十年代初本项目发明人卢新先生在国内率先研制出用于蔬菜中农药残留快速检测的成形技术和产品——农药速测卡，该技术利用胆碱酯酶对有机磷和氨基甲酸酯这两大类高毒农药的高度敏感性，通过测定胆碱酯酶活性的抑制情况，一个产品就可以检测出两大类共几十种有毒农药的微量残留，具有快速、方便、稳定和实用等特点而被广泛地应用于蔬菜中农药残留快速检测，并取得该领域国内第一个专利(对食物残留农药的检测卡片，ZL:03226093.8)，近年来国内也相继出现了一些类似的专利技术和产品，如上海交通大学的"农药环境污染〔金断速测卡及其制造方法(ZL:200310108265.5)"和浙江杭州贺筱蓉的"蔬菜农药残留速测卡(ZL:200420110115.8)"等。由于农药速测卡采用了生物酶法，若用來检测成品茶叶中的农药残留，其酶活性很容易受到成品茶叶所含多种生物碱和植物次生物质的干扰和抑制，因此目甜现有的这些农药速测卡产品都无法应用于茶叶中农药残留的快速检测。
发明内容1、本发明所要解决的技术问题为了解决
背景技术：
中所述对农药检测方法所存在的问题，设计一种稳定性好、抗干扰性强(不受成品茶叶中成份的干扰)、操作简便、检测时间短、易学易用、无需专业技术知识的检测卡片及方法，用于对茶叶中农药残留进行快速检测，这就是本发明的目的。2、本发明采用的技术方案本发明通过建立一种新的样品处理和检测程序，有效地减少样品中干扰物质吸附到酶片上，在酶片中加入保护酶活性抗干扰的复合糖类稳定剂，并采用特殊的酶固定化材料和方法，将胆碱酯酶牢固地结合到滤纸基质上，即使酶片放入水中浸泡清洗胆碱酯酶都不会脱落。本发明由酶片、显色片、底片和盖膜组成，其中酶片是吸附了胆碱酯酶和稳定剂的纸片，稳定剂主要由单糖类(含量0.1-1%)及多糖类(含量0.1-1%)组成，其作用是为了提高卡片的稳定性及消除茶叶中各干扰成份对农残检测结果的影响。显色片是吸附了胆碱酯酶底物和显色剂的纸片，与酶片接触后会呈现颜色变化。酶片和显色片不接触的附着在底片上，酶片和显色片上有盖膜，可以防潮和保持卡片的稳定性、活性。用本发明对茶叶中残留农药的检测，是通过以下过程实现的。1〉取10g(克)茶叶放入带盖瓶中，加入50mL(毫升)丌水(纯净水烧开即可)，震摇50次，静置5min(分钟)后将茶水倒出，冷却至室温；2〉取一片茶叶农残速测卡，揭去上盖膜，将白色药片插入纯净水中，浸湿后取出；3〉将上述润湿的白色药片放入茶叶浸泡液中约10s(秒)，然后将白色药片置于一大杯纯净水中(200mL以上)清洗约10s;4>取出放置10min进行预反应，预反应后的药片表面必须保持湿润；5〉将速测卡对折，用手捏3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应；6〉同时做空白对照测试；7〉结果判定白色药片变为蓝绿色或与空白对照卡相同，为阴性结果；白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果，不变蓝为强阳性结果，说明农药残留量较高，显浅蓝色为弱阳性结果，说明农药残留量相对较低。3、本发明的有益效果本发明操作简便、检测快速、结果准确，只需观察反应颜色的变化就可判定农药的残留情况；卡片中用以检测的胆碱酯酶药片上采用特异性的稳定剂，使卡片具有良好的稳定性和抗干扰能力；卡片制作方面采用易于降解的生物材料，无毒无害，安全环保；检测方法简便易行，而且可以有效消除成品茶叶中干扰成份的影响；检测卡片及其操作方法易学易用，无需任何专业知识，检测成本低，特别适合于基层检测人员的使用。综上所述，本发明可以大大的降低茶叶中农残检测的技术门槛，使广大的茶叶生产种植人员及基层检测人员参与到农残监控的队伍中來，从而能够对茶叶的农残进行全方位的实时有效监控。(四)附图与实施例图l是根据发明提出的一种型式(当掀开盖膜时)的示意图。图2是本实施例一的纵向剖视图。1、实施例一速测卡的制备1>分别将直径为ll醒和13腿的圆形滤纸片固定于大小为48mmX20mm的长方形底片(1)的酶片(2)和显色片(3)的位置上。酶片滤纸要先进行活化处理，使其带有能够与酶结合的交联基团；2〉将含有稳定剂(右旋糖苷0.5%+甘露醇0.2%)的胆碱酯酶液20微升(约0.5IU)加到酶片(2)所在的滤纸片上；先在15-25"C晾40分钟，再转入真空T-燥器中15-24小时；3>将显色剂靛酚乙酸酯的丙酮溶液(0.4%)15微升加到显色片(3)所在的滤纸片h，45'C干燥15分钟；4〉在底片(1)上盖一层60um的PET复合盖膜(4)，以使酶片(2)和显色片(3)与空气隔离丌来。2、实施例二对几类常见茶叶中农药的最低检测限按照本发明中提供的检测方法对几类常见茶叶中农药的最低检测限如下表所示<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>参照附图，本实施例一是由下列各部分组成1——-代表底片，2——-代表粘在底片上的酶片，3——-代表粘在底片上的显色片，4——代表盖膜。本实施例中，底片1是由生物合成材料制成；酶片2是吸附了胆碱酯酶和稳定剂的滤纸片，这是本发明的要点所在；显色片3是吸附了胆碱酯酶底物和显色剂的滤纸片，酶片2和显色片3都粘在底片1上；盖膜4是透明的胶片。权利要求1、一种专用于对茶叶中农药残留进行快速检测的卡片及其检测方法，其特征在于卡片是由含有胆碱酯酶的酶片和含有胆碱酯酶底物和显色剂的显色片组成，两者不接触地附着在底片上，酶片上吸附着稳定剂，酶片和显色片上还有盖膜。2、根据权利要求1所述的对茶叶中农药残留快速检测的卡片及其检测方法，其特征在于在酶片上附着的稳定剂主要由单糖类(含量0.1_1%)及多糖类(含量0.1-1%)组成，该稳定剂能够有效的消除茶叶中各干扰成份对农残检测结果的影响。3、根据权利要求1所述的对茶叶中农药残留快速检测的卡片及其检测方法，其特征在于第一歩进行样品处理，取10g(克)茶叶放入带盖瓶中，加入50mL(毫升)热水(纯净水烧丌即可)，震摇50次，静置5min(分钟)后将茶水倒出，冷却至室温。第二歩检测，取一张检测卡片，揭去上盖膜，将白色药片插入纯净水中，浸湿后取出；将上述润湿的白色药片放入茶叶浸泡液中约10s(秒)，然后将白色药片置于一大杯纯净水中(200mL以上)清洗约10s;取出放置10rain进行预反应，预反应后的药片表面必须保持湿润；将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应；第三歩结果判定白色药片变为蓝绿色为阴性结果；白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果，不变蓝为强阳性结果，说明农药残留量较高，显浅蓝色为弱阳性结果，说明农药残留量相对较低。全文摘要一种对茶叶中农药残留快速检测的卡片及其检测方法，涉及食品安全快速检验
技术领域：
。本发明是由含有稳定剂的固定化酶片和显色片组成。用它检测，既避免了传统仪器方法设备昂贵、操作繁杂、费时费力、专业性强、难以推广及快速检出结果等缺陷，又克服了现有农残快速检测技术抗干扰性差、无法用于茶叶中农残检测的弊端。本发明技术具有操作简便，检测时间短，抗干扰性强，能够快速有效的鉴别出农药残留超标的茶叶，为茶叶流通消费提供有力的安全保障。检测无需专业知识，易学易用，非常适合于广大的基层检测监督机构和人员使用。卡片采用易降解的材料，无毒无害，安全环保。文档编号G01N21/78GK101319997SQ200710028490公开日2008年12月10日申请日期2007年6月8日优先权日2007年6月8日发明者新卢,朱志辉申请人:广州绿洲生化科技有限公司;卢新;朱志辉