专利名称：一种hplc法分析分离氯吡格雷中间体及其对映异构体的方法
技术领域：
本发明属涉及一种高效液相色谱法，尤其是一种分析分离氯吡格雷中间体及 其对映异构体的高效液相色谱法。
背景技术：
氯吡格雷为一种抗凝血药，在其制备过程中的一种中间体的结构式为
分子式为CI6H16CIN02S,化学名为(S)-a-(2-氯苯基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]-吡啶 -5(4印-乙酸甲酯，该中间体的分子中含1个手性碳原子，在通过定向合成目标化 合物氯吡格雷的过程中需要控制其对映异构体的含量。
对于氯吡格雷中间体的对映异构体杂质,在药物合成过程当中是需要进行质 量控制的。含手性碳原子的对映异构体的分离一直是手性药物合成和制剂过程中 质量控制的难点，实现氯吡格雷中间体及其对应异构体的分离在氯吡格雷药物的 合成和制剂过程的质量控制方面具有现实意义。
本发明的目的在于提供一种分析分离氯吡格雷中间体及其对映异构体杂质 的高效液相色谱方法，从而实现氯吡格雷中间体与其对映异构体杂质的分离测 定。
申请人发现，以纤维素类手性柱，以乙腈与pH值为2-4的磷酸/磷酸盐缓冲 液的混合溶液为流动相，可以将氯吡格雷中间体及其对映异构体进行有效分离， 从而可以准确控制氯吡格雷的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分析分 离氯吡格雷中间体及其对映异构体杂质。
S^0CH3<
发明内容
进--歩地，选用OD-RH (DACEL 150mmx4.6mm)纤维素类手性柱，可以
获得更好的分析分离效果。OD-RH纤维素类手性柱是以(纤维素三(3.5-二甲苯
基氨基甲酸酯))为填料。
进一歩地，本发明的磷酸/磷酸盐缓冲液中的磷酸盐选自磷酸二氢铵或磷酸
二氢钠，最优选磷酸二氢铵。
本发明的方法中的流动相选用体积比为25 : 75乙腈与磷酸/磷酸盐缓冲液的
混合溶液。
本发明的方法中的流动相中磷酸/磷酸盐缓冲液的pH值为2.5。 本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现
(1) 取氯吡格雷中间体样品适量，用甲醇或异丙醇溶解样品，配制成每lmL 含氯吡格雷0.1mg 0.5mg的样品溶液。
(2) 设置流动相流速为0.4 1.2mL/min，检测波长为205 235 nm，最佳检 测波长为225nm，色谱柱柱温箱为20 40匸，色谱柱柱温的最佳温度为室 温。
(3) 取(l)的样品^液2-5(HiL注入液相色谱仪，完成氯吡格雷中间体及其对 映异构体的分析与分离。
其中
高效液相色谱仪岛津LC-10ATip， SPD-M10Aip， SCL-10Ayp， DGU-12A
色谱柱OD-RH (DACEL 150mmx4.6mm)手性色谱柱
流动相乙腈-(0.01moI/L磷酸二氢钠，稀磷酸调pH至2.5) =25:75
流速1.0mL/min
检测波长225nrn
柱温室温
进样体积lOpL
本发明采用纤维素类OD-RH (DACEL 150mmx4.6mm)手性色谱柱，能够 有效的分析分离氯吡格雷中间体及其对映异构体(杂质)；选择流动相溶解样品， 确保了溶液的稳定性；选择进样体积10nL，柱温为室温，提高了色谱峰的对称 性。本发明解决了含氯吡格雷中间体及其对映异构体的原料及制剂的分析与分离 问题，从而确保了氯吡格雷及其制剂的质量可控。
图1实施例1，乙腈-(0.01mol/L磷酸二氢铵，磷酸调pH2.5) =25:75的 HPLC图2实施例2，乙腈-(0.0mol/L磷酸二氢铵，磷酸调pH3.0) =25:75的 HPLC图
图3实施例3，乙腈-(0.01mol/L磷酸二氢铵，磷酸调pH4.0) =25:75的 HPLC图
图4实施例4,乙腈-(0.01mol/L磷酸二氢铵，磷酸调pH3.5) -'30:70的 HPLC图
具体实施例方式
实施例l
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10AT、少，SPD-M10Ayp， SCL-10Av/ , DGU-12A;
色谱柱OD-RH (DACELlS0mmX4.6mm);
流动相乙腈-(0.01加ol/L磷酸二氢铵，磷酸调pH2.5) =25:75
流速1.0mL/min;
柱温s室温；
进样体积lOflL。
检测波长225nm; 实验步骤
分别称取氯吡格雷中间体及其对映异构体各5mg，置于25mL容量瓶中，加 流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取氯吡格雷中间 体其对映异构体各5mg，分别置于2个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置 刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图l,图中l号峰为氯吡格雷，2号峰为异构体，可以看出 在该条件下氯吡格雷主峰可以和异构体完全分离开来，且氯吡格雷主峰在 33.9min左右。
实施例2
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATv; , SPD-M10Av; ， SCL-10Av/ ， DGU-12A;
色谱柱OD-RH (DACEL150mmx4.6mm);
流动相乙腈-(0.01mol/L磷酸二氢铵，磷酸调pH3.0) =25:75;
流速1.0mL/min;
检测波长225nm;
柱温室温；
进样体积10jiL。
实验步骤
分别称取氯吡格雷中间体及其对映异构体各5mg,置于25mL容量瓶中，加 流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取氯吡格雷中间 体其对映异构体各5mg，分别置于2个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置 刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图2，图中l号峰为氯吡格雷，2号峰为异构体，可以看出 在该条件下氯吡格雷主峰可以和异构体完全分离开来，且氯吡格雷主峰在 33.9min左右。
实施例3
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp， SPD-M10Av/ ， SCL-10Avp， DGU-12A;
色谱柱OD-RH (DACEL150mmx4.6mm);
流动相乙腈-(0.01mol/L磷酸二氢铵，碟酸调pH4.0) =25:75;
流速1 .OmL/min;
检测波长225nm;
柱温室温；
进样体积10nL。
实验歩骤
分别称取氯吡格雷中间体及其对映异构体各5mg，置于25mL容量瓶中，加 流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取氯吡格雷中间 体其对映异构体各5mg，分别置于2个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置
刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记
录色谱图。结果见附图3，图中l号峰为氯吡格雷，2号峰为异构体，可以看出 在该条件下氯吡格雷主峰可以和异构体完全分离开来，且氯吡格雷主峰在 33.9min左右。
实施例4
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-I0ATvj3， SPD-M10Av/ ， SCL-10Av/ ， DGU-12A;
色谱柱OD-RH (DACEL150mmX4.6mm);
流动相乙腈-(0.01mol/L磷酸二氢铵，磷酸调pH3.5) =30:70;
流速1.0mL/min;
检测波长225nm;
柱温室温；
进样体积10jiL。
实验步骤
分别称取氯吡格雷中间体及其对映异构体各5mg，置于25mL容量瓶中，加 流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取氯吡格雷中间 体其对映异构体各5mg，分别置于2个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置 刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图4，图中l号峰为氯吡格雷，2号峰为异构体，可以看出 在该条件下氯吡格雷主峰可以和异构体基线分离，且氯吡格雷主峰在29.2min左 右。
权利要求
1. 一种高效液相色谱法分析分离氯吡格雷中间体及其对映异构体的方法，其特征在于采用以纤维素类手性柱，以乙腈与磷酸/磷酸盐缓冲液的混合溶液为流动相。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述纤维素类手性柱为OD-RH(DACEL 150mmx4.6mm)。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的磷酸盐为磷酸二氢铵或磷酸 二氢钠。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的磷酸盐为磷酸二氢铵。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述流动相中乙腈与磷酸/磷酸盐缓 冲液的体积比为25 : 75。
6. 根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述磷酸/磷酸盐缓冲液的pH值为 2-4。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述磷酸/磷酸盐缓冲液的pH值为 2.5。
8. 根据权利要求l'所述的方法，其特征在于包括以下步骤U)取氯吡格雷中间体样品适量，用甲醇溶解样品，lmL含氯吡格雷0.1mg 0.5mg的样品溶液。(2) 设置流动相流速为0.4 1.2mL/min，检测波长为205 235nm,检测波长 为225nm，色谱柱柱温箱为20 40X:。(3) 取步骤U)的样品溶液2-50nL注入液相色谱仪，记录色谱图。
全文摘要
本发明公开了一种氯吡格雷中间体及其对映异构体的分析与分离测定方法，采用纤维素类手性柱，以乙腈与磷酸/磷酸盐缓冲液(调至一定pH值)的混合溶液为流动相，用该方法可以快速的分离分析氯吡格雷以及含氯吡格雷制剂的对映异构体杂质。
文档编号G01N30/00GK101393185SQ200710122128
公开日2009年3月25日 申请日期2007年9月21日 优先权日2007年9月21日
发明者牟淑慧 申请人:北京德众万全药物技术开发有限公司