专利名称：：唾液稳定试剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种唾液稳定试剂。
背景技术：
：人类几乎所有系统在生理紊乱和疾病感染时体液都会出现某些变化，包括血液、尿液、唾液、泪液、汗液和精液等。这些改变可以通过可溶性离子、酶和其他蛋白质的常见特征加以证实，也可以由特异性免疫球蛋白、抗原和核酸的存在加以证实。检测这些体液的特异性改变也就提供一种诊断的手段，在需要的时候可以帮助临床医生作出特异性治疗的决定。目前，大多数疾病的诊断依靠分析血液或尿液，但血液的采集必须采用侵入式手段如针刺，采血过程中有不安全因素存在，一定程度上在操作使用中可能会给受检对象带来血液交叉污染的可能，而在进行大面积人群筛查传染性疾病检测中更存在着诸多不方便操作因素。而尿液中分析物浓度也不能经常反应血中分析物的活性。尿液抗体检测试剂(酶联法)的准确性在实验室的条件下综合准确性可以达到96%--97%，在非实验室条件下，尿液检测的准确性将得不到保障，甚至会出现同一个人、同一天检测有两种不同检测结果的情况。除了血液，相对于其他体液而言，唾液是最合适的样品来源，其特点是容易采集、隐私性强、稳定以及量可以满足要求。在未来检测人体传染性疾病标本中人体唾液标本将逐渐替代人体血液标本。这是从创伤性的血液检测人体传染性标本过渡到非创伤性检测人体传染性标本的一次革命性改进，其意义除了避免因采集血液标本时发生的血液交叉污染事件、为特殊传染性疾病在特种场合下进行快速初步筛査提供了更为便利的测试手段外，还有利于预防控制特殊传染性疾病的传播。唾液的获得是非侵入性的直接方式。唾液成分很复杂，其中99%是水，有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等，还可含有一些外源物质，如微生物，药物和毒物。故唾液除用于口腔内环境和唾液腺功能检査外，尚可用于某些全身性、代谢性、传染性疾病的实验诊断以及药物的监测、药物中毒的急诊检验等。含免疫球蛋白的唾液还可用于各种疾病的诊断，特别是检测对病原菌产生的抗原具有特异性的IgG，可预示感染或新近的接触。由于唾液中被分析物含量较低，为了保证唾液取样后能长期保存且不影响检测结果，有必要对唾液中的被分析物进行稳定。
发明内容本发明的目的在于针对唾液成分的复杂性，提供一种能长时间稳定唾液中被分析物的唾液稳定试剂。本发明的目的是这样实现的本发明由缓冲液、防腐剂、蛋白稳定剂、氯化钠组成，缓冲液的浓度为0.01-0.1mol/L，pH值为7.1-7.3，防腐剂、蛋白稳定剂、氯化钠的用量按其质量与缓冲液的体积比为，防腐剂为0.01%-4%W/V，蛋白稳定剂为0.1%-5%W/V，氯化钠为0.5-5%W/V;唾液稳定试剂的pH值为7.1-7.3。本发明中的缓冲液优选磷酸盐缓冲液(PBS)、巴比妥缓冲液、巴比妥一氯化钠缓冲液、硼砂—氯化钙缓冲液或枸橼酸—磷酸氢二钠缓冲液。本发明中的防腐剂优选脱氢醋酸钠、硫柳汞、双乙酸钠、醋酸钠、丙酸钙、羟苯乙酯中的一种或多种。本发明中的蛋白稳定剂优选氨基己酸、葡萄糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)中的一种或几种。本发明的唾液稳定试剂主要用于稳定唾液中被分析物，被分析物可以是一种特异的免疫球蛋白例如IgG，特异的免疫球蛋白来自于HIV-1、HIV-2、HBV、HCV、麻疹、腮腺炎或风疹等。所述被分析物还可以是一种肿瘤标志物。本发明的技术效果是唾液是源自口腔内各种腺的分泌物的复杂混合物，其中很多组分是各种酶、免疫球蛋白和粘蛋白以及细胞碎片与细菌。由于唾液比较粘稠，其粘度使唾液的流动性降低，延长了检测时抗原抗体的结合，有可能导致错误的检测结果，为了不影响被分析物如IgG或肿瘤标志物等的检出，本发明通过缓冲液来改变唾液的粘度，并将缓冲液的PH值控制在7.l-7.3之间。唾液中含有细菌不利于唾液样本的长期保存，本发明在缓冲液中加入一定量的防腐剂可以有效抑制唾液样本中的细菌生长。在唾液样本保存的过程中，为了提高被分析物的再生，本发明加入一定量的氯化钠可以提高免疫球蛋白折叠的修复。本发明中的蛋白稳定剂可以保护被分析物不被降解，以达到长期保存唾液中被分析物的目的。图1是HIV抗体在不同溶液中随时间变化的曲线图。具体实施例方式实施例一按常规方法配制浓度为0.01mol/L、PH值为7.2的磷酸盐缓冲液(即PBS)500ml，然后在该磷酸盐缓冲液中加入5g的氯化钠(其用量为1%W/V，按其质量与缓冲液的体积比来计算，以下所说的用量均是按此方式计算)、0.5g的双乙酸钠(用量为0.19&W/V)和lg的氨基己酸(用量为0.2y。W/V)，然后用氢氧化钠或盐酸调pH值为7.2，即得pH值为7.2的唾液稳定试剂。本发明的唾液稳定试剂室温保存。利用唾液收集装置收集HIV(或HBV、HCV)待检唾液，并将收集的唾液按1:1的体积比加入上述所配制的唾液稳定试剂中，唾液中被分析物可在室温中保存一个月。为了检测唾液稳定试剂的功效，我们以水+HIV阳性唾液和HIV阳性抗体作为对照，用ELISA方法检测了唾液稳定试剂在33天内对唾液中HIV抗体的稳定情况。33天内IO次测得的吸光值(OD)见下表和图1。<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>可见HIV阳性唾液在加入唾液稳定试剂后抗体活性得到了很好的保护。实施例二按常规方法配制浓度为0.01mol/L、pH值为7.2的巴比妥缓冲液500ml，然后在该缓冲液中加入10g的氯化钠(其用量为2%W/V)、10g的脱氢醋酸钠(用量为2%W/V)和0.5g的牛血清白蛋白(BSA)(用量为0.W。W/V)，然后用氢氧化钠或盐酸调pH值为7.2，即得pH值为7.2的唾液稳定试剂。实施例三按常规方法配制浓度为0.1mol/L、pH值为7.1的硼砂一氯化钙缓冲液500ml，然后在该缓冲液中加入2.5g的氯化钠(其用量为0.5%W/V)、20g的硫柳汞(用量为4%W/V)和25g的葡萄糖(用量为5%W/V)，然后用氢氧化钠或盐酸调pH值为7.1，即得pH值为7.1的唾液稳定试剂。实施例四按常规方法配制浓度为0.05mol/L、pH值为7.3的枸橼酸—磷酸氢二钠缓冲液500ml，然后在该缓冲液中加入25g的氯化钠(其用量为5%W/V)、0.05g的羟苯乙酯(用量为0.01%W/V)和5g的麦芽糖(用量为1%W/V)，然后用氢氧化钠或盐酸调pH值为7.3，即得pH值为7.3的唾液稳定试剂。权利要求1.一种唾液稳定试剂，其特征在于由缓冲液、防腐剂、蛋白稳定剂、氯化钠组成，缓冲液的浓度为0.01-0.1mol/L，pH值为7.1-7.3，防腐剂、蛋白稳定剂、氯化钠的用量按其质量与缓冲液的体积比为，防腐剂为0.01％-4％W/V，蛋白稳定剂为0.1％-5％W/V，氯化钠为0.5-5％W/V；唾液稳定试剂的pH值为7.1-7.3。2.根据权利要求1所述的唾液稳定试剂，其特征在于所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、巴比妥缓冲液、巴比妥一氯化钠缓冲液、硼砂一氯化钙缓冲液或枸橼酸一磷酸氢二钠缓冲液。3.根据权利要求1所述的唾液稳定试剂，其特征在于所述防腐剂选自脱氢醋酸钠、硫柳汞、双乙酸钠、醋酸钠、丙酸转、羟苯乙酯中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的唾液稳定试剂，其特征在于所述蛋白稳定剂选自氨基己酸、葡萄糖、麦芽糖、牛血清白蛋白中的一种或几种。5.根据权利要求1至4任一权利要求所述的唾液稳定试剂，其特征在于用于稳定唾液中被分析物。6.根据权利要求5所述的唾液稳定试剂，其特征在于所述被分析物是一种特异的免疫球蛋白，来自于HIV-1、HIV-2、HBV、HCV、麻疹、腮腺炎或风疹。7.根据权利要求6所述的唾液稳定试剂，其特征在于所述特异的免疫球蛋白是IgG。8.根据权利要求5所述的唾液稳定试剂，其特征在于所述被分析物是一种肿瘤标志物。全文摘要本发明为一种唾液稳定试剂，由缓冲液、防腐剂、蛋白稳定剂、氯化钠组成，缓冲液的浓度为0.01-0.1mol/L，pH值为7.1-7.3，防腐剂、蛋白稳定剂、氯化钠的用量按其质量与缓冲液的体积比为，防腐剂为0.01％-4％W/V，蛋白稳定剂为0.1％-5％W/V，氯化钠为0.5-5％W/V；唾液稳定试剂的pH值为7.1-7.3。本发明可以长期保存唾液中被分析物。文档编号G01N33/50GK101196515SQ20071012557公开日2008年6月11日申请日期2007年12月28日优先权日2007年12月28日发明者方强宗申请人:深圳长今生物科技有限公司