专利名称：一种医学组织切片染色方法
技术领域：
本发明涉及在医学研究中通过对组织切片染色来观察疾病的病理变化的医学组织切片 染色方法。
技术背景在医学研究中，通过组织切片来观察疾病的病理变化极为重要。常用的HE (苏木精一伊 红〉染色法只能显示蓝色细胞核和红色的细胞质，免疫组化染色也只能在一张切片上特异性 地显示一种细胞成分。如要明确区分各种组织成分，则受到一定的限制。美国华盛顿大学病 理系的Movat (慕伟特)套染法，能在一张组织切片上用不同的五种颜色分别显示胶原纤维、 蛋白聚糖、肌纤维、弹力纤维、纤维蛋白等，染色效果好，但是所用染料(藏红花、阿尔辛 蓝、酸性品红、猩红、苏木精、苦味酸、碘等)成本太高， 一般实验室很难承受，另外这种 方法的染色程序每次染色需8小时，时间太长。并且Movat套染法只限于应用在动脉粥样硬 化的血管壁的石蜡切片染色。 发明内容本发明针对现有医学组织切片染色方法存在的不足，提供一种成本低、染色耗时短、应 用范围广的医学组织切片染色方法。本发明的医学组织切片染色方法包括以下步骤(1) 如果不是冰冻切片，则取石蜡切片，用常规二甲苯脱蜡、系列乙醇水化；如果是冰 冻切片直接进入下一步；(2) 将饱和苦味酸75ml、 37—40M甲醛25ml和冰醋酸5ml混合均匀制成混合溶液，置 于微波炉中，在45'C—55r加热45秒，将切片放入加热后的溶液里10分钟，取出后流水冲 洗10分钟；(3) 将切片放入5%硫代硫酸钠溶液中浸泡5分钟，经蒸馏水冲2 — 3遍；(4) 将切片放入1%阿尔辛蓝溶液内浸泡20分钟，再用流水冲洗3分钟；(5) 用95%乙醇90ml和氨水10ml配制成碱性乙醇，将碱性乙醇用微波炉在55。C一65'C 下预热45秒，将切片放入预热后的溶液里10分钟，取出后用流水冲洗3分钟；(6) 将2%苏木素30ml、氯化铁溶液40ml和碘溶液20ml混合均匀配制成苏木素工作液， 在避光条件下将切片放入配制的工作液中60分钟，用流水冲洗片刻，经蒸馏水洗3遍，每遍 3分钟；其中2%苏木素由苏木素10g和95免乙醇500ml配制，氯化铁溶液由氯化铁12. 4g、 蒸馏水500tnl和浓盐酸5ml配制，碘溶液由碘10g、碘化钾20g和蒸馏水500ml配制；(7) 将藏红花储存液80ml和酸性品红储存液20ml混合均匀配制成藏红花/酸性品红工 作液，将切片放入藏红花/酸性品红工作液l分钟，取出，经蒸馏水洗3遍，每次3分钟； 其中藏红花储存液由猩红lg、蒸馏水99. 5ml和浓冰醋酸0. 5ml配制，酸性品红储存液由酸 性品红0. lg、蒸馏水99. 5ml和浓冰醋酸0. 5ml配制；(8) 将切片放入5%磷钨酸溶液内浸泡5分钟，直接转入1%冰醋酸内浸泡5分钟，再 经蒸馏水洗3遍，每次3分钟；(9) 用95%乙醇脱水1分钟，100%乙醇脱水2遍，每遍l分钟；(10) 将切片放入乙醇藏红花溶液内浸泡7分钟；通过将藏红花6g、无水乙醇100ml放 入密封瓶内，再放60'C烤箱48小时，冷却后过滤制成乙醇藏红花溶液；(11) 用100%乙醇脱水2遍，每遍l分钟；(12) 用二甲苯透明中性树胶封存切片。 本发明的医学组织切片染色方法成本低。染色流程所用时间比原程序将縮短2—4小时(冰冻切片大约縮短4小时；石蜡切片大约縮短2.5小时)，使染色更加鲜艳。还增加了应用 范围，能够用于在动脉粥样硬化的其它脏器的研究，如肝脏、肾脏等。也可用于动脉粥样硬 化及其它疾病的病理学研究。
具体实施方式
按以下步骤进行医学组织切片染色-(1) 如果不是冰冻切片，则取石蜡切片，用常规二甲苯脱蜡、系列乙醇水化；如果是冰 冻切片直接进入下一步；(2) 将饱和苦味酸75ml、 37—40X甲醛25ml和冰醋酸5ml混和均匀，置于微波炉中， 在45'C—55'C加热45秒，将切片放入加热后的溶液里10分钟，取出后流水冲洗10分钟；(3) 将切片放入5%硫代硫酸钠溶液中浸泡5分钟，经蒸馏水冲2—3遍；(4) 将切片放入1%阿尔辛蓝溶液内浸泡20分钟，再用流水冲洗3分钟；(5) 用95W乙醇90ml和氨水10ml配制成碱性乙醇，将碱性乙醇用微波炉在55°C—65'C 下预热45秒，将切片放入预热后的溶液里10分钟，取出后用流水冲洗3分钟；(6) 将2%苏木素30ml、氯化铁溶液40ml和碘溶液20ml混合均匀配制成苏木素工作液， 其中2%苏木素由苏木素10g和95%乙醇500 ml配制，氯化铁溶液由氯化铁12. 4g、蒸馏水 500ml和浓盐酸5ml配制，碘溶液由碘10g、碘化钾20g和蒸馏水500ml配制，在避光条件下 将切片放入配制的工作液中60分钟，用流水冲洗片刻，经蒸馏水洗3遍，每遍3分钟；(7) 配制藏红花/酸性品红工作液:藏红花储存液80ml(猩红lg+蒸馏水99. 5ml+浓冰 醋酸0. 5ml)十酸性品红储存液20ml (酸性品红0. lg+蒸馏水99. 5ml+浓冰醋酸0. 5ml)混匀， 将切片放入l分钟，取出，经蒸馏水洗3遍，每次3分钟；(8) 将切片放入5%磷钨酸溶液内浸泡5分钟，直接转入1%冰醋酸内浸泡5分钟，再 经蒸馏水洗3遍，每次3分钟；(9) 用95%乙醇脱水1分钟，100%乙醇脱水2遍，每遍l分钟；(10) 将切片放入乙醇藏红花溶液(国产藏红花6g+无水乙醇100ral放入密封瓶内，放 6(TC烤箱48小时，冷却后过滤即可)内浸泡7分钟；(11) 用100%乙醇脱水2遍，每遍l分钟；(12) 用二甲苯透明中性树胶封存切片。 经上述过程染色后，最终得到的切片染色结果是 核及弹力纤维一黑色，基质和粘蛋白 一蓝色， 肌肉 一红色，胶原和网状纤维一黄色， 纤维蛋白 —深红色。
权利要求
1.一种医学组织切片染色方法，其特征在于，包括以下步骤(1)如果不是冰冻切片，则取石蜡切片，用常规二甲苯脱蜡、系列乙醇水化；如果是冰冻切片直接进入下一步；(2)将饱和苦味酸75ml、37-40％甲醛25ml和冰醋酸5ml混合均匀制成混合溶液，置于微波炉中，在45℃--55℃加热45秒，将切片放入加热后的溶液里10分钟，取出后流水冲洗10分钟；(3)将切片放入5％硫代硫酸钠溶液中浸泡5分钟，经蒸馏水冲2-3遍；(4)将切片放入1％阿尔辛蓝溶液内浸泡20分钟，再用流水冲洗3分钟；(5)用95％乙醇90ml和氨水10ml配制成碱性乙醇，将碱性乙醇用微波炉在55℃--65℃下预热45秒，将切片放入预热后的溶液里10分钟，取出后用流水冲洗3分钟；(6)将2％苏木素30ml、氯化铁溶液40ml和碘溶液20ml混合均匀配制成苏木素工作液，在避光条件下将切片放入配制的工作液中60分钟，用流水冲洗片刻，经蒸馏水洗3遍，每遍3分钟；其中2％苏木素由苏木素10g和95％乙醇500ml配制，氯化铁溶液由氯化铁12.4g、蒸馏水500ml和浓盐酸5ml配制，碘溶液由碘10g、碘化钾20g和蒸馏水500ml配制；(7)将藏红花储存液80ml和酸性品红储存液20ml混合均匀配制成藏红花/酸性品红工作液，将切片放入藏红花/酸性品红工作液1分钟，取出，经蒸馏水洗3遍，每次3分钟；其中藏红花储存液由猩红1g、蒸馏水99.5ml和浓冰醋酸0.5ml配制，酸性品红储存液由酸性品红0.1g、蒸馏水99.5ml和浓冰醋酸0.5ml配制；(8)将切片放入5％磷钨酸溶液内浸泡5分钟，直接转入1％冰醋酸内浸泡5分钟，再经蒸馏水洗3遍，每次3分钟；(9)用95％乙醇脱水1分钟，100％乙醇脱水2遍，每遍1分钟；(10)将切片放入乙醇藏红花溶液内浸泡7分钟；通过将藏红花6g、无水乙醇100ml放入密封瓶内，再放60℃烤箱48小时，冷却后过滤制成乙醇藏红花溶液；(11)用100％乙醇脱水2遍，每遍1分钟；(12)用二甲苯透明中性树胶封存切片。
全文摘要
本发明提供了一种医学组织切片染色方法，包括以下步骤石蜡切片脱蜡、水化；将切片放入加热后的苦味酸、甲醛和冰醋酸溶液里，取出后流水冲洗；将切片放入5％硫代硫酸钠溶液中浸泡、经蒸馏水冲洗；将切片放入阿尔辛蓝溶液内浸泡、用流水冲洗；将切片放入预热后的碱性乙醇溶液里浸泡、用流水冲洗；在避光条件下将切片放入苏木素工作液中，用流水和蒸馏水洗；将切片放入藏红花/酸性品红工作液中、经蒸馏水洗；将切片放入磷钨酸溶液内浸泡，再转入冰醋酸内浸泡，经蒸馏水洗；用乙醇脱水；将切片放入乙醇藏红花溶液内浸泡；再用乙醇脱水；封存。本发明的染色方法成本低，染色流程所用时间缩短，染色更加鲜艳，还增加了应用范围。
文档编号G01N1/30GK101251449SQ20081001509
公开日2008年8月27日 申请日期2008年4月10日 优先权日2008年4月10日
发明者军 徐, 莉 李, 李瑞峰, 胡志敏, 胡维诚, 融 陈 申请人:山东大学