专利名称::四味姜黄汤制剂的质量控制方法
技术领域:
:本发明涉及一种藏成药——四味姜黄汤制剂的质量控制方法,特别涉及四味姜黄汤散剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂和片剂的质量控制方法,属于对药品进行质量控制的
技术领域:
。技术背景四味姜黄汤散是《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册中收载的具有清热,利尿功能,主治尿道炎,尿频,尿急的藏成药,四味姜黄汤其他制剂是在散剂基础上进行剂改得到的药品,包括丸剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂等系列制剂。其处方由中药材姜黄15g、小檗皮12.Sg、余甘子25g、蒺藜25g组成。原制剂质量标准仅有散剂通则检査,不足以控制药品质量。本发明对四味姜黄汤散剂和剂改产品丸剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂等提出了质量控制方法,提高后的质量标准能有效控制药品,真IH体现药品的安全有效、质量可控。
发明内容本发明的目的在于提供一种四味姜黄汤制剂的质量控制方法。该制剂包括散剂、丸齐U、颗粒剂、胶囊剂和片剂。本发明针对原有制剂四味姜黄汤散质量标准过于简单,产品质量难以控制的缺点,对本制剂的质量控制方法进行了研究,建立了姜黄、小檗皮、余甘子、蒺藜四个药材的TLC薄层鉴别,增加了姜黄素的高效液相色谱定量分析方法和盐酸小檗碱的毛细管电泳定量分析方法,提高了四味姜黄汤制剂的质量控制标准,从而保证了本制剂的临床疗效。本发明中所述四味姜黄汤制剂均按照《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册中四味姜黄汤散的处方比例制备,其丸剂的制备方法为以上四味或部分药味(其余药味用水煎煮),粉碎成细粉,过筛,混匀。每100g粉末用炼蜜3550g加适量的水或水煎液泛丸,千燥,制成水蜜丸;或加炼蜜80110g制成小蜜丸或大蜜丸,即得;其他剂型的制备方法为全部或部分药材用水或含水醇回流提取1-3次,滤过,合并滤液,浓缩或回收乙醇成稠膏,将上述稠膏和部分药材细粉或适量辅料混匀,再按照不同的方法制备成颗粒剂、胶囊剂或片剂。本发明的制剂,在制成制剂时根据需要可以加入药物可接受的载体,这些载体可以是任何适合制成本发明制剂的载体。本发明所述质量控制方法可用于以上方法制成的藏成药制剂,其步骤包括鉴别、含量测定两个项目中的一项或两项,其中鉴别包括以姜黄对照药材、小檗皮对照药材和盐酸小檗碱对照品、余甘子对照药材、蒺藜对照药材为对照的薄层鉴别的部分或全部;含量测定包括以姜黄素和/或盐酸小檗碱对照品为对照的含量测定方法。本发明所述的质量控制方法包括-鉴别1.取四味姜黄汤制剂,研细,加乙醇、甲醇或含水醇(均》70%)中的任一种,加热回流,滤过,滤液作为供试品溶液;另取姜黄对照药材,同法制成对照药材溶液;分别吸取上述2种溶液,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以苯(甲苯)-氯仿一乙醇(4-6:2-4:0.1-0.3)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365或254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。2.取1项下的回流提取液,蒸干,残渣加氨试液10-20ml使溶解,再用三氯甲烷7-15ml萃取,分取三氯甲垸液,挥干,残渣加乙醇使溶解,作为供试品溶液。另取小檗皮对照药材,加乙醇回流,滤过,滤液作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加乙醇溶解,作为对照品溶液;分别吸取上述3种溶液,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇-36%醋酸-水(5-7:卜3:0.15-0.35)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365或254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光主斑点。3.取四味姜黄汤制剂,研细,加入乙醇、甲醇或含水醇(均》70%)中的任一种,超声处理,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇或甲醇使溶解,作为供试品溶液。另取余甘子对照药材,同法制成对照药材溶液。分别吸取上述2种溶液,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4-6:3-5:0.5-2)(为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1_5%三氯化铁乙醇溶液,100-ll(TC加热或热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝色斑点。4.取四味姜黄汤制剂,研细,加水煮沸,滤过,滤液加盐酸0.5-2ml,水浴加热l小时,立即冷却,用氯仿10-30ml提取,提取液蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液。另取蒺藜对照药材,同法制成对照药材溶液。分别吸取上述2种溶液,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷-醋酸乙酯(10-20:0.5-2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5-10%硫酸乙醇溶液,100-ll(TC加热或热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色(紫色)的斑点;置紫外光灯(365或254nm)下视检,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的橙色荧光斑点。姜黄素("H,A;)含量测定照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙睛4%冰醋酸(43-53:47-57)为流动相,检测波长430士2nm,理论板数按姜黄素峰计算应不低于4000;对照品溶液制备取姜黄素对照品适量,精密称定,加甲醇或乙醇制成每lml含2-20yg的溶液,即得。供试品溶液制备取四味姜黄汤制剂,研细,取约0.02-0.2g,精密称定,精密加入甲醇、乙醇或含水醇(均》70%)中的任一种10-50ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30-90分钟,放冷,再称定重量,用相同溶剂补足减失的重量,摇匀,高速离心或用0.45um滤膜滤过,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10iil,注入液相色谱仪,测定,即得。本四味姜黄汤制剂中,每lg含姜黄以姜黄素(C21H2。06)计,不得少于0.40mg(胶囊剂与片剂可根据不同规格重量折算成每粒或每片的含量)。小檗碱(C21,HI8C1N04)含量测定照中国药典2005年版一部附录VID毛细管电泳法测定。电泳分离条件弹性石英毛细管柱58.5cm(有效长度50cm)X75ymlD;运行缓冲液0.2M乙酸钠甲醇=6-10:1-3;压力进样10-30kPas;运行电压10-25kV;柱上检测A=265士2nm;毛细管柱温20-40。C;每次进样间用0.1MNaOH、水、运行缓冲液分别冲洗毛细管1、2、3min;内标溶液每lml甲醇或乙醇含碘化甲基三苯基磷(methyl-triphenylphosphoniumiodide,含量97%)4-10呢,使用时按供试液定容体积的5%加入。对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量,精密加入内标溶液适量,用甲醇或乙醇制成每lml含20-60yg盐酸小檗碱和200-500iig内标物质的溶液,摇匀,即得。供试品溶液制备取四味姜黄汤制剂0.l-0.3g,精密称定于10-50ml量瓶中,精密加入内标溶液0.5-2.5ml与盐酸-甲醇或盐酸-乙醇(1:100)中的任一种8-45ml,超声处理(功率200-300W,频率30-50kHz)30-90分钟,放冷,定容至刻度,摇匀,高速离心或用0.45um滤膜滤过,取上清液或滤液,即得。测定法将待测供试品溶液置于进样器中,设定操作参数进行测定。四味姜黄汤制剂中,每lg含小檗碱以盐酸小檗碱(C2QH:SC1N04)计,不得少于0.4mg(胶囊剂与片剂可根据不同规格重量折算成每粒或每片的含量)。上述四味姜黄汤制剂屮4种药材鉴别所述的最优展开剂姜黄为苯(甲苯)-氯仿一乙醇(甲醇)(5:3:0.2);小檗皮为正丁醇-36%醋酸-水(6:2:0.25);余甘子为甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1);蒺藜为环己烷-醋酸乙酯(15:1)。由于药材来源、产地、生长年限和采收季节等存在差异,导致制剂的含量差异较大,本发明暂定最低限,实际制剂的含量限度可以在固定药材产地条件下,根据多批生产样品的数据进行调整。上述检测项目可以根据需要选择部分或全部进行,其步骤并不需要按照先后顺序,同吋还可以进行常规检测性状对于散剂本品为黄色粗粉;气微香,味苦、略甜。对于丸剂本品为黄棕色至棕褐色的水蜜丸、小蜜丸或大蜜丸;气微,味苦、略甜。对于颗粒剂本品为黄棕色至棕褐色的颗粒;气微,味苦。对于胶囊剂木品内容物为黄棕色至棕褐色的粉末或颗粒;气微,味苦。对于片剂本品为薄膜衣片,除去包衣后呈黄棕色至棕褐色;气微,味苦。检査应符合屮国药典一部通则各剂型项下有关的各项规定。本发明的特点和优点是首次建立了四味姜黄汤制剂中姜黄、小檗皮、余甘子、蒺藜四味药材有无的判断方法;首次建立了四味姜黄汤制剂中有效成分姜黄素的HPLC定量分析方法和标准;首次建立了四味姜黄汤制剂中有效成分小檗碱的HPCE定量分析方法和标准;保证了工艺的规范化和质量的稳定可控;另外,从操作上看,本发明的质量控制方法简单易行、准确先进。下面结合研究实例进一步叙述本发明的技术方案和效果,本发明不仅限于所述研究实例。1.四味姜黄汤散的薄层鉴别研究1.1取本品5g,加70X乙醇20ml,加热回流1小时,放冷,滤过,滤液作为供试品溶液。另取缺姜黄的阴性对照品4g,同法制成阴性对照品溶液。再取姜黄对照药材0.5g,加70%乙醇10ml,同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各3ul,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,分别以苯-氯仿-乙醇(5:3:0.2)、甲苯-氯仿-甲醇(5:3:0.2)、氯仿-甲醇(96:4)和氯仿一甲醇一甲酸(96:4:0.7)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365或254nm)下检视。结果表明,四种展开系统均得到相似的结果,但以苯-氯仿-乙醇(5:3:0.2)为展开剂时,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光主斑点,且主要斑点分离度好,阴性对照无干扰,方法重现性好,故列入质量标准下.文。1.2取姜黄鉴别项下的70%乙醇提取液10ml,蒸干,残渣加氨试液15ml使溶解,再用三氯甲烷10ml萃取,分取三氯甲烷液,挥干,残渣加乙醇lml使溶解,作为供试品溶液。另取缺小檗皮的阴性对照品1.8g,加70%乙醇10ml,同法制成阴性对照品溶液。再取小檗皮对照药材0.5g,加乙醇20ml,加热回流l小时,放冷,滤过,滤液作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加乙醇制成每lml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各2nl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,分别以正丁醇-36%醋酸-水(6:2:0.25)、苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨溶液(6:3:1.5:1.5:0.5,氨蒸汽饱和)为展丌剂,展丌,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光主斑点,缺小檗皮的阴性对照品无干扰。两种展开系统结果相似,但展开剂正丁醇-36%醋酸-水(6:2:0.25)组成简单,毒性小,故列入质量标准IH文。1.3取本品2g,加7(^乙醇20ml,超声处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇lml使溶解,作为供试品溶液。另取缺余甘子的阴性对照品2g,同法制成阴性对照品溶液。再取余甘子对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各2y1,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,分别以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)、醋酸乙酯-甲酸-水(8:2:2)为展丌剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝色斑点。缺余甘子的阴性对照品无干扰。两种展开系统结果相似,但甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)展开剂所得色谱图Rf值适中,故列入质量标准正文。1.4取本品3g,加水30ml,煮沸30分钟,补足水分,用棉花滤过,滤液加盐酸lml,水浴加热1小时,立即冷却,用氯仿20ml提取,提取液蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺蒺藜的阴性对照品2.2g,同法制成阴性对照品溶液。再取蒺藜对照药材lg,同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各3iil,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,分别以环己烷-醋酸乙酯(15:1)、正己烷-乙醚(8:2)为展丌剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色(紫色)的斑点;置紫外光灯(365nm)下视检,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的橙色荧光斑点。两种展开系统结果相似,但环己烷-醋酸乙酯(15:1)展开剂所得色谱图Rf值适中,故列入质量标准正文。2.四味姜黄汤丸中姜黄素的高效液相色谱含量测定方法研究2.1仪器与色谱条件高效液相色谱仪(安捷伦1100系列);phenomenexLuna〔18柱(250匪X4.6mm,5um);以乙睛-4%冰醋酸(48:52)为流动相;检测波长430nm。理论板数按姜黄素峰计算,应不低于4000。在此条件下,姜黄素与其他成分达基线分离,阴性样品无干扰(见附图1)。2.2试剂和药品四味姜黄汤丸购至康定县藏医院;姜黄对照药材和姜黄素对照品(供含量测定用)均购于中国药品生物制品检定所;甲醇、乙腈为色谱纯,水为高纯水;其余试剂均为分析纯。2.3线性关系考察精密称取姜黄素对照品5.6mg,置100ml量瓶中,加甲醇溶解定容,摇匀,即得对照品贮备液。精密量取贮备液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、3.2ml,分别置10ml量瓶中,加甲醇制备成浓度为2.24、4.48、6.72、8.96、11.2、17.92ug/ml的对照品溶液,分别精密吸取10nl,注入液相色谱仪。以峰面积积分值对进样浓度进行回归,得回归方程Y=121.62447X+0.7296053。结果表明进样量在0.02240.179ug范围内呈良好的线性关系(r=0.9997)。2.4最小检出量测定以检测器恰能产生3倍噪声的信号时所需进入色谱柱的最小浓度计算。实验中通过基线记录和姜黄素对照品溶液稀释进样,最终确定姜黄素对照品溶液的最小检出量为0.015yg/ml。2.5仪器精密度试验精密吸取同一姜黄素对照品溶液,按上述色谱条件重复自动进样5次,测得峰面积积分值分别为580.6、583.3、581.5、583.1、582.7,RSD=0.198%(n=5),说明仪器的进样与检测精密度良好。2.6供试品溶液稳定性考察取同一供试品溶液于室温条件放置,于0、2、4、6、8、20、24h进样测定艽峰面积,结果7次测定的峰面积分别为588.2、588.2、588.3、592.4、595.1、592.3、603.3,RSD为0.919%,说明供试品溶液室温放置24h基本稳定。2.7重复性试验取同一批供试品5份,按"2.9"项下方法操作,并按"2.1"项下色谱条件测试,结果5份样品的含量分别为0.943、0.937、0.981、0.973、0.964mg/g,平均含量为0.960rag/g,RSD为1.98%。2.8问收率试验减半量称取已知含量的同批样品9份,精密称定,分别按梯度(0.8倍、1倍、1.2倍)精密加入一定量的姜黄素对照品溶液(48.2ug/ml),按"2.9"项下前处理方法处理,按"2.1"项K色谱条件测定。结果平均回收率为99.4%,RSD为1.46%(见表1)。2.9样品测定取四味姜黄汤丸适量,研细,取约0.05g,精密称定,精密加入甲醇10ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)60分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,高速离心,取上清液,按"2.1"项下色谱条件,进样10ul测定。3批样品每lg含姜黄素分别为0.960、1.05、0.918mg。表2.1样品加样回收率试验(mg)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>3.四味姜黄汤散中小檗碱的毛细管电泳含量测定方法研究3.l试剂和药品对照品盐酸小檗碱购自SIGMA(在本实验条件下根据面积归一化法计算其含量大于98%),小檗皮对照药材购自中国药品生物制品检定所。四味姜黄汤散自制;水为高纯水(购于西南物理研究所);内标物碘化甲基三苯基磷(methyl-triphenylphosphoniumiodide,含量97%)购于美国ACROSORGANICS公司;其余试剂均为分析纯。3.2仪器与实验条件惠普^CE毛细管电泳仪(二极管阵列检测器及HP色谱工作站),弹性石英毛细管58.5cm(有效长度50cm)X75咖(河北水年锐沣色谱器件有限公司);检测波长265nm;压力进样20kPas;运行电压15kV,柱温25°C,缓冲液0.2molL—'乙酸钠-甲醇(8:2)。每次进样前分别用0.1mol("氢氧化钠溶液、水、运行缓冲液冲洗毛细管1,2,3min。在本HPCE条件下,小檗碱与其他成分良好分离,阴性样品无干扰(见附图2)。3.3盐酸小檗碱的紫外吸收光谱用二极管阵列检测器(DAD)在线检测对照品和样品中盐酸小檗碱在0.2mol乙酸钠-甲醇(8:2)缓冲系统中的光谱,盐酸小檗碱在265nm处有最大吸收峰,故采用265nm波长检测。3.4线性关系及最低检测限精密称取盐酸小檗碱对照品19.90mg,用甲醇溶解定容至50ml,分别精密吸取O.25,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0ml置于10ml容量瓶中,加入内标溶液(O.6917g溶解于100ml70%甲醇中)0.5mi,用盐酸-甲醇(100:1)]定容,分别配制成浓度为9.95,19.9,39.8,79.6,119.4,159.2ugml—'的对照品溶液,以盐酸小檗碱的相对峰面积Y(即被测物与内标物的峰面积比)对盐酸小檗碱对照品溶液浓度C(mg,匚')作标准曲线。其回归方程为Y=0.0244C十O.0121r=0.9999当进样量为20kPas时,以信噪比等于3计,小檗碱的最低检测限为1.gml—'。3.5测定条件优化3.5.1运行电压的选择分离体系最佳外加电压值与缓冲溶液浓度(离子强度)及毛细管内径和长度有关,为了尽可能使用高电压而不产生过多的焦耳热,我们制作了欧姆定律曲线。取0.2mo1*L—'乙酸钠一甲醇(8:2)缓冲溶液,按不同设置的运行电压(3,5,8,10,12,15,18,20kV)测试其电流值,绘制欧姆定律曲线,结果当电压大于15kV时开始偏离线性段,其相应的电流偏大,故确定15kV为运行电压。3.5.2进样间毛细管的清洗取四味姜黄汤散样品溶液,2次进样间直接用运行缓冲液冲洗和用O.1mol*LH氢氧化钠溶液、水、运行缓冲液分别清洗l,2,3min后进样,结果以后种方式清洗测定的盐酸小檗碱峰形对称,而前者拖尾。故确定2次进样间分别用0.1mol4/1氢氧化钠溶液、水、运行缓冲液冲洗l,2,3min。3.6进样精密度试验取浓度为39.8Pgm1—1的盐酸小檗碱对照品溶液分别连续进样5次,测得盐酸小檗碱相对峰面积平均值为1.38,RSD=1.2%。3.7重复性试验称取四味姜黄汤散约0.2g,共5份,按样品测定项下操作,其小檗碱含量平均为3.14mg'g—',RSD=1.65%。另在第10天再次测定该批四味姜黄汤散,其平均含量为3.19mg.g1(n=3,RSD=1.41%)。以上2个不同日期样品测定结果均值的RSD=1.71°/。(n=8),说明该法重复性良好。3.8稳定性实验取浓度为39.8Pgml—'的盐酸小檗碱对照品溶液于配制当H0,1,2,3,4,5,6,7,8h各测定1次,其相对峰面积平均值为1.27,RSD=1.61%(n=9),说明对照品当R室温放置8h内测定浓度基本无变化。用新配制的标准溶液测定冰箱放置1月的对照品溶液,其配制浓度和测定浓度RSD4.4M,基本稳定。另取四味姜黄汤散样品溶液于当R第0,3,8,9h分别测定4次,其相对峰面积平均值为1.31,RSD=1.58%;于次日(第24h)再测定一次,其闩间相对峰面积的RSD为1.67%(n二5)。3.9加样回收实验取已知含量(3.14mgg—')的四味姜黄汤散0.lg,精密称定于25ml量瓶中,平行操作5份,加入119.4ug'mr'的盐酸小檗碱对照品溶液3ml,内标溶液(0.6917g溶解于100ml70%甲醇中)1.25ml,按3.10样品测定项下的方法操作,结果平均加样回收率为98.7°/。,RSD:2.4%。3.]0样品测定取四味姜黄汤散0.2g,精密称定于25ml量瓶中,准确加入内标溶液1.25ml,用盐酸-甲醇(l:100)20ml超声提取60min,放至室温,定容至刻度,取约1.5ml高速离心(14000rmin—')10min,上清液经0.45她微孔滤膜过滤后作为样品溶液。按3.1项下的实验条件测定。结果三批样品盐酸小檗碱含量分别为3.14、3.31、3.24mg'g—1。图l是本发明姜黄素含量测定专属性11PLC谱图;图2是本发明盐酸小檗碱含量测定专属性HPCE谱图。图i中,A—缺姜黄阴性、B—样品、C—姜黄对照药材、D—姜黄原料药材、E—姜黄素对照品图2中,A—缺小檗皮阴性、B—内标+小檗皮阴性、C一内标十样品、D—内标+小檗皮对照药材、E—内标+盐酸小檗碱对照品具体实施方式实施例1四味姜黄汤颗粒的质量控制方法处方姜黄774.2g小檗皮645.2g余甘子1290g蒺藜1290g。制法以上四味,加10倍量水浸泡30分钟,煎煮提取3次,每次1.5小时,煎液合并,滤过,滤液浓縮成相对密度为1.101.15(8CTC热测)的清膏,等分成两份,一份喷雾干燥成浸膏粉,作为制粒的母核,其余清膏作为黏合剂,采用一步制粒机制成1000g颗粒,即得。性状本品为黄棕色至棕褐色的颗粒;气微,味苦。鉴别(1)取本品5g,研细,加70M乙醇20ml,加热回流l小时,放冷,滤过,滤液作为供试品溶液。另取姜黄对照药材0.5g,加70y。乙醇10ml,同法制成对照药材溶液。吸取上述2种溶液各3ul,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯-氯仿-甲醇(5:3:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365腿)下检视。供试品色谱屮,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光主斑点。(2)取姜黄鉴别项下的70W乙醇提取液10ml,蒸干,残渣加氨试液15ml使溶解,再用三氯甲烷IOml萃取,分取三氯甲烷液,挥干,残渣加乙醇lml使溶解,作为供试品溶液。另取小檗皮对照药材0.5g,加乙醇20ml,加热回流l小时,放冷,滤过,滤液作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加乙醇制成每lml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各l2ul,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇-36%醋酸_水(6:2:0.25)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光主斑点。(3)取本品2g,加70%乙醇20ml,超声处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇lml使溶解,作为供试品溶液。另取余甘子对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。吸取上述2种溶液各l2yl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝色斑点。(4)取本品粉末3g,加水30ml,煮沸30分钟,补足水分,用棉花滤过,滤液加盐酸lml,水浴加热1小时,立即冷却,用氯仿20ml提取,提取液蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液。另取蒺藜对照药材lg,同法制成对照药材溶液。吸取上述2种溶液各12ul,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷-醋酸乙酯(15:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色(紫色)的斑点;置紫外光灯(365nm)下视检,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的橙色荧光斑点。检査应符合中国药典一部颗粒剂项下有关的各项规定(附录IC)。含量测定照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙睛4%冰醋酸(48:52)为流动相,检测波长430nm,理论板数按姜黄素峰计算应不低于4000;对照品溶液的制备精密称取姜黄素对照品适量,加甲醇制成每lml含10yg的溶液,摇匀,即得。供试品溶液制备取四味姜黄汤颗粒,研细,取约0.05g精密称定,精密加入甲醇10ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)60分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,高速离心或用0.45ym滤膜滤过,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定,即得。本品每lg颗粒含姜黄以姜黄素(C21H2。06)计,不得少于2.0mg。实施例2四味姜黄汤胶囊的质量控制方法处方姜黄258.6g小檗皮215.5g余甘子431g蒺藜431g。制法以上四味,加10倍量水浸泡30分钟,煎煮提取3次,每次1.5小时,煎液合并,滤过,滤液浓縮成相对密度为1.101.15(8CTC热测)的清膏,等分成两份,一份喷雾干燥成浸膏粉,作为制粒的母核,其余清膏作为黏合剂,采用一步制粒机制成颗粒,装入胶囊,制成1000粒,即得。性状本品内容物为黄棕色至棕褐色的粉末或颗粒;气微,味苦。鉴别同实施例1。检査应符合中国药典一部胶囊剂项下有关的各项规定(附录IL)。含量测定照中国药典2005年版一部附录VID毛细管电泳法测定。电泳分离条件弹性石英毛细管柱58.5cm(有效长度50cm)X75umlD;运行缓冲液0.2M乙酸钠甲醇=8:2;压力进样20kPas;运行电压15kV;柱上检测人=265nm;毛细管柱温30'C;每次进样间用0.1MNaOII、水、运行缓冲液分别冲洗毛细管1、2、3min;内标溶液每lml甲醇或乙醇含碘化甲基三苯基磷(methyl-triphenylphosphoniumiodide,含量97%)4mg,使用时按供试液定容体积的5%加入。对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量,精密加入内标溶液适量,用甲醇或乙醇制成每lml含20ng盐酸小檗碱和200ug内标物质的溶液,摇匀,即得。供试品溶液制备取四味姜黄汤制剂0.2g,精密称定于25ml量瓶中,精密加入内标溶液1.25ml与盐酸-甲醇或盐酸-乙醇(1:100)中的任一种20ml,超声处理(功率250W,频率40kHz)60分钟,放冷,定容至刻度,摇匀,高速离心或用0.45ym滤膜滤过,取上清液或滤液,即得。测定法将待测供试品溶液置于进样器中,设定操作参数进行测定。本品每粒含小檗皮以盐酸小檗碱(C2。H,8C1NCX,)计,不得少于1.8mg。实施例3四味姜黄汤片剂的质量控制方法处方姜黄258.6g小檗皮215.5g余甘子431g蒺藜431g。制法以上四味,加10倍量水浸泡30分钟,煎煮提取3次,每次1.5小时,煎液合并,滤过,滤液浓缩至适量,干燥,加辅料适量,制成颗粒,干燥,压制成1000片,包薄膜衣,即得。性状本品为薄膜衣片,除去包衣后显黄棕色至棕褐色;气微,味苦。鉴别同实施例1。检查应符合中国药典一部片剂项下有关的各项规定(附录ID)。含量测定方法同实施例1。本品每l片含姜黄以姜黄素(C,凡A)计,不得少于2.0mg。本品每1片含小檗皮以盐酸小檗碱(C2。H1SC1N04)计,不得少于1.8mg。实施例4四味姜黄汤丸的质量控制方法处方姜黄193.5g小檗皮161.2g余甘子322.6g蒺藜322.6g制法以上四味,粉碎成细粉,过筛,混匀。每100g粉水用炼蜜35g加适量的水泛丸,干燥,制成水蜜丸IOOOg,或加炼蜜80110g制成小蜜丸或大蜜丸,即得。性状本品为黄棕色至棕褐色的水蜜丸、小蜜丸或大蜜丸;气微,味苦、略甜。鉴别(1)取本品5g,研细,加70X乙醇20ml,加热回流1小时,放冷,滤过,滤液取本品5g,研细,加70X乙醇20ral,加热回流1小时,放冷,滤过,取滤液10ml,蒸干,残渣加氨试液15ral使溶解,再用三氯甲烷10ml萃取,分取三氯甲烷液,挥干,残渣加乙醇lml使溶解,作为供试品溶液。另取小檗皮对照药材0.5g,加乙醇20ml,加热回流1小时,放冷,滤过,滤液作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加乙醇制成每lml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各l2iU,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇-36%醋酸-水(6:2:0.25)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光主斑点。(2)取本品2g,研细,加70%乙醇20ml,超声处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇lml使溶解,作为供试品溶液。另取余甘子对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。吸取上述2种溶液各l2nl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝色斑点。检查应符合中国药典一部丸剂项下有关的各项规定(附录IA)。含量测定同实施例1。本品每lg丸剂含姜黄以姜黄素(C21H2。06)计,不得少于1.9mg。实施例5四味姜黄汤散的质量控制方法处方姜黄193.5g小檗皮161.2g余甘子322.6g蒺藜322.6g制法以上四味,粉碎成粗粉,过筛,混匀,即得。性状本品为黄色粗粉;气微香,味苦、略甜。鉴别同实施例2。检查应符合中国药典一部散剂项下有关的各项规定(附录IB)。含量测定同实施例1。本品每lg散剂含姜黄以姜黄素(C21H2。06)计,不得少于1.9mg。权利要求1.一种藏成药四味姜黄汤制剂的质量控制方法,所述制剂包括散剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂和片剂,其特征在于所述质量控制方法主要包括鉴别、含量测定两个项目中的一项或两项;其中鉴别包括以姜黄对照药材、小檗皮对照药材和盐酸小檗碱对照品、余甘子对照药材、蒺藜对照药材为对照的薄层鉴别的部分或全部;含量测定包括以姜黄素对照品和/或盐酸小檗碱对照品为对照的含量测定方法。2.按照权利要求1所述四味姜黄汤制剂的质量控制方法,其特征在于所述鉴别选自以下力—法中的一种或几种(1)该制剂中姜黄药材用薄层色谱法鉴别取四味姜黄汤制剂3-7g,研细,加乙醇、甲醇或含水醇(均》70%)中的任一种10-50ml,加热回流30-90分钟,放冷,滤过,滤液作为供试品溶液。另取姜黄对照药材0.3-0.7g,同法制成对照药材溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各15ul,分别点T同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以苯-氯仿一乙醇(4-6:2-4:0.1-0.3)、甲苯-氯仿-甲醇(4-6:2-4:0.1-0.3)、氯仿一甲醇(93-99:3-5)和氯仿一甲醇一甲酸(93-99:3-5:0.5-0.9)中的任一种为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365或254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光主斑点。(2)该制剂中小檗皮药材用薄层色谱法鉴别取1项卜'的回流提取液5-15ml,蒸干,残渣加氨试液10-20ml使溶解,再用三氯甲烷7-15ml萃取,分取三氯甲垸液,挥干,残渣加乙醇卜2ml使溶解,作为供试品溶液。另取小檗皮对照药材0.3-0.7g,加乙醇、甲醇或含水醇(均》70%)中的任一种10-30ml,加热回流30-90分钟,放冷,滤过,滤液作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加乙醇制成每lml含0.1-0.3mg的溶液,作为对照品溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验,吸取上述3种溶液各1-3u1,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇-36%醋酸-水(5-7:1-3:0.15-0.35)、苯-醋酸乙酯一甲醇-异丙醇-浓氨溶液(5-7:1-4:1-2:1-2:0.3-0.7)中的任一种为展丌剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365或254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光主斑点。(3)该制剂中余甘子药材用薄层色谱法鉴别取四味姜黄汤制剂l-3g,加乙醇、甲醇或含水醇(均》70%)中的任一种10-50ml,超声处理15-45分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1-2ml使溶解,作为供试品溶液。另取余甘子对照药材0.3-0.7g,同法制成对照药材溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各1-3y1,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4-6:3-5:0.5-2)、醋酸乙酯-甲酸-水(6-10:1-3:l-3)中的任一种为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1-5%三氯化铁乙醇溶液,100-ll(TC加热或热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝色斑点。(4)该制剂中蒺藜药材用薄层色谱法鉴别取四味姜黄汤制剂1-5g,加水10-50ml,煮沸10-60分钟,补足水分,用棉花滤过,滤液加盐酸0.5-2ml,水浴加热1小时,立即冷却,用氯仿10-30ral提取,提取液蒸干,残渣加甲醇0.5-lml使溶解,作为供试品溶液。另取蒺藜对照药材0.5-2g,同法制成对照药材溶液。吸取上述2种溶液各1-5u1,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷-醋酸乙酯(10-20:0.5-2)、正己烷-乙醚(6-10:1-3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5-10%硫酸乙醇溶液,IOO-IICTC加热或热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色(紫色)的斑点;置紫外光灯(365或254nm)下视检,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的橙色荧光斑点。3.按照权利要求1所述四味姜黄汤制剂的质量控制方法,其特征在于所述含量测定选自以下方法中的一种或两种(1)用卨效液相色谱法测定姜黄素(C21H2。06)含量色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙睛4%冰醋酸(43-53:47-57)为流动相,检测波长420-440咖,理论板数按姜黄素峰计算应不低于4000;对照品溶液每lml甲醇或乙醇含2-20ng姜黄素;供试品溶液制备取四味姜黄汤制剂,研细,取约0.02-0.2g,精密称定,精密加入甲醇、乙醇或含水醇(均》70%)中的任一种10-50ml,称定重量,超声处理(功率200-300W,频率30-50kHz)30-90分钟,放冷,再称定重量,用相同溶剂补足减失的重量,摇匀,高速离心或用0.45ym滤膜滤过,即得;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20u1,注入液相色谱仪测定含量,该四味姜黄汤制剂中,每lg含姜黄以姜黄素(C21H2。06)计,不得少于0.40mg(胶囊剂与片剂可根据不同规格重量折算成每粒或每片的含量)。(2)用毛细管电泳法测定四味姜黄汤制剂中的小檗碱电泳分离条件弹性石英毛细管柱58.5cm(有效长度50cm)X75umlD;运行缓冲液0.2M乙酸钠甲醇=6-10:1-3;压力进样10-30kPas;运行电压10-20kV;柱上检测A=255-275nm;毛细管柱温20-4CTC;每次进样间用0.1MNaOH、水、运行缓冲液分别冲洗毛细管1、2、3min;内标溶液每lml甲醇或乙醇含碘化甲基三苯基磷(methyl-triphenylphosphoniumiodide,含量97%)4-10mg,使用时按供试液定容体积的5%加入;对照品溶液每lml甲醇或乙醇含盐酸小檗碱20-60ug和碘化甲基三苯基磷200-500ug;供试品溶液取四味姜黄汤制剂0.1-0.3g,精密称定于10-50ml量瓶屮,精密加入内标溶液0.5-2.5ml与盐酸-甲醇或盐酸-乙醇(1:100)中的任一种8-45ml,超声处理(功率200-300W,频率30-50klIz)30-90分钟,放冷,定容至刻度,摇匀,高速离心或用0.45um滤膜滤过,取上清液或滤液,即得;测定法将待测供试品溶液置于进样器中,设定操作参数进行测定。四味姜黄汤制剂中,每lg含小檗皮以盐酸小檗碱(CdUClN(U计,不得少于0.4mg(胶囊剂与片剂可根据不同规格重量折算成每粒或每片的含量)。4.按照权利要求2-3所述四味姜黄汤制剂的质量控制方法,其特征在于,所述制剂是由如下重量配比的中药原料制成的姜黄15g、小檗皮12.5g、余甘子25g、蒺藜25g。全文摘要本发明公开了一种由姜黄、小檗皮、余甘子、蒺藜制成的藏成药——四味姜黄汤制剂的质量控制方法,具体涉及医药领域中四味姜黄汤散剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂和片剂等剂型的质量控制方法。其特征是利用薄层色谱法鉴别该复方制剂中的姜黄、小檗皮、余甘子、蒺藜;以高效液相色谱法测定姜黄素含量,以毛细管电泳法测定小檗碱含量。该方法保证了四味姜黄汤制剂质量检测的快速、准确和先进,有利于实现对四味姜黄汤制剂内在质量的有效控制,也可作为考察工艺稳定性的指标。文档编号G01N30/00GK101244240SQ20081004536公开日2008年8月20日申请日期2008年2月5日优先权日2008年2月5日发明者琦张,张新申,蒋小萍申请人:四川大学