专利名称：：皮革中农药残留量的测定方法
技术领域：
：本发明属于分析化学领域，涉及气相色谱-质谱联用测定皮革中农药残留量的方法。具体涉及通过正己烷和乙腈超声提取皮革样品，用液液萃取、凝胶渗透色谱(GPC)、吸附剂层析柱、固相萃取柱(SPE柱)分离净化样品提取液中的农药，气相色谱-质谱联用法测定其含量。
背景技术：
：农药广泛应用于农业生产和工业生产中，在发挥其杀虫杀菌灭害作用的同时，农药也成为了重要的污染物之一。日常生活中食品及生活用品中残留的农药通过消化道、呼吸道及皮肤接触等方式侵入人体，从而对人们的健康造成损害。不同的农药对人体有不同的危害，有机氯类农药易产生慢性中毒；有机磷及氨基甲酸酯类农药易产生急性中毒，有时严重危及生命。随着人们对农药污染的认识和重视，对农药残留量的检测需求日益增长，其检测对象涉及食品、农产品、纺织品、中草药等。皮革生产中，农药作为杀菌防虫剂使用。而残留于皮革制品中的农药，通过皮肤接触，对人体造成伤害，这种情况已经引起一些大型服装生产厂商的观注，并提出了相应的检测需求。然而，目前对于皮革中的农药残留量检测还没有相对完善的方法，更没有标准方法可循。经过反复实验，本发明确定了针对于皮革中残留的农药的气相色谱-质谱检测方法，填补了农药残留量检测领域的这一空白。
发明内容本发明提供了一种气相色谱-质谱联用法测定皮革中农药残留量的方法。皮革样品中残留的农药经正己烷和乙腈超声提取，提取液经多种净化方法净化分离后使用气相色谱-质谱联用仪对农药含量进行检测。l.提取与净化A.提取a.称取混合均匀的2g-10g皮革样品于150mL烧杯中；b.加入30mL-100mLTH己垸，充分混匀后，于30。C-60。C水浴中超声50min-100min，提取液经滤纸滤入250mL分液漏斗中；c.样品残渣中加入30mL-100mL乙腈，于30。C-60。C水浴中超声50min-100min，合并乙腈相于分液漏斗中；B.净化a.液液萃取分液漏斗在振荡器上振荡20min-50min，将乙腈层转移至平底烧瓶中，正己烷相再分别用20mL-50mL乙腈振荡提取2_4次，每次振荡30min-50min，合并乙腈相于平底烧瓶中；合并的乙腈提取液在旋转蒸发仪上浓縮近干，加入5mL-15mL的环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液，再次浓縮近干后用环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液定容至10mL。b.GPC净化将定容至10mL的样品提取液经0.45ym针式过滤器滤入GPC进样小瓶，使用Bio-Beads,S-X3(200-400目)的色谱柱进行GPC净化。收集液转移入平底烧瓶中，旋转蒸发至近干，加入10mL正己垸，再次旋转蒸发至近干；GPC净化条件采集时间20min-32min4进样体积5mL流动相环己垸和乙酸乙酯(1:1)溶液流速5mL/minc.层析柱净化层析柱的制备采用湿法填装法，用含0.2%-0.8%丙酮的正己烷溶液在玻璃层析柱中加入0.5cm-1.5cm高的无水硫酸钠，10g-20g弗罗里硅土，10g-20g硅胶，顶端再加入约0.5cm-l.5cm高的无水硫酸钠，敲实，用含0.2%-0.8%丙酮的正己烷溶液10mL-30tnL活化柱子，备用。上样与淋洗用含0.2%-0.8%丙酮的正己烷溶液约5mL-10mL洗涤b中的平底烧瓶，将溶液转移入制备好的层祈柱中，用含0.2%-0.8%丙酮的正己烷溶液20mL-30mL淋洗，弃去淋洗液。再加入含10%-20%丙酮的正己烷溶液100mL-150mL淋洗层析柱，收集淋洗液于平底烧瓶中，浓縮至近干；d.SPE柱净化用5mL-10mL的含20%_30%丙酮的正己烷溶液活化石墨化碳小柱，将经层析柱净化并已浓縮的样品溶液转移入小柱，用5mL-15mL的含20%-30%丙酮的正己垸淋洗小柱，收集淋洗液，浓縮近干后加入5mL-10mL正己烷再浓缩至近干，用正己烷定容至lmL，用GC.-MS进行分析。2.设定GC-MS仪器参数A.GC条件气相色谱仪ThermoDSQII色谱柱HP-5MS毛细管柱0.25mmX30mX0.25ym进样口温度250°C-300°C传输线温度25CTC-30(TC载气流速1.OmL/min，恒流进样模式不分流进样进样体积1UL程序升温初始温度为IO(TC，保持2rain后以8°C/min的升温速度升至250°C。250'C保持5min后，以15°C/min的速度升至320。C，保持5min。B.质谱条件检测器温度250°C-300°C离子源温度250°C-300°C电离方式EI采集方式S頂模式本发明针对皮革样品中的油脂、染料和各种助剂提供了多种净化分离的的方法，其特征在于液液萃取、GPC、吸附剂层析柱、SPE净化柱净化分离方法联合使用，去除皮革样品中的油脂、染料及多种皮革处理助剂。本发明采用气相色谱-质谱连用法，应用优化了的升温程序实现了杂质和待测物的分离，有效测定了皮革样品中残留的农药。具体实施例实施例一猪皮样品中农药的检测51.提取与净化A.提取a.称取混合均匀的5.0g样品于150mL烧杯中；b.加入50mL正己烷，充分混匀后，于5(TC水浴中超声60min，提取液经滤纸滤入250mL分液漏斗中；c.样品残渣中加入50mL乙腈，于5(TC水浴中超声60min，合并乙腈相于分液漏斗中；B.净化a.液液萃取分液漏斗在振荡器上振荡30min，将乙腈层转移至平底烧瓶中，正己垸相再分别用30mL乙腈振荡提取2次，每次振荡40min，合并乙腈相并合并入平底烧瓶中；合并的乙腈提取液在旋转蒸发仪上浓缩近干，加入10mL的环己垸和乙酸乙酯(1:1)溶液，浓縮近干后用环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液定容至10mL。b.GPC净化将定容至10mL的样品提取液经0.45um针式过滤器滤入GPC进样小瓶，进行GPC净化。收集液转移入平底烧瓶中，旋转蒸发至近干，加入10mL正己垸，蒸发至近干；GPC净化条件采集时间20min-32min进样体积5mL流动相环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液流速5mlVminc.层析柱净化层析柱的制备采用湿装的方法，用含0.5%丙酮的正己烷溶液在玻璃层析柱中加入lcm高的无水硫酸钠，加入10g弗罗里硅土，加入10g硅胶，顶端再加入lcm高的无水硫酸钠，敲实，用含0.5%丙酮的TH己烷溶液20mL活化柱子，备用。上样与淋洗用含0.5。/。丙酮的正己垸溶液约5mL洗涤平底烧瓶，将溶液转移入制备好的层析柱中，用含0.5%丙酮的正己烷溶液25mL淋洗，弃去淋洗液。再加入含15%丙酮的正己烷溶液110mL淋洗层析柱，收集淋洗液于平底烧瓶中，浓縮至近干；d.SPE柱净化用5mL含25%丙酮的正己烷溶液活化石墨化碳小柱，将经层析柱净化并已浓縮的样品溶液转移入小柱，用10mL含25%丙酮的正己烷淋洗小柱，收集淋洗液，浓缩近干后加入10mLiH己烷再浓縮至近干，用正己垸定容至lmL，用GC-MS进行分析。2.设定GC-MS仪器参数A.GC条件气相色谱仪ThermoDSQII色谱柱HP-5MS毛细管柱0.25國X30mX0.25ym进样口温度250°C传输线温度280°C载气流速1.0mL/min，恒流进样模式不分流进进样体积luL程序升温升温速度(°C/min)温度rc)保持时间(min)100282505153205B.质谱条件检测器温度300°C离子源温度250°C电离方式EI采集方式S頂模式C.有机磷农药的特征离子:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>3.定性和定量A.定性经样品峰和标准品峰的保留时间相比较，样品峰质谱图和标准物质质谱图相比较，确定化合物。B.定量采用标准曲线外标法定量。实施例二牛皮样品中农药残留量的检测1.提取与净化A.提取a.称取混合均匀的3.0g样品于150mL烧杯中；b.加入40mL正己烷，充分混匀后，于60'C水浴中超声80min，提取液经滤纸滤入250mL分液漏斗中；c.样品残渣中加入40mL乙腈，于6(TC水浴中超声80min，合并乙腈相于分液漏斗中；B.净化a.液液萃取分液漏斗在振荡器上振荡40min，将乙腈层转移至平底烧瓶中，正己烷相再分别用30mL乙腈振荡提取3次，每次振荡30min，合并乙腈相并合并入平底烧瓶中；合并的乙腈提取液在旋转蒸发仪上浓縮近干，加入8mL的环己垸和乙酸乙酯(l:l)溶液，浓縮近干后用环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液定容至10mL。b.GPC净化将定容至10mL的样品提取液经0.45um针式过滤器滤入GPC进样小瓶，进行GPC净化。收集液转移入平底烧瓶屮，旋转蒸发至近干，加入lOmL正己烷，蒸发至近干；GPC净化条件采集时间20min-32min进样体积5mL流动相环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液流速5mlVminc.层析柱净化层析柱的制备采用湿装的方法，用含0.8%丙酮的iH己垸溶液在玻璃层析柱中加入1cm高的无水硫酸钠，加入10克弗罗里硅土，加入10克硅胶，顶端再加入lcm高的无水硫酸钠，敲实，用含0.8%丙酮的正己垸溶液18mL活化柱子，备用。上样与淋洗用含0.8%丙酮的正己烷溶液约5mL洗涤平底烧瓶，将溶液转移入制备好的层析柱屮，用含0.8%丙酮的正己烷溶液25mL淋洗，弃去淋洗液。再加入含18%丙酮的正己烷溶液120mL淋洗层析柱，收集淋洗液于平底烧瓶中，浓缩至近干；d.SPE柱净化用8mL的含20y。丙酮的iH己烷溶液活化石墨化碳小柱，将经层析柱净化并已浓縮的样品溶液转移入小柱，用15mL的含20%丙酮的正己垸淋洗小柱，收集淋洗液，浓縮近干后加入lOmLIH己烷.再浓縮至近干，用TH己烷定容至lmL，用GC-MS进行分析。2.设定GC-MS仪器参数A.GC条件气相色谱仪The，DSQII色谱柱HP-5MS毛细管柱0.25mmX30raX0.25wm进样口温度280°C传输线温度300aC载气流速LOmL/min，恒流进样模式不分流进样进样体积liiL程序升温升温速度(°C/min)8温度rc)100250保持时间(min)_25选择离子229,266，264，268123,167，224125,158，173291，139，155346，137,181,238_^_B.质谱条件检测器温度300°C离子源温度250°C电离方式EI采集方式SIM模式C.有机磷农药的特征离子320序号化合物中文名化合物英文名CASNo.1四氯间苯二腈Chlorothalonil1897—45—62N，N-二甲基-N-苯基-(N-氟二氯甲硫基)-磺酰胺Dichlofluanid1085—98—9二硫代磷酸0,o-二甲基-S-(1,2-二乙酯基乙基)酉旨Malathion121—75—5o，o-二乙基-o-对硝Parathion-ethyl56—38—2N-(二氯氟甲)硫基-N-对甲苯基-N',N'-二甲基硫酰二胺Tolyfluranid731—27—1^__a-六氮硫环a-endosulfan959-98-8339,241,265^__g-六氮硫环e-endosulfan33213-65-9339,241,2658六氯-环氧八氢-二Dieldrin60-57-1345,380,237,79__甲撑萘____91，1，1-三氯-2，2-Methoxychlor72-43-5227,228,153双(4-甲氧基苯基)乙烷910二氯苯醚酯permethrin52645-53-1183,163，1273.定性和定量A.定性经样品峰和标准品峰的保留时间相比较，样品峰质谱图和标准物质质谱图相比较，确定样品中是否检出目标化合物。B.定量采用标准曲线外标法定量。实施例三羊皮中农药残留量的检测l.提取与净化A.提取a.称取混合均匀的5.0g样品于150mL烧杯中；b.加入50mL正己垸，充分混匀后，于5(TC水浴中超声60min，提取液经滤纸滤入250mL分液漏斗中；c.样品残渣中加入50mL乙腈，于5(TC水浴中超声60m工n，合并乙腈相于分液漏斗中；B.净化a.液液萃取分液漏斗在振荡器上振荡30rain，将乙腈层转移至平底烧瓶中，TH己垸相再分别用30mL乙腈振荡提取3次，每次振荡40min，合并乙腈相并合并入平底烧瓶中；合并的乙腈提取液在旋转蒸发仪上浓缩近干，加入lOmL的环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液，浓縮近干后用环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液定容至10mL。b.GPC净化将定容至lOmL的样品提取液经0.45tim针式过滤器滤入GPC进样小瓶，进行GPC净化。收集液转移入平底烧瓶中，旋转蒸发至近干，加入lOmL正己烷，蒸发至近干；GPC净化条件采集时间20min-32min进样体积5mL流动相环ci院和乙酸乙酯(1:1)溶液流速5mL/minc.层析柱净化层析柱的制备采用湿装的方法，用含0.5%丙酮的iE己烷溶液在玻璃层析柱中加入1cm高的无水硫酸钠，加入10克弗罗里硅土，加入10克硅胶，顶端再加入lcm高的无水硫酸钠，敲实，用含0.5%丙酮的lH己垸溶液20mL活化柱子，备用。上样与淋洗用含0.5%丙酮的正己烷溶液约5mL洗涤平底烧瓶，将溶液转移入制备好的层析柱中，用含0.5%丙酮的正己垸溶液25mL淋洗，弃去淋洗液。再加入含15%丙酮的正己烷溶液llOmL淋洗层析柱，收集淋洗液于平底烧瓶中，浓縮至近干；d.SPE柱净化用5mL含25》。丙酮的+:己垸溶液活化石墨化碳小柱，将经层析柱净化并已浓缩的样品溶液转移入小柱，用10mL含25%丙酮的正己烷淋洗小柱，收集淋洗液，浓縮近干后加入10mL100.25腿X30mX0.25um正己垸再浓縮至近干，用正己烷定容至lmL，用GC-MS进行分析。2.设定GC-MS仪器参数A.GC条件气相色谱仪ThermoDSQII色谱柱HP-5MS毛细管柱进样口温度250°C传输线温度280°C载气流速1.0mL/min，恒流进样模式不分流进样进样体积IWL程序升温<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>B.质谱条件检测器温度300°C离子源温度250°C电离方式RT采集方式S頂模式c.有机磷农药的特征离子<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>1，1,1-三氯-2，2-双(4-甲氧基苯基)乙烷Methoxychlor72-43-5227,228，15310二氯苯醚酯permethrin52645-53-1183,163,1273.定性和定量A.定性经样品峰和标准品峰的保留时间相比较，样品峰质谱图和标准物质质谱图相比较，确定样品中是否检出目标化合物。B.定量采用标准曲线外标法定量。实施例四软牛皮中农药残留量的检测l.提取与净化A.提取a.称取混合均匀的10.0g样品丁150mL烧杯中；b.加入lOOmLIE己烷，充分混匀后，于6(TC水浴中超声100min，提取液经滤纸滤入250mL分液漏斗屮；c.样品残渣中加入100mL乙腈，于6(TC水浴中超声100min，合并乙腈相于分液漏斗中；B.净化a.液液萃取分液漏斗在振荡器上振荡50min，将乙腈层转移至平底烧瓶中，正己烷相再分别用50mL乙腈振荡提取4次，每次振荡40min，合并乙腈相并合并入平底烧瓶中；合并的乙腈提取液在旋转蒸发仪上浓縮近干，加入15mL的环己垸和乙酸乙酯(1:1)溶液，浓縮近干后用环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液定容至10mL。b.GPC净化将定容至10mL的样品提取液经0.45ym针式过滤器滤入GPC进样小瓶，进行GPC净化。收集液转移入平底烧瓶中，旋转蒸发至近干，加入10mL正己烷，蒸发至近干；GPC净化条件采集时间20min-32min进样体积5mL流动相环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液流速5mL/minc.层析柱净化层析柱的制备X用湿装的方法，用含0.5%丙酮的正己垸溶液在玻璃层析柱中加入lcm高的无水硫酸钠，加入10克弗罗里硅土，加入10克硅胶，顶端再加入lcm高的无水硫酸钠，敲实，用含0.5%丙酮的正己烷溶液20niL活化柱子，备用。上样与淋洗用含0.5%丙酮的正己烷溶液约lOmL洗涤平底烧瓶，将溶液转移入制备好的层析柱中，用含0.5%丙酮的正己垸溶液30mL淋洗，弃去淋洗液。再加入含2(F。丙酮的正d烷溶液150mL淋洗层析柱，收集淋洗液于平底烧瓶中，浓缩至近干；12d.SPE柱净化用10mL的含3(TO丙酮的正己垸溶液活化石墨化碳小柱，将经层析柱净化并已浓缩的样品溶液转移入小柱，用15mL的含30%丙酮的正己烷淋洗小柱，收集淋洗液，浓縮近干后加入10mL正己垸再浓缩至近干，用正己烷定容至lmL，用GC-MS进行分析。2.设定GC-MS仪器参数A.GC条件气相色谱仪ThermoDSQII色谱柱HP-5MS毛细管柱进样口温度250°C传输线温度300°C0.25腿X30mX0.25um载气流速进样模式进样体积程序升温1.OmL7min，恒流不分流进样1yL升温速度rC/min)温度(°c)保持时间(min)100282505153205B.质谱条件检测器温度300°C离子源温度250°C电离方式EI采集方式SIM模式C.有机磷农药的特征离子<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>7e-六氮硫环P-endosulfan33213-65-9339,241,2658六氯-环氧八氢-二甲撑萘Dieldrin60-57-1345,380，237,7991，1，l-三氯-2，2-双(4-甲氧基苯基)乙院Methoxychlor72-43-5227,228，15310二氯苯醚酯permethrin52645-53-1183,163,1273.定性和定量A.定性经样品峰和标准品峰的保留时间相比较，样品峰质谱图和标准物质质谱图相比较，确定样品中是否检出目标化合物。B.定量采用标准曲线外标法定量。1权利要求1.一种气相色谱质谱联用(GC-MS)测定皮革中农药残留量的方法，其特征在于对皮革样品经超声提取，采用液液萃取、凝胶渗透色谱(GPC)、吸附剂层析柱、固相萃取柱(SPE柱)联合使用的方法，分离净化提取液中残留的农药，并使用气相色谱-质谱联用仪测量其含量，其中，所说的净化分离皮革样品提取液中农药包括以下步骤A.超声提取称取2g-10g混合均匀的皮革样品于烧杯中，加入30mL-100mL正己烷，充分混匀后，于30℃-60℃水浴中超声50min-100min，提取液经滤纸滤入分液漏斗中，样品残渣中加入30mL-100mL乙腈，于30℃-60℃水浴中超声50min-100min，将正己烷相和乙腈相合并于分液漏斗中；B.液液萃取将皮革样品的正己烷和乙腈提取液转移至分液漏斗中，并在分液漏斗振荡器上振荡20min-50min，将乙腈层转移至平底烧瓶中，正己烷相再分别用20mL-50mL乙腈振荡提取2-4次，每次振荡30min-50min，合并乙腈相并于平底烧瓶中，合并的乙腈提取液在旋转蒸发仪上浓缩后，加入5mL-15mL的环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液，再次浓缩后用环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液定容至10mL；C.GPC净化将定容至10mL的样品提取液用针式过滤器滤入GPC进样小瓶，进行GPC净化，收集液转移入平底烧瓶中，在旋转蒸发仪上进行浓缩后，加入10mL正己烷，蒸发至0.1mL-0.5mL；GPC净化条件为采集时间20min-32min进样体积5mL流动相环己烷和乙酸乙酯(1:1)溶液流速5mL/minD.吸附剂层析柱净化用含0.2％-0.8％丙酮的正己烷溶液5mL-10mL洗涤C步骤中的平底烧瓶，将溶液转移入制备好的层析柱中，用含0.2％-0.8％丙酮的正己烷溶液20mL-30mL淋洗，弃去淋洗液，再用含10％-20％丙酮的正己烷溶液100mL-150mL淋洗层析柱，收集淋洗液于平底烧瓶中，于旋转蒸发仪上浓缩淋洗液；E.SPE净化用约5mL-10mL的含20％-30％丙酮的正己烷溶液活化SPE小柱，将经层析柱净化并已浓缩的样品溶液转移入小柱，用5mL-15mL的含20％-30％丙酮的正己烷淋洗小柱，收集淋洗液，浓缩近干后加入5mL-10mL正己烷再浓缩至近干，用正己烷定容至1mL；F.气相色谱-质谱联用测定提取液，其中参数为色谱条件进样口温度可以是250℃-300℃，升温程序如下设置初始温度为100℃，保持2min后以8℃/min的升温速度升至250℃，250℃保持5min后，以15℃/min的速度升至320℃，保持5min；质谱条件检测器温度250℃-300℃离子源温度250℃-300℃电离方式EI采集方式SIM模式。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于GPC净化方法中使用填充材料为Bio-Beads，S-X3(200-400目)的色谱柱。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于吸附剂层析柱净化中的层析柱填料为无水硫酸钠、弗罗里硅土和硅胶，三种填料分层单独填充，依次填充0.5cm-1.5cm高的无水硫酸钠，10g-20g弗罗里硅土，10g-20g硅胶，顶端再加入0.5cm-l.5cm高的无水硫酸钠，用10mL-30tnL含0.2%-0.8%丙酮的正己垸溶液进行活化。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于SPE柱净化小柱是石墨化碳小柱。5.如权利要求1所述，其特征在于方法针对皮革中农药残留量的气相色谱质谱检测，农药为四氯间苯二腈(百菌清，Chlorothaloni丄)、N，N-二甲基-N-苯基-(N-氟二氯甲硫基)-磺酰胺(抑菌灵，Dichlofluanid)、二硫代磷酸0,0-二甲基-S-(1,2-二乙酯基乙基)酯(马拉硫磷，Malathion)、0，0-—一乙基-0-对硝基苯基酯(乙基对硫磷，Parathion-ethyl)、N-(二氯氟甲)硫基-N-对甲苯基-N'，N'二甲基硫酰二胺(甲苯氟磺胺，Tolyfluranid)、a-六氮硫环(a-硫丹，a-endosulfan)、六氮硫环(e-硫丹，0-endosulfan)、六氯-环氧八氢-二甲撑萘(狄氏剂，Dieldrin)、1，1，1-三氯-2，2-双(4-甲氧基苯基)乙垸(甲氧氯，Methoxychlor)、二氣苯鹏酉旨(氣菊酉旨，permethriri)。全文摘要本发明属于分析化学领域，涉及皮革中农药残留量的气相色谱-质谱联用法测定。方法采用正己烷及乙腈对皮革样品进行超声提取，并针对皮革样品油脂含量高、残留的加工用助剂复杂等特点采用了液液萃取、凝胶渗透色谱、吸附剂层析柱、固相萃取柱等多种手段对样品提取液进行分离和净化，净化后的样品提取液使用气相色谱-质谱联用法进行农药含量的测定。本发明具有选择性强、适用性广、检测限低的特点。本发明实现了皮革中农药残留量的测定，开辟了皮革中农药残留测试的新思路，填补了农药残留量检测的空白。文档编号G01N27/64GK101498692SQ20081005416公开日2009年8月5日申请日期2008年8月18日优先权日2008年8月18日发明者俞安敏,军李,李耀青,王培花,王大章,陈志强申请人:通标标准技术服务(天津)有限公司