专利名称：一种hplc法分析分离盐酸依伐布雷定中间体光学异构体的方法
技术领域：
本发明属涉及一种高效液相色谱法，尤其是一种分析分离盐酸依伐布雷定中 间体及其光学异构体的高效液相色谱法。
背景技术：
盐酸依伐布雷定为一种抗心绞痛药，有良好的抗心绞痛和抗心肌缺血作用， 中间体的分子式为C H15N(VHC1，化学名为(R)- (4,5-二甲氧基苯并环丁烷-1-基)甲胺盐酸盐，结构式为
NH7 HCI
该分子中含1个手性碳原子，在通过定向合成目标化合物盐酸依伐布雷定的过程 中需要控制其光学异构体的含量。
对于盐酸依伐布雷定中间体的光学异构体杂质，在药物合成过程当中是需要 进行质量控制的。含手性碳原子的光学异构体的分离一直是手性药物合成和制剂 过程中质量控制的难点，实现盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构体的分离在盐 酸依伐布雷定药物的合成和制剂过程的质量控制方面具有现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分析分离盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构 体杂质的高效液相色谱方法，从而实现盐酸依伐布雷定中间体与其光学异构体杂 质的分离测定。
申请人发现，以纤维素类手性柱，以加入一定比例胺的正相混合溶剂为流动 相低温条件下，可以将盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构体进行有效分离，从 而可以准确控制盐酸依伐布雷定中间体的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分析分离盐酸依伐布雷定中问体及其光学异构体杂质。
进一步地，选用纤维素类手性柱OJ-H (Daicel， 250mmx4.6mm' 5pm)，可 以获得更好的分析分离效果。OJ-H (Daicel， 250mmx4.6mm， 5pm)纤维素类手
性柱是以对甲苯基甲酸酯键合纤维素为填料。
进--歩地，本发明的正相溶剂选用正己烷和无水乙醇的混合溶剂。
本发明时方法中的流动相选用体积比为50 :50~90 : io正己烷和异丙醇的
混合溶剂。
本发明的方法中的流动相中的胺选用二乙胺。 本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现
(1) 取盐酸依伐布雷定样品适量，用无水乙醇溶解样品，配制成每lml含盐 酸依伐布雷定0.1mg 0.5mg的样品溶液。
(2) 设置流动相流速为0.4 1.2ml/min，最佳检测波长为288nm，色谱柱柱 温的最佳温度为室温。
(3) 取(l)的样品溶液2-50pl注入液相色谱仪，完成盐酸依伐布雷定中间体 及其光学异构体的分析与分离。
其中
高效液相色谱仪岛津lC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCl-10Avp， DGU-12A; 色谱柱OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5pm)纤维素手性色谱柱；
流动相正己烷-异丙醇-二乙胺=80 : 20 : 0.2;
检测波长288nm; 流速1.0ml/min; 进样体积1(^1。
本发明采用纤维素类OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5nm)手性色谱柱， 能够有效的分析分离盐酸依伐布雷定及其光学异构体(杂质)；选择流动相溶解 样品，确保了溶液的稳定性；选择进样体积10nl，柱温为室温，提高了色谱峰的 对称性。本发明解决了含盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构体的原料及制剂的 分析与分离问题，从而确保了盐酸依伐布雷定中间体及其制剂的质量可控。
图1实施例1，正己烷-异丙醇-二乙胺=70 : 30 : 0.2的HPLC图；图2实施例2，正己烷-异丙醇乙胺=80 : 20 : o.i的hplc图;
图3实施例3，正己垸-异丙醇-二乙胺=90 : 10 : 0.1的HPLC图; 图4实施例4，正己垸-异丙醇-二乙胺=50 : 50 : 0.2的HPLC图。
具体实施例方式
-实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津lC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCl-10Avp， DGU-12A; 色谱柱OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5nm);
流动相正己垸-异丙醇-二乙胺=70 :30 : 0.2;
流速1.0ml/min; 检测波长288ran;
进样体积10nl。
实验步骤
分别称取盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构体各5mg，置于25ml容量瓶 中，加无水乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取盐酸 依伐布雷定中间体及其光学异构体各5mg，分别置于2个25ml容量瓶中，加无
水乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图l，图中1号峰为盐酸依伐布雷定中间体，2号峰为异构 体，可以看出在该条件下盐酸依伐布雷定中间体主峰可以和异构体完全分离开 来，且盐酸依伐布雷定中间体主峰在8.3min左右。
实施例2
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津lC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCl-10Avp， DGU-12A;
色谱柱OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5pm);
流动相正己垸-异丙醇-二乙胺=80 : 20 : o.i;
流速1.0ml/min; 检测波长288nm;
进样体积1(^1。实验歩骤
分别称取盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构体各5mg，置于25ml容量瓶 中，加无水乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取盐酸 依伐布雷定中间体及其光学异构体各5mg，分别置于2个25ml容量瓶中，加无 水乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图l，图中1号峰为盐酸依伐布雷定中间体，2号峰为异构 体，可以看出在该条件下盐酸依伐布雷定主峰可以和异构体完全分离开来，且盐 酸依伐布雷定中间体主峰在11.2min左右。
实施例3
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津lC-10ATvp， SPD-M10A甲，SCl-10Avp， DGU-12A; 色谱柱OJ陽H (Daicel, 4.6腿x250mm， 5pm);
流动相正己烷-异丙醇-二乙胺=90 : io : o.i;
流速1.0ml/min; 检测波长288nm;
进样体积10^1。
实验步骤
分别称取盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构体各5mg，置于25ml容量瓶 中，加无水乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取盐酸 依伐布雷定中间体及其光学异构体各5mg，分别置于2个25ml容量瓶中，加无 水乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图l，图中1号峰为盐酸依伐布雷定中间体，2号峰为异构 体，可以看出在该条件下盐酸依伐布雷定主峰可以和异构体完全分离开来，且盐 酸依伐布雷定中间体主峰在21.7min左右。
实施例4
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津lC-10ATvp， SPD-M10Av; ， SCl-10Avp， DGU-12A;色谱柱OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5,);
流动相正己垸-异丙醇-二乙胺=50 :50 : 0.2;
流速1.0ml/min; 检测波长288nm;
进样体积10^1。
实验步骤 '
分别称取盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构体各5mg，置于25ml容量瓶 中，加无水乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取盐酸 依伐布雷定中间体及其光学异构体各5mg，分别置于2个25ml容量瓶中，加无 水乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图l，图中1号峰为盐酸依伐布雷定中间体，2号峰为异构 体，可以看出在该条件下盐酸依伐布雷定主峰可以和异构体完全分离开来，且盐 酸依伐布雷定中间体主峰在6.3min左右。
权利要求
1.一种高效液相色谱法分析分离盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构体的方法，其特征在于采用以纤维素类手性柱，以加入一定比例胺的正相混合溶剂为流动相，低温条件下进行分离。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述纤维素类手性柱为OJ-H(Daicel， 250mmx4.6mm， 5jiiA)。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于采用正相色谱法。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的正相混合溶剂为正己垸和疫 异丙醇的混合溶剂。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的正己垸和异丙醇的体积比例为50 : 50~90 : io。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的正己烷和异丙醇的体积最佳 比例为70 : 30。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的胺为二乙胺。
8. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述的二乙胺的加入量为 0.1% 0.5%。
9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步骤(1) 取盐酸依伐布雷定中间体样品适量，用无水乙醇溶解样品，得到lml含 盐酸依伐布雷定中间体0.1mg 0.5mg的样品溶液；(2) 设置流动相流速为0.4 1.2ml/min，检测波长为288nm，色谱柱柱温箱 为9 15°C;(3) 取步骤a)的样品溶液2-50w注入液相色谱仪，记录色谱图。
全文摘要
本发明公开了一种盐酸依伐布雷定中间体及其光学异构体分析与分离测定方法，采用纤维素类手性柱，以加入一定比例胺的正相混合溶剂为流动相的正相色谱法室温条件下进行分离，用该方法可以快速的分离分析盐酸依伐布雷定中间体以及含盐酸依伐布雷定中间体制剂的光学异构体杂质。
文档编号G01N30/00GK101609071SQ20081011509
公开日2009年12月23日 申请日期2008年6月16日 优先权日2008年6月16日
发明者牟淑慧 申请人:北京德众万全药物技术开发有限公司