一种羟基自由基的测定方法

专利名称：一种羟基自由基的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种羟基自由基的测定方法，特别涉及一种利用萘基二苯甲烷
染料一维多利亚艳蓝BO(C. I 42595)作为显色剂的分光光度法测定羟基自由基 的方法。
背景技术：
羟基自由基(*OH)对生物体毒性强危害大，但它的反应活性大，寿命短，
存在浓度低。目前，国内外报道的测定羟基自由基的方法有分光光度法、电 子自旋共振法、高效液相色谱法、荧光法、共振散射光谱法等。这些方法或仪 器昂贵，或灵敏度不够。
目前尚未见利用萘基二苯甲烷染料一维多利亚艳蓝BO(C. I 42595)作为显
色剂的分光光度法测定羟基自由基的方法。

发明内容
本发明的目的是提供一种能够克服上述现有技术的弊端，具有操作简便， 灵敏度高、结果准确等优点的羟基自由基的测定方法。 本方法的测定原理
在水溶液中，羟基自由基氧化碘离子形成12， 12与过量的r反应生成v阴离 子，13—与维多利亚艳蓝BO缔合生成艳蓝色化合物。维多利亚艳蓝在酸性溶液中 显黄绿色，缔合物水溶液则呈艳蓝色，对波长571nm处的可见光有选择性吸收， 通过测定溶液的吸光度可以得到溶液中羟基自由基的浓度。本发明的技术方案 本发明所选用的试剂均为分析纯。 标准工作曲线的绘制
移l.Oxl(T2 mol.L-1碘化钾水溶液8.0mL、 1.0xl0-3 mol'L-1 FeSo40.1mL于 50mL容量瓶中，取现配制的S.OxlO^mol.L-1的双氧水0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 l.OmL 分别注入容量瓶中，再依次加入pH为2.0的磷酸一磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、 含乳化剂OP 0.5g L"的2.0X lO-Vol'L"维多利亚艳蓝BO水溶液lO.OmL，用
蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用lcm比色皿，试剂空白作参比，在571nm 处测定溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，以双氧水浓度为横坐标，绘制标准 曲线。
根据标准曲线获得回归方程A=0.06C(mol *L-1) + 0.002 (r =0.9994， 0.0 mg 'L" 0.0082mol，L");其中A为吸光度；C为双氧水摩尔浓度，根据反应原理 知，羟基自由基的摩尔浓度与双氧水摩尔浓度成l: l的关系，为方便研究，可 用双氧水摩尔浓度C代替羟基自由基摩尔浓度。
羟基自由基的测定50mL容量瓶中，依次移入1.0xl0—211101，1/1碘化钾水 溶液8.0mL、 l.OxlO-3 mol七"FeSo40.1mL 、可产生羟基自由基的被测物、pH为 2.0的磷酸—磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP浓度为0.5g I/1的2.0 X 10"mol丄"维多利亚艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min 后，用lcm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处，测定溶液的吸光度，查标准 曲线或根据标准曲线获得的回归方程计算羟基自由基浓度。本方法测试的羟基 自由基浓度范围为0.0 mg L/1 0.008211101 U1。
测定体系中共存离子对测定结果会产生影响，以下离子允许量为(mg*!/1):K十(2000)、 Caz+(2000)、 Sn2+(2000)、 Al卄(2000)、Pb2十(2000)、N(y-(2000)、 SO/(2000)、 NH4+(2000)、 Br隱(2000)、 HC2O4X2000)、 H2BO3—(2000)、 H4P3O1()-(2000)、拧檬酸 根(2000)， Ni十(lOO)、 Cu2+(100)、 Co2+(100)、 Mn2+(100)、 Cr3+(100)、 Cl-(5000)、 Fe3+(400)、 F(30)、硅酸氢根(IOOO)、 Ag+(0.05)、 Hg2+(0.03)、 Cd2+(0.05)。
本发明的技术效果
运用本发明提供的维多利亚艳蓝BO为显色剂、分光光度法测定羟基自由基 的方法，具有结果准确、操作简便、灵敏度高等优点。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明进一步阐述。 实施例
所用试剂均为分析纯。
标准工作曲线的绘制
移l.Oxl(V2 mol丄"碘化钾水溶液8.0mL、 l.Oxl(y3 mol'L" FeSo40.1mL于 50mL容量瓶中，取现配制的5.0x10 4 mol'L-1的双氧水0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 l.OmL 分别注入容量瓶中，再依次加入pH为2.0的磷酸一磷酸二氢盐钠缓冲溶液 8.0mL、含乳化剂OP 0.5g 'I/12.0 X lO^mol'I/1维多利亚艳蓝BO水溶液lO.OmL，
用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用lcm比色皿，试剂空白作参比，在571nm 处测定溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，以双氧水浓度为横坐标，绘制标准 曲线。
根据标准曲线获得回归方程A = 0.06C (mol 'L") +0.002 (r =0.9994， 0.0mg *1^ 0.0082mol'L");其中A为吸光度；C为双氧水摩尔浓度即羟基自由基摩 尔浓度。羟基自由基的测定
在50mL容量瓶中，依次移入l.OxlO^mol-L-1碘化钾水溶液8.0mL、 1.0x1 (T3 mol'L" FeSo40.1mL 、可产生羟基自由基的被测物、pH为2.0的磷酸一磷酸二氢 盐缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP浓度为0.5g'L"的2.0Xl(TVioll"维多利亚 艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用lcm比色皿， 试剂空白作参比，在571nm处,测定溶液的吸光度，查标准曲线或根据标准曲线 获得的回归方程计算羟基自由基浓度。
权利要求
1. 一种测定羟基自由基的测定方法，其特征在于测定步骤如下(1)标准曲线的绘制移1. 0×10-2mol·L-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL于50mL容量瓶中，取现配制的5.0×10-4mol·L-1的双氧水0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分别注入容量瓶中，再依次加入pH为2.0的磷酸—磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP0.5g·L-1的2.0×10-4mol·L-1维多利亚艳蓝BO(C.I42595)水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处测定溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，以双氧水浓度为横坐标，绘制标准曲线；(2)根据步骤(1)的标准曲线获得回归方程A＝0.06C(mol·L-1)+0.002(r＝0.9994，0.0mg·L-1～0.0082mol·L-1)；其中A为吸光度；C为双氧水摩尔浓度；(3)羟基自由基的测定在50mL容量瓶中，依次移入1.0×10-2mol·L-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL、可产生羟基自由基的被测物、pH为2.0的磷酸—磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP为0.5g·L-1的2.0×1.0-4mol·L-1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容至50mL；摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处，测定溶液的吸光度，根据步骤(2)中的回归方程计算羟基自由基浓度。
全文摘要
本发明涉及一种羟基自由基的测定方法，特别涉及一种利用萘基二苯甲烷染料—维多利亚艳蓝BO(C.I 42595)作为显色剂的分光光度法测定羟基自由基。在50ml容量瓶中，依次移入1.0×10^-2mol·L^-1碘化钾水溶液8.0ml、1.0×10^-3mol·L^-1 FeSO₄0.1ml、可产生羟基自由基的被测物、pH为2.0的磷酸-磷酸二氢盐缓冲溶液8.0ml、含乳化剂OP为0.5g·L^-1的2.0×10^-4mol·L^-1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0ml，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂作参比，在571nm处，测定溶液的吸光度，根据标准曲线获得的回归方程A＝0.06C(mol·L^-1)+0.002(r＝0.9994，0.0mg·L^-1～0.0082mol·L^-1A为吸光度；C为羟基自由基摩尔浓度即双氧水摩尔浓度)计算羟基自由基浓度。本方法具有仪器简单、操作简便快捷、灵敏度高、分析结果准确。
文档编号G01N21/77GK101413896SQ20081020381
公开日2009年4月22日 申请日期2008年12月2日 优先权日2008年12月2日
发明者张元璋, 施文健, 杨琴淋, 王亚伟, 琴 秦, 钟晓永, 闻海峰, 陈树薇, 陈肖云, 高隽臣 申请人:上海理工大学