肝病中的脂肪酸合酶的制作方法

专利名称：肝病中的脂肪酸合酶的制作方法
肝病中的脂肪酸合酶 相关申请本申请要求2007年2月27日提交的美国临时专利申请60/891， 928的优先权权
益，其据此整体并入本文，如同完全陈述于本文一样。 本公开内容的领域 公开了用于检测受治疗者肝脏中升高的脂肪酸合酶(FAS)表达的方法和组合物。 所述检测可以是受治疗者肝脏细胞本身中或体液物质中的表达。还公开了用于鉴别存在或 不存在与升高的FAS相关的肝病或病理的方法。所公开的方法可用包含本文所述的用于检 测FAS表达的试剂的各种组合物实施。
本公开内容的背景 非酒精性脂肪性肝炎(NASH)也称为非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，它是一种特征为
从简单的脂肪变性(脂肪肝)到NASH/NAFLD(进展至确定的肝硬化)的病理谱的慢性肝病
(1)。 NASH的诊断是基于肝脏活检建立的，其中所述病理本质上无法与酒精性肝炎区分。脂
肪变性、具有肝细胞损伤的急性和慢性炎症的病灶、马洛里玻璃质(Mallory's hyaline)和
各种程度的纤维化是所述疾病的特点(2)，并且必须在不存在显著的饮酒下发生。 NASH已细分为两组继发性和原发性(1)。继发性NASH发生于脂肪性肝病环境，由
诸如以下的直接原因造成空肠回肠旁路手术、药物、肝毒素或诸如脂肪营养不良、韦-克
氏病(Weber-Christian disease)或HIV的疾病。原发性NASH与肥胖症、II型糖尿病、血
脂异常和胰岛素抵抗、代谢综合征的部分征兆和症状群有关，或可以是特发性的。 在其早期，NASH本质上是无症状的，因此在症状发作之前确立诊断是重要的，所述
症状通常与肝硬化的发作相关。也可能在NASH中发展肝硬化而不显现症状。虽然肝脏活
检仍是诊断NASH的金标准，但是穿剌活检伴有采样误差和可能的曲解两方面(3，4)。此外，
肝脏活检和成像技术诸如磁共振波谱(MRS)受成本的阻碍而在作为筛选检验时不实用。因
此，已尝试采用普通的和相对廉价的对血清执行的肝脏功能检验来检测NASH。 有许多测定用于检测血清中肝脏酶的存在，所述肝脏酶可单独或组合用作肝病
的标志物。血液中这些酶的存在指示肝细胞损伤。这些酶包括AST(天冬氨酸氨基转移
酶)、ALT (丙氨酸氨基转移酶)、碱性磷酸酶(ALP) 、GGT ( y -谷氨酰转移酶)和乳酸脱氢酶
(LDH)。虽然血液中这些酶的升高指示肝细胞损伤，但ALP和GGT的小管(cannilcular)定
位可指示受阻的过程，诸如因结石或肿瘤的胆道阻塞(5)。 遗憾的是，肝脏酶的水平对于一般的慢性肝病和具体地NASH是不敏感的和非特 异性的(1、6-10)。例如，在K皿de等人最近的研究中，使用ALT〉 19U/L作为正常的截留值 时，233名具有II/II类肥胖症的妇女中血清ATL升高对于检测NASH的灵敏度和特异性是 74%和42%。将截留值改为ALT〉30U/L使灵敏度和特异性增加至42X和80X。不过，作 者的结论是ALT鉴别NASH的诊断用途仍然不大(6)。在对106名具有NASH的患者的纵向 研究中，Fassio等人显示无论是ALT还是AST/ALT比值都不能用于预测NASH的进展(8)。 在51名具有正常ATL水平的患者对比50名具有升高的ALT水平的患者的NASH研究中， 在具有正常ALT水平的患者中观察到了范围从脂肪变性到确定的肝硬化的完整疾病谱。因
4此，正常的ALT值并不排除NASH向晚期纤维化的进展(10)。为了从另一途径探究此问题， 研究了乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒阴性但在捐血时间发现具有升高的ALT水平的119名 患者的升高的ALT水平的原因。肥胖症(30. 2% )和酒精中毒(28. 6% )与ALT升高最频 繁相关。40名患者中的肝脏组织学显示脂肪变性(35% )、脂肪性肝炎(30% )、非特异性肝 炎(12.5% )和正常肝脏(15% );肝硬化、血色素沉着病(hemochromotosis)和门静脉纤 维化各有一例。同样，ALT升高并不高度预测此群体中的NASH(ll)。总之，没有可用来筛选 NASH存在的实用检验。 脂肪酸合酶(FAS)已作为人类癌症治疗的药物靶标和癌症诊断的生物标志物引 起人们注意。FAS以高百分比表达于大多数常见的人类肿瘤中，诸如肺、前列腺、结肠、乳腺 和卵巢肿瘤(12)。抑制FAS在人类癌细胞中诱导凋亡(13)，并且小分子FAS抑制剂抑制 人类癌症异种移植物的生长(14， 15)。此外，已报道了乳腺癌患者血液中升高的FAS水平 (16-18)。也有在具有肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌和结肠癌的患者中与对照相比显著升高 的FAS水平的报道(19)。最近，新配置的FAS ELISA测定已证实了这些先前的血清学研究 (图l)。 引用上述文件并不意在承认上述任何内容都是相关的现有技术。所有关于这些文 件的日期的陈述或关于这些文件的内容的表示是基于申请人可得的信息，并不构成对这些 文件的日期或内容正确性的任何承认。
本公开内容的概述 本文公开了用于检测或鉴别肝脏病况(包括包含各种病因的肝病和病理)的方法 和组合物。所述方法可有利地结合或者随后是治疗所鉴别的肝脏病况、疾病或病理的方法。 所述方法的方面和所述组合物的活性包括检测或测量受治疗者诸如人类患者肝脏中的脂 肪酸合酶(FAS)表达。本公开内容的实施方案包括将检测或测量的FAS表达水平应用于诊 断疾病和选择疾病的治疗。 在一个方面，本公开内容包括检测或测量受治疗者肝脏中脂肪酸合酶(FAS)表达 的方法。所述检测或测量可以是FAS表达的水平或量。在一些实施方案中，所述检测或测量 是FAS蛋白质或其片段。所述方法的非限制性实施方案包括使用来自受治疗者的含有FAS 的样品材料。在一些实施方案中，所述含有FAS的样品包括体液，诸如血液或血清。在其他 非限制性实施方案中，所述含有FAS的样品包含来自受治疗者的一个或多个肝脏细胞、肝 脏细胞的匀浆物或含有FAS的肝脏细胞提取物。 在一些实施方案中，所述样品可来自认为、相信或预期具有肝脏病况的受治疗者。 可选地，受治疗者可被怀疑具有此类病况。在其他实施方案中，受治疗者可以是被怀疑、认 为、相信或诊断为无癌症的受治疗者。作为另外的可选实施方案，受治疗者可以是已被诊断 为具有特征为升高的FAS表达的肝脏病况，而且使用本公开内容的方法确认所述诊断或为 所述诊断提供另外的支持的受治疗者。 在进一步的实施方案中，检测或测量FAS表达的方法可用于确定或鉴别受治疗者 肝脏中升高的FAS水平。可选地，所述方法可用于确定或鉴别受治疗者肝脏中未升高的或 正常的FAS水平。FAS水平可被确定为与来自无肝病或病理的受治疗者的样品中的FAS水 平相比升高或未升高。 所述方法的一些实施方案是基于检测或测量样品中反映其中的FAS表达水平的一种或多种组分。在一些情形中，所述组分可以是FAS蛋白质或其片段。在此类实施方案 中，所述方法可包括使用结合FAS蛋白质或其片段的试剂。在其他实施方案中，所述组分可 以是反映FAS表达的细胞的因子或中间物。在此类实施方案中，所述方法可包括使用检测 或测量所述因子或中间物的一种或多种试剂。作为非限制性实例，所述组分可以是编码FAS 蛋白质的mRNA，而所述试剂可以是检测所述mRNA的核酸探针。可选地，可使用用于反转录 聚合酶链式反应(RT-PCR)的试剂组合，诸如引物和探针分子。另外的选择是使用定量PCR， 诸如检测mRNA反转录后的FAS cDNA。 在另一方面，本公开内容包括基于检测或测量的FAS水平来诊断存在或不存在肝 脏病况的方法。在一些实施方案中，所述诊断是基于升高的FAS表达诊断肝病或病理的 存在。在其他实施方案中，所述诊断是基于未升高的FAS表达诊断肝病或病理的不存在。 肝病或病理的非限制性实例包括脂肪性肝炎(或非酒精性脂肪性肝炎，NASH);酒精性肝 炎；肝脏毒性；肝脏的病毒感染，或病毒性肝炎；自身免疫性肝炎；隐源性肝硬化；低灌注 (hypoperfusion)后的肝坏死；和其他疾病造成的肝炎，或继发性NASH。
在进一步的方面，本公开内容包括基于检测或测量的FAS表达水平来诊断受治疗 者肝脏中脂肪蓄积的方法。在一些实施方案中，诊断受治疗者肝脏中存在脂肪蓄积是基于 升高的FAS表达。可选地，诊断受治疗者肝脏中不存在脂肪蓄积可以是基于未升高的FAS 表达水平的检测或测量。在一些实施方案中，这些方法可组合肝脏炎症的检测或测量使用。 不存在炎症指示存在脂肪变性，而存在炎症诸如具有相关的肝细胞损伤的肝脏小叶中病灶 性急性炎症指示存在脂肪性肝炎。已报道门管三联(portal triad)的轻度慢性炎症可存 在于具有脂肪变性的患者中。 在另外的方面，本公开内容的方法可与其他医学或临床方法组合使用作为鉴别诊 断(differential diagnosis)方法的一部分。此类方法可包括将本文所述的FAS相关测 定与其他测定组合实施，以通过包括或排除其他可能的疾病病况来促进医学诊断过程。
在又一另外的方面，本公开内容包括基于本文所述的肝脏病况的诊断来选择或应 用治疗或疗法的方法。在一些实施方案中，所述治疗或疗法是技术人员已知或认为缓解或 改善所诊断的病况的症状或方面的治疗或疗法。非限制性实例包括临床医师或其他医学执 业者认可和认为或已知对所诊断的疾病或病理有益的治疗和疗法。 在又进一步的方面，本公开内容包括制备如本文所述的来自受治疗者的生物材料 样品的方法。所述制备可通过技术人员已知的任何手段或方法。在一些实施方案中，可制 备生物液体样品，然后用于本文公开的方法。在其他实施方案中，可制备含有肝脏细胞的样 品或含有从该细胞得到的材料的样品并用于本文所述的方法。 本公开内容还包括用于实施本文所公开的方法的组合物。非限制性实施方案包括 用于检测FAS蛋白质或其片段，或用于检测编码FAS的核酸的试剂。当然，还公开了包含一 种或多种此类试剂的组合物。另外的材料包括复合物，所述复合物包含用于检测FAS表达 的试剂和被所述试剂结合的配体。所述试剂和配体形成本公开内容的"结合对"，以使本公 开内容的复合物可包含此类"结合对"。配体的非限制性实例包括生物液体或肝脏细胞中被 所述试剂结合的组分和分子。在一些实施方案中，所述复合物是从通常发现与配体在一起 的一种或多种分子分离或纯化的。 另外的实施方案的详情在附图和下面的描述中阐明。根据附图和详细描述以及根据权利要求，所述实施方案的其他特征、目标和优点将是显然的。
定义 本文所用的术语"肝脏病况"和其变体指受治疗者中不是正常或无疾病个体的肝 脏状况的那些病况。所述病况可以是异常肝脏的病况或不期望的生理状态的病况。 一个非 限制性实例是脂肪肝。所述术语还包括诸如肝病和肝脏病理的病况。 本文所用的"肝病"和其变体指受治疗者肝脏中破坏它的正常水平或特征功能的 病况。在一些情形中，所述破坏是肝脏功能的中断、停止或失调。在其他情形中，所述破坏 是肝脏功能的错误或异常水平或特性。所述疾病可由受治疗者中遗传因子或状态造成或由 一种或多种病原造成。 本文所用的术语"肝脏病理"和其变体指包含可通过检查肝脏细胞和/或组织鉴别的 结构组分的肝脏疾病病况。病理通常是可通过研究组织、器官和/或体液鉴别的状态或病况。 所述研究可以基于视觉检查，诸如在显微镜下，任选地通过染色和/或免疫组织化学增强。
如本文所用，"脂肪性肝炎"包括非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和酒精性脂肪性肝炎 两种。 术语"人类脂肪酸合酶"或"hFAS"指先前在美国专利5， 759， 791和其依赖的专利 申请中被鉴别为癌症相关抗原的多肽。所述抗原在本领域中也被称为0A-519，并被生物化 学和分子生物学国际联盟命名委员会(NC-IUBMB)定义为脂肪酸合酶(E. C. 2. 3. 1.85)，如 www. chem. qmul. ac. uk/iubmb/enzyme/所述。所述术语不限于根据氨基酸序列的特定人类 脂肪酸合酶，而是被本公开内容的抗体识别的任何hFAS或其片段。该术语还指hFAS蛋白 质或肽，包括全长序列的片段，其保留细胞内形式以及在胞外环境和体液中发现的无细胞 形式。在一些情形中，全长hFAS的片段是指示全长hFAS(全长hFAS独有的)的片段。本 文所用的术语"FAS多肽"、"FAS肽"和"FAS蛋白质"指整体上是FAS的全部或部分的氨基 酸残基的聚合物。这些术语还包括含有保守氨基酸置换以使所述聚合物整体上保持其功能 性的聚合物，所述功能性诸如被本公开内容的抗-FAS抗体识别的功能性。
术语"接触"指置于直接的物理联系(association)，诸如将本公开内容的抗体与 hFAS多肽放置在一起以使可造成这两种组分的复合物的形成。 术语"升高的FAS水平"或其变体涉及样品或其他材料中存在或不存在FAS多肽 或包含FAS多肽的复合物的定性或定量评估。所述习语还可考虑检测到存在的FAS多肽高 于特定水平，诸如但不限于高于本底噪音或参考细胞或样品(包括来自正常受治疗者的细 胞或样品)水平的水平。如本文所用，所使用的"确定"或"检测"FAS多肽水平指以定量或 半定量水平评估多肽的量。所述评估不需是绝对精确的，而可以相反是近似的。
术语"轭合"、"键合"、"连接"和其变体指两个实体通过形成至少一个共价键的物 理联接。在一些情况中，它们指使两个多肽成为一个连续的多肽分子。在本公开内容的环 境中，所述术语包括指将抗体部分接合到固相支持物或其他固相材料，包括固相材料的表 面以及另一分子。共价键的形成可以是使用化学反应来形成所述键。术语"支持物"指常 规的支持物，诸如珠、粒子、量杆(dipstick)、纤维、过滤器、膜和硅烷或硅酸盐支持物诸如 载玻片。本公开内容的轭合抗体包括但不限于联接至标记的抗体。
附图简述

图1说明了具有乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌和结肠癌的患者与正常的对照相
7比的血清FAS水平。正常男性指0.21士0.27ng/ml(平均值±标准偏差)的结果，其中n =10。正常女性指0. 45±0. 67ng/ml (平均值±标准偏差)的结果，其中n = 20。"卵巢" 指卵巢癌病例，其中n = 13。"乳腺"指乳腺癌病例，其中n = 12。"结肠"指结肠癌病例， 其中n = 10。"前列腺"指前列腺癌病例，其中n = 13。"肺"指肺癌病例，其中n = 11。男 性和女性的正常上限分别是1. 02ng/ml和2. 46ng/ml (平均值+3标准偏差)。
图2说明了 38(n = 38)名肥胖受治疗者肝脏活检中与脂肪变性和脂肪性肝炎 相关的FAS表达。A部分显示脂肪肝得分与脂肪性肝炎得分的图，其中p < 0.0001单向 ANOVA，而***指示双尾t检验p < 0. 001。 B部分显示FAS表达得分与脂肪肝得分的图，其 中p < 0. Oil单向ANOVA， 1旨示p < 0. 05，而***指示双尾t检验p < 0. 01。 C部分显示 FAS表达得分与脂肪性肝炎得分的图，其中p < 0. 0003单向ANOVA，而**指示双尾t检验p < 0. 01。 图3显示正常肝脏、脂肪变性、脂肪性肝炎和肝硬化样品中的FAS表达。
本公开内容实施方式的详述 本公开内容包括用于检测受治疗者中肝脏病况的方法和组合物。所述病况的检测 可用于改善受治疗者中疾病的诊断和/或治疗。所述方法可以定性方式执行，诸如通过检 测处于或高于一定水平的FAS表达。可选地，所述方法可以定量方式执行，诸如通过测量 FAS表达的水平或量。 本公开内容包括检测受治疗者肝脏中升高的FAS的方法。在一些实施方案中，所 述方法可包括分析一个或多个肝脏细胞中的FAS表达。在其他实施方案中，所述方法可包 括分析已从肝脏中释放的FAS，诸如受治疗者体液中的FAS。在其中所述体液是血清的实施 方案中，FAS水平在本文中公开为不与ALT、 AST、 ALP、总胆红素、总蛋白质或白蛋白水平相 关联。在进一步的实施方案中，所述血清已在4t:储存了约1、约1至2、约2、约2-3、约3、 约3-4或约4天。 分析的非限制性实例包括检测或测量受治疗者肝脏中的FAS表达或FAS水平。所 述检测或测量可直接进行，诸如通过检测FAS蛋白质或其片段。可选地，所述检测或测量可 间接进行，诸如经由指示FAS表达的中间物。 所述检测或测量可以是对样品进行，诸如来自受治疗者的一个或多个肝脏细胞样 品或来自受治疗者的体液样品。在一些实施方案中，所述受治疗者是人类。在其他实施方 案中，所述受治疗者是非人类动物，诸如易感肝脏代谢综合征的那些(参见Hansen, R.J.等 人."Avian fatty liverhemorrhagic syndrome :a comparative review，，(禽类月旨肪月干 出血性综合征的比较回顾)Adv Vet Sci Comp Med 37:451-468,1993。)非限制性实例包 括鸟类(如鸡、鸭、鹅和其他农业上重要的禽类物种)、哺乳动物(如牛、猪和其他农业上重 要的四足动物(quadr即eds))和人类伴侣动物(如猫、狗等)。 在一些实施方案中，所述受治疗者是人类患者，诸如非肥胖人员，其通常将具有低 于肥胖人员的血清FAS水平的血清FAS水平。因此，非肥胖人员中升高的血清FAS水平指 示存在脂肪变性或脂肪性肝炎。此外，具有肝病或病理的肥胖人员将通常比具有相同疾病 或病理的非肥胖人员拥有更高的血清FAS水平。因此，具有炎性肝病诸如病毒性肝炎的患 者中的高血清FAS水平可指示存在与所述炎性疾病联合的脂肪变性或脂肪性肝炎。
在进一步的实施方案中，受治疗者的升高的FAS表达是由于通过肝脏更具体地肝脏细胞的表达增加。因此在一些实施方案中，受治疗者没有贡献于可检测的或可测量的升 高的表达水平的其他FAS表达来源。增加的FAS表达的可选来源的非限制性实例见于癌症 或其他恶性肿瘤病例。因此在一些实施方案中，受治疗者是未患有或被认为不具有癌症或 恶性肿瘤的那些受治疗者。换言之，受治疗者是已被诊断或另外地确定或怀疑为无癌症的 那些受治疗者。 因此本公开内容的一个实施方案是检测受治疗者肝脏中升高的脂肪酸合酶(FAS) 的方法。所述方法包括检测或测量来自被怀疑或诊断为无癌症的受治疗者的体液样品中的 脂肪酸合酶(FAS)的水平。升高的FAS水平指示所述受治疗者肝脏中升高的FAS。
如本文所公开的，样品中升高的FAS水平指示所述受治疗者肝脏中升高的FAS。不 受理论束缚和提供以加强对本公开内容的理解，本文描述的方面和实施方案部分是基于这 样的认识升高的FAS表达发生于具有肝脏病况，像作为非限制性实例的脂肪变性和脂肪 性肝炎的受治疗者中。因此，在具有肝脏病况的受治疗者中，检测或测量升高的FAS表达可 用于指示存在所述病况。因此升高的水平可以是受治疗者中存在所述病况的标志或指示。
见于脂肪变性和脂肪性肝炎的FAS表达增加指示，脂肪蓄积的来源至少部分是源 自于肝脏中的从头合成。因此本公开内容还包括通过检测或测量一个或多个肝脏细胞、肝 脏细胞匀浆物或含有FAS的肝脏细胞提取物的样品中的FAS表达，来检测被称为脂肪肝或 脂肪变性的肝脏病况的方法。所述样品可以来自被发现或诊断为具有变大的肝脏和/或 怀疑具有脂肪变性的受治疗者。此类样品可用于所述方法，以基于FAS表达将受治疗者诊 断或鉴别为具有或患有脂肪变性。在其他实施方案中，具有脂肪变性的受治疗者中升高的 FAS水平可指示存在未被肝脏活检鉴别出的脂肪性肝炎。本公开内容的方法允许技术人员 通过与肝脏活检联合使用的同一标准来区分非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和酒精性脂肪性 肝炎。 本公开内容还包括通过检测或测量已从肝脏中释放的FAS，来检测被称为脂肪性 肝炎的肝脏病况的方法。在一些实施方案中，所述释放是由于肝细胞损伤，其将FAS释放到 体液诸如血清中。所述方法可包括分析所述体液样品，以基于所述液体中升高的FAS水平 将受治疗者诊断或鉴别为具有或患有脂肪性肝炎。因此一个非限制性实施方案包括使用来 自受治疗者的血清样品检测或测量升高的FAS水平，其指示存在脂肪性肝炎。任选地，所述 方法可与一种或多种另外的测定联合执行，所述另外的测定诸如检测如本文所述的肝癌或 脂肪变性。 在相关的方面，本公开内容包括检测或测量肝脏中FAS表达的方法。在一些实施 方案中，所述方法可包括检测或测量包含肝脏细胞、肝脏细胞匀浆物或含有FAS的肝脏细 胞提取物的样品中FAS蛋白质或其片段的量。任选地，所述样品是肝脏活检诸如穿剌活检 的全部或部分。在一些实施方案中，对所述样品进行癌症存在筛选，诸如在经由免疫组织化 学方法检测FAS水平之前。任选地还可通过组织学手段，诸如常规苏木精和伊红染色后进 行分析，来对所述样品进行脂肪变性存在的筛选。 在其他实施方案中，所述方法可包括检测或测量受治疗者的体液样品中FAS蛋白 质或其片段的量。如本文所用的，FAS蛋白质片段是指示FAS蛋白质存在或水平的FAS蛋 白质部分。在一些实施方案中，所述片段被也检测FAS蛋白质的试剂检测。
在一些实施方案中，通过与没有肝脏病况并因而没有肝病或病理的正常受治疗者中的FAS表达比较，可将检测或测量的FAS表达水平确定为升高的。在其他实施方案中，所 述比较可以是在具有FAS的正常生理表达的受治疗者中。 当公开的方法包括确定FAS表达水平时，所述水平可被确定为相对于没有肝脏病 况的受治疗者中的水平是升高的。这允许将所检验的受治疗者鉴别为具有肝脏病况，诸如 肝病或病理。可选地，所述水平可被确定为相对于没有肝病或病理的受治疗者中的水平是 相同的，因此是未升高的。这将所检验的受治疗者鉴别为不具有肝脏病况。
因此，本公开内容的实施方案包括通过分析FAS表达，来鉴别受治疗者中肝脏病 况诸如肝病或病理存在或不存在的方法。所述方法可包括 检测或测量来自所述受治疗者的体液样品中的脂肪酸合酶(FAS)的水平，其中
i)相对于无肝病或病理的受治疗者中的水平升高的FAS水平鉴别所述受治疗者 中肝脏病况的存在，禾口 ii)相对于无肝病或病理的受治疗者中的水平相同的FAS水平鉴别所述受治疗者 中肝脏病况的不存在。 在一些实施方案中，所述受治疗者被怀疑患有特征为升高的FAS水平的肝病或病 理，诸如脂肪性肝炎，包括非酒精性脂肪性肝炎或酒精性肝炎。在其他实施方案中，所述疾 病或病理的特征不是升高的FAS水平，诸如肝脏毒性；肝脏的病毒感染，或病毒性肝炎；自 身免疫性肝炎；隐源性肝硬化；低灌注后的肝坏死；和其他疾病造成的肝炎。在其他实施方 案中，所述受治疗者被怀疑患有肝病或病理，任选地在肝硬化症状发作之前。
在所公开的方法中，可能受治疗者具有脂肪肝并发一种或多种另外的病况，所述 病况使血清或一种或多种其他体液中FAS升高。当FAS的升高是来自肝脏时，所述另外的 病况是本文所述的肝脏病况。如果所述FAS升高是来自非肝脏来源，则技术人员可通过本 领域已知的方法，诸如作为非限制性实例的肝脏组织学(或组织病理学)检查，来区分所述 脂肪肝病况和非肝脏病况。 在其中所述疾病或病理是肝脏毒性的实施方案中，其可能是由于受治疗者接触外 源药物或化学剂。在一些情形中，所述药物或化学剂是四环素或四氯化碳。可选地，和在所 述疾病或病理是由于病毒感染或病毒性肝炎时，其可由选自甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎 或丁型肝炎的病毒造成。在其他实施方案中，所述病毒是巨细胞病毒或疱疹病毒，或系统性 或局部性病毒感染。 在其中所述疾病或病理是自身免疫相关或基于自身免疫的实施方案中，其可能是 由于系统性红斑狼疮、硬皮病、CREST综合征或其他自身免疫疾病。当所述疾病或病理是 低灌注后的肝坏死时，其可以是严重的低血压、肝脏的机械性损伤或血管危象(vascular compromise)。可选地，所述疾病或病理可以是由于溃疡性结肠炎、克罗恩病、硬化性胆管炎 或隐源性肝硬化。 在进一步的实施方案中，所述疾病或病理可以是因恶性疾病的肝脏病灶性或弥漫 性浸润。此类恶性疾病的非限制性实例包括肝细胞癌、白血病、淋巴瘤或其他原发性或转移 性恶性肿瘤。 如本文所述的，所公开的方法可通过使用结合FAS蛋白质或其片段的试剂来实 施。在一些实施方案中，所述试剂是针对FAS的抗体，诸如针对人类脂肪酸合酶(hFAS)的 抗体。如本文所用的，"抗体"指与特定抗原免疫学反应的免疫球蛋白分子和其片段。在一些情形中，所述抗体可与来自人类癌细胞的FAS反应，并且还与来自非转化细胞的肝脏FAS 反应。在一些情形中，单克隆抗体或其FAS结合片段可用于所公开的方法。
术语"抗体"指多种此类分子，并且不限于单个类型的抗体的均一群体。术 语"抗体"还包括遗传加工形式诸如嵌合抗体(如，人源化鼠抗体)、异种轭合物 (heteroconjugate)抗体(如，双特异性抗体)和重组单链Fv片段(scFv)和二硫化物稳定 的(dsFv)Fv片段(参见，例如美国专利5， 747， 654)。术语"抗体"还包括抗体的抗原结合形 式(如，Fab' 、F(ab' )2、Fab、Fv禾口rlgG。另夕卜参见，Pierce Catalog and Handbook (Pierce 目录和手册)，1994-1995 (Pierce Chemical Co. ， Rockford， 111.)。术语"抗-hFAS"指针 对hFAS产生的抗体。 如本文所述的与FAS或hFAS免疫学反应的抗体可通过已知的方法诸如用FAS或 hFAS多肽免疫接种产生抗体的动物来产生。单克隆抗体可通过本领域技术人员熟悉的各种 技术获得。制备此类单克隆抗体的技术的描述可参见，如，Stites等人(编辑)BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY(基础和临床免疫学)(第4版)，Lange Medical Publications, Los Altos, Calif.，和其中引用的参考文献；Harlow&Lane，同上;Goding， MONOCLONAL ANTIBODIES PRINCIPLES AND PRACTICE (单克隆抗体原理和实践)(第2版)，Academic Press, New York, N. Y. (1986) ;Kohler&Milstein， Nature 256:495497(1975);和特别是 (Chowdhury， P. S.等人Mol. Immunol. 34 :9 (1997))，其讨论了一种产生单克隆抗体的非限 制性方法。 制备单克隆抗体的方法包括用编码期望的免疫原(在本发明情形中为FAS多肽)
的核酸序列免疫接种动物。此技术具有超过基于蛋白质的免疫接种的至少两个优点避免
了对蛋白质纯化的需要；和所述免疫原进行正确的翻译后修饰的增加的可能性。 在一些实施方案中，所述抗体可被称为是FAS蛋白质或其片段"特异性的"或与
FAS蛋白质或其片段"特异性免疫反应"。这些术语指抗体在结合反应中与FAS诸如人类FAS
或其片段反应的能力。所述反应可在存在其他蛋白质、细胞或材料时确定FAS的存在或量。
在技术专业人员期望的测定条件包括本文公开的非限制性条件下，所述抗体优先结合FAS，
而不以显著或可检测的方式结合样品中的其他因子。本公开内容的非限制性实施方案利用
其中所述抗体或其可选形式选择性结合而产生信号的条件，所述信号是本底信号或噪音的
至少两倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍、或至少10倍至100倍。本底信号或噪
音可包括与其他蛋白质或生物材料的低水平交叉反应性。 本公开内容的FAS特异性抗体的可选形式可通过技术人员已知的方法容易地产 生。产生抗体的抗原结合片段的能力是公知的，并可用于产生用于如本文所公开的用途的 双价F(ab' )2和单价Fab片段。如本文所用的，"Fab"指抗体的双链结合片段，其包含至少 功能完整的轻链和重链可变域。另外，产生抗体的杂合(hybrid)、嵌合、改变的、重组(包括 单链)或人源化形式的方法也是技术人员已知的。这些抗体形式可考虑本文公开的抗体和 单克隆抗体的衍生物。 在一些实施方案中，所述可选形式是"单链Fv"或"scFv"，其指其中传统两条链的 抗体的重链和轻链被接合在一起形成具有单个结合位点的一条链的抗体。通常，在所述两 条链之间置有连接体肽，以允许可变区进行正确的折叠和定位来生成活性结合位点。术语 "连接体肽"指抗体结合片段(如，Fv片段)中的多肽链，其作用是间接联接可变重链与可变轻链。 更通常地，"连接体"是用于将所述抗体接合至另一分子的分子。连接体能够与所 述抗体和与所述其他分子形成共价键。合适的连接体是技术人员公知的，并且包括但不限 于直链或支链碳连接体、杂环碳连接体或肽连接体。当抗体和另一分子是多肽时，所述连接 体可通过其侧基(如，通过与半胱氨酸的二硫键)接合至组成氨基酸。可选地，所述连接体 将接合至末端氨基酸的a碳氨基和羧基基团。 另外的衍生形式包括已被轭合至其他化学部分的本公开内容的抗体和其可选形 式。非限制性实例包括标记的抗体或其可选形式。术语"标记"、"可检测地标记"或"用可检 测的标志物标记"指能够被检测(直接或间接)以指示"被标记的"分子的存在的抗体组合 物。检测可定量或定性进行。因此标记产生指示存在被标记的分子的可检测信号，并且本公 开内容的被标记的抗体可借助所述标记检测。合适的标记包括结合对的一个成员(诸如生 物素_亲和素或生物素_链霉亲和素结合对中的生物素)、放射性同位素、发色团、酶(如， 辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和ELISA中通常使用的其他酶)、底物、染料、荧光分子(如，荧 光素异硫氰酸酯、得克萨斯红、若丹明、绿色荧光蛋白和类似荧光分子)、化学发光部分、磁 粒或珠、生物发光部分、量热标记(诸如胶体金)和类似标记。同样地，标记是通过分光镜、 光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或化学手段直接或间接可检测的任何组合物。在一 些实施方案中，所述标记产生可视信号，所述可视信号可通过视觉检查诸如通过肉眼检测。
检测此类标记的手段是技术人员公知的。例如，放射性标记可使用照相胶片或闪 烁计数器检测，荧光标志物可使用光检测器检测发射的光照来检测。酶标记通常通过向酶 提供底物并检测酶作用于所述底物产生的反应产物来检测，而比色标记只需通过肉眼观察 有色的标记来检测。 本公开内容的抗体和其可选形式还可通过已知的方法和手段轭合于固相支持物， 诸如但不限于，玻璃、塑料、合成膜。其他非限制性实例包括珠、粒子、量杆、纤维、过滤器、 培养皿、ELISA(酶联免疫吸附测定)板、微滴定板、硅烷或硅酸盐支持物，诸如载玻片、和器 皿、孔或容器以及其侧壁。所述抗体的此类固定形式可用于本文公开的检测方法。
本公开内容的抗体和其可选形式还可配制成组合物。所述组合物还可包含用于检 测FAS或其片段的一种或多种其他试剂。非限制性实例包括抗体结合于其关联FAS的复合 物和抗体与用于基于抗体的检测方法的其他试剂的组合。其他实例包括与其他FAS结合抗 体或检测剂的混合物。抗体和其可选形式与其他检测剂的组合还可以是用于检测FAS的制 造物品诸如检验设备的一部分。 用于检测或测量FAS或其片段的方法不受设计的限制。非限制性实例包括如本 文所述的利用本公开内容的抗体和其可选形式的方法，和基于蛋白质印迹或其他免疫印 迹、ELISA、侧向流动(lateral flow)设备、三明治测定、显微镜目视观察、竞争性和非竞争 性免疫测定、免疫酶测定(immunoenzymetric assay)、免疫荧光、免疫磁性选择和流式细 胞术(包括通过多色流式细胞术检测)原理的方法。另外的免疫测定形式参见Harlow和 Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual (抗体实验室手册)，ColdSpring Harbor Publications, New York。本公开内容的方法用于定性或定量检测或测量FAS在本文所述 的样品或"检验样品"中的存在或不存在。 如本文所用的，"样品"或"检验样品"指分离自被怀疑具有升高的FAS或包括升高的FAS作为可检测征兆的病况的个体的样品。可选地，所述术语指已知含有FAS诸如人类 FAS的样品，以在所公开的检测方法中用作对照，或用于所公开的检测方法以确认FAS的存 在或定量FAS的量。样品可通过任何适当的手段收集，包括在含有细胞的样品情形中的活 检和穿剌活检，和在含有血清的样品情形中的采血。本公开内容的样品还可以是作为非限 制性实例的肝脏细胞匀浆物或提取物。样品还可以是血清稀释液，诸如在测定前用样品稀 释剂稀释。所述稀释剂可以是技术人员期望的任何合适溶剂。 在一个实施方案中，本公开内容的方法是基于使用结合FAS或其片段以与之形成 复合物的捕获试剂。所述捕获试剂可以是如本文所述的单克隆抗体或其可选形式。可选地， 所述试剂可以是结合FAS的另一抗体，包括但不限于结合多种FAS和其他细胞组分的多克 隆或重组抗体。捕获试剂可固定于固相支持物上，任选地在接触本公开内容的样品之前，如 本文对本公开内容的抗体所述的。当然，结合FAS蛋白质和FAS特异性抗体的复合物而不 是单独的抗体的捕获剂也可用于实施本公开内容。 无论是否与捕获试剂一起使用，本公开内容还包括结合FAS蛋白质或其片段以直 接或间接指示其存在或量的检测剂。所述检测剂可以是结合FAS蛋白质或其片段的本公 开内容的抗体或其可选形式。结合后，检测剂与其结合配偶体形成结合复合物。所述检测 剂可被可检测地标记，以使所述标记在结合所述检测剂之后指示关联结合配偶体和因此的 FAS蛋白质或其片段的存在或量。可选地，所述检测剂本身被可检测地标记的第二剂结合。
当与捕获试剂联合使用时，形成了包含所述试剂、FAS蛋白质或其片段和检测剂的 三明治复合物。可于此三明治复合物之前形成包含捕获试剂和FAS蛋白质或其片段的复合 物，此复合物接触检测剂形成所述三明治复合物。可选地，可于所述三明治复合物之前形成 包含检测试剂和FAS蛋白质或其片段的复合物，此复合物随后接触捕获试剂形成所述三明 治复合物。所述三明治复合物以及其他形式的特异性可通过捕获试剂、检测试剂或二者引 入。 本公开内容的实施方案包括使用下列捕获试剂和检测试剂的组合 结合FAS蛋白质或其片段的多克隆抗体，和结合FAS蛋白质或其片段的单克隆抗
体； 结合包含FAS蛋白质或其片段的复合物的多克隆抗体，和结合FAS蛋白质或其片 段的单克隆抗体； 结合FAS蛋白质或其片段的单克隆抗体，和结合FAS蛋白质或其片段的多克隆抗 体； 结合FAS蛋白质或其片段的单克隆抗体，和结合包含FAS蛋白质或其片段的复合 物的多克隆抗体；禾口 结合FAS蛋白质或其片段的单克隆抗体，和结合FAS蛋白质或其片段的单克隆抗 体。 本公开内容的方法还包括竞争性结合测定作为实施方案。这些包括如本文所述的 且与本领域已知的竞争性测定方法类似的、使用FAS蛋白质或其片段的标记形式，所述标 记形式竞争与检测剂和/或捕获试剂的结合。本公开内容提供的方法还可全部或部分自动 化。 用于本公开内容的方法的材料理想地适于制备根据公知的程序产生的试剂盒。本公开内容包括试剂盒，所述试剂盒包含如本文所述的用于检测和/或定量样品中的FAS蛋
白质或其片段的剂。此类试剂盒任选地包含所述剂和/或试剂与和本公开内容的方法中所
述试剂盒的用途或所述试剂盒的适用性相关的鉴别描述或标签或说明。此类试剂盒可包含
容器，每个容器具有所述方法中使用的各种剂和/或试剂中的一种或多种(任选地以浓縮
的形式)，包括，例如，检测剂和/或捕获试剂的预固定形式。通常还将包括一组说明或试剂
标识。其他示例性试剂盒含有用于实施所公开的方法的设备或固相支持物，诸如但不限于，
侧向流动设备、试纸条(test strip)、珠、膜或容器的包被表面、器皿或孔。 所述试剂盒还可任选地包括对照样品，诸如具有免疫反应性FAS蛋白质或其片段
的已知样品。对照可以已知的量存在，以便使用用于稀释样品的样品稀释剂稀释而用作外
部对照，或被加入实际样品而用作内部对照，任选地用于确定所述测定在被检验的样品类
型环境中的灵敏度。所述试剂盒可包含用于单次测定或用于多次测定的材料。 因此，本公开内容的实施方案包括这样的方法，所述方法包括形成和然后检测或
测量FAS结合抗体或其FAS结合片段和FAS蛋白质或其片段之间的复合物。在一些实施
方案中，所述复合物可通过使FAS结合抗体或其FAS结合片段接触可含有FAS蛋白质或其
片段的样品来形成。所述接触在如果样品中存在FAS，则允许形成所述复合物的条件下发
生。如本文所公开的，所述样品可以是含有肝脏细胞的样品或肝脏细胞衍生的样品或体液
样品。在进一步的实施方案中，所述样品可以是含有FAS的阳性对照。 在一些情形中，检测或测量通过使用酶联免疫吸附测定(ELISA)或放射免疫测定
执行。可选地，检测或测量是通过使用侧向流动设备，其中可在所述侧向流动设备的固相组 分上分离如上文所述的复合物。 在另一方面，本公开内容包括检测受治疗者肝脏中的脂肪蓄积的方法。在一些实
施方案中，所述方法可包括检测或测量来自受治疗者的包含一个或多个肝脏细胞、肝脏细
胞匀浆物或含有FAS的肝脏细胞提取物的样品中的FAS表达。FAS表达水平可被确定为如
本文所述的升高。升高的水平可用于指示受治疗者肝脏中从头合成的脂肪的蓄积。 在进一步的实施方案中，此方法还可包括检测肝脏炎症和/或肝细胞损伤。不存
在炎症或损伤指示存在脂肪变性，而存在炎症或损伤指示存在脂肪性肝炎。 在另外的实施方案中，指示存在脂肪蓄积的升高的FAS表达水平还可用于指示大
于约5%的肝脏总重量，或肝脏小叶中多于约30%的肝脏细胞具有脂肪沉积。 所公开的方法可包括另外的操作。在一些实施方案中，所述另外的操作是将FAS
表达水平传达至所述受治疗者。在其他实施方案中，所述另外的操作是请求或接收用于检
测或测量FAS表达的付款。 现在已大体上列举了本公开内容，通过参考下列实施例将更易于理解本公开内 容，所述实施例是通过例证方式提供的，除非指明，并不意于限制本公开内容。
实施例 实施例1 : 为了检查脂肪变性、脂肪性肝炎和FAS表达之间的关系，用单克隆抗_人类FAS抗 体以免疫组织化学研究了来自38名肥胖受治疗者的穿剌活检中的FAS表达。脂肪变性、脂 肪性肝炎和FAS表达半定量分级为0-4+，增幅为0. 5。数据分析揭示脂肪变性和FAS表达最佳地被分成三类0-0. 5+，其代表阴性或很少的表达，1. 0-2. 5+，其指示轻度至中度的表达， 和3. 0-4. O，指示强烈表达。图2显示了此研究的结果。 图2，版块A比较了脂肪性肝炎和脂肪肝之间的关联。如所预期的，没有脂肪肝的 患者(0-0. 5+)几乎没有脂肪性肝炎，而具有显著的脂肪变性的那些患者(3.0-4.0+)具有 最高的脂肪性肝炎水平，p〈0. 0001(单向AN0VA分析，Prism 4.00 for Windows,Gr即hPad Software, San Diego California USA， www. graphpad. com)。这些发I见与已知的月旨肪月干禾口 脂肪性肝炎之间的关联一致(2)。 图2，版块B比较了脂肪肝(脂肪变性)和FAS表达之间的关系。增加的脂肪变 性和FAS表达之间存在关联(p = 0. 011)。不受理论束缚和提供以加强对本公开内容的理 解，这些结果表明肝脏中蓄积的脂肪的一部分或大部分可能是肝脏中从头脂肪酸合成的产 物，而不代表脂肪酸从脂肪组织向肝脏的动员和运输。 图2，版块C比较了 FAS表达与活动性脂肪性肝炎。增加的FAS表达和存在脂肪性 肝炎之间具有强烈的关联(P = 0. 0003)。因此，与脂肪肝类似，FAS表达也与存在脂肪性肝 炎高度关联。同样不受理论束缚和提供以加强对本公开内容的理解，这些结果表明脂肪性 肝炎和升高的血液和血清FAS水平之间存在关联。
实施例2 : 图3是说明FAS表达与脂肪变性、脂肪性肝炎和肝硬化的关联的一系列显微照片。 图3A是苏木精和伊红染色的福尔马林固定石蜡包埋的肝脏切片，所述肝脏是没有脂肪变 性或脂肪性肝炎迹象的组织学上寻常的肝脏。在3B中，大致连续的正常肝脏活检切片用 抗-人类FAS小鼠单克隆抗体染色。此肝脏具有轻微的FAS反应性，如对应于FAS表达的 砖色染色所示(箭头)。相反，图3C是苏木精和伊红染色的具有严重脂肪变性的肝脏的切 片。应注意到代表甘油三酯(triglyeride)液滴的大的圆形空间，甘油三酯充盈了肝脏细 胞(箭头)。这是大泡性脂肪变性的实例。此外，还有少量具有小泡的细胞，所述小泡赋予 细胞质"肥皂泡"外观，指示小泡性脂肪变性组成。 图3D说明了相同活检中FAS的免疫组织化学。应注意到具有大量甘油三酯的细 胞(箭头)中FAS的强烈细胞质染色，其指示与3B中正常肝脏相比FAS表达的上调。脂肪 性肝炎显示于图3E。应注意到主要的大泡性脂肪变性区域中肝细胞之间的炎症病灶(箭 头)。 3F中FAS的免疫组织化学染色在所有肝细胞中显示强烈的FAS细胞质染色，甚至 参与炎症的肝细胞中也如此(箭头)。具有脂肪性肝炎的患者可继续发展肝硬化。图3G是 苏木精和伊红染色的来自具有晚期肝硬化的患者的肝脏活检，所述晚期肝硬化是在脂肪性 肝炎环境中发展的。应注意到造成肝硬化的结节性外观的致密的纤维状疤痕(箭头)。如 图3H中所示，此硬化肝脏中保持高FAS表达水平(箭头)。 总之，高FAS表达水平显示与脂肪变性和脂肪性肝炎关联，直到在具有NASH的患
者中发展确定的肝硬化。 实施例3 : 为了确定具有可检测的循环FAS的脂肪变性或脂肪性肝炎之间的关系，测量了 丢弃的手术前血清中的FAS，所述血清来自经历病态肥胖症减肥手术的16名患者。此外， 还对这些患者中的12名执行手术肝脏活检，以评估脂肪变性或脂肪性肝炎的存在。血清FAS水平使用单克隆抗_人类FAS三明治ELISA测定进行测量。与20名正常受治疗者相比，所述16名肥胖患者具有更高的血清FAS水平，如图4A所示(3. 5±1. 17ng/ml，肥胖；0. 17±0. 07ng/ml，正常；p = 0. 003，双尾不配对t检验，Gr即hPad Prism version4. 00 forWindows, GraphPad Software, San Diego California USA，www. graphpad. com)。
对于可从手术获得其肝脏组织的12名患者，基于脂肪变化、炎症和纤维化的程度，使用0-4+的半定量量度将脂肪性肝炎和脂肪变性分级。增加的血清FAS水平与脂肪性肝炎而不是脂肪变性有关(p = 0. 03，单尾t检验，Prism 4. O，Gr即h Pad Software)。图4B是与没有脂肪性肝炎的患者相比，具有脂肪性肝炎的患者中升高的血清FAS水平的图绘。
对具有血清FAS测量的17名患者，进行了一组肝脏功能检验。所述检验包括ALT、AST、 ALP、总胆红素、总蛋白质和白蛋白。使用皮尔森相关性检验(Pearsons correlationtest)，这些分析物未显示与血清FAS值的显著相关性。这表明血清FAS水平很可能独立于这组常规的肝脏功能研究。 本文引用的所有参考文献，包括专利、专利申请和公布，据此通过引用整体并入本文，无论前面是否明确将其并入。 现在已充分提供了本公开内容，本领域技术人员应理解，可在大范围内的等效参数、浓度和条件下执行本公开内容，而不背离本公开内容的精神和范围，并且无需过多的实验。 虽然已联系本公开内容的具体实施方案对其进行了描述，但是应理解其能够进行进一步的修饰。本申请意于涵盖本公开内容的任何变化、用途或修改，所述变化、用途或修改一般依据所公开的原理并包括对本公开内容的如下变更——诸如落入本公开内容所属的领域内已知或惯例的做法的变更，以及诸如可以应用于上文列举的必要特征的变更。
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权利要求
一种检测受治疗者肝脏中升高的脂肪酸合酶(FAS)的方法，所述方法包括检测或测量来自怀疑为无癌症或诊断为无癌症的受治疗者的体液样品中的脂肪酸合酶(FAS)的水平，其中升高的FAS水平指示所述受治疗者肝脏中升高的FAS。
2. 如权利要求1所述的方法，其还包括鉴别所述受治疗者中肝病的存在或不存在，其中i) 相对于无肝病受治疗者中的水平升高的FAS水平鉴别所述受治疗者中肝病的存在，和ii) 相对于无肝病受治疗者中的水平相同的FAS水平鉴别所述受治疗者中肝病的不存在。
3. 如权利要求2所述的方法，其中所述肝病特征为升高的FAS水平，该肝病是脂肪性肝 炎，诸如非酒精性脂肪性肝炎或酒精性肝炎；或所述肝病特征不是升高的FAS水平，该肝病诸如肝脏毒性；肝脏的病毒感染，或病毒性 肝炎；自身免疫性肝炎；隐源性肝硬化；低灌注后的肝坏死；和其他疾病造成的肝炎。
4. 如权利要求3所述的方法，其中所述肝脏毒性是由于受治疗者接触外源药物或化学剂，诸如四环素或四氯化碳； 所述病毒感染或病毒性肝炎选自甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎或丁型肝炎，或是由于 巨细胞病毒或疱疹病毒的感染；所述自身免疫性肝炎是由于所述受治疗者中的系统性红斑狼疮、硬皮病或CREST综合征；所述低灌注后的肝坏死选自严重的低血压、肝脏的机械性损伤或血管危象；或 所述其他疾病造成的肝炎选自溃疡性结肠炎、克罗恩病或硬化性胆管炎。
5. 如权利要求1或2或3或4所述的方法，其中所述受治疗者是人类。
6. 如权利要求l或2或3或4或5所述的方法，其中所述体液是血液或血清。
7. 如权利要求1或2或3或4或5或6所述的方法，其中所述检测或测量包括形成和 检测或测量FAS结合抗体或抗体片段和，如果存在，所述样品中的FAS之间的复合物。
8. 如权利要求7所述的方法，其中所述检测或测量是通过ELISA或测向流动试纸条。
9. 如权利要求l或2或3或4或5或6或7或8所述的方法，其还包括将FAS水平传 达至所述受治疗者。
10. 如权利要求2或3或4所述的方法，其中所述受治疗者被怀疑患有肝病，任选地在 肝硬化症状发作之前。
11. 一种检测受治疗者肝脏中升高的脂肪酸合酶(FAS)的方法，所述方法包括 检测或测量包含来自受治疗者的肝脏细胞的样品中的脂肪酸合酶(FAS)表达的水平， 其中升高的FAS表达水平指示所述受治疗者肝脏中升高的FAS。
12. 如权利要求11所述的方法，其还包括鉴别所述受治疗者中肝病的存在或不存在，射i) 相对于无肝病受治疗者中的水平升高的FAS水平鉴别所述受治疗者中肝病的存在，和ii) 相对于无肝病受治疗者中的水平相同的FAS水平鉴别所述受治疗者中肝病的不存在。
13. 如权利要求12所述的方法，其中所述肝病选自脂肪性肝炎(非酒精性脂肪性肝 炎或酒精性肝炎)；酒精性肝炎；肝脏毒性；肝脏的病毒感染，或病毒性肝炎；自身免疫性肝 炎；隐源性肝硬化；低灌注后的肝坏死；和其他疾病造成的肝炎。
14. 如权利要求13所述的方法，其中所述肝脏毒性是由于受治疗者接触外源药物或化学剂，诸如四环素或四氯化碳； 所述病毒感染或病毒性肝炎选自甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎或丁型肝炎，或是由于 巨细胞病毒或疱疹病毒的感染；所述自身免疫性肝炎是由于所述受治疗者中的系统性红斑狼疮、硬皮病或CREST综合征；所述低灌注后的肝坏死选自严重的低血压、肝脏的机械性损伤或血管危象；或 所述其他疾病造成的肝炎选自溃疡性结肠炎、克罗恩病或硬化性胆管炎。
15. 如权利要求11或12或13或14所述的方法，其中所述受治疗者是人类。
16. 如权利要求11或12或13或14或15所述的方法，其中所述体液是血液或血清。
17. 如权利要求11或12或13或14或15或16所述的方法，其中所述检测或测量包 括形成和检测或测量FAS结合抗体或抗体片段和，如果存在，所述样品中的FAS之间的复合 物。
18. 如权利要求17所述的方法，其中所述检测或测量是通过ELISA或测向流动试纸条。
19. 如权利要求11或12或13或14或15或16或17或18所述的方法，其还包括将 FAS水平传达至所述受治疗者。
20. 如权利要求12或13或14所述的方法，其中所述受治疗者被怀疑患有肝病，任选地 在肝硬化症状发作之前。
21. —种检测受治疗者肝脏中脂肪蓄积的方法，所述方法包括检测或测量包含来自受治疗者的肝脏细胞的样品中的脂肪酸合酶(FAS)表达的水平， 其中升高的FAS水平指示所述受治疗者肝脏中从头合成的脂肪的蓄积。
22. 如权利要求21所述的方法，其还包括检测肝脏炎症，其中不存在炎症指示脂肪变 性的存在，而存在炎症指示脂肪性肝炎的存在。
23. 如权利要求21所述的方法，其中所述FAS表达水平指示大于约5%的肝脏总重量， 或肝脏小叶中多于约30%的肝脏细胞具有脂肪沉积。
全文摘要
公开了用于检测受治疗者肝脏中升高的脂肪酸合酶(FAS)表达的方法和组合物。所述检测可以是受治疗者的肝脏细胞本身中或体液中的表达。还公开了用于鉴别存在或不存在与升高的FAS相关的肝病或病理的方法。所公开的方法可用包含本文所述的用于检测FAS表达的试剂的各种组合物实施。
文档编号G01N33/50GK101720434SQ200880013430
公开日2010年6月2日 申请日期2008年2月27日 优先权日2007年2月27日
发明者F·P·库哈杰达, S·M·迈杰豪西 申请人:菲思根诊断学有限公司