新型as160-样蛋白质、包括其的用于鉴定2型糖尿病治疗剂的检测系统、方法和用途的制作方法

专利名称：：新型as160-样蛋白质、包括其的用于鉴定2型糖尿病治疗剂的检测系统、方法和用途的制作方法新型AS160-样蛋白质、包括其的用于鉴定2型糖尿病治疗剂的检测系统、方法和用途本发明涉及新型AKT底物160kDA_样蛋白质(AS160-样蛋白质)；鉴定改变细胞的葡萄糖摄入的物质的方法，包括将包含新型AKT底物160kDa样蛋白质(AS160样蛋白质)的检测系统与测试物质接触，并且通过检测指示改变的细胞的葡萄糖摄入的信号来鉴定测试物质为改变细胞的葡萄糖摄入的物质；包含编码AKT底物160kDa-样蛋白质(AS160-样蛋白质)的基因和提供基因的可控表达的诱导型启动子的检测系统；检测系统用于鉴定提高至细胞内的葡萄糖摄入的物质的用途；以及AS160-样蛋白质在2型糖尿病模型中的用途。糖尿病是以高血糖和其他病征为特征的代谢障碍，这与单个的疾病或病况不同。世界卫生组织公认3种主要形式的糖尿病1型、2型和妊娠糖尿病(在妊娠期间发生的)，它们具有相似的病征、症状和后果，但具有不同的病因和群体分布。最后，所有形式都是因胰腺的β细胞不能产生足够的胰岛素来防止高血糖而引起。1型通常因产生胰岛素的胰腺β细胞的自身免疫性破坏而导致。2型的特征在于广泛的组织(tissue-wide)胰岛素抗性，特别地包括脂肪组织、肝和骨骼肌的胰岛素敏感性组织的胰岛素抗性，并且变化很广泛；其有时发展至β细胞功能丧失。妊娠糖尿病与2型糖尿病相似，因为其牵涉由妊娠的激素引起的胰岛素抗性。1型和2型是难治的慢性病况，但却是可治疗的并且通常用食疗和药物(包括胰岛素补充)的组合来控制。糖尿病可引起许多并发症例如低血糖、酮症酸中毒或非酮症高渗性昏迷。严重的长期并发症包括心血管疾病(两倍的风险)、慢性肾功能衰竭(糖尿病肾病是发达国家成年人中透析的主要原因)、视网膜损害(其可导致失明并且是发达国家的非老年人中的成人失明的最主要原因)、神经损害(几种类型的)和微血管损害，其可引起勃起机能障碍(阳痿)和愈合不良。创伤特别是脚上的愈合不良可导致可能需要截肢的坏疽_发达国家成年人中非创伤截肢的首要原因。因为胰岛素是调节葡萄糖从血液至大多数细胞(主要是肌肉和脂肪细胞)内的摄入的主要激素，因此胰岛素的缺乏或其受体的无敏感性在所有形式的糖尿病中起着中心作用。胰岛素通过胰腺中的β细胞响应升高的血糖水平(例如，在进餐后)而被放入血液。胰岛素使大多数身体细胞(通常估计大约2/3，包括肌肉细胞和脂肪组织)能够从血液吸收葡萄糖。2型糖尿病因缺陷型胰岛素分泌与胰岛素抗性或胰岛素敏感组织(特别地脂肪组织、肝和骨骼肌)的减小的胰岛素灵敏性的组合而引起。在早期，主要异常是减小的胰岛素敏感性，其特征在于血液中升高的胰岛素水平。在该阶段，高血糖症可通过提高胰岛素敏感性或通过肝减少葡萄糖产生的各种措施和药物治疗来逆转，但随着疾病发展，胰岛素分泌的损害恶化，从而胰岛素的治疗性替代通常变得很有必要。通常，2型糖尿病首先通过尝试改变体力活动、饮食(通常减少碳水化合物摄入)和体重损失来治疗。必要时，通常下一步是使用口服抗糖尿病药的治疗。由于胰岛素的产生在2型糖尿病患者中最初只是适度受损，口服药物仍然可用于促进胰岛素的产生，调节肝脏对葡萄糖的不适当释放以及大大减弱胰岛素抗性。早期阶段中糖尿病的适当治疗，特别是提高脂肪组织、肝和骨骼肌的胰岛素灵敏性可延长、延缓和/或阻止疾病的发展。因此，本发明的第一目的是更好地理解参与葡萄糖代谢的分子背景，从而帮助更好地寻找提高(improve)细胞(特别地为主要胰岛素敏感性组织的骨骼肌、脂肪组织和/或肝)的细胞的胰岛素敏感性的新型潜在药物。令人惊讶的是，本发明者现已鉴定AKT底物160kDa(AS160，也称为Tbc1D4或AS160，同种型1)的两个新型同种型(同种型2和3)。在下文中，术语“AS160样蛋白质”是指AS160的新型同种型中的任一个或两个，即指同种型2和/或3。根据一个实施方案，术语“AS160样蛋白质”是指两个同种型，根据另一个实施方案，其指同种型2，根据另一个实施方案中，其指同种型3。根据优选实施方案，术语“AS160样蛋白质”是指同种型2。AS160，同种型AS160，同种型2在6种主要胰岛素敏感性组织即脂肪组织、肝、骨骼肌、心脏、脑和胰腺组织中表达(参见图2A、B)。与此相反，AS160的同种型1主要在骨骼肌和心脏中被检测至丨J。第三种同种型(AS160，同种型3)，缺少AS160的外显子12(图1)，也主要在心脏和骨骼肌中表达。(图2C)。由于无效胰岛素作用是2型糖尿病的标志，因此AS160样蛋白质提供了研究胰岛素敏感性组织中胰岛素抗性的分子基础的新型靶。此外，AS160样蛋白质可用于鉴定可提高葡萄糖摄入，从而在相关组织中提高胰岛素敏感性的物质。已鉴定参与AS160样蛋白质的细胞内信号转导途径的组分，这使得能够在不同水平上研究物质与各信号转导途径的相互作用。其可显示与AS160样蛋白质相关的胰岛素刺激的信号转导包括AS160和AKT的磷酸化、PI3K(PI3激酶)和MEKK/ERK激酶的参与。令人出乎意料地，本发明者发现AS160样的过表达导致增加的GLUT4至质膜的转运和葡萄糖摄入的增加。他们还发现包含AS160样蛋白质的检测系统可用于研究在高葡萄糖条件下细胞对葡萄糖的摄入。这对于糖尿病模型或对于鉴定用于治疗和/或预防糖尿病的适当的治疗可能是特别重要的，因为该疾病以血液中增加的葡萄糖水平为特征。因此，检测能够在该条件(高葡萄糖)下改变，特别地提高，葡萄糖摄入的物质可有利于新治疗的鉴定。因此，AS160样蛋白质可用于鉴定改变，特别地增加，细胞的葡萄糖摄入，从而具有治疗或预防2型糖尿病的潜能的物质的方法。因此，本发明在第一方面提供了鉴定改变细胞的葡萄糖摄入和/或GLUT4转运的物质的方法，其包括(a)将包含AKT底物160kDa样蛋白质(AS160样蛋白质)的检测系统与测试物质接触，和(b)通过检测指示改变的细胞的葡萄糖摄入的信号来将测试物质鉴定为改变细胞的葡萄糖摄入和/或GLUT4转运的物质。在本发明的上下文中“改变细胞的葡萄糖摄入”意指改变，增加或减少细胞的葡萄糖摄入。优选增加细胞的葡萄糖摄入。在本发明的上下文中，如果与(测试)物质接触的细胞的葡萄糖摄入比对照(例如未与所述(测试)物质接触的相同细胞)的葡萄糖摄入显著更低或更高，那么细胞的葡萄糖摄入与对照相比发生改变，即分别减少或增加。本领域技术人员知道评估两个值彼此之间是否具有显著差异的统计学方法例如学生氏t-检验或卡方检验(关于适当的检测方法，也参见实施例)。在增加的葡萄糖摄入的优选实施方案中，细胞的葡萄糖摄入总计达到对照的至少110%，优选达到至少125%，更优选达到至少150%、160%、170%、180%或190%，仍更优选达到至少200%和最优选达到至少300%。如上所详述的，对于2型糖尿病的治疗或预防，特别重要的是改变胰岛素敏感性组织的葡萄糖摄入。因此，优选本发明的方法使得能够鉴定改变(优选增加)，在至少1个，优选至少2个，更优选至少3个或至少4个或至少5个或至少6个胰岛素敏感性组织中葡萄糖摄入的物质。胰岛素敏感性组织的实例包括但不限于脂肪组织、肝、骨骼肌、胰腺组织、心肌、血管平滑肌和活性乳腺。然而，6个主要胰岛素敏感性组织是脂肪组织、肝、骨骼肌、心脏、脑和胰腺组织。因此，物质优选改变更优选增加至少1、2、3、4、5或6或更多个此类组织，S卩脂肪组织、骨骼肌、心脏、脑、胰腺组织和/或肝中的葡萄糖摄入。如果在1个组织中改变优选增加葡萄糖摄入，则该组织可以例如是脂肪组织、肝、心脏、脑、胰腺组织或骨骼肌中的任一个。如果在2个组织中改变优选增加葡萄糖摄入，则该这两个组织可以是例如，脂肪组织和肝；脂肪组织和骨骼肌；或肝和骨骼肌，或如上所列的6个主要胰岛素敏感性组织中的2个的任何其他组合。如果在3个组织中改变优选增加葡萄糖摄入，则这3个组织可以是例如，脂肪组织、肝和骨骼肌或上面所列的6个主要胰岛素敏感性组织中的3个的任何其他组合。如果在4个组织中改变优选增加葡萄糖摄入，则这4个组织可以是例如，脂肪组织、肝、骨骼肌和脑或上面所列的6个主要胰岛素敏感性组织中的4个的任何其他组合。如果在5个组织中改变优选增加葡萄糖摄入，则这5个组织可以是例如，脂肪组织、肝、骨骼肌、脑和心脏或上面所列的6个主要胰岛素敏感性组织中的5个的任何其他组合。存在于脂肪组织、肝、心脏、脑、胰腺组织和骨骼肌中的主要细胞类型分别是脂肪细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元细胞、胰腺细胞、β细胞和骨骼肌细胞。因此，物质优选改变更优选增加这些细胞类型(即脂肪细胞、肝细胞和/或骨骼肌细胞)中的至少1、2或3种细胞中的葡萄糖摄入。如果在1个细胞类型中改变，优选增加葡萄糖摄入，则该类型可以是例如，脂肪细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元细胞、胰腺细胞、β细胞或骨骼肌细胞。如果在2个细胞类型中改变，优选增加葡萄糖摄入，则这两个细胞类型可以是，例如，脂肪细胞和肝细胞；脂肪细胞和骨骼肌细胞；或肝细胞和骨骼肌细胞或存在于如上所列的6种主要胰岛素敏感性组织中的主要细胞类型的任何其他组合。如果在3个细胞类型中改变，优选增加葡萄糖摄入，则这3个细胞类型可以是，例如，脂肪细胞，肝细胞和骨骼肌细胞或存在于如上所列的6种主要胰岛素敏感性组织中的如上所列的主要细胞类型的任何其他组合。如果在4、5或更多个如上所列的6个胰岛素敏感性组织的主要细胞类型中改变，优选增加葡萄糖摄入，则可以是4、5或更多个此类细胞类型的任何组合。如上所详述的，本发明的方法涉及包含AS160样蛋白质的检测系统。根据一个实施方案(AS160的同种型2)，AS160样蛋白质源自AKT底物160kDa(AS160)，其中与AS160相比较，AS160的外显子11和12编码的序列在AS160样蛋白质中缺失(也参见图1)。根据另一个实施方案(AS160的同种型3)，AS160样蛋白质源自AKT底物160kDa(AS160)，其中与AS160相比较，该序列缺少外显子12。此外，如下所详述的，可存在其他突变。AS160(AKT底物160kDa;ΝΜ_014832(EMBL))最初被鉴定为3T3脂肪细胞中的蛋白质激酶AKT的底物(Kane等，2002)。另外的研究证明AS160也在小鼠、大鼠和人的骨骼肌中起作用。胰岛素、contraction或AICAR(5-氨基咪唑-4-氨甲酰1β-D-核糖核苷，cAMP-依赖的蛋白激酶(cAMPK)激活物)在两个位点(Ser588和Thr642)上增加AS160的磷酸化，所述两个位点位于就AKT磷酸化而预测的特征基序(RXRXXS/T)中(Kane等，同上)。AS160的突出特征是存在Rab蛋白质的GTP酶激活结构域。此类小G蛋白是膜运输所必需的。在本上下文中，最近的数据提供了AS160将AKT下游的信号与GLUT4的胰岛素刺激的转运相联系的证据(Sano等，2003)。AS160的激活在II型糖尿病患者中减少，这导致GLUT4转运受损(Karlsson等，2005b)。全长AS160在脂肪细胞中的过表达不改变GLUT4的基础或胰岛素刺激的表面至整体(surface-to-total)的分布，表明AS160的量似乎不是限速的(Zeigerer等，2004；Sano等，2003)。使用突变体AS160(包含4个突变的磷酸化位点)的实验显示GLUT4的转运显著减少(Sano等，2003)。此外，AS160的功能性GAP(GTP酶-激活蛋白质)结构域是GLUT4转运所必需的。AS160，同种型2在编码AS160的新型同种型2的基因中，与全长AS160基因相比较，缺失外显子11和12(参见实施例1和2)。在人基因的情况下，与如由序列NM_014832(参见EMBL数据库)定义的人全长AS160相比较，编码氨基酸678至740的核苷酸缺失。此夕卜，在位置nt606(沉默)和nt3827(Ala-Val)上鉴定了两个错配。此外，实施例2的克隆包含3bp缺失(nt2594-2596)，该缺失也在人胎盘cDNA中但非在人脑cDNA中被发现。对于实施例中所用的缺少外显子11和12的同种型的表达克隆，将缺失的3bp序列再导入以使更能与NM_014832(EMBL)的全长序列相似。所得的编码AS160的同种型2的DNA序列(SEQIDNO1)示于下列编码AS160的同种型2的DNA序列(SEQIDNO1)ATGGAGCCGCCCAGCTGCATTCAGGATGAGCCGTTCCCGCACCCCCTGGAGCCCGAGCCGGGCGTCTCAGCTCAGCCCGGCCCCGGGAAGCCAAGCGATAAGCGGTTCCGGCTGTGGTACGTTGGGGGGTCGTGCCTGGACCACAGGACCACGCTGCCTATGCTGCCCTGGCTCATGGCCGAGATCCGCAGGCGCAGCCAGAAGCCCGAGGCGGGCGGCTGCGGGGCGCCGGCGGCCCGAGAGGTGATCCTGGTGCTCAGCGCGCCCTTCCTGCGTTGCGTCCCCGCGCCGGGCGCTGGGGCCTCGGGGGGCACTAGTCCGTCGGCCACGCAGCCCAACCCGGCGGTATTCATCTTCGAGCACAAGGCGCAGCATATCTCGCGCTTCATCCACAACAGCCACGACCTCACCTACTTTGCCTACCTGATCAAGGCGCAGCCCGACGACCCCGAGTCGCAGATGGCCTGCCACGTTTTCCGCGCCACAGACCCCAGCCAGGTTCCTGATGTTATTAGCAGCATAAGGCAATTATCTAAAGCGGCCATGAAAGAGGATGCCAAACCCAGCAAAGATAATGAGGACGCCTTTTACAACTCTCAGAAGTTTGAAGTCCTGTACTGTGGAAAGGTGACCGTGACCCACAAGAAGGCCCCCTCAAGCCTCATCGATGACTGCATGGAGAAGTTCAGCCTGCACGAACAGCAGCGCCTGAAGATCCAAGGCGAGCAGCGCGGTCCGGACCCAGGAGAGGACCTGGCTGACTTGGAGGTGGTGGTGCCCGGGTCCCCCGGAGACTGCCTGCCGGAGGAGGCTGACGGCACCGACACCCACCTTGGCTTACCTGCCGGGGCCAGCCAGCCTGCCCTGACCAGCTCTCGGGTCTGCTTCCCTGAGCGGATTTTGGAAGATTCTGGCTTTGATGAGCAGCAGGAGTTTCGGTCTCGGTGCAGCAGTGTCACCGGCGTGCAACGGAGAGTTCACGAGGGCAGCCAGAAATCCCAGCCGCGACGGAGACACGCGAGCGCACCCAGTCACGTCCAGCCCTCGGACTCGGAGAAGAACAGGACCATGCTCTTCCAGGTTGGGCGATTTGAGATTAACCTTATCAGTCCAGACACTAAATCAGTTGTGCTAGAAAAGAATTTTAAAGATATCTCCTCTTGTTCTCAGGGTATAAAGCATGTGGATCACTTTGGCTTTATCTGCCGGGAGTCTCCAGAGCCTGGACTTAGCCAGTATATTTGTTATGTATTCCAGTGTGCCAGCGAATCTCTGGTTGATGAGGTAATGCTGACTCTGAAACAGGCCTTCAGTACGGCGGCTGCCCTGCAGAGTGCCAAGACGCAGATTAAACTGTGTGAGGCCTGCCCGATGCACTCTTTGCATAAGCTCTGTGAAAGGATTGAAGGTCTCTACCCACCAAGAGCCAAGCTGGTGATACAGAGGCATCTCTCATCACTGACAGATAATGAGCAAGCTGACATCTTTGAAAGAGTTCAGAAAATGAAGCCAGTCAGTGACCAGGAAGAAAATGAACTTGTGATTTTACACCTGAGGCAGCTGTGTGAAGCCAAGCAGAAGACACACGTGCACATCGGGGAAGGCCCTTCTACTATTTCAAATAGTACAATCCCAGAAAATGCAACAAGCAGTGGAAGGTTCAAACTTGACATTCTGAAAAATAAAGCTAAGAGATCCTTAACTAGCTCCCTGGAAAATATCTTCTCAAGGGGAGCTAACAGAATGAGAGGTCGGCTTGGAAGTGTGGACAGTTTTGAACGGTCCAACAGTCTTGCTTCAGAGAAGGACTACTCACCAGGGGATTCTCCACCAGGGACACCGCCAGCGTCCCCACCGTCCTCAGCTTGGCAAACGTTTCCCGAAGAGGATTCCGACTCCCCGCAGTTTCGAAGACGGGCACACACGTTCAGCCACCCACCTTCAAGCACAAAGAGAAAGCTGAATTTGCAGGATGGGAGGGCTCAGGGTGTGCGTTCCCCTCTGCTGAGGCAGAGCTCCAGTGAACAGTGCAGTGATGGAGAAGGGAGAAAAAGGACCTCATCTACCTGCAGCAATGAGTCCCTAAGTGTGGGAGGAACCTCTGTCACTCCTCGCCGGATCTCCTGGCGGCAGCGCATTTTCCTCAGGGTTGCTTCTCCCATGAACAAATCTCCCTCAGCAATGCAACAGCAAGATGGATTGGACAGGAACGAGCTGCTGCCACTGTCCCCCCTCTCTCCAACCATGGAGGAGGAACCGCTGGTTATATTCCTGTCTGGGGAGGATGACCCAGAAAAGATTGAAGAAAGAAAGAAATCAAAAGAACTGAGGAGCTTGTGGAGAAAAGCTATACACCAACAAATCTTGTTACTTCGAATGGAAAAAGAAAACCAGAAACTTGAAGGAGCAAGCAGAGATGAACTCCAGTCCAGAAAAGTTAAATTAGACTATGAAGAAGTTGGTGCATGTCAGAAAGAGGTCTTAATAACTTGGGATAAGAAGTTGTTAAACTGCAGAGCTAAAATCAGATGTGATATGGAAGATATTCATACTCTTCTTAAAGAAGGAGTTCCCAAAAGTCGACGAGGAGAAATTTGGCAGTTTCTGGCTTTACAGTACCGACTCAGACACAGATTGCCTAATAAACAACAGCCTCCTGACATATCCTATAAGGAACTTTTGAAGCAGCTCACTGCTCAGCAGCATGCGATTCTCGTGGATTTAGGAAGGACGTTTCCTACTCACCCTTACTTTTCAGTACAGCTTGGGCCAGGACAGCTGTCACTGTTTAACCTCCTGAAAGCCTATTCTTTGCTGGACAAAGAAGTGGGATACTGTCAGGGGATCAGCTTTGTGGCTGGAGTCCTGCTTCTGCACATGAGTGAAGAGCAAGCCTTTGAAATGCTGAAATTCCTCATGTATGACCTCGGCTTCCGCAAGCAGTACAGACCTGACATGATGTCGCTGCAGATTCAAATGTACCAGCTGTCCAGGCTCCTTCATGACTATCACAGAGATCTCTACAATCACCTTGAAGAAAATGAAATCAGCCCCAGTCTTTATGCTGCCCCCTGGTTCCTCACATTGTTTGCCTCTCAGTTTTCATTAGGATTTGTAGCCAGAGTTTTTGATATTATTTTTCTTCAGGGAACTGAAGTTATATTCAAGGTTGCACTCAGCCTACTGAGCAGCCAAGAGACACTTATAATGGAATGTGAGAGCTTTGAAAATATTGTTGAGTTTCTTAAAAACACGCTACCTGATATGAATACCTCTGAAATGGAAAAAATTATTACCCAGGTTTTTGAGATGGATATTTCTAAGCAGTTGCATGCCTATGAGGTGGAATATCATGTGCTACAGGATGAGCTTCAGGAATCTTCATATTCCTGTGAGGATAGTGAAACTTTGGAGAAGCTGGAGAGGGCCAATAGCCAACTGAAAAGACAAAACATGGACCTCCTAGAAAAATTACAGGTAGCTCATACTAAAATCCAGGCCTTGGAATCAAACCTGGAAAATCTTTTGACGAGAGAGACCAAAATGAAGTCTTTAATCCGGACCCTGGAACAAGAAAAAATGGCTTATCAAAAGACAGTGGAGCAACTCCGGAAGCTGCTGCCCGCGGATGCTCTAGTCAATTGTGACCTGTTGCTGAGAGACCTAAACTGCAACCCTAACAACAAAGCCAAGATAGGAAATAAGCCAS160的新型同种型2的通过EditSeq(Lasergene)翻译的氨基酸序列(SEQIDNO3)示于下列MEPPSCIQDEPFPHPLEPEPGVSAQPGPGKPSDKRFRLWYVGGSCLDHRTTLPMLPWLMAEIRRRSQKPEAGGCGAPAAREVILVLSAPFLRCVPAPGAGASGGTSPSATQPNPAVFIFEHKAQHISRFIHNSHDLTYFAYLIKAQPDDPESQMACHVFRATDPSQVPDVISSIRQLSKAAMKEDAKPSKDNEDAFYNSQKFEVLYCGKVTVTHKKAPSSLIDDCMEKFSLHEQQRLKIQGEQRGPDPGEDLADLEVVVPGSP⑶CLPEEADGTDTHLGLPAGASQPALTSSRVCFPERILEDSGFDEQQEFRSRCSSVTGVQRRVHEGSQKSQPRRRHASAPSHVQPSDSEKNRTMLFQVGRFEINLISPDTKSVVLEKNFKDISSCSQGIKHVDHFGFICRESPEPGLSQYICYVFQCASESLVDEVMLTLKQAFSTAAALQSAKTQIKLCEACPMHSLHKLCERIEGLYPPRAKLVIQRHLSSLTDNEQADIFERVQKMKPVSDQEENELVILHLRQLCEAKQKTHVHIGEGPSTISNSTIPENATSSGRFKLDILKNKAKRSLTSSLENIFSRGANRMRGRLGSVDSFERSNSLASEKDYSP⑶SPPGTPPASPPSSAWQTFPEEDSDSPQFRRRAHTFSHPPSSTKRKLNLQDGRAQGVRSPLLRQSSSEQCSDGEGRKRTSSTCSNESLSVGGTSVTPRRISWRQRIFLRVASPMNKSPSAMQQQDGLDRNELLPLSPLSPTMEEEPLVIFLSGEDDPEKIEERKKSKELRSLWRKAIHQQILLLRMEKENQKLEGASRDELQSRKVKLDYEEVGACQKEVLITWDKKLLNCRAKIRCDMEDIHTLLKEGVPKSRRGEIWQFLALQYRLRHRLPNKQQPPDISYKELLKQLTAQQHAILVDLGRTFPTHPYFSVQLGPGQLSLFNLLKAYSLLDKEVGYCQGISFVAGVLLLHMSEEQAFEMLKFLMYDLGFRKQYRPDMMSLQIQMYQLSRLLHDYHRDLYNHLEENEISPSLYAAPWFLTLFASQFSLGFVARVFDIIFLQGTEVIFKVALSLLSSQETLIMECESFENIVEFLKNTLPDMNTSEMEKIITQVFEMDISKQLHAYEVEYHVLQDELQESSYSCEDSETLEKLERANSQLKRQNMDLLEKLQVAHTKIQALESNLENLLTRETKMKSLIRTLEQEKMAYQKTVEQLRKLLPADALVNCDLLLRDLNCNPNNKAKIGNKPAs160,同种型3在编码AS160的新型同种型3的基因中，与全长AS160基因相比较，缺失外显子12。该外显予对应于NM_014832(参见EMBL数据库)的氨基酸733至740。所得的编码AS160的同种型3的DNA序列(SEQIDNO22)示于下列编码AS160的同种型3的DNA序列(SEQIDNo22)ATGGAGCCGCCCAGCTGCATTCAGGATGAGCCGTTCCCGCACCCCCTGGAGCCCGAGCCGGGCGTCTCAGCTCAGCCCGGCCCCGGGAAGCCAAGCGATAAGCGGTTCCGGCTGTGGTACGTTGGGGGGTCGTGCCTGGACCACAGGACCACGCTGCCTATGCTGCCCTGGCTCATGGCCGAGATCCGCAGGCGCAGCCAGAAGCCCGAGGCGGGCGGCTGCGGGGCGCCGGCGGCCCGAGAGGTGATCCTGGTGCTCAGCGCGCCCTTCCTGCGTTGCGTCCCCGCGCCGGGCGCTGGGGCCTCGGGGGGCACTAGTCCGTCGGCCACGCAGCCCAACCCGGCGGTATTCATCTTCGAGCACAAGGCGCAGCATATCTCGCGCTTCATCCACAACAGCCACGACCTCACCTACTTTGCCTACCTGATCAAGGCGCAGCCCGACGACCCCGAGTCGCAGATGGCCTGCCACGTTTTCCGCGCCACAGACCCCAGCCAGGTTCCTGATGTTATTAGCAGCATAAGGCAATTATCTAAAGCGGCCATGAAAGAGGATGCCAAACCCAGCAAAGATAATGAGGACGCCTTTTACAACTCTCAGAAGTTCGAAGTCCTGTACTGTGGAAAGGTGACCGTGACCCACAAGAAGGCCCCCTCAAGCCTCATCGATGACTGCATGGAGAAGTTCAGCCTGCACGAACAGCAGCGCCTGAAGATCCAAGGGGAGCAGCGCGGTCCGGACCCAGGAGAGGACCTGGCTGACTTGGAGGTGGTGGTGCCCGGGTCCCCCGGAGACTGCCTGCCGGAGGAGGCTGACGGCACCGACACCCACCTTGGCTTACCTGCCGGGGCCAGCCAGCCTGCCCTGACCAGCTCTCGGGTCTGCTTCCCTGAGCGGATTTTGGAAGATTCTGGCTTTGATGAGCAGCAGGAGTTTCGGTCTCGGTGCAGCAGTGTCACCGGCGTGCAACGGAGAGTTCACGAGGGCAGCCAGAAATCCCAGCCGCGACGGAGACACGCGAGCGCACCCAGTCACGTCCAGCCCTCGGACTCGGAGAAGAACAGGACCATGCTCTTCCAGGTTGGGCGATTTGAGATTAACCTTATCAGTCCAGACACTAAATCAGTTGTGCTAGAAAAGAATTTTAAAGATATCTCCTCTTGTTCTCAGGGTATAAAGCATGTGGATCACTTTGGCTTTATCTGCCGGGAGTCTCCAGAGCCTGGACTTAGCCAGTATATTTGTTATGTATTCCAGTGTGCCAGCGAATCTCTGGTTGATGAGGTAATGCTGACTCTGAAACAGGCCTTCAGTACGGCGGCTGCCCTGCAGAGTGCCAAGACGCAGATTAAACTGTGTGAGGCCTGCCCGATGCACTCTTTGCATAAGCTCTGTGAAAGGATTGAAGGTCTCTACCCACCAAGAGCCAAGCTGGTGATACAGAGGCATCTCTCATCACTGACAGATAATGAGCAAGCTGACATCTTTGAAAGAGTTCAGAAAATGAAGCCAGTCAGTGACCAGGAAGAAAATGAACTTGTGATTTTACACCTGAGGCAGCTGTGTGAAGCCAAGCAGAAGACACACGTGCACATCGGGGAAGGCCCTTCTACTATTTCAAATAGTACAATCCCAGAAAATGCAACAAGCAGTGGAAGGTTCAAACTTGACATTCTGAAAAATAAAGCTAAGAGATCCTTAACTAGCTCCCTGGAAAATATCTTCTCAAGGGGAGCTAACAGAATGAGAGGTCGGCTTGGAAGTGTGGACAGTTTTGAACGGTCCAACAGTCTTGCTTCAGAGAAGGACTACTCACCAGGGGATTCTCCACCAGGGACACCGCCAGCGTCCCCACCGTCCTCAGCTTGGCAAACGTTTCCCGAAGAGGATTCCGACTCCCCGCAGTTTCGAAGACGGGCACACACGTTCAGCCACCCACCTTCAAGCACAAAGAGAAAGCTGAATTTGCAGGATGGGAGGGCTCAGGGTGTGCGTTCCCCTCTGCTGAGGCAGAGCTCCAGTGAACAGTGCAGCAATCTTTCGTCAGTTCGACGCATGTACAAGGAGAGTAATTCTTCCTCCAGTCTTCCAAGTCTTCACACTTCCTTCTCTGCCCCTTCCTTCACTGCCCCCTCTTTCCTGAAAAGCTTTTACCAGAATTCAGGTAGACTGTCCCCACAGTATGAAAATGAAATCAGACTGATGGAGAAGGGAGAAAAAGGACCTCATCTACCTGCAGCAATGAGTCCCTAAGTGTGGGAGGAACCTCTGTCACTCCTCGCCGGATCTCCTGGCGGCAGCGCATTTTCCTCAGGGTTGCTTCTCCCATGAACAAATCTCCCTCAGCAATGCAACAGCAAGATGGATTGGACAGGAACGAGCTGCTGCCACTGTCCCCCCTCTCTCCAACCATGGAGGAGGAACCGCTGGTTGTATTCCTGTCTGGGGAGGATGACCCAGAAAAGATTGAAGAAAGAAAGAAATCAAAAGAACTGAGGAGCTTGTGGAGAAAAGCTATACACCAACAAATCTTGTTACTTCGAATGGAAAAAGAAAACCAGAAACTTGAAGCAAGCAGAGATGAACTCCAGTCCAGAAAAGTTAAATTAGACTATGAAGAAGTTGGTGCATGTCAGAAAGAGGTCTTAATAACTTGGGATAAGAAGTTGTTAAACTGCAGAGCTAAAATCAGATGTGATATGGAAGATATTCATACTCTTCTTAAAGAAGGAGTTCCCAAAAGTCGACGAGGAGAAATTTGGCAGTTTCTGGCTTTACAGTACCGACTCAGACACAGATTGCCTAATAAACAACAGCCTCCTGACATATCCTATAAGGAACTTTTGAAGCAGCTCACTGCTCAGCAGCATGCGATTCTCGTGGATTTAGGAAGGACGTTTCCTACTCACCCTTACTTTTCAGTACAGCTTGGGCCAGGACAGCTGTCACTGTTTAACCTCCTGAAAGCCTATTCTTTGCTGGACAAAGAAGTGGGATACTGTCAGGGGATCAGCTTTGTGGCTGGAGTCCTGCTTCTGCACATGAGTGAAGAGCAAGCCTTTGAAATGCTGAAATTCCTCATGTATGACCTCGGCTTCCGCAAGCAGTACAGACCTGACATGATGTCGCTGCAGATTCAAATGTACCAGCTGTCCAGGCTCCTTCATGACTATCACAGAGATCTCTACAATCACCTTGAAGAAAATGAAATCAGCCCCAGTCTTTATGCTGCCCCCTGGTTCCTCACATTGTTTGCCTCTCAGTTTTCATTAGGATTTGTAGCCAGAGTTTTTGATATTATTTTTCTTCAGGGAACTGAAGTTATATTCAAGGTTGCACTCAGCCTACTGAGCAGCCAAGAGACACTTATAATGGAATGTGAGAGCTTTGAAAATATTGTTGAGTTTCTTAAAAACACGCTACCTGATATGAATACCTCTGAAATGGAAAAAATTATTACCCAGGTTTTTGAGATGGATATTTCTAAGCAGTTGCATGCCTATGAGGTGGAATATCATGTGCTACAGGATGAGCTTCAGGAATCTTCATATTCCTGTGAGGATAGTGAAACTTTGGAGAAGCTGGAGAGGGCCAATAGCCAACTGAAAAGACAAAACATGGACCTCCTAGAAAAATTACAGGTAGCTCATACTAAAATCCAGGCCTTGGAATCAAACCTGGAAAATCTTTTGACGAGAGAGACCAAAATGAAGTCTTTAATCCGGACCCTGGAACAAGAAAAAATGGCTTATCAAAAGACAGTGGAGCAACTCCGGAAGCTGCTGCCCGCGGATGCTCTAGTCAATTGTGACCTGTTGCTGAGAGACCTAAACTGCAACCCTAACAACAAAGCCAAGATAGGAAATAAGCCATAATTGAAG(SEQIDNO22)AS160的新型同种型3的通过EditSeq(Lasergene)翻译的氨基酸序列(SEQIDNO23)示于下列MEPPSCIQDEPFPHPLEPEPGVSAQPGPGKPSDKRFRLWYVGGSCLDHRTTLPMLPWLMAEIRRRSQKPEAGGCGAPAAREVILVLSAPFLRCVPAPGAGASGGTSPSATQPNPAVFIFEHKAQHISRFIHNSHDLTYFAYLIKAQPDDPESQMACHVFRATDPSQVPDVISSIRQLSKAAMKEDAKPSKDNEDAFYNSQKFEVLYCGKVTVTHKKAPSSLIDDCMEKFSLHEQQRLKIQGEQRGPDPGEDLADLEVVVPGSP⑶CLPEEADGTDTHLGLPAGASQPALTSSRVCFPERILEDSGFDEQQEFRSRCSSVTGVQRRVHEGSQKSQPRRRHASAPSHVQPSDSEKNRIMLFQVGRFEINLISPDTKSVVLEKNFKDISSCSQGIKHVDHFGFICRESPEPGLSQYICYVFQCASESLVDEVMLTLKQAFSTAAALQSAKTQIKLCEACPMHSLHKLCERIEGLYPPRAKLVIQRHLSSLTDNEQADIFERVQKMKPVSDQEENELVILHLRQLCEAKQKTHVHIGEGPSTISNSTIPENATSSGRFKLDILKNKAKRSLTSSLENIFSRGANRMRGRLGSVDSFERSNSLASEKDYSP⑶SPPGTPPASPPSSAWQTFPEEDSDSPQFRRRAHTFSHPPSSTKRKLNLQDGRAQGVRSPLLRQSSSEQCSNLSSVRRMYKESNSSSSLPSLHTSFSAPSFTAPSFLKSFYQNSGRLSPQYENEIRLMEKGEKGPHLPAAMSP.VWEEPLSLLAGSPGGSAFSSGLLLP.TNLPQQCNSKMDWTGTSCCHCPPSLQPWRRNRWLYSCLGRMTQKRLKKERNQKN.GACGEKLYTNKSCYFEffKKKTRNLKQAEMNSSPEKLN.TMKKLVHVRKRS..LGIRSC.TAELKSDVIWKIFILFLKKEFPKVDEEKFGSFWLYSTDSDTDCLINNSLLTYPIRNF.SSSLLSSMRFSWI.EGRFLLTLTFQYSLGQDSCHCLTS.KPILCffTKKffDTVRGSALffLESCFCT.VKSKPLKC.NSSCMTSASASSTDLT.CRCRFKCTSCPGSFMTITEISTITLKKMKSAPVFMLPPGSSHCLPLSFH.DL.PEFLILFFFRELKLYSRLHSAY.AAKRHL.WNVRALKILLSFLKTRYLI.IPLKWKKLLPRFLRWIFLSSCMPMRWNIMCYRMSFRNLHIPVRIVKLWRSWRGPIAN.KDKTWTS.KNYR.LILKSRPffNQTffKIF.RERPK.SL.SGPffNKKKffLIKRQffSNSGSCCPRML.SIVTCC.ET.TATLTTKPR.EISHN.(SEQIDNO23)术语“AS160样蛋白质”是指AS160的同种型2或3的两个或任一个。术语“AS160的同种型2”是指其基因是AS160基因的天然发生的变体的蛋白质，在所述基因中缺失外显子11和12。术语“AS160的同种型3”是指其基因是AS160基因的天然发生的变体的蛋白质，在所述基因中与全长AS160相比较缺少外显子12。此外，如果将AS160样蛋白质的序列与AS160的序列相比较，短的错配可存在于AS160样蛋白质。短的错配意味着涉及达到5个毗连的氨基酸，优选达到4个，更优选达到3个，更优选达到2个，最优选达到1个毗连的氨基酸的添加、缺失或置换。在天然发生的AS160样蛋白质内，与AS160相比较，可以存在达到5个添加、缺失和/或置换，优选达到4个，更优选达到3、2或1个添加、缺失和/或置换。示例性缺失和置换是上面提及的缺失和置换，即在对应于由人AS160基因的nt2594-2596编码的位置的位置上1个氨基酸的缺失，或在对应于由人AS160基因的nt3827-3829编码的位置的位置上的置换(例如Ala—Val)。要指出的是期望AS160样蛋白质或编码其的核酸还可来自除了人以外的物种，包括但不限于哺乳动物，例如猴子、啮齿类动物(例如，小鼠或大鼠)、狗、猫、牛、猪、马、绵羊、山羊；或禽类例如鸡；或两栖类动物，例如蛙；然而，哺乳动物或人氨基酸和核酸序列是优选的。对应于本文中指定的人序列的位置的非人物种的AS160或AS160样蛋白质序列中的位置可通过本领域技术人员已知的序列比对来确定。在本发明的一个实施方案中，AS160样蛋白质包含下述或由下述组成天然发生的AS160样蛋白质的序列(例如SEQIDNO:3或SEQIdNO23)和C-和/或N-末端添力口，例如与如下文所示的蛋白质异源的最多30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸的短C-和/或N末端序列。因此，特征“AS160样蛋白质”涉及，例如1)由包含或具有与根据SEQIDNO1或SEQIDNO22的核酸序列90%或更多，优选95%或更多，更优选97%或更多，更优选99%或更多的序列同源性的核酸编码的蛋白质，2)由包含或具有根据SEQIDNO:1或SEQIDNO22的核酸序列的核酸编码的蛋白质，或3)由在严格条件下与具有根据SEQIDNO:1或SEQIDNO22的核酸序列的核酸杂交的核酸编码的蛋白质，或4)具有根据SEQIDNO:3或SEQIDNO23的氨基酸序列的蛋白质，或5)具有与SEQIDNO:3或SEQIDNO23的95%或更多，优选97%或更多，更优选98%或更多，更优选99%或更多以及优选99.5%或更多的序列同源性的氨基酸序列的蛋白质，6)具有已知的AS160的氨基酸序列(优选，人AS160的氨基酸序列和更优选根据序列NM_014832(参见EMBL数据库)的AS160的氨基酸序列)但当与该AS160氨基酸序列相比较时缺少氨基酸600至800，优选缺少氨基酸650至770，更优选缺少氨基酸670至750，更优选氨基酸675至745和最优选缺少氨基酸678至740的蛋白质，或7)具有已知的AS160的氨基酸序列(优选，人AS160的氨基酸序列和更优选根据序列NM_014832(参见EMBL数据库)的AS160的氨基酸序列)但缺少由外显子12编码的氨基酸(优选缺少氨基酸733至740)的蛋白质，8)如上在1至7下所定义的AS160样蛋白质之一的功能性片段或功能性衍生物，上述蛋白质优选具有至少一个如上和如下说明的AS160样蛋白质的功能性特征。片段是当与全长蛋白质相比较时，携带1个或更多个的末端(η-和/或C-末端)或内部缺失(1个、2个或更多个氨基酸的缺失)的蛋白质。蛋白质的功能性片段是该蛋白质的任何片段，其具有至少一个，以及优选2个或更多个全长蛋白质的功能性特征。术语蛋白质的衍生物与天然发生的形式相比较(在本申请上下文中，特别地与根据SEQIDNO3或SEQIDNO23的AS160样相比较)包含非缺失的任何类型的蛋白质修饰。蛋白质的功能性衍生物是该蛋白质的任何衍生物，其具有至少1个，以及优选2个或更多个未修饰的蛋白质的功能性特征。本发明还包括AS160样蛋白质的片段的功能性衍生物。氨基酸或核酸序列的同源性的测定可以例如通过使用程序GAP(GCGProgramPackage,GeneticComputerGroup1991)或本领域内已知的任何其他程序来进行。分离的多核苷酸和寡核苷酸可用于在不同严格性条件下杂交。当两个分子的单链形式在适当的反应(“退火”或杂交)条件(取决于周围介质的温度和离子强度)下可退火形成新的双链核酸分子时，核酸分子可与另一个核酸分子杂交。杂交需要两个退火的核酸分子包含互补序列。取决于选择的退火条件，严格性条件，有可能发生碱基间的错配而不阻止双链形成。术语严格性描述了影响两个单链核酸分子的杂交的特异性或退火的反应条件。严格性，和从而反应的特异性取决于用于反应的温度和缓冲液条件等严格性，并且因此特异性可以例如通过增加反应温度和/或降低反应缓冲液的离子强度来增加。用于核酸杂交的适当的严格性条件取决于核酸的长度、类型和它们的互补程度。可变因素在本领域内是已知的。两个退火核酸序列之间的相似性或同源性的程度越大，则具有这些序列的核酸的杂交产物的解链温度越高。核酸杂交的相对稳定性依赖形成双链的单链核酸的类型RNA:RNA>DNA:RNA>DNAiDNA0对于长度大于100个核苷酸的杂交产物，用于计算解链温度的公式在本领域内是已知的。对于更短的杂交产物(例如，寡核苷酸)，解链温度的计算取决于长度，其中错配变得更重要。例如，如果杂交在室温下于2xSSC溶液中进行，则低严格性(和从而低反应和杂交特异性)的条件存在。高严格性条件包括例如在68°C下于0.IxSSC和0.SDS溶液中的杂交反应。在本发明的上下文中，术语“在严格性条件下杂交”是指进行杂交反应和随后的清洗过程的条件，在该条件下具有一定互补性的核苷酸序列通常保持杂交。对于给定的核酸组的这样的条件的选择在普通技术人员的能力范围内，适当的方案可见于关于标准方法的熟知的文献例如"CurrentProtocolsinMolecularBiology，，，JohnWiley&Sons，N.Y.(1989),6.3.1至6.3.6中。在本发明的不同方面内的严格性条件下的杂交优选理解为将标记的探针与待分析的核酸样品在65°C下，或在寡核苷酸探针的情况下，在比由寡核苷酸和样品组成的双链体的退火或解链温度(退火和解链温度在下面理解为同义词)低5°C下于50mMTrispH7.5、IMNaCl、1%SDS、10%硫酸葡聚糖，0.5mg/ml变性的鲑精或鲱精DNA中杂交过夜。在室温下于2xSSC中清洗10分钟。在65°C(或在寡核苷酸的情况下比退火温度低5°C)下于lxSSC/0.1%SDS中清洗30分钟。在65°C(或在寡核苷酸的情况下比退火温度低5°C)下于0.lxSSC/0.1%SDS中清洗30分钟。在一个实施方案中，AS160样蛋白质由包含、基本上由或由SEQIDNO:1或SEQIDNO:23的序列组成的核酸编码。“基本上由......组成”涉及编码蛋白质的核酸，所述蛋白质由SEQIDNO:1或23编码的序列和短C-和/或N-末端序列组成，所述段C-和/或N-末端序列为与蛋白质同源或异源的至多30，25，20，15，10，9，8，7，6，5，4，3，2或1个氨基酸。这些序列可因遗传操作例如特定限制性位点的使用而产生，或可以是纯化蛋白质所需要的，例如标签例如His-标签、Strep-标签、Arg-标签、c-myc-标签或Flag-标签。特征“异源氨基酸”或“与蛋白质异源的氨基酸”是指任何氨基酸，所述氨基酸与位于紧邻天然发生的AS160样蛋白质、AS160蛋白质或其剪接变体的氨基酸不同。因此，包含至少1个异源氨基酸的AS160样蛋白质是指与任何天然发生的AS160蛋白质或其剪接变体不同的蛋白质。新型AS160样蛋白质的功能性特征可以是本文中详细说明的AS160样蛋白质的任何特征。此类功能性特征的实例包括但不限于例如其组织分布、其在胰岛素刺激的信号转导调控中的参与(所述调控例如胰岛素刺激的葡萄糖摄入的调控、尤其是刺激；AS160和AKT的磷酸化的调控、尤其是刺激；PI3K(PI3激酶)和MEKK/ERK激酶的活性的调控，尤其是刺激；GLUT4至质膜的转运的调控、尤其是刺激)、AS160样蛋白质与其他蛋白质的相互作用(例如AS160样蛋白质和GLUT4的相互作用)以及任何其他其的功能性特征，特别地如本申请的上下文和下面所示的实验结果中所描述的特征。根据优选实施方案，检测系统在细胞中。基于细胞的系统是有利的，因为其允许通过繁殖细胞容易地扩增检测系统，并且允许细胞机制例如胰岛素的下游或AS160样蛋白质的下游或上游的信号转导组分，因为这些可用于检测指示改变的细胞的葡萄糖摄入的信号。适合于本发明的背景的细胞的实例包括但不限于L6细胞、3T3脂肪细胞、HEK293、745-A、A-431、心房肌细胞、BxPC3、C5N、Caco-2、Capan-1、CC531、CFPAC、CHO,CHOΚΙ、C0S-1、C0S-7、CV-I、EAHY,ΕΑΗΥ926、F98、GH3、GP&envAM12、H-295R、Η-4-ΙΙ-Ε、HACAT,HACATA131、HEK、HEL、HeLa、H印G2、HighFive、Hs766T、HT29、HUV-ECR24、HUV-EC-C、IEC17、IEC18,Jurkat,K562、KARPAS-299、L929、LIN175、MAt-LYLU、MCF-7、MNEL、MRC-5、MT4、N64、NCTC2544、NDCKII、Neuro2A、NIH3T3、NT2/D1、P19、原代神经元细胞、原代树突细胞、原代人或哺乳动物成肌细胞、原代脂肪细胞、原代角质形成细胞、SF9、SK-UT-1、ST、Sff480、SWU-20S、U-373、U-937、横纹肌肉瘤(RD)和Y_l。其他适当的细胞对于本领域技术人员来说是已知的。然而，优选检测系统在胰岛素依赖性组织(例如脂肪组织、肝、骨骼肌、心肌、血管平滑肌和活性乳腺，优选骨骼肌、脂肪或肝)的细胞中，因为这些细胞是哺乳动物体内的主要胰岛素依赖性细胞类型。特别适合的细胞包括骨骼肌细胞、脂肪细胞和/或肝细胞，因为此类细胞在2型糖尿病相关组织中可能最好地反映对物质的应答。直接从动物或人培养的细胞已知为原代细胞。除了一些来源于肿瘤的细胞系外，大多数原代细胞培养物具有有限的生命期。在一定次数的群体倍增后，细胞经历衰老过程并停止分裂，尽管通常保持存活力。已建立的或无限增殖化的细胞系已通过随机突变或有意修饰例如人工表达端粒酶基因获得无限增殖的能力。存在许多代表特定细胞类型的良好建立的细胞系并且选择适当的细胞系在技术人员的知识范围之内。因此，在本发明的优选实施方案中，细胞是细胞系。细胞系是在培养中增殖的细胞群体，其来源于单个共同的祖先细胞，从而在遗传上与共同的所述祖先细胞一致。优选细胞系是L6细胞(参见实施例)、HEK293细胞(原代人胚肾)、3T3细胞(鼠胚成纤维细胞)、CHO细胞(中国仓鼠卵巢)、C0S-7细胞(非洲绿猴细胞系)、HeLa细胞(人上皮样宫颈癌)、JURKAT细胞(人T-细胞白血病)、BHK21细胞(仓鼠正常肾，成纤维细胞)和MCF-7细胞(人乳腺癌)。优选骨骼肌、肝或脂肪组织的细胞系包括但不限于骨骼肌L6细胞(也参见实施例)、C2C12(小鼠)，优选DSMACC2853(参见下面)。脂肪组织3T3脂肪细胞、棕色脂肪细胞细胞系ΗΙΒ-1Β)，品系F44-2A、美国专利6，071，747中公开的细胞系。肝:BNLCL.2(小鼠，BALB/c)、BNLSVΑ.8(小鼠)、RLC-18(大鼠)WRL68。特别优选细胞系(L6-GLUT4myC-tetR-AS160样)(其包含处于四环素响应启动子系统控制之下的编码AS160的同种型2的基因)于2007年6月20日在国际承认用于专利稈序的微牛物保存布汰佩斯条约下以登录号DSMACC2853(称为L6-GLUT4myc_tetR-AS160样)保藏在"DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH，，(DSMZ),Inhoffenstra^e7B,38124Braunschweig，GERMANY。为了筛选AS160样蛋白质，和特别地AS160的同种型2介导的效应，可将使用上述细胞系获得的结果与使用相同的但缺乏编码AS160样蛋白质的基因的导入的细胞系(L6-GLUT4myc-tetR)(该细胞系也于2007年6月20日在国际承认用于专利稈序的微牛物保存布汰佩斯条约下以登录号DSMACC2852(称为L6-GLUT4myc-tetR)保藏在“DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH，，(DSMZ),Inhoffenstra^e7B,38124Braunschweig,GERMANY)获得的结果相比。已如实施例2中所述制备两种细胞系(L6-GLUT4myc-tetR_AS160样和L6-GLUT4myc-tetR)。简而言之，从pCDNA3.1(+)/TR(Invitrogen)分离四环素阻抑物(TR)，将其克隆入图3中所示的pIRESpuro2的NheI和NotI位点以获得pIRESpuro2/TR，将pIRESpuro2/TR转染入稳定表达GLUT4myc的L6细胞(大鼠骨骼肌细胞)(L6_GLUT4myc，描述于Wang等1998中)。对于L6-GLUT4myc_tetR-AS160样细胞，额外地将包含AS160的同种型2基因的pCDNA5载体(Invitrogen)导入细胞。类似地，可按照本领域技术人员已知的标准方案使用相似的方法制备表达AS160样蛋白质的同种型3的细胞系。关于培养，可将细胞系于细胞培养箱中培养并且维持在适当的温度下和气体混合物(通常，37°C，5%CO2)中。培养条件对于每一种细胞类型来说变化很广泛，用于特定细胞类型的条件的变化可导致不同的表达的表型。除了温度和气体混合物以外，培养系统中最常改变的因素是生长培养基。生长培养基的配方可在PH、葡萄糖浓度、生长因子和其他营养成分的存在上发生改变。还可向生长培养基中加入抗生素。其中对培养细胞进行的常见操作是培养基更换和传代细胞。然而，适当条件的选择对于本领域技术人员来说是已知的。细胞或细胞系可被遗传改造从而包括本发明的检测系统。检测系统可位于瞬时或稳定转染的细胞或细胞系中。用于将转基因导入受体细胞的方法称为转染。使用DNA的转染产生稳定的以及不稳定的(瞬时的)细胞或细胞系。瞬时细胞系反映转染的DNA以染色体外形式存在；稳定的细胞系由至基因组内的整合产生。可通过对于本领域技术人员来说是已知的和经改造适合于各细胞类型的许多方法将转基因导入细胞。本领域熟知的用于导入和表达核酸分子的重组DNA克隆技术可用于导入和表达转基因。可使用任何适当的方法，包括病毒载体、化学转染剂、电穿孔、磷酸钙共沉淀和DNA的直接扩散来转染细胞。用于将检测系统导入受体细胞的的适当的方法详述于实施例2中并且可经改造以适用于各受体细胞。如本文中所使用的，载体是将转基因运至细胞的物质，其可包含适当的转录和翻译控制信号例如启动子。载体可以是质粒、病毒或本领域已知的其他载体。启动子可以是诱导型或组成型启动子，一般(general)或细胞特异性启动子，核或细胞质特异性启动子。启动子、载体和其他元件的选择是在本领域普通技术人员的水平以内的常规设计问题。许多此类元件描述于文献中并且可通过商业提供者获得。通常，转移的方法包括选择标记至细胞的转移。适当的启动子和载体公开于实施例和本说明书中。通常，利用任何上述方法转染细胞系，其中转基因与选择标记有效连接。在转染后，在富集培养基中培养细胞例如进行数天，然后变换到选择培养基中。转染的细胞展现对选择的抗性并且能够生长，然而未转染的细胞通常死亡。选择标记的实例包括嘌呤霉素、zeocin、新霉素(Iieo)和潮霉素B(其分别赋予对嘌呤霉素，zeocin,氨基糖苷G-418和潮霉素的抗性)，和/或实施例中所使用的任何选择标记。然而，本领域技术人员已知的其他选择方法也可以是适合的。在本发明的方法的步骤b)中，通过检测指示改变的细胞的葡萄糖摄入的信号将测试物质鉴定为改变细胞的葡萄糖摄入的物质。信号可以是指示改变的细胞的葡萄糖摄入的任何适当的信号；然而，信号可以是与AS160样蛋白质相关的胰岛素刺激的信号转导的任何组分或部分。特别地，其可以是AS160或AKT的磷酸化程度、PI3K(PI3激酶)或MEKK/ERK激酶的活性、GLUT4至质膜的转运或细胞的葡萄糖摄入的增加。用于测量AS160样蛋白质信号转导途径的前述组分的适当方法在本领域内是已知的并且也在实施例中进行了详述。优选，可检测的信号是在细胞中表达的AS160样蛋白质(同种型2和/或3)的量、磷酸化的ΑΚΤ、磷酸化的AS160样蛋白质、GLUT4至质膜的转运、GLUT4在细胞中的分布或细胞对葡萄糖的摄入。如可在实施例中所显示的，所有这些信号都与细胞，优选胰岛素敏感性组织的细胞的葡萄糖摄入相关。可检测信号可以是细胞中AS160样蛋白质的量，因为该蛋白质的量指示葡萄糖的摄入。如果该蛋白质的量增加，细胞特别是胰岛素敏感性细胞的葡萄糖摄入也增加。测定特定蛋白质的量的方法对于本领域技术人员来说是已知的，其包括例如Western印迹法和使用特异性抗体的检测，可如实施例中所述进行所述方法。实施例中也提供了特异性抗体。备选地，抗AS160样单克隆或多克隆抗体可根据本领域技术人员的知识来产生，和利用酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)和荧光激活细胞分选术(FACS)来检测。本领域内已知的许多其他技术可用于定量给定的蛋白质的量。此类技术包括但不限于免疫学技术例如ELISA或RIA或定量分析技术例如分光术或火焰色谱法(flamechromatography)。备选地，可通过杂交法或核酸扩增法测量AS160样-mRNA的量而非蛋白质的量。此类方法对于技术人员来说是已知的，其包括斑点杂交法、Northern杂交法或RT-PCR法。备选可检测的信号可以是磷酸化的AKT和/或磷酸化的AS160样蛋白质的量，因为此类蛋白质的磷酸化程度指示葡萄糖的摄入。如果磷酸化的量或程度增加，则细胞特别是胰岛素敏感性细胞的葡萄糖摄入也增加。测定磷酸化的量或程度的方法对于技术人员来说是已知的并且包括此类磷酸化蛋白质的特异性抗体的使用，如实施例中所描述的。其他可检测信号可以是GLUT4至质膜的转运或GLUT4在细胞中的分布，因为GLUT4的转运程度指示葡萄糖的摄入。如果质膜中GLUT4的量增加，则细胞，特别是胰岛素敏感性细胞的葡萄糖摄入也增加。测定GLUT4至质膜的转运或GLUT4在细胞中的分布的方法对于技术人员来说是已知的并且包括在胞内Western技术或ACUMEN技术中使用myc-标记的GLUT4。可如实施例中所述进行此类方法。备选地，细胞的葡萄糖摄入可以例如通过使用标记的葡萄糖或标记的葡萄糖衍生物来测定。适当的标记包括例如可检测的标签、放射性同位素例如3H或14C或荧光标记。此类标记的葡萄糖或标记的葡萄糖衍生物包括但不限于2-氟-2-脱氧-D-葡萄糖、2-脱氧[14C]葡萄糖和[14C]甲基葡萄糖。优选，使用放射性标记的2-脱氧葡萄糖。可如实施例中所述进行该方法。如上所述的，本发明的方法可用于物质在高葡萄糖条件下进行检测，所述高葡萄糖条件更好地反映了糖尿病患者的状况。高葡萄糖条件是具有升高的葡萄糖浓度的条件。人血中葡萄糖的正常/安全水平在3.5和7.SmM之间。因此，高葡萄糖条件是葡萄糖浓度高于正常水平的条件。具体地，用于本发明的方法的葡萄糖浓度可以是至少10mM，优选至少15mM,更优选至少25mM葡萄糖。使用本发明的方法检测的物质可以是任何测试物质或任何化学性质的测试化合物。其可以是已知的用于除了2型糖尿病以外的疾病的药物或药剂。备选地，其可以是已知的但仍然不知具有疗效的化合物。在另一个实施方案中，化合物可以是新型的或到目前为止未知的化合物。在另一个本发明的筛选方法的实施方案中，以化合物文库的方式提供测试物质。化合物文库包含多种化合物并且已经由任何多个来源汇集而成，包括化学合成的分子和天然产物，或已经通过组合化学技术产生。它们特别适合于高通量筛选。它们可包含特定结构的化合物或特定生物例如植物的化合物。在使用本发明的背景中，化合物文库优选是包含蛋白质和多肽或小分子的文库。有利地，在机器人系统(roboticssystem)(例如包括机器人涂板和机器人液体转移系统，例如使用微观流体的，即通道结构化的(charmelledstructured))中进行本发明的方法。在本发明的另一个实施方案中，以高通量筛选系统的形式进行方法。在这样的系统中，有利地使筛选方法自动化和小型化；特别地其使用小型化的孔和受机制人控制的微观流体。高通量筛选(HTS)是进行特别地用于药物发现和与生物和化学领域相关的科学实验的方法。HTS允许研究者在短时时内，通常通过现代机器人、数据处理和控制软件、液体操作装置和灵敏的检测器的组合有效地进行数百万个生物化学、遗传学或药理学检测。通过该方法，人们可快速鉴定调节特定生物分子途径的活性化合物；特别是改变细胞的葡萄糖摄入的物质。本质上，HTS使用在相对短的时间内收集大量关于许多物质对于特定靶的作用的实验数据的方法。筛选，在该背景中，是可随后将所有这些数据用于其的更大的实验，其唯一目的通常是检测科学假设。关于HTS，可将包含AS160样蛋白质或编码所述蛋白质的核酸的细胞接种在组织板，例如多孔板，例如96孔板中。然后将板中的细胞与测试物质接触，进行足以刺激和产生如上定义的适当的可检测信号的时间。测试物质在整个板上不同的孔之间可以是不同的。在允许产生信号的温育时间过后，通过人工或利用机器对所有板上的孔进行测量。当研究者将使用显微镜检查法(例如)寻找孔中测试化合物的变化，从而寻找计算机本身不能容易测定的作用时，可能必需进行人工测量。否则，专门的自动化分析机器可在孔上进行许多实验(例如分析特定频率的光)。在该情况下，机器例如以数值网格的形式输出各实验的结果，其中各数字映射获自单个孔的值。依赖于该第一测定的结果，研究者可通过使用将与被鉴定为活性(即改变细胞的葡萄糖摄入)的物质相似的物质用于新测定板内在相同的筛选内进行追踪观察测定，然后再进行实验以收集进一步的数据，对化合物的结构进行最优化以提高化合物对细胞的作用。自动化是HTS的有效性的重要因素。专业化的机器人通常在单个测定板从产生至最终的分析的整个时限中负责许多过程。HTS机器人通常可同时制备和分析许多板，从而进一步加速数据收集过程。本发明的另外的目的涉及用于鉴定提高葡萄糖至细胞内的摄入的物质的检测系统，所述检测系统包括编码AKT底物160kDa样蛋白质(AS160样蛋白质)或其功能变体的基因；和提供基因的可控表达的诱导型启动子，其中AS160样蛋白质的激活产生可检测的信号。要指出的是，该检测系统的所有特征可如对于本发明的方法所详细描述的那样进行进一步定义。该检测系统特别有用，因为其允许鉴定提高(即增加)细胞的葡萄糖摄入的物质或用作研究2型糖尿病的模型。AS160样蛋白质和提供基因的受控表达的诱导型启动子的组合使得能够测定具有和不具有AS160样蛋白质的相同细胞中的效应。因此，可将与不表达AS160样蛋白质的细胞相比在表达AS160样蛋白质的细胞中获得的信号转导的差异归因于AS160样蛋白质。由于AS160样蛋白质可用于鉴定2型糖尿病(如上所详述的)的新型潜在药物或作为主要胰岛素敏感性组织中的关键的蛋白质，因而此类检测系统可用于获得关于2型糖尿病的病理生理学和治疗的新见解。优选，本发明的检测系统位于细胞，特别地遗传改造的细胞中。细胞可以是本发明的方法的上下文中公开的任何细胞。特别地，可将基因和/或启动子导入遗传改造的细胞。本发明的检测系统包含提供基因的受控表达的诱导型启动子。基因的受控表达意指在对检测系统化学或物理刺激时表达可被诱导或阻抑，所述刺激可以如研究者或实验者所期望的那样被应用。启动子代表了可与其他调控区(增强子、沉默子、边界元件/隔离子)合作作用指导给定的基因的转录水平的至关重要的元件。诱导型启动子在对特定化合物即诱导物(化学刺激物)的存在或对确定的物理条件例如升高的温度(物理刺激)的响应中被激活。诱导型启动子是基因工程中非常有效的工具，因为与其有效连接的基因的表达可根据需要被打开或关闭。存在系列化学调控的启动子，包括其转录活性受醇、四环素、类固醇、金属和其他化合物的存在或不存在调控的启动子。物理调控的启动子包括其转录活性受光和低温或高温的存在或不存在调控的启动子。优选，化学调控的启动子应当来源于在进化上远离其中需要其作用的细胞的生物。因此，有待用于哺乳动物细胞中的启动子大部分来源于生物体例如酵母、大肠杆菌(E.coli)或果蝇。具体的实例是醇调控的启动子系统(醇脱氢酶I(alcA)基因启动子和反式激活蛋白AlcR)；四环素调控的启动子系统(四环素阻遏蛋白质(TetR)，四环素操纵子序列(tetO)，四环素反式激活融合蛋白(tTA)，其为TetR和单纯疱疹病毒蛋白质16(VP16)激活序列的融合蛋白质，实施例2中公开的启动子系统)；类固醇调控的启动子系统(类固醇应答启动子，例如，基于大鼠糖皮质激素受体(GR)的启动子或基于人雌激素受体(ER)的启动子)；或来源于酵母、小鼠和人的金属硫蛋白质基因的金属调控的启动子。然而，诱导型启动子优选是四环素诱导型启动子，更优选实施例2中所述的启动子系统。本发明的其他方面涉及包含AS160样蛋白质的检测系统用于鉴定改变，特别地提高葡萄糖至细胞内的摄入的物质的用途，如已在本方法的背景中对于本发明的检测系统所详细描述的那样。所使用的检测系统可如上面关于本发明的方法或检测系统所述的那样进行进一步详细说明。也根据上述公开内容，AS160样蛋白质可用于2型糖尿病的模型中，其中将相应地应用关于本发明的方法或检测系统的上述详细内容。本发明的其他实施方案涉及由或基本上由下述组成的多肽根据SEQIDNO3或23的氨基酸序列或根据SEQIDNO:1或22的序列所编码的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明涉及由或基本上由下述组成的多核苷酸根据SEQIDNO:1或22的多核苷酸序列或编码根据SEQIDNO:3或23的多肽的多核苷酸序列。本发明的另一个实施方案涉及特异性结合下述多肽的抗体或其功能性片段，所述多肽由或基本上由根据SEQIDNO:3或23的氨基酸序列或根据SEQIDNO:1或22的序列所编码的氨基酸序列组成。适当的抗体或其功能性片段的制备在本领域内是熟知的，例如，通过用AS160样蛋白质或其片段(必要时在例如弗氏佐剂和/或氢氧化铝凝胶存在的情况下)免疫哺乳动物，例如兔子(参见，例如，Diamond,B.Α.等(1981)TheNewEnglandJournalofMedicine=1344-1349)0随后可使用熟知的方法从血液分离作为免疫反应的结果在动物中形成的多克隆抗体，并且例如，通过柱层析进行纯化。产生单克隆抗体的适当的方法在本领域内也是熟知的(参见例如Winter，G.&Milstein，C.(1991)Nature，349，293-299和下面所列的关于标准方法的文献)。在本发明的上下文中，术语抗体或抗体片段还包括重组抗体或其抗原结合部分，例如嵌合抗体、人源化抗体、多功能抗体、双特异性抗体、寡特异性抗体或单链抗体或抗体F(ab)或F(ab)2片段(参见例如EP-B1-0368684，WO88/01649,WO93/06213,WO98/24884，US4，816，567或US4,816,397)。根据本发明的特异性抗AS160样抗体在标准实验室条件下(例如在Western印迹法等中)与AS160样蛋白质的相互作用应当比与AS160的同种型1的相互作用更强。根据一个实施方案，特异性抗AS160样抗体在标准实验室条件下与AS160的新型同种型2(如本文中所鉴定的)的相互作用比与AS160蛋白质的同种型1或3中的一个或两者的相互作用更强(即特异性AS160，同种型2抗体)。根据另一个实施方案，根据本发明的特异性抗AS160样抗体在标准实验室条件下与AS160的同种型3的相互作用比与AS160蛋白质的同种型1或2的一个或两者的相互作用更强(即特异性AS160，同种型3抗体)。根据另一个实施方案，本发明涉及异源表达多肽的细胞或用多核苷酸稳定地或瞬时地转染的细胞，所述多肽由或基本上由根据SEQIDNO:3或23的氨基酸序列或根据SEQIDNO:1或22的序列所编码的氨基酸序列组成，所述多核苷酸由或基本上由根据SEQIDNO:1或22的多核苷酸序列或编码根据SEQIDNO3或23的多肽的多核苷酸序列组成。细胞可以是能够用核酸载体稳定或瞬时转染的且能够表达异源基因的任何原核或真核细胞。此类细胞主要包括原代细胞以及来自细胞培养物的细胞，优选真核细胞培养物(其包括来源于多细胞生物体和组织的细胞(例如HeLa、CHO,COS、SF9或3T3细胞)或来源于单细胞生物体例如酵母的细胞(例如粟酒裂殖酵母(s.pombe)或酿酒酵母(s.cerevisiae)))；或原核细胞培养物(优选毕赤酵母属(Pichia)或大肠杆菌细胞)。来源于组织和样品可利用熟知的技术例如血液采集、组织穿刺(tissuepunction)或外科手术技术获得。本发明的另一方面涉及SiRNA(小抑制RNA)，其能够负干扰任何AS160样同种型2和/或3的表达和/或活性，例如对于SEQIDNO1或SEQIDNO.22的DNA序列的至少部分是特异性的或部分与其互补术语“siRNA”是指诱导RNA干扰(RNAi)途径(关于RNAi干扰途径，参见例如Elbashir等，GenesandDevelopment(2001)15188-200,Tuschl.等，(1999)，GenesandDevelopment,13:ρ·3191-3197或Zamore等，Cell(2000)第101卷，p.25-33)的小抑制RNA。在本发明的上下文中，术语“siRNA”包括两条分开的链的双链体以及可形成包含双链体区域的发夹结构的单链，即所谓的shRNA-短发夹RNA。siRNA分子在长度上可不同(长度通常15至35、18至30或20至25个核苷酸)；然而，适当长度的选择在本领域内是熟知的。此外，siRNA可在它们与在反义链中其靶mRNA的互补程度上发生变化。互补性的适当程度的选择在本领域也是熟知的。siRNA可在有义链和/或反义链的5’和/或3’末端具有未配对的突出端碱基。针对给定的cDNA序列的siRNA的设计和制备在本领域是熟知的，参见，例如Elbashir等(2001)Nature411:494_498(关于siRNA的制备和siRNA至细胞内的转染，特别地参见P.497，右栏)和Tuschl等(1999)GenesandDevelopment13:3191-3197)。siRNA的应用方法包括化学合成或体外转录的siRNA，例如双链体或shRNA，所述siRNA随后被转染入或注射入细胞或转基因动物。还可在细胞或转基因动物中从表达载体或PCR产物表达siRNA，其中术语表达载体是指任何类型的用于驱动siRNA(双链体或shRNA)的表达的载体系统，包括穿梭载体以及病毒，例如逆转录病毒载体和慢病毒载体，如本领域内所熟知的。根据另一个方面，本发明涉及AS160样蛋白质(同种型2和/或3)或其核酸序列的用途，其用于产生能够负干扰AS160样蛋白质(同种型2和/或3)的表达和/或活性的siRNA(双链体或shRNA)。下列图和实施例将举例说明本发明，但不应当被理解为限定本发明的范围。附1显示AS160的3种不同的同种型的比较。已基于定量RTPCR(Taqman)(对于同种型2使用引物SEQIDNO7、8、9)鉴定了新型AS160样蛋白质(同种型2和新型同种型3)。全长AS160(使用引物SEQIDN019、20和21扩增的)描述于(A)中，缺少外显子11和12的AS160样蛋白质，同种型2描述于⑶中。同种型3示于(C)中(使用引物SEQIDNO16、17、18扩增的)。显示了磷酸化位点Ser-588和Thr-642(下划线标的)和错配T202和T1275(斜体)。图2(Α和B)显示AS160同种型的表达(Taqman)。通过使用特异性引物(对于全长AS160而言引物SEQIDNO4、5、6和/或19、20、21，对于AS160样使用引物SEQIDNO7、8、9以及对于同种型3使用引物16、17、18)检查3种不同同种型的表达。针对内源RPL37amRNA(使用引物SEQIDNO10、11、12扩增的)的表达标准化AS160同种型的mRNA水平。数据代表5个不同人供体。图3显示克隆AS160的同种型2的克隆策略的示意图。将来源于ρ⑶NA3.1(+)/TR的tet-阻抑物克隆入pIRESpuro2的NheI和NotI位点，从而产生pIRESpuro2/TR。图4显示L6_GLUT4myc细胞中AS160的同种型2的表达是tet-诱导型的。使用SDS-PAGE和western印迹分析法分析RIPA(放射性免疫测定)提取物。在多西环素不存在的情况下(_同种型2)或多西环素存在的情况下(+同种型2)温育细胞48小时。用特异性AS160抗体(Upstate,CatNo.:07_741)检测AS160样的表达。图5显示在AS160的同种型2的表达存在或不存在的情况下，L6_GLUT4myc细胞中胰岛素刺激的AKT激活。使用抗pAKT(Ser473)抗体(Biosource,CatNo.:44_621G)确认AKT在Ser473上的磷酸化。图6显示AKT和AS160的同种型2的磷酸化(胞内western)。在96孔板中进行胞内western分析。用多西环素预处理细胞48小时来诱导AS160的同种型2(+AS160的同种型2)表达。将胰岛素温育20分钟。磷酸-AKT抗体(Biosource,CatNo.:44_621G)检测AKT在Ser473上的磷酸化。磷酸-AS160抗体(BiosourceCatNo.:44_1071G)对于Thr642上的磷酸化位点是特异性的。标准偏差代表8个读数点。*P值<0.OOlvs.-AS160样。RU表示相对单位。图7显示AS160的同种型2对胰岛素刺激的葡萄糖摄入的作用。测量响应胰岛素的2-脱氧葡萄糖的摄入。将胰岛素温育20分钟。标准偏差代表8个读数点。<0.OOlvs.-AS160样的同种型2值。图8显示葡萄糖摄入的剂量依赖性。观察包含AS160的同种型2的L6_GLUT4myC细胞的2-脱氧葡萄糖的摄入的多西环素依赖性。将多西环素温育48小时。将胰岛素温育20分钟。标准偏差代表8个读数点。图9显示AS160的同种型2对IGF-I和AICAR刺激的葡萄糖摄入的作用。测量响应IGF-I(A)和AICAR(B)的2-脱氧葡萄糖的摄入。将IGF-I温育20分钟。将AICAR温育2小时。标准偏差代表4至8个读数点。*P<0.05vs.-同种型2-值。图10显示AS160的同种型2对二甲双胍(metformin)刺激的葡萄糖摄入的作用。测量响应胰岛素(左)和二甲双胍(右)的2-脱氧葡萄糖的摄入。在饥饿期间(3小时)温育二甲双胍，温育胰岛素20分钟。标准偏差代表4个读数点。*P<0.05vs.-AS160样值，**P<0.OOlvs.-AS160样值。图11显示AKT抑制剂的作用。通过SDS-PAGE分离10μgRIPA提取物，然后使用pAKT(Ser473)特异性抗体(Biosource，CatNo.:44_621G)通过western印迹法进行分析(A)。将细胞与渥曼青霉素(200nM;Upstate，CatNo.12-338)或AKT抑制剂Calb.(50μM,Calbiochem，CatNo.=124005)一起预温育1小时，然后用胰岛素(IOnM)刺激20分钟。测量响应单独的胰岛素和AICAR以及渥曼青霉素加胰岛素或AICR(Biomol)的组合的2-脱氧葡萄糖的摄入(B)。温育胰岛素20分钟，温育AICAR2小时。*P<0.OOlvs.-IOnmol胰岛素。图12显示葡萄糖摄入的时间依赖性。在5、15、30分钟后测量2-脱氧葡萄糖的摄入。为了诱导AS160样蛋白质的表达，用多西环素预处理细胞，或不作处理。标准偏差获自8个独立的值。图13显示MEKK/ERK抑制剂对葡萄糖摄入的作用。用多西环素诱导AS160的同种型2的表达，进行48小时(+AS160样)。饥饿细胞4小时。在饥饿培养基中温育MEKK/ERK抑制剂U0126(10μΜ、20μM，UpstateCatNo.19-147)。然后，在指定的胰岛素浓度下刺激细胞，进行20分钟。*P<0.05vs.-AS160样。图14显示胰岛素抗性的诱导(葡萄糖摄入)。为了诱导胰岛素抗性，在高葡萄糖和胰岛素存在的情况下(右)温育细胞过夜或在正常条件下(左)温育细胞过夜。通过温育多西环素进行48小时来进行同种型2表达的诱导。将胰岛素温育20分钟。标准偏差代表8个读数点。<0.05vs.-AS160的同种型2。图15显示胰岛素抗性的诱导(胞内western)。为了诱导胰岛素抗性，在高葡萄糖加胰岛素存在的情况下温育细胞过夜或在正常条件下温育细胞。通过温育多西环素48小时来进行同种型2表达的诱导。使用识别Ser473的抗体(BiosourceCatNo.:44_621G)测定AKT的活化。磷酸-AS160抗体直接针对Thr642位点。*P<0.05vs.在正常条件下的IOOnM胰岛素。图16显示二甲双胍对葡萄糖摄入的作用。用多西环素诱导所有孔中AS160的同种型2的表达，进行48小时。诱导胰岛素抗性，进行过夜。将二甲双胍(800μM)温育过夜。使细胞饥饿4小时，然后用不同的胰岛素浓度在指定的条件下进行刺激。*P<0.05vs.在无化合物下的适当的值。图17显示二甲双胍对AKT和AS160，同种型1的磷酸化的作用(胞内Western)。用多西环素诱导所有孔中AS160的同种型2的表达，进行48小时。诱导胰岛素抗性，进行过夜。将二甲双胍(800μΜ)温育过夜。使细胞饥饿4小时，然后用不同的胰岛素浓度在指定的条件下进行刺激。RU表示相对单位。图18显示GLUT4转运的分析(ACUMEN)。将细胞与多西环素一起温育以诱导AS160样蛋白质的表达或不作处理。将胰岛素温育20分钟。标准偏差获自8个单个的值。<0.05vs.L6-GLUT4-myc+100nM胰岛素。#P<0.05vs.-AS160的同种型2+100nM胰岛素。图19显示GLUT4分布(ACUMEN)的示意图。基于在不同的条件后的激光扫描荧光细胞计量术获得直方图。曲线代表总细胞计数(DNA标记)。以浅灰色显示的箭头左边的细胞对于myc-GLUT4染色是阴性的。以浅灰色显示的箭头右边的细胞代表细胞群体，其展现被转运在质膜上的myc-标记的GLUT4。图20显示用于从人睾丸cDNAPCR克隆AS160的同种型2的正向和反向引物在同种型2-编码序列(SEQIDNO13)的DNA序列上游和下游上的位置。引物以粗体打印并且以虚线下划标示；AS160样编码序列以实线下划标示。图21显示在基础和胰岛素刺激的条件下myc-GLUT4和AS160的同种型2的细胞内定位的基于免疫荧光的分析。在处理以进行免疫荧光显微镜检查之前将大鼠成肌细胞与胰岛素(IOOnM)—起温育20分钟。实施例实施例1:AS160同种型在不同组织中的表达EST的生物信息学分析显示存在3种AS160的同种型(图1A、B、C)。图1显示AS160和鉴定的新型同种型的示意图概述。使用定量RT-PCR在不同的组织中观察这些不同AS160-同种型的表达。使用TaqmanPCR，利用特异性引物对(对于全长AS160SEQIDNO:4、5和6，(或备选地19、20和21)，对于AS160样SEQIDNO:7、8和9，对于同种型3SEQNO:16、17和18)反转录和检查可商购获得的5个不同人供体的RNA。为此，将总细胞RNA的等分试样进行第一链DNA合成。反转录的cDNA用作扩增的模板。使用共同的探针测定胰岛素敏感性组织(脂肪、肌肉、肝、心脏、脑)中总ASieom表达。核糖体基因RPL37a(人(Homosapiens)核糖体蛋白质L37a，mRNA,cDNA克隆MGC26772)的内源mRNA表达用于标准化mRNA水平(SEQIDNO:10、11和12)。基于特异性引物对，可区分不同同种型的表达。利用5δCT法(Yuan等，2006)计算相对mRNA表达法。使用下列引物和探针特异性I-SEQ^IDNO~同种型1(全For5'-ATTCAGGTAGACTGTCCCCACAGTAT19长AS160)Rev5'-CCTTCTCCATCACTTGATTCTGAAG20探针FAM-MGBNFQ215‘-ATGAAATCAGACAAGACACTG~同种型2For5'-GCGTTCCCCTCTGCTGAG7(AS160-样)Rev5'-ACTCATTGCTGCAGGTAGATGAG8<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>该RT-PCR的结果示于图2中。同种型1(NM_014832_vl；EMBL)代表全长AS160。全长AS160以及同种型3主要在心脏和骨骼肌中表达(图2A和B)。代表AS160样的同种型2大部分在肾上腺和甲状腺中表达，但也在肺、肾和脑中表达(图B)。也在脂肪组织和肝中检测到表达(图2A)。与全长AS160和同种型3相比较，AS160样只是少量地在骨骼肌中表达。数据可能表明不同同种型在不同组织中的特定功能。在下列实验中，本发明者集中于同种型2(AS160样)的检查，因为其是新型的且在大多数组织中显示最高的总体表达。实施例2新型AS160样蛋白质表达构建体的克隆和四环素诱导型AS160样蛋白质表达系统的建立使用根据图21的引物(SEQIDs14禾口15)从人睾丸cDNA(Clontech，Cat#7117_l；Lot#2100009)扩增AS160样插入片段(SEQIDNO:1)；所获得的PCR片段(参见图21，插入片段以下划线标示)用作模板用于产生相应于具有用于克隆的gateway序列的编码序列的片段。将插入片段克隆入PD0NR221(Irwitrogen)，然后通过标准方法克隆入表达载体PCDNA5-T0(Invitrogen)。序列分析显示与全长AS160(NM_014832；EMBL)相比较，在AS160样中缺少外显子11和12(图1)。在位置nt606(沉默)和nt3827(Ala—Val)上鉴定了两个错配。此外，该克隆包含也在人胎盘cDNA但非在人脑cDNA中发现的3bp缺失(nt2594-2596)。对于缺少外显了11和12的同种型的表达克隆，重新修复该3bp缺失以使更能与ΝΜ_014832(EMBL)的全长序列相似。稳定地表达具有导向外表面(exofacially)的myc-标签(GLUT4myc)的葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的L6成肌细胞(大鼠骨骼肌细胞)(L6_GLUT4myC，描述于Wang等1998中)随后用于AS160样蛋白质的四环素(tet)诱导型表达。为此目的，使用来自Invitrogen的T-REx系统。该系统中的调控质粒控制处于CMV(巨细胞病毒)启动子控制之下的tet-阻抑物(tet-R)的组成型表达。在四环素(或多西环素)不存在的情况下，阻抑物结合特异性四环素-操纵子序列(Tet02)，从而阻抑表达。四环素(或多西环素)的加入诱导了目的蛋白质的表达。为了使tet-系统能够在L6-GLUT4myc细胞中稳定整合，从ρ⑶NA3.1(+)/TR(Invitrogen)分离tet-阻抑物，并且将其克隆入如图3所示的pIRESpuro2的NheI和NotI位点。以下如SEQIDNO:2所示，给出pIRES-puro2/TetR的序列。序列pIRES-puro2/TetR(SEQIDNO2)GACGGATCGGGAGATCTCCCGATCCCCTATGGTCGACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATCTGCTCCCTGCTTGTGTGTTGGAGGTCGCTGAGTAGTGCGCGAGCAAAATTTAAGCTACAACAAGGCAAGGCTTGACCGACAATTGCATGAAGAATCTGCTTAGGGTTAGGCGTTTTGCGCTGCTTCGCGATGTACGGGCCAGATATACGCGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCTCTGGCTAACTAGAGAACCCACTGCTTACTGGCTTATCGAAATTAATACGACTCACTATAGGGAGACCCAAGCTTGGTACCGAGCTCGGATCGATATCTGCGGCCTAGCTAGCGTTTAAACTTAAGCTTACCATGTCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCCGCGTACAGCGGATCCCGGGAATTCAGATCTTATTAAGCGGCCGCATAGATAACTGATCCAGTGTGCTGGAATTAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGGTCGAGCATGCATCTAGGGCGGCCAATTCCGCCCCTCTCCCTCCCCCCCCCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTGATTTTCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGAGCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGAAGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGGAACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAAAGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTCCTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGATCTGGGGCCTCGGTGCACATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCCCGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAAGCTTGCCACAACCCACAAGGAGACGACCTTCCATGACCGAGTACAAGCCCACGGTGCGCCTCGCCACCCGCGACGACGTCCCCCGGGCCGTACGCACCCTCGCCGCCGCGTTCGCCGACTACCCCGCCACGCGCCACACCGTCGACCCGGACCGCCACATCGAGCGGGTCACCGAGCTGCAAGAACTCTTCCTCACGCGCGTCGGGCTCGACATCGGCAAGGTGTGGGTCGCGGACGACGGCGCCGCGGTGGCGGTCTGGACCACGCCGGAGAGCGTCGAAGCGGGGGCGGTGTTCGCCGAGATCGGCCCGCGCATGGCCGAGTTGAGCGGTTCCCGGCTGGCCGCGCAGCAACAGATGGAAGGCCTCCTGGCGCCGCACCGGCCCAAGGAGCCCGCGTGGTTCCTGGCCACCGTCGGCGTCTCGCCCGACCACCAGGGCAAGGGTCTGGGCAGCGCCGTCGTGCTCCCCGGAGTGGAGGCGGCCGAGCGCGCCGGGGTGCCCGCCTTCCTGGAGACCTCCGCGCCCCGCAACCTCCCCTTCTACGAGCGGCTCGGCTTCACCGTCACCGCCGACGTCGAGTGCCCGAAGGACCGCGCGACCTGGTGCATGACCCGCAAGCCCGGTGCCTGACGCCCGCCCCACGACCCGCAGCGCCCGACCGAAAGGAGCGCACGACCCCATGGCTCCGACCGAAGCCGACCCGGGCGGCCCCGCCGACCCCGCACCCGCCCCCGAGGCCCACCGACTCTAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAGCTGGGGCTCGAGTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGTATACCGTCGACCTCTAGCTAGAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCAATGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGTC然后将pIRESpuro2/TR转染入L6_GLUT4myc细胞。用0.5μg/ml嘌呤霉素(InvivoGen)选择稳定地表达调控质粒的克隆。将含有AS160样的L6_GLUT4myC细胞培养在补充有10%胎牛血清(FCS)(PAA，无tet)、2yg/ml杀稻瘟素(Calbiochem)、0.5μg/ml嘌呤霉素(InvivoGen)、200μg/ml潮霉素(Invitrogen)的MEMα(PAN)中。用四环素诱导型GFP表达质粒(pCDNA5/T0-GFP)控制tet-阻抑物的功能性。在四环素(或多西环素)不存在的情况下，只有少数细胞表达GFP。多西环素的加入使表达GFP的细胞的数量增加大约10倍(数据未显示)。为了获得AS160的同种型2的tet-诱导型表达，使用来自Invitrogen的含有AS160的同种型2的基因的pCDNA5载体。使用潮霉素(200μg/ml,Invitrogen)进行稳定克隆的选择。通过western印迹分析，利用识别全长AS160和AS160的同种型2的AS160特异性抗体检查AS160的同种型2的表达。用1μg/ml多西环素(Sigma)诱导AS160的同种型2的表达。通过加入多西环素(1μg/ml,Sigma)，然后进行western印迹分析来研究tet-阻抑物的功能性。对于所有实施例，将含有AS160的同种型2的L6_GLUT4myC细胞培养在补充有10%胎牛血清(FCS)(PAA,无tet)、2μg/ml杀稻瘟素(Calbiochem)、0.5μg/ml嘌呤霉素(InvivoGen),200μg/ml潮霉素(Invitrogen)的MEMa(PAN)。用1μg/ml多西环素(Sigma)诱导AS160的同种型2的表达。将L6-野生型(wt)(ATCC:CRL_1458)细胞培养在补充有10%FCS(PAA，无tet)和青霉素/链霉素(PAA)的MEMα+GlutaMax(Gibco)中。将L6-GLUT4myc细胞培养在补充有10%FCS(PAA,无tet)、1%青霉素/链霉素(PAA)和2μg/ml杀稻瘟素(Calbiochem)的MEMα+GlutaMax(Gibco)中。将所有细胞在37°C和5%CO2下培养。在进行各实验之前将含有AS160的同种型2的L6-GLUT4myc细胞在饥饿培养基(MEMα)中温育3至4小时。为了进行Western印迹分析，将蛋白质在SDS-PAGE凝胶(4-12%分离胶，Invitrogen)上分离，转移至PVDF膜(Roche)，用Roti-Block(Roth)封闭1小时。将膜与一抗一起温育过夜。抗AS160抗体来自Upstate。在TBST中清洗膜，将其与适当的第二辣根过氧化物酶缀合的抗体(SantaCruz)—起温育。用LumiLight(Roche)显现免疫反应条带，并用Lumi-Imager(BiihringerIngelheim)进行检测。tet-阻抑物的功能性的分析显示AS160的同种型2只在多西环素存在的情况下表达(图4)。为了检查AS160蛋白质的同种型2在含有AS160样的L6_GLUT4myc细胞中的四环素和胰岛素依赖性表达，进行western印迹分析。如上所述，用1μg/ml多西环素诱导AS160样蛋白质的表达，进行48小时。然后，用胰岛素(5nM至50nM;Sanofi-AventiS)刺激所述细胞，进行20分钟。如上所述，制备细胞提取物，利用SDS-PAGE分离，并转移至PVDF膜。图4显示了含有AS160样转录物的L6_GLUT4myc细胞中AS160样蛋白质的多西环素诱导型表达的代表性western印迹。与胰岛素的温育诱导了AKT的磷酸化(Ser473)(图5)。AS160的同种型2的表达对AKT的激活没有作用。实施例3=AKT和AS160的磷酸化为了研究AKT和AS160的磷酸化，使用实施例2中所述的细胞。通过至关重要的基序(RXRXXS/T)上的磷酸化激活AS160。AS160中的已知的磷酸-位点是Ser570、Ser588、Thr642和Thr751(Sano等，2003)。负责AS160的激活的一个激酶是AKT(Kane等，2002)。为了测定AS160的同种型2的激活状态，使用胞内western印迹技术。该方法使得能够在96孔板中直接检测特定蛋白质而无需制备细胞提取物。该测定中所用的特异性抗体识别AS160和AS160样蛋白质的磷酸化的Thr642磷酸化位点。为此，将细胞接种入96孔板(黑色，Nunc)并且培养48小时。用含有2%马血清(Cambrex)的MEMa(PAN)饥饿细胞，进行3至4小时。在移去培养基后，将细胞在3.7%新配制的多聚甲醛(Sigma)中固定20分钟。用PBS+0.1%Triton-X-IOO透化细胞。使用Odyssey封闭缓冲液(Licor)在4°C下进行封闭过夜。在室温下温育一抗2小时。抗磷酸AKT(Ser473，CatNo.:44_621G)和抗磷酸AS160(Thr642，CatNo.:44_1071G)购自Biosource。在一抗温育后，用PBS+0.1%Tween20清洗细胞。将第二抗兔-IgG-800-CW抗体(RocklandCatNo.:611_131_122)温育1小时。为了检测DNA，使用T0-PR03染料(MolecularProbes,CatNo.:T3605)。荧光信号(图6)以相对单位(RU)表示。作为对照，在相同实验设置中测定AKT在Ser473上的剂量依赖性磷酸化/激活。胰岛素以剂量依赖性的方式诱导AKT磷酸化及AS160的全长或同种型2的磷酸化(图6Α和B)。在无AS160样蛋白质的多西环素诱导型表达的细胞中未观察到AS160或AS160蛋白质的同种型2的磷酸化。实施例4:AS160蛋白质的同种型2对葡萄糖摄入的作用为了检查细胞的葡萄糖摄入，将各细胞涂板在96孔Cytostar-T闪烁微量滴定板(Amersham)中。在48小时后，对细胞进行血清饥饿(3_4小时)，然后如所指定的用抑制剂进行处理。如已描述的(Voss等，2005)的那样进行2-脱氧葡萄糖(0.0IMBq/孔，Amersham)的摄入。在40μM松胞菌素B(Calbiochem)存在的情况下测定非特异性摄入。从所有其他值中减去该值。在WallacMicrobeta计数器(PerkinElmer)中进行测量。2_脱氧葡萄糖的摄入被表示为每百万计数(countspermillion)(cpm)。检查响应胰岛素的表达AS160的同种型2的L6_GLUT4myC细胞中2_脱氧葡萄糖的摄入(图7)。数据显示在用胰岛素(50nM的胰岛素浓度)刺激后，AS160的同种型2的表达使葡萄糖的摄入增加至高达4倍。在AS160的同种型2的表达不存在情况下，胰岛素诱导葡萄糖摄入达到最大2倍。多西环素以剂量依赖性的方式在此类细胞中诱导葡萄糖摄入的增加(图8)，所述剂量依赖性方式的多西环素与AS4160蛋白质的同种型2的水平相关。根据文献，已知IGF-I(胰岛素样生长因子，R&D系统，CatNo.:291_G1)和AMPK(5-AMP-激活的蛋白质激酶)激活物AICAR(5-氨基咪唑-4-氨甲酰1-β-D-呋喃核糖苷(ribofuranoside)，BiomolCatNo.:E1_330)也刺激骨骼肌细胞中葡萄糖摄入(Ciaraldi等，2002)。因此，我们检查了AS160的同种型2的表达对IGF-I和AICAR刺激的葡萄糖摄入的影响(图9)。在AS160的同种型2不存在的情况下，与胰岛素相比，用IGF-I刺激的细胞中的葡萄糖的摄入比在用胰岛素(2倍)刺激后的更高(3倍)(图9A)。用AICAR刺激的细胞中的葡萄糖的摄入比用胰岛素刺激的细胞的摄入更低(1.5倍)(图9B)。AS160蛋白质的同种型2的表达在用IGF-I刺激后进一步增加葡萄糖的摄入(达到5倍)，然而在用AICAR刺激后未观察到AS160的同种型2的表达的额外效应。这些数据表明葡萄糖摄入的刺激可通过AMPK以不依赖于AS160的同种型2的方式发生和通过AKT以同种型2依赖性的方式发生。从而所述细胞系统可用于区分同种型2依赖性作用和不依赖于其的作用。实施例5二甲双胍对葡萄糖摄入的作用二甲双胍(二甲基二胍)在2型糖尿病中的降葡萄糖作用已得到良好地证明(Karlsson等，2005a)；然而，其确切作用机制依然不清楚，尽管已知其治疗益处。我们检查了在用不同浓度的二甲双胍刺激后，AS160蛋白质的同种型2对葡萄糖摄入的作用，其中如上所述进行检测(图10)。与胰岛素相比，AS160蛋白质的同种型2的表达对葡萄糖摄入没有增加作用。该作用似乎可与在用AICAR刺激后观察到的作用相比较。这些数据表明二甲双胍_诱导的作用也是不依赖于AS160蛋白质的同种型2的，并且可能由AMPK介导。实施例6=AKT抑制剂的作用为了获得导致AS160的同种型2的激活的信号级联放大的更详细的分析，使用两种不同的抑制剂。渥曼青霉素(UpstateCatNo.12-338)是已良好确定的化合物，已知其在PI3激酶(PI3K)的水平产生抑制作用，随后导致减少的AKT磷酸化，其传导PI3激酶下游的信号(Okada等，1994)。所使用的第二化合物是1L-6-羟甲基-手性-肌醇2-(R)-2-0-甲基-3-0-十八烷基碳酸酯(缩写为AKT抑制剂Calb.；CalbiochemCatNo.124005)。该化合物被描述为只微弱地干扰PI3K的AKT的选择性抑制剂(Hu等，2000)。如所预期的，Western印迹分析显示渥曼青霉素完全消除了AKT(Ser473)的磷酸化(图11A)。AKT抑制剂Calb.对AKT(Ser473)的磷酸化没有作用(图11A)。为了检查AKT抑制剂Calb.的功效，需要进行AKT下游的信号传导分子的分析，因为AKT的磷酸化可能不与AKT的活性直接相关。使用来自Biosource的磷酸-特异性抗体(CatNo.:44_621G)检测AKT在Ser473上的磷酸化。渥曼青霉素也能够完全消除表达AS160的同种型2的L6_GLUT4myC细胞的葡萄糖摄入，然而AICAR刺激的细胞的葡萄糖摄入几乎保持未变(图11B)。到目前为止，葡萄糖摄入过程似乎由PI3K-AKT信号传导途径介导。实施例7表达AS160的同种型2的L6-GLUT4_myC细胞的葡萄糖摄入的时间依赖性AS160的同种型2促成提高的葡萄糖摄入的贡献可能是GLUT4至质膜的转运的加速、膜上更高的GLUT4蛋白质总量或受损的内吞作用。为了阐明该机制，在诱导或不诱导AS160的同种型2的情况下在表达AS160的同种型2的细胞中进行葡萄糖摄入的时间依赖性分析。研究在3个不同时间点(5、15、30分钟)上葡萄糖摄入。用两个不同胰岛素浓度(10nM,50nM)刺激细胞。图12显示在用50ηΜ胰岛素刺激5分钟后，已观察到葡萄糖摄入的最大值。未检测到表达AS160的同种型2的L6-GLUT4myc细胞与无AS160的同种型2表达的细胞之间的差异。这些数据表明AS160的同种型2在检查的时间点内不加速葡萄糖摄入。在AS160的同种型2存在的情况下增强的葡萄糖的摄入的另一个潜在原因可能是增加的GLUT4在质膜上的量。GLUT4的转运是葡萄糖摄入的诱导中的至关重要的事件。实施例8:MEKK/ERK抑制剂U0126的作用为了研究促分裂原活化激酶(MAPK)在骨骼肌细胞中在胰岛素信号转导的负调控中以及对胰岛素抗性的贡献中的作用，我们检查了常用MEKK/ERK抑制剂U0126(UpstateCatNo.:19-147;DeSilva等，1998)对葡萄糖-摄入的作用。细胞与MEKK/ERK抑制剂υ0126(10μΜ，20μΜ)的温育显示在用5ηΜ胰岛素进行另外的刺激后葡萄糖的摄入显著增力口。该作用主要在表达AS160的同种型2的细胞中发生(图13)。该发现表明MEKK/ERK激酶在所使用的细胞模型中也以同种型2依赖性方式负影响胰岛素信号传导和葡萄糖摄入。J.Zierath小组(Bouzakri和Zierath，2007)最近公布了关于TNF-α诱导的胰岛素抗性细胞模型的相似数据，其推测，尤其地MAPK4的沉默可以是恢复骨骼肌细胞中适当的胰岛素信号传导的新方法。实施例9胰岛素抗性细胞模型的建立由于在II型糖尿病中外周胰岛素抗性变成内在性的，因此我们着眼建立基于细胞的胰岛素抗性模型，该模型使得能够研究胰岛素抗性的分子基础并且同时使得能够开发恢复胰岛素敏感性的策略。已对脂肪细胞(Nelson等，2002；Greene等，2001)和L6肌管(Walgren等，2003)良好地建立了基于细胞培养的胰岛素抗性模型。在该模型中，在高葡萄糖/胰岛素条件(25mM葡萄糖+IOnM胰岛素)下培养细胞过夜以诱导胰岛素抗性(Walgren等，2003)。与在正常葡萄糖条件(图14，左)下培养的细胞相比较，用高葡萄糖和胰岛素处理的细胞的葡萄糖摄入显著减少(图14，右)。AS160的同种型2的表达稍微提高了葡萄糖摄入，但不能恢复胰岛素敏感性。胞内western印迹分析显示同样在高葡萄糖+胰岛素的条件下，AKT(Ser473，BiosourceCatNo.:44_621G)和AS160(Thr642,BiosourceCatNo.:44_1071G)仍然以剂量依赖性的方式被磷酸化(图15)。然而与未处理的条件(正常Glc)相比，磷酸化信号被降低至72%。此外，检查在高葡萄糖条件下二甲双胍的作用。为此目的，在正常条件下以及平行地在高葡萄糖+胰岛素条件(25mM葡萄糖+IOnM胰岛素)下将二甲双胍(800μM)温育过夜。在所有孔中都诱导了同种型2-表达。图16显示在正常条件下二甲双胍显著增强基础葡萄糖摄入。除了IOOnM胰岛素外，使用不同胰岛素浓度进行的额外刺激在正常条件下都没有进一步提高葡萄糖的摄入，这表明二甲双胍没有致敏效应。在高葡萄糖+胰岛素条件下，二甲双胍显著增加基础葡萄糖摄入以及在使用5、10和50ηΜ胰岛素刺激后的葡萄糖摄入(图16，右)。然而，在胰岛素抗性条件下，在二甲双胍刺激后葡萄糖摄入的最大值不超过基础水平，再次证明二甲双胍在肌肉中的作用不依赖于胰岛素刺激的葡萄糖处置(disposal)。在正常和胰岛素抗性条件下AKT和AS160的磷酸化状态的平行检查显示使用二甲双胍处理细胞对AKT或AS160的活化没有作用(图17)。这些数据表明二甲双胍介导的作用不依赖于AKT或AS160的活化。实施例10:GLUT4转运的检查虽然基于细胞的葡萄糖摄入具有非常好的重现性并且使得能够进行化合物的高灵敏性筛选，但其仍有待改进以适用于高通量筛选(HTS)。该背景中的一个限速步骤是放射性标记的葡萄糖在摄入实验中的使用。为了为该测定在HTS筛选中提供改进的基础，我们检查了增加的葡萄糖摄入与GLUT4至质膜的转运之间的相关性。为此目的，使用适合于化合物筛选的技术。激光扫描荧光微量平板细胞计量术(Laser-scanningfluorescencemicroplatecytometry)(ACUMEN技术，LIT)使得會邑够进行微量平板中单荧光细胞的不同的多参数分析(Bowen和Wylie，2006)。为了进行激光扫描荧光微量平板细胞计量术(Acumen)，将细胞涂板在96孔板(Biocat，black)中。如所示，处理血清饥饿细胞。简而言之，将细胞在3.75%多聚甲醛(Sigma)中固定20分钟。然后，用IOOnMNH4Cl进行猝灭。用足够的封闭溶液封闭细胞，进行最少1小时。将一抗(单克隆抗-myc9E10,SantaCruz,sc-40)温育1小时。在Sytox-orange存在的情况下温育第二山羊_抗小鼠IgG(AlexaFluor488,MolecularProbes)，进行1小时(Bowen禾口Wylie，2006)。基于该高灵敏性方法，可能筛选不同的细胞数目来进行基于质膜的GLUT4-myc-展示。用DNA染料(SytoxOrange)复染细胞以确认相等的细胞数目。作为另外的对照，亲代细胞系L6_wt和L6-GLUT4_myc包括在本实验中。ACUMEN实验显示显著增加的GLUT4至质膜的转运(大约15%)(图18)。如所预期的，在用单独的IOOnM胰岛素刺激后，已少量地诱导GLUT4转运。转运也在包含AS160样表达盒的细胞中得到增加，但不被多西环素诱导。该现象很可能是由于渗漏启动子造成的。利用激光扫描荧光微量平板细胞计量术(ACUMEN)获得的GLUT4转运的图示示于图19中。在这些直方图中，曲线代表检测到的用DNA标记(SytoxOrange)染色的细胞的总数。以浅灰色显示的箭头左边的细胞不展现质膜结合的GLUT4。以浅灰色显示的箭头右边的细胞代表细胞群体，其在质膜上展现myc-标记的GLUT4。实施例11:GLUT4和AS160的同种型2的定位将基于免疫荧光的分析用于检测GLUT4-myc和AS160样在大鼠成肌细胞系L6-GLUT4-myc-tetR-AS160样中的定位。将细胞在无菌盖玻片上培养于12孔板中。用多西环素处理48小时来诱导AS160的同种型2的表达。用IOOnM胰岛素处理血清饥饿细胞20分钟或不作处理。在刺激后，将细胞在3.75%多聚甲醛(Sigma)中固定20分钟。然后，用0.1%的PBS中的TritonXlOO(IconBiomedicals)透化细胞，或不进行透化(如所示)，在室温下进行5分钟。透化过程使得能够检测细胞内定位的区室。在不透化细胞的情况下显现膜结合蛋白质。在PBS+1%BSA(USB)中封闭细胞，进行最短时间1小时。将一抗(单克隆抗_myc，SantaCruz,sc-40和多克隆抗-ASieOUpstate)温育过夜。所使用的二抗是检测AS160的同种型2的抗-兔Alexa488和检测GLUT4_myC的抗-小鼠A546。温育进行1小时(黑暗处)。将细胞置于15μ1DakoCytomationFluorescentMounting培养基(DakoCytomation)中，通过使用LeicaDMIRE2的共聚焦激光扫描显微镜检查法进行检查，使用LeicaDMSDK软件进行分析。获得的图示于图21中。数据表明在基础条件下，AS160的同种型2和GLUT4_myC都定位在细胞的核周区室中。胰岛素剌激(IOOnM)诱导GLUT4-myc至质膜的转运。AS160蛋白质的同种型2仍保留在核周区室中。参考文献表BouzakriiK.禾口Zierath，J.R.(2007).MAP4K4genesilencinginhumanskeletalmusclepreventsTNF-alpha-inducedinsulinresistance.JBiolChem.282,7783-7789Bowen,W.P.禾口Wylie，P.G.(2006).Applicationoflaser-scanningfluorescencemicroplatecytometryinhighcontentscreening.Assay.DrugDev.Technol.4，209—221.Ciaraldi，T.P.，Carter，L，Rehman,N.，Mohideen，P.，Mudaliar，S.，禾口Henry，R.R.(2002).Insulinandinsulin-likegrowthfactor-1actiononhumanskeletalmuscle-preferentialeffectsofinsulin-likegrowthfactor—lintype2diabeticsubjects.Metabolism.51，1171-1179.DeSilva，D.R.，Jones，E.A.，Favata，M.F.，Jaffee，B.D.，MagoIda,R.L.，Trzaskos,J.M.，禾口Scherle，P.A.(1998).Inhibitionofmitogen-activatedproteinkinasekinaseblocksTcellproliferationbutdoesnotinduceorpreventanergy.JImmunol.160,4175-4181.ElbashirS.M.，HarborthJ.，LendeckelW.，YalcinΑ.，WeberK.，禾口TuschlΤ.(2001).Duplexesof21-nucleotidesRNAsmediateRNAinterferenceinmammaliancellculture.Nature.411.494-498Greene，E.L，Nelson，B.A.，Robinson,K.A.，禾口Buse，Μ.G.(2001).alpha-Lipoicacidpreventsthedevelopmentofglucose-inducedinsulinresistancein3T3—L1adipocytesandacceleratesthedeclineinimmunoreactiveinsulinduringcellincubation.Metabolism.50，1063-1069.Hu,Y.，Qiao，L.，Wang,S.，Rong，S.B.，Meuillet，E.J.，Berggren，M.，Gallegos，A.，Powis，G.，禾口Kozikowski，A.P.(2000).3-(Hydroxymethyl)-bearingphosphatidylinositoletherlipidanaloguesandcarbonatesurrogatesblockPI3-K，Akt，andcancercellgrowth.JMedChem.43,3045-3051.Kane,S.，Sano，H.,Liu,S.C.,Asara,J.Μ.,Lane,W.S.,Garner,C.C.，禾口Lienhard，G.E.(2002).Amethodtoidentifyserinekinasesubstrates.AktphosphorylatesanoveladipocyteproteinwithaRabGTPase-activatingprotein(GAP)domain.JBiol.Chem.277,22115-22118.KarIsson,H.K.，Hallsten，K.，Bjornholm，M.，Tsuchida，H.，Chibalin，A.V.，Virtanen，K.A.，Heinonen，0.J.，Lonnqvist,F.，Nuutila，P.，禾口Zierath，J.R.(2005a).Effectsofmetforminandrosiglitazonetreatmentoninsulinsignalingandglucoseuptakeinpatientswithnewlydiagnosedtype2diabetes:arandomizedcontrolledstudy.Diabetes.54，1459-1467.Karlsson，H.K.，Zierath，J.R.，Kane，S.，Krook，A.，Lienhard，G.E.，禾口WalIberg-Henriksson,H.(2005b).Insulin-stimulatedphosphorylationoftheAktsubstrateAS160isimpairedinskeletalmuscleoftype2diabeticsubjects.Diabetes.54,1692-1697.Nelson，B.A.，Robinson,K.A.，禾口Buse，M.G.(2002).DefectiveAktactivationisassociatedwithglucose—butnotglucosamine-inducedinsulinresistance.Am.JPhysiolEndocrinolMetab.282,E497-E506.Okada,T.，Kawano,Y.，Sakakibara，Τ.，Hazeki，0.，禾口Ui，Μ.(1994).Essentialroleofphosphatidylinositol3一kinaseininsulin-inducedglucosetransportandantilipolysisinratadipocytes.Studieswithaselectiveinhibitorwortmannin.JBiol.Chem.269,3568-3573.Sano,H.，Kane，S.，Sano,Ε.，Miinea，C.P.，Asara，J.Μ.，Lane，W.S.，Garner，C.W.，禾口Lienhard，G.Ε.(2003).Insulin-stimulatedphosphorylationofaRabGTPase-activatingproteinregulatesGLUT4translocation.JBiol.Chem.278，14599-14602.TuschT.，ZamorePD.，LehmannR.，BartelDP.禾口SharpPA(1999).TargetedmRNAdegradationbydouble-strandedRNAinvitro.GenesandDevelopment13.3191-3197Voss，M.D.，Beha，A.，Tennagels,N.，Tschank，G.，Herling，A.W.，Quint，M.，Gerl,Μ.，Metz-Weidmann,C.，Haun,G.，禾口Korn，Μ.(2005).GeneexpressionprofilinginskeletalmuscleofZuckerdiabeticfattyrats!implicationsforaroleofstearoyl-CoAdesaturase1ininsulinresistance.Diabetologia.48,2622-2630.Walgren,J.L.，Vincent，T.S.，Schey，K.L.，禾口Buse，M.G.(2003).HighglucoseandinsulinpromoteO-GlcNAcmodificationofproteins，includingalpha-tubulin.Am.JPhysiolEndocrinolMetab.284,E424-E434.WangQ.，KhayatΖ.，KishiY.，EbinaY.，和KlipΑ.(1998).GLUT4translocationbyinsulininintactmusclecells-detectionbyafastandquantitativeassay.FEBSLett.427(2)，193-197Yuan，J.S·，Reed，A.，Chen，F.，禾口Stewart，C.N.，Jr.(2006).Statisticalanalysisofreal-timePCRdata.BMCBioinformatics.7:85.,85.Zeigerer,A.，McBrayer,Μ.K.，禾口McGraw，Τ.Ε.(2004).InsulinstimulationofGLUT4exocytosis,butnotitsinhibitionofendocytosis，isdependentonRabGAPAS160.Mol.Biol.Cell.15，4406-4415.如果未另外指出，标准实验室方法可以根据本领域已知的标准方法进行，例如如下列实验室标准文献中所描述的Sambrook等人(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual.Secondedition.ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor,NY.545pp；CurrentProtocolsinMolecularBiology；周期性更新，例如卷2000；Wiley&Sons,Inc；编辑FredΜ.Ausubel,RogerBrent,RobertEg.Kingston,DavidD.Moore,J.G.Seidman，JohnA.Smith，KevinStruhl.CurrentProtocolsinHumanGenetics；；Wiley&Sons,IncNicholasC·Dracopoli，HonathanLHaines，BruceR.Korf,CynthiaC.Morton,ChristineE.Seidman,J.G.Seigman，DouglasR.Smith.CurrentProtocolsinProteinScience；；Wiley&Sons,IncJohnΕ.Coligan,BenΜ.Dunn,HiddeLPloegh，DavidW.Speicher,PaulT.Wingfield.MolecularBiologyoftheCell；第三片反；Alberts，B.，Bray,D.，Lewis,J.，Raff，Μ.，Roberts，K.，Watson,J.D.；GarlandPublishing，Inc.NewYork&London，1994；ShortProtocolsinMolecularBiology,第五片反，FrederickΜ.Ansubel(编^)，RogerBrent(㈱)，RobertΕ.Kingston(㈱)，DavidD.Moore(㈱)，J.G.Seidman(编辑)，JohnA.Smith(编辑)，KevinStruhl(编辑)，2002年10月，JohnWiley&Sons,Inc.，NewYork“Genetargeting:APracticalApproach,%2JoynerAL,^2000.IRLPressatOxfordUniversityPress，NewYork权利要求鉴定改变细胞的葡萄糖摄入的物质的方法，其包括(a)将包含AKT底物160kDa样蛋白质(AS160样蛋白质)或其功能性变体的检测系统与测试物质接触，和(b)通过检测指示改变的细胞的葡萄糖摄入的信号来将测试物质鉴定为改变葡萄糖摄入和/或GLUT4至细胞质膜的转运的物质。2.权利要求1的方法，其中细胞的葡萄糖摄入增加或减少，优选增加。3.权利要求1或2的方法，其中所述物质在至少一个、二个或三个胰岛素敏感性组织中改变葡萄糖摄入和/或GLUT4至质膜的转运。4.权利要求3的方法，其中所述胰岛素敏感性组织是脂肪组织，骨骼肌和/或肝。5.权利要求1至4的任一项的方法，其中所述物质改变肝细胞、脂肪细胞和/或骨骼肌细胞的葡萄糖摄入和/或GLUT4至质膜的转运。6.权利要求1至5的任一项的方法，其中所述AS160样蛋白质是哺乳动物的AS160样蛋白质，并且优选人AS160样蛋白质。7.权利要求1至6的任一项的方法，其中所述AS160样蛋白质是AS160的同种型2。8.权利要求1至6的任一项的方法，其中所述AS160样蛋白质是AS160的同种型3。9.权利要求1至8的任一项的方法，其中所述AS160样蛋白质包含SEQIDNO1或22编码的序列或由所述序列组成。10.权利要求1至9的任一项的方法，其中所述检测系统在细胞中。11.权利要求10的方法，其中所述细胞是骨骼肌细胞、脂肪细胞和/或肝细胞，特别地骨骼肌细胞。12.权利要求10或11的方法，其中所述细胞是来自细胞系的细胞。13.权利要求1至12的任一项的方法，其中所述可检测信号是在细胞中表达的AS160样蛋白质的量、磷酸化的AKT、磷酸化的AS160样蛋白质、GLUT4至质膜的转运、GLUT4在细胞中的分布或细胞对葡萄糖的摄入。14.权利要求1至13的任一项的方法，其中以化合物文库的形式提供所述测试化合物。15.权利要求1至14的任一项的方法，其中在机器人系统中进行所述方法。16.权利要求1至15的任一项的方法，其中所述方法是高通量筛选的方法。17.用于鉴定提高细胞的葡萄糖摄入和/或GLUT4至质膜的转运的物质的检测系统，所述检测系统包含编码AKT底物160kDa样蛋白质(AS160样蛋白质)或其功能性变体的基因；和提供所述基因的可控表达的诱导型启动子，其中AS160样蛋白质或其功能性变体的激活影响可检测的信号。18.权利要求17的检测系统，其中所述检测系统位于细胞，特别地遗传改造的细胞中。19.权利要求18的检测系统，其中所述基因和/或启动子被导入遗传改造的细胞。20.权利要求17至19的任一项的检测系统，其中所述诱导型启动子是四环素诱导型启动子。21.权利要求17至20的任一项的检测系统，其中所述检测系统如在权利要求3至11的任一项中所进一步定义的。22.包含AS160样蛋白质的检测系统的用途，其用于鉴定改变，特别地提高细胞的葡萄糖摄入和/或GLUT4至质膜的转运的物质。23.权利要求22的用途，其中所述检测系统如在权利要求3至13和14至21的任一项中所进一步定义的。24.AS160样蛋白质或其功能性变体在2型糖尿病的模型中的用途。25.异源表达AS160样蛋白质或其功能性变体的细胞作为2型糖尿病的模型或在2型糖尿病的模型中的用途。26.权利要求24或25的用途，其中所述用途包括如权利要求3至13和14至21的任一项中所定义的检测系统。27.根据前述权利要求9至26的任一项的方法、用途或检测系统，其中所述AS160样蛋白质是AS160蛋白质的同种型2或同种型3。28.多肽，其由或基本上由下述氨基酸序列组成根据SEQIDNO:3或23的氨基酸序列或根据SEQIDNO:1或22的序列所编码的氨基酸序列。29.多核苷酸，其由或基本上由下述多核苷酸序列组成根据SEQIDN0:1或22的多核苷酸序列或编码根据SEQIDNO3或23的多肽的多核苷酸序列。30.特异性结合根据权利要求28的多肽的抗体。31.异源表达根据权利要求28的多肽的细胞。32.用根据权利要求29的多核苷酸稳定地或瞬时转染的细胞。33.能够负干扰AS160样蛋白质的表达和/或活性的siRNA。34.编码AS160样蛋白质的核酸或AS160样蛋白质的核酸序列用于产生siRNA的用途。35.根据权利要求33的siRNA或根据权利要求35的用途，其中所述AS160样蛋白质是AS160蛋白质的同种型2或3。全文摘要本发明涉及新型AKT底物160kDa样蛋白质(AS160样蛋白质)，涉及鉴定改变细胞的葡萄糖摄入和/或GLUT4至质膜的转运的物质的方法，所述方法包括将包含AKT底物160kDa样蛋白质(AS160样蛋白质)的检测系统与测试物质接触，并且通过检测指示改变的细胞的葡萄糖摄入的信号来鉴定测试物质为改变细胞的葡萄糖摄入的物质；涉及包含编码AKT底物160kDa-样蛋白质(AS160-样蛋白质)的基因和提供基因的可控表达的诱导型启动子的检测系统；检测系统用于鉴定提高细胞的葡萄糖摄入和/或GLUT4至质膜的转运的物质的用途；以及AS160-样蛋白质在2型糖尿病模型中的用途。文档编号G01N33/68GK101815943SQ200880101474公开日2010年8月25日申请日期2008年7月23日优先权日2007年8月1日发明者D·鲍斯,K·赫梅尔,N·特纳格尔斯,W·迪特里希申请人:塞诺菲-安万特股份有限公司