专利名称：：一种酚酞的快速检测试纸及其检测试剂盒和检测方法
技术领域：
：本发明涉及酚酞的检测技术，具体是涉及酚酞的快速检测试纸及其检测试剂盒和检测方法。
背景技术：
：随着生活水平的提高，人们意识到肥胖严重影响身体健康，同时也意识到用西药快速减肥会带来严重的副作用。但是，中药类减肥药的减肥效果需要较长时间才能体现出来，很难引起人们的购买欲望。因此，面对巨大的市场和利润，一些不法厂商利用消费者急于减肥的心理和中药无毒副作用的认识误区，在减肥类中成药、保健食品和食品中大量添加国家法律法规明令禁止的化学减肥药、泻药以增强其减肥效果，致使消费者在不知情的情况下，连续服用这类产品，严重危害了广大消费者的健康。常用的化学减肥药和泻药有盐酸西布曲明、盐酸芬氟拉明、硫酸镁、酚酞等。临床上芬氟拉明主要用于治疗单纯性肥胖及伴有糖尿病、冠心病和高血压的肥胖病。研究表明，使用芬氟拉明可导致心脏瓣膜损害、肺动脉高压和手指坏死等严重副作用，1997年，FDA决定禁用该药，欧盟2000年4月4日的官方公报中决定撤消包括芬氟拉明/右芬氟拉明在内的13种减肥药。西布曲明是一种非苯丙胺类食欲抑制药，药理作用与芬氟拉明相似，我国允许使用西布曲明减肥，但须要慎用此类药物，使用时应严格根据适应症，每日剂量不得超过15mg并规定应在医生指导下遵照药品说明书规定使用，使用中的身体状况必须随时监测才能确保用药。硫酸镁作为泻药使用已有过百年的历史，服用过量的硫酸镁会给人体的胃部、肠道、膀胱和肾造成严重的损害。自发现酚酞可作为泻药使用并具有优于硫酸镁的效果后，硫酸镁作为泻药应用的地位逐渐被酚酞取代。但是，酚酞易引起人体过敏，引发皮炎、药疹、瘙痒及灼痛等症状，长期应用可使血糖升高、血钾降低，过量或长期滥用可造成电解质紊乱、诱发心律失常，也可发生神志不清、肌痉挛以及倦怠无力等症状。自2007年以后，关于酚酞检测方法的研究和报道逐渐增多，但主要集中在利用高端分析仪器进行的检测方法。高效液相色谱、薄层色谱法以及液相色谱_质谱联用等方法虽然可以将中药中的酚酞进行精确的定性和定量，但是这些方法的检测周期长、过程繁琐，不适合现场批量筛查。此外，色谱检测分析仪器价格昂贵、体积较大，检测分析成本较高，要求操作人员具有较高的专业技术水平，基层药监人员难以掌握其操作，不适合用于大批量药物的筛查。
发明内容为克服上述技术缺陷，本发明提供了一种酚酞快速检测用的试纸，以及相关试剂盒和检测方法，以克服上述用高端分析仪器进行检测所存在的缺陷。为实现上述目的，本发明首先提供了一种酚酞的快速检测试纸的制备方法，具体操作如下取中性滤纸，置于ra值为11-12的碱性溶液中，浸泡，取出，干燥。浸泡的时间可在0.5至1分钟之间。干燥方式可采用晾干、风干或烘干。优选的，所述碱性溶液包括NaOH溶液、Na2C03溶液或KOH溶液。其中，NaOH溶液、Na2C03溶液或KOH溶液中的溶质的质量体积百分比浓度为3%10%。利用上述的检测试纸和其他溶液组装成一种酚酞的快速检测试剂盒，该试剂盒除了检测试纸外，还包括乙醇溶液。优选的，乙醇溶液中的乙醇的体积百分比浓度为9096%。本发明还提供了利用上述检测试纸检测酚酞的方法，取供试品加入乙醇溶液中，振摇，静置；将所述检测试纸浸入处理后的供试品溶液中，取出，若试纸呈玫瑰红则判断含有酚酞，反之，则判断为不含酚酞。当供试品为液体时，可以直接加入乙醇溶液；当供试品为固体时，将所述供试品研碎或压碎。上述检测试纸可应用在针对减肥类中成药、保健食品和食品中酚酞的检测中。本发明的酚酞快速检测试纸及相关试剂盒及其方法，能快速准确地检测出酚酞，特别是能够在现场鉴别出减肥类中成药、保健食品和食品中是否违法添加酚酞，操作简易方便，适合现场检测，还能实现半定量检测；有利于提高监督检验效率并打击违法添加酚酞的行为，为中成药、保健食品和食品的安全监管提供有效的检测手段，对规范市场秩序，切实保护广大消费者的权益具有重要的意义。图1是检测41号样品、62号-绿色胶囊号样品及48号样品的检测结果；图2是41号样品中酚酞最低检出限的试验结果图；图3是对照品中酚酞最低检出限的试验结果图。具体实施例方式为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。实施例l本实施例的检测试纸的制备方法如下取中性滤纸，置于ra值为11的NaOH溶液中浸泡0.5分钟，取出，晾干。其中，NaOH的质量体积百分比浓度为3%。实施例2本实施例的检测试纸的制备方法如下取中性滤纸，置于ra值为12的化20)3溶液中浸泡1分钟，取出，风干。其中，Na2C03的质量体积百分比浓度为10%。实施例3本实施例的检测试纸的制备方法如下取中性滤纸，置于ra值为12的K0H溶液中浸泡0.7分钟，取出，烘干。其中，K0H的质量体积百分比浓度为8%。实施例4本实施例的酚酞的快速检测试剂盒包括检测试纸，还包括乙醇溶液。乙醇溶液中的乙醇的体积百分比浓度为90%。在另一实施例中，乙醇溶液中的乙醇的体积百分比浓度为96%。在另一实施例中，乙醇溶液中的乙醇的体积百分比浓度为92%。实施例5:初步检测本实施例提供了一种利用实施例4中的试剂盒进行快速检测减肥类中成药、保健食品和食品中酚酞的方法。该方法是取41号样品、62号-绿色胶囊、48号样品的胶囊剂各1粒，研磨成粉末状，再将该粉末加入乙醇溶液中，乙醇溶液可以为3-5ml，振摇1分钟，静置，可见有沉淀物出现；最后将检测试纸浸入乙醇处理后的供试品溶液的上清液中，半秒后取出。若试纸呈玫瑰红则判断供试品中含有酚酞；反之，则判断供试品中不含酚酞。其中，41号样品果茶抽油瘦胶囊，批准文号国食健字G20080301，生产厂家广州麦获康生物科技有限公司，云南高原生物资源开发有限公司，批号090601/3;62号-绿色胶囊绿婷减肥胶囊中的绿色胶囊，批准文号国食健字G20050386，生产厂家遵义康神王生物科技有限公司，批号200904091;48号样品苦瓜清脂瘦身胶囊("美腿瘦腰"型)，批准文号卫食准字(2004)第0462号，生产厂家青海宏大医药生物科技有限公司，批号2009.01.06。检测结果见图1，图1中，左侧为41号样品检测的结果，中间为62号-绿色胶囊的检测结果，右侧为48号样品的检测结果。由图可见，41号样品和62号-绿色胶囊的显色结果呈玫瑰红，表明该两种样品中含有酚酞。48号样品的显色结果没有显出玫瑰红，初步判断其不含酚酞。在另一实施例中，检测片剂、袋泡茶、颗粒剂、口服液时，片剂取1片的检测用量，袋泡茶、颗粒剂取约1/2包的检测用量，口服液等液体制剂取1/2次服用量；片剂和颗粒剂需预先研碎或压碎。其他步骤同上。实施例6:样品中酚酞最低检出限试验取编号为41号的样品内容物，根据HPLC-DAD测定结果，该样品酚酞含量为49.3mg/g。精密称定该样品0.4260g，置50ml量瓶中，加入乙醇30ml，超声提取5分钟，放冷，加乙醇稀释至50ml的刻度，摇匀，滤过。分别吸取该溶液不同量制成每l毫升含酚酞0.021mg、0.042mg、0.084mg、0.126mg、0.168mg、0.210mg、0.42mg的样品梯度溶液。分别取该样品梯度溶液各10iU，自左向右点于检测试纸上。观察颜色变化，并记录实验结果。样品中酚酞最低检出限试验结果见表1及图2。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注"+"表示颜色变化程度，2个"+"以上表示肉眼可以区分，"-"表示无颜色变化。由表1及图2可见，反应的显色深度随着浓度的高低呈现规律性变化，样品中酚酞的浓度越高，则反应的显色越深，浓度越低，则反应的显色越浅。本发明的试纸可据此对样品中酚酞进行半定量检测。当样品中酚酞的浓度降低到0.021yg/yl时，肉眼几乎不能区分是否有颜色呈现。因此，推定该试纸的酚酞最低检出浓度约为0.02i!g/iU。同时，还用酚酞对照品进行了最低检出限的实验。首先精密称取酚酞对照品10.25mg置25ml量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别吸取该对照品溶液不同量制成每1毫升含酚酞0.020.41mg的对照品梯度溶液。分别取对照品梯度溶液各10iU，自左向右点于检测试纸上。观察颜色变化，并记录实验结果，该结果见表2及图3。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注"+"表示颜色变化程度，2个"+"以上表示肉眼可以区分，"-"表示无颜色变化。由表2及图3可见，酚酞对照品的反应的显色深度随着浓度的高低呈现规律性变化，对照品中酚酞的浓度越高，则反应的显色越深，浓度越低，则反应的显色越浅。且当样品中酚酞的浓度降低到0.02i！g/iU时，肉眼几乎不能区分是否有颜色呈现。与前述检测样品中酚酞的结果吻合。由于试纸条的吸附量以20iU为宜，因而，本方法对酚酞的最低检出限为0.4iig，具有较高的灵敏度。相对于酚酞的起效剂量(50mg)而言，本方法适用于减肥类中成药、保健食品和食品中是否掺杂酚酞的快速筛查。实施例7:用实施例4的检测试剂盒结合本发明的方法检测掺杂酚酞与用薄层色谱法和高效液相色谱仪-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)检测方法进行比较验证试验用本发明方法对62种样品进行快速检测，并与常规薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱仪-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)检测方法进行比较验证。薄层色谱法作为初步确证方法，具体实验操作如下供试品处理依照本发明中的方法进行。另取酚酞对照品适量，加乙醇制成每1ml含酚酞为0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各5iU，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(19:1)为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，再喷以2%氢氧化钠溶液，置日光下检视，若供试品色谱与对照品色谱所显斑点颜色与位置相同，则可判定为供试品中可能含有酚酞。高效液相色谱仪_二极管阵列检测器(HPLC-DAD)作为确认方法，具体实验操作如下色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱，以乙腈-水(50:50)为流动相；检测波长为275nm;柱温为30°C。理论板数按酚酞峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备取酚酞对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含酚酞为0.12mg的溶液，即得；供试品溶液的制备若供试品为片剂，研细，精密称定约1片量；若供试品为胶囊剂，取出内容物研细，精密称定约l粒量；若为颗粒剂、袋泡茶等固体制剂，研磨粉碎，精密称定约1/2包量；若供试品为口服液，量取1/2次服用量；分别置25ml量瓶中，加无水乙醇适量，超声处理10分钟，放冷至室温，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取照品溶液与供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测定，即得。供试品色谱中不得出现与对照品保留时间一致的色谱峰。如出现与对照品保留时间一致的色谱峰，则应采用二极管阵列检测器进行检测，若该色谱峰与对照品的紫外吸收光谱相同，则可判断含有酚酞。由表3结果可见，本发明的检测结果与后两种方法具有较高的吻合度，具体数据见表3。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。权利要求一种酚酞的快速检测试纸的制备方法，其特征在于，取中性滤纸，置于PH值为11-12的碱性溶液中，浸泡，取出，干燥。2.根据权利要求1所述的检测试纸的制备方法，其特征在于，所述碱性溶液包括NaOH溶液、Na2C03溶液或K0H溶液。3.根据权利要求2所述的检测试纸的制备方法，其特征在于，所述NaOH溶液、化20)3溶液或K0H溶液中的溶质的质量体积百分比浓度为3%10%。4.根据权利要求1所述的检测试纸的制备方法，其特征在于，所述浸泡的时间为0.5-1分钟。5.根据权利要求1所述的检测试纸的制备方法，其特征在于，所述干燥的方式为晾干、风干或烘干。6.权利要求1-5之一所述的制备方法得到的检测试纸。7.—种包含权利要求6所述的检测试纸的酚酞的快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括乙醇溶液。8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述乙醇溶液中的乙醇的体积百分比浓度为9096%。9.利用权利要求6所述的检测试纸检测酚酞的方法，其特征在于，取供试品加入乙醇溶液中，振摇，静置；将所述检测试纸浸入处理后的供试品溶液中，取出，若试纸呈玫瑰红则判断含有酚酞，反之，则判断为不含酚酞。10.权利要求6所述的检测试纸在检测减肥类中成药、保健食品和食品中酚酞的应用。全文摘要本发明提供了一种酚酞快速检测用的试纸的制备方法、检测试剂盒和检测方法。取中性滤纸，置于pH值为11-12的碱性溶液中浸泡，取出，干燥。碱性溶液包括NaOH溶液、Na2CO3溶液或KOH溶液。上述方法制得的试纸和乙醇溶液组装为检测试剂盒。利用上述检测试纸检测酚酞的方法是取供试品加入乙醇溶液中，振摇，静置；将检测试纸浸入处理后的供试品溶液中，取出，若试纸呈玫瑰红则判断含有酚酞，反之，则判断为不含酚酞。本发明的酚酞快速检测试纸及相关试剂盒及其方法，能快速准确地检测出酚酞，特别是能够在现场鉴别出减肥类中成药、保健食品和食品中是否违法添加酚酞，操作简易方便，适合现场检测，还能实现半定量检测。文档编号G01N21/78GK101718704SQ20091019419公开日2010年6月2日申请日期2009年11月26日优先权日2009年11月26日发明者杨文红,黄奕滨,黄诺嘉申请人:广东省汕头市药品检验所