专利名称：一种基因婚配方法
技术领域：
本发明涉及遗传学，分子生物学，人类学等技术领域，具体地说是一种基因婚配的 方法。该方法可以为未婚男女的择偶提供科学的根据。
背景技术：
现代遗传学认为，基因是DNA (脱氧核糖核酸)分子上具有遗传效应的片段。基因 位于染色体上，并在染色体上呈线性排列。基因不仅可以通过复制把遗传信息传递给下一 代，还可以使遗传信息得到表达。不同人种之间头发、肤色、眼睛、鼻子等不同，是基因差异 所致，每个人的生老病死也与基因有着密切的关系。近年来，一些研究表明婚姻状况也和基 因有关。瑞典Karolinska大学Walum医生的研究显示，男性是否拥有“垂体后叶加压素基 因”突变体，会影响到他与人相爱的能力。通过采访志愿参与研究的夫妇，研究者们发现，那 些拥有这种“坏因子”的丈夫更倾向于认为自己的婚姻生活是“不稳定”的，而那些没有这 种基因的丈夫则相反。科学家声称，异性恋者会被有着与其相反性别的亲代相似面孔的人深深吸引，提 示这种行为是与进化压力紧密相关的。在匈牙利的Pecs大学，由Tamas Bereczkei领导的 一个团队设计了一个面孔比较的模型，包括14个面部分区，如下颚的宽度，嘴与眉毛之间 的距离，等等。运用此模型，他们调查了来自52个家庭的312名成年匈牙利人。每个家庭 都有一对夫妇，并各自都有双亲。调查显示，在妻子的父亲和丈夫之间存在着极大的面部 相似度，同样的情况在丈夫的母亲和妻子之间也存在。研究小组还在一般人群中重复了这 个调查研究，并有一个裁判小组进行判断。结果裁判小组同样分辨出了随机抽取的一组照 片中哪些是成对的。有意思的是，在寻找伴侣的过程中，男人和女人关注的面部区域并不相 同。男人寻找的女伴通常会在嘴唇的丰满度，宽度，下颚的长度和宽度这些方面与其母亲有 着相似性。而对女人来说，关键的指标是嘴与眉毛之间的距离，脸的长度，两眼间的距离，以 及鼻子的大小。在做出选择时，更多的驱动力来自进化选择的压力，而不是心理或社会的原 因，Bereczkei这样解释。同时他提到，通过寻找遗传上的相似特征，可以将其他的适应优 势传递给后代个体。这样可以将从双亲那里得到的基因表型增强，因而增加了后代的遗传 代表性。寻找相似的伴侣还有利于维持进化成适应某一特殊的环境的遗传复杂性。另一组研究表明，MHC(majorhistocompatibility complex，主要组织相容性复 合物，人类相对应的是HLA)除了在免疫识别中的所起的作用外，还与体味有关，从而在两 性间的吸引中起到重要作用。从研究小鼠的结果得知，MHC的不同决定了体味，对体味的 辨别又转化成了对配偶的偏好。另一方面，在小鼠和人均已发现一群嗅觉受体(odorant receptors, OR)基因与MHC紧密连锁，由于这些原因，MHC分子又被称为免疫-嗅觉复合体。瑞士伯尔尼大学的Wedekind教授做过一项实验让女性自愿者嗅男性穿过三天 的T恤衫，然后对它们的吸引力打分。这位教授分析了这些男性和女性参与者的HLA (human leukocyteantigen，人类白细胞抗原)，发现女性更喜爱与她们HLA差异很大的男性的T恤
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1997年，Ober研究了 Hutterite (哈特人)群体[注哈特人是生活在北美的、以其 密切的亲缘关系、公社化生活方式和有限数量的5座位HLA单倍型(HLA-A，_B，_C，_DR，-DQ) 的欧洲血统群体]是否存在着在选择配偶时避免与某人自身的HLA单倍型相同的个体。研 究发现dutteriete的配偶选择受HLA单倍型影响而避免拥有相同单倍型的两人结为连理。2008年，Chaix研究小组用全基因组范围的基因型和HLA分型，研究了非裔和欧裔 美洲夫妇，从全基因组范围效应中区分MHC特异的效应，来测试人类是否倾向于选择MHC相 异的配偶。该研究结果再次证明在某些人类种族中MHC影响配偶选择。很多遗传疾病是由隐性遗传因子控制的，这些遗传病在通常情况下很少会出现， 但是在近亲结婚的情况下，他们有可能从共同的祖先那里继承相同的致病基因，产生纯合 的缺陷基因，从而使后代出现病症的机会大大增加。这类遗传病称为常染色体隐性遗传病， 约900种，如纤维囊泡症，可出现新生儿肠梗阻，黑性痴呆可表现为智力障碍和视力障 碍，致死性畸形，半乳糖血症临床表现为肝肿大、黄疸，继而肝硬化，苯丙酮尿症临床上 出现严重智力障碍，抽搐发作等等。比较MHC可以比较亲族关系，从而防止近亲结合。杂合的优势还表现在对于一些病原体，比如寄生虫和病毒的入侵，机体具备了较 强抵抗力。研究发现杂合的MHC比纯合的对HIV，HPC等病毒有更强的抵抗。父母的MHC基 因种类越广泛，后代的免疫反应对象的范围也会很广泛，就不容易生病。除了与感染性疾病的关系以外，研究发现中度和严重妊高症患者中，夫妇共有某 些HLA等位基因的频率增高。夫妇间共有HLA抗原，生育能力下降，习惯性流产发生率较高， 新生儿体重降低。婚姻状况虽然不完全是由配偶双方的基因决定，但遗传信息可以为单身男女的择 偶提供一定的科学依据，这样的择偶是一种顺应自然，利于优生优育的过程。可以提高婚姻 的质量，保证孕产妇的安全，减少遗传病的发病率，保证下一代的健康。
发明内容
本发明的目的是提供一种基因婚配的方法，该方法利用分子生物学的检测技术， 获得相关基因的信息，从而为婚配提供建议，能为未婚男女的择偶提供科学的根据，帮助其 找到合适的终身伴侣。该方法包括以下步骤获得被检测者的体液，毛发，组织或细胞样本；通过检测DNA或蛋白质的方法获得样本中与DNA婚配相关的遗传信息；对得到的DNA婚配相关的生物信息进行数据处理与统计分析，从而得到被检测男 女之间的婚配指数。其中，检测DNA或蛋白质的方法包括各种从生物样本中提取核酸的方法；各种通过分子标记技术处理DNA的方法；各种核酸及核苷酸杂交技术；单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术；各种DNA测序的方法；
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生物芯片技术；各种检测生物样品中蛋白质的方法。DNA分子标记是一种可遗传的并可检测的DNA序列，该技术包括限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)；随机扩增多态性 DNA (random amplified polymorphic DNA, RAPD)；单核苷酸多态性(single hucleotide polymorphism, SNP)；特定序列位点(sequence-taggedsite, STS)；扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP)。
图1是本发明实施例所述的相关系数R的检测及计算结果。该图表示了 1名女性 与10名男性分别比对后R值由高到低的分布。
具体实施例方式下面结合具体实施例进一步阐述本发明，这些实施例仅用于说明目的，而不用于 限制本发明范围。一、DNA样本的获得本实施例采集了 20名20 40岁男女的DNA样本。样本采集1) 口腔清洁用清水漱口一到二次，去除口腔中的食物残渣，并注意咽尽口腔中 剩余的清水。2)采前准备取出采样管，轻甩一下，使管中的细胞固定液沉积在管底，拧开管 盖，使管口朝上立于桌上备用。人的口腔内壁有大量脱落细胞，口腔分泌的唾液中也含有较 多的DNA。将舌尖抵住上颚并持续片刻，这样可有效促进唾液的分泌。3)采集样本取出一次性使用的海绵采样棒，伸入口腔，以海绵头尽可能多地吸 取口腔内分泌的唾液，然后再用浸润了唾液的海绵头以相当于刷牙的力度，擦拭口腔两侧 内壁及牙龈外侧表面，持续擦拭1分钟左右。4)采样检验从口腔中取出采样棒，当观察到海棉头已经被唾液充分浸润，海绵 头应无食物残渣等异物粘附。5)固定细胞将采样棒海绵头一端伸入到含有细胞固定液的采样管的底部，上下 移动挤压海绵头3次，使细胞固定液充分浸润到海绵头中，然后将海绵头推入采样管中，拧
紧瓶盖。DNA抽提及纯化于4°C以1500g离心10分钟收获细胞，用TBS重悬细胞，再次离心收获细胞并重复 洗涤步骤。用TE(PH8.0)重悬细胞至5X107个细胞/ml，将悬液转移至大小适当的离心管 中，加入以下组分的抽提缓冲液并温育。10mmol/L Tris. CI (PH 8. 0)0. lmol/L EDTA (PH 8. 0)20 u g/ml 胰 RNA 酶
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0. 5% SDS加蛋白酶K至终浓度为100 yg/ml，用一玻棒温和的将酶混入粘滞的溶液中。将 裂解细胞的悬液置于50°C水浴中3小时，不时旋动该粘滞溶液。将溶液倾入离心管，加等 体积0.5mol/L Tris. CI (PH 8. 0)平衡的酚，缓慢地来回倾倒离心管10分钟，以小心的混合 两相。当两相未能混合形成乳浊液，则将离心管至于一旋转器上1小时，于室温以5000g离 心15分钟，使两相分开。用大口径移液管将粘稠的水相移至另一洁净的离心管中，用酚重 复抽提2次。二、Illumina SNP-GoldenGate使用illumina公司的MHC Mapping Panel芯片，实验操作步骤Pre-PCRMake SUD1)在样本表中输入每个样本名称、板号。2)将加热头预热至95 °C，热封机预热至95 °C。3)将GS#_MS1溶液溶化至室温。4)震荡管中溶液至彻底溶解混勻并倒入一个灭菌的V槽中。5)用TE将样本DNA溶至终浓度50ng/ul使之浓度标化。6)用10ul/8道手动排枪加5ul GS#_MS1到GS#_SUD板各孔中。7)换新Tip再各加入5ul标化过的DNA样本至每孔中。8)用热封膜/热封机封板，250g短暂离心。9)将板置于振板机上2300rpm震荡20秒。10)250g 短暂离心。11)将板放于已预热至95°C的Heat-Block上30min。12)取下板并250g短暂离心。Precip SUD1)小心将热封膜从GS#_SUD板上慢慢撕下。2)用lOul/8道手动排枪加5ul GS#-PS1溶液至每孔，然后用粘性膜封板。3)250g短暂离心，然后置于振板机上2300rpm震荡20秒。4)揭去粘性膜并用lO-lOOul/8道排枪每孔加入15ul异丙醇。5)重新封上新粘性膜并在1600rpm震荡Vortex 20秒。6)将板再3000g离心20分钟。7)取出板，揭去膜，将板用力重拍倒扣在无尘吸水纸上，再继续拍打直至管中基本 无残留液滴。8)将板垫上吸水纸倒置8g离心1分钟。9)将板保持倒置状态，架空，室温干燥15分钟。Re suspend SUD1)将1. 2ml的GS#_RS1溶液倒入灭菌V槽。2)加10ul GS#-RS1 溶液至 GS#_SUD 每孔中。3)粘性膜封板，短暂离心至250g。4) 2300rpm震荡1分钟重悬蓝色沉淀。
5)确认所有蓝色沉淀被重新悬浮。Make ASE1)预热 Heat-Block 至 70°C。2)从冰箱冰冻室中取出GS#-0PA，室温完全溶解并颠倒混勻。3)从冰箱冰冻室取出GS#_0B1，室温完全溶解并颠倒混勻。4)将GS#_ASE条码贴在一块新的0. 2ml96孔板右侧短裙边上。5)在样本表上记录GS#-0PA的条形码。6) 250g短暂离心含活化DNA的GS#_SUD板。7)将溶化的GS#-0PA试剂管中1. 2ml溶液全部倒入V形槽。8)在新的GS#_ASE板上每孔加入10ul GS#-0PA溶液。9)将溶化的GS#_0B1试剂管中溶液全部倒入V形槽。10)力口 30ul GS#-0B1 至 GS#_ASE 板各孔中。11)小心揭去GS#_SUD板上粘性膜。12)将GS#_SUD和GS#_ASE 二板同方向放置，从GS#_SUD板中转移10ul已活化的 DNA溶液至GS#-ASE板对应孔中。每次换不同Tip头。13)用热封膜/热封机封GS#_ASE板并250g短暂离心。14)将GS#_ASE板置于振板机上1600rpm震荡1分钟。15)将GS#_ASE板置于已预热至70°C的Heat-Block上并合上外罩(立刻将Block 温度转设成30°C，让板在Heat-Block上自然冷却至30°C。Add MEL1)将 GS#_ASE 板从 Heat-Block 上取下。2)将Heat-Block调至45°C，并让温度稳定在45°C。3)从冰箱冰冻室中取出GS#_MEL，室温完全溶解并颠倒混勻。4)从冰箱冷藏室取出GS#-AM1和GS#-UB1。5)将11ml GS#-AM1溶液倒入消过毒的V形槽。6)将llmlGS#_UBl溶液倒入消过毒的另一个V形槽。7) GS#-ASE 板 250g 短暂离心。将GS#_ASE板放在磁板上2分钟。8)保持96孔板在磁板上，揭去GS#-ASE板的热封膜，将8道10_100ul排枪调至 70ul，先沿左壁枪头伸到底先吸去奇数列孔中全部50ul上清，再将板连同磁板一起调转 180度后每列换Tip再吸去奇数列(原偶数列)孔中的全部50ui上清。9)从磁板架上取下GS#_ASE板，用8道10-100U1排枪用新的同一排Tip在每孔中 加入50ulGS#-AMl溶液。用粘性膜封板。10)在振板机上1600rpm震荡20秒或至磁珠完全悬浮11)把板重新放在磁板架上2分钟或至磁珠完全沉聚。12)保持96孔板在磁板上将8道10-100U1排枪调至70ul，吸去每孔中的 50ulGS#-AMl 洗涤液。13)再加入50ul GS#-AM1重复上述振荡洗涤步骤，第二次洗后尽量吸干净 GS#-AM1 溶液。
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14)从磁力架上取下板，用新的同一排Tip沿每孔的右侧上沿加入50ul GS#-UB1, 先加偶数列孔再反转180度加偶数列孔(原奇数列)。15)把板重新放在磁板架上2分钟。16)用同一排8道Tip头按奇数列/反转后奇数列方式吸去所有GS#_UB1上清17)再加入50ul GS#-UB1重复上述步骤，最后尽量吸干净残留的GS#_UB1溶液。18)将溶解的GS#-MEL试剂倒入一个新的V形灭菌槽内。19)用新的一排Tip头在GS#-ASE板中加入37ul GS#-MEL溶液。20)粘性膜封板，振板机上1600rpm震荡1分钟。21)将板放在45°C预热的Heat-Block上15分钟。Make PCR1)溶化 GS#_MMP 至室温。2)在 GS#_MMP 管中加入 64ul Titanuim Taq DNA Polymerase。3)再加入50ul UDG(可选项)4)颠倒混勻至少10次，并倒入灭过菌的V形槽中。5)将GS#_PCR条码贴于一块新的0. 2ml 96孔板右侧短边侧面裙边上。6) GS#-PCR每孔加入30ul上述混合液。7)用透明的粘性膜封GS#_PCR板，250g短暂离心，室温避光保存待用。Inoc PCR1)从Heat-Block上取下GS#_ASE板并立即将温度调至95°C。2)在灭菌V形槽内倒入6ml GS#_UB1。3)在另一个灭菌V形槽内倒入全部GS#_IP1溶液。
4)将GS#_ASE板置于磁板架上2分钟。5)在磁板上揭去GS#_ASE板透明粘性膜。6)调8道10-100U1排枪至50ul，用同一排tip沿左壁下方按奇数列/反转后奇 数列方式吸去约37ul上清，留磁珠。7)GS#_ASE板留在磁板上。8)用新的同一排Tip沿每孔的右侧上沿加入50ul GS#_UB1，先加偶数列孔再反转 180度加偶数列孔(原奇数列)，目的是使50ul液体顺壁流过仍沉聚在管壁上的磁珠面。让 GS#-ASE板留在磁板上2分钟。9)调8道10-100U1排枪至70ul，用同一排tip沿左壁下方按奇数列/反转后奇 数列方式吸去所有约50ul上清，尽可能不要残留液体，留下磁珠。
10)弃去Tip头。11)加35ul GS#-IP1入GS#_ASE每孔并封上粘性膜。12)在振板机上 1800rpm*Vortex 1 分钟。13)置板于 95V Heat-Block 上 1 分钟。14)将GS#_ASE板马上重新放于磁板上2分钟。15)每列换新Tip，按序转移30ulGS#_ASE板上溶液至对应的GS#_PCR板上,17)用粘性Tap膜封GS#_PCR板并马上放到MJ-225热循环PCR仪上。18)丢弃 GS#_ASE 板。
Post-PCRPCR 循环将粘性Tap膜封的板放入MJ-225 PCR仪实施下列循环60ul总反应体系
权利要求
1.一种基因婚配方法，其特征是包括以下步骤 获得被检测者的体液，毛发，组织或细胞样本；通过检测DNA或蛋白质的方法获得样本中与基因婚配相关的遗传信息； 对得到的基因婚配相关的遗传信息进行数据处理与统计分析，从而得到被检测者之间 的婚配和谐程度。
2.根据权利要求1所述的一种基因婚配方法，其特征所述基因婚配是一种利用分子生 物学的检测技术，获得相关基因的信息，从而为婚配提供建议的方法。
3.根据权利要求1所述的一种基因婚配方法，其特征是所述检测DNA或蛋白质的方法 包括各种从生物样本中提取核酸的方法；各种通过分子标记方法处理DNA的方法； 各种核酸及核苷酸杂交技术； 单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术； 各种DNA测序的方法； 生物芯片技术；各种检测生物样品中蛋白质的方法。
4.根据权利要求1所述的一种基因婚配方法，其特征是所述分子标记包括限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)； 随机扩增多态性 DNA (random amplified polymorphic DNA, RAPD)； 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)； 特定序列位点(sequence-tagged site, STS)；扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP)。
全文摘要
本发明提供了一种基因婚配方法，它包括获得被检测者的体液，毛发，组织或细胞样本；通过检测DNA或蛋白质的方法获得样本中与DNA婚配相关的遗传信息；对得到的DNA婚配相关的生物信息进行数据处理与统计分析，从而得到被检测男女之间的婚配指数。该方法利用分子生物学的检测技术，获得相关基因的信息，从而为婚配提供建议，能为未婚男女的择偶提供科学的根据，帮助其找到合适的终身伴侣。
文档编号G01N33/68GK102002521SQ20091019473
公开日2011年4月6日 申请日期2009年8月28日 优先权日2009年8月28日
发明者楼屹 申请人:上海金缘生物科技有限公司