专利名称：水稻愈伤组织质量评价方法
技术领域：
本发明涉及水稻质量评价技术领域，更具体涉及水稻愈伤组织质量评价方法。该 方法适用于所有水稻。
背景技术：
在水稻组织培养以及其他物种的组织培养研究过程中，我们要进行培养基对愈伤 组织的生长率和生长质量进行评估，为培养基筛选和设计提供依据，对生长率进行评价很 容易进行，只要计算愈伤继代前后的重量比值即可，但是对愈伤质量进行评价就要有相应 的模型，在此之前还没有这种模型被建立。这就给培养基的综合评估带来了问题。所以本 发明是建立了愈伤组织评价的模型，主要对愈伤组织质量相关的四个形状进行评估、统计， 将愈伤组织的质量进行量化，这样就有利于对愈伤组织的质量进行量化评比，使得我们对 培养基的研究更为严谨，方便。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种水稻愈伤组织质量评价方法，该方法首次建立了 水稻愈伤组织的评价模型，评价结果和转基因效率基本一致，模型的建立有利于实验和生 产的评估，比较和质量控制。本评价模型得分低于70以下愈伤组织质量较差，分化率不高， 也很难进行转基因操作；得分在70-90之间的愈伤组织已经适合分化，可以得到较高的分 化率，仍得不到较高的转化率，很难转化成功，得分大于90的愈伤组织适合农杆菌转化操 作，也有最高的分化率。为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施一种水稻愈伤组织质量评价方法，其步骤是1)、本评估系统以愈伤组织颗粒，愈伤组织色泽，愈伤组织是否水化，愈伤组织是 否有分化趋势共四个指标做为评价指标。2)、颗粒指标(P)愈伤组织颗粒根据愈伤组织生长的具体情况分为1，颗粒散 碎，硬度低；2，颗粒致密，硬度高。3)、如步骤2)所描述颗粒散碎定义为愈伤组织的直径小于3mm，容易松散，不紧 密，并且愈伤组织表面毛刺状不平滑，切片特征为愈伤组织断裂处较多，愈伤组织边缘不清 晰，切片观察如图.U。颗粒致密定义为愈伤组织直径大于3mm的颗粒，颗粒致密硬度高 不宜松散，愈伤组织表面光滑状，切片观察为细胞致密，胞质密度高，愈伤组织边缘清晰，愈 伤组织组织的外层细胞结构明显。4)、愈伤组织色泽指标(C)根据愈伤组织生长的具体情况分为五个等级，1，苍 白；2，黄白；3，黄；4，深黄；5，褐。如果一块愈伤组织上有一点出现黑(褐)点，则这块愈伤 组织的整体色泽特征定义为”褐”，如果愈伤组织上有一点出现苍白特征，这块愈伤组织整 体特征将定义为”苍白”。愈伤组织具有苍白特征则往往和水化特征相连，愈伤组织质地变 软，细胞死亡。
5)、如步骤4)所描述的5个颜色指标，以R，G，B颜色系统定义如下表观察光源 为日光灯管，色温6500度，亮度5001ux ；
权利要求
1. 一种水稻愈伤组织质量评价方法，其步骤是1)、本评估系统以愈伤组织颗粒，愈伤组织色泽，愈伤组织是否水化，愈伤组织是否有 分化趋势共四个指标做为评价指标；2)、颗粒指标(P):愈伤组织颗粒根据愈伤组织生长的具体情况分为a、颗粒散碎，硬 度低；b、颗粒致密，硬度高；3)、如步骤2)所描述颗粒散碎定义为愈伤组织的直径小于3mm，容易松散，不紧密， 并且愈伤组织表面毛刺状不平滑，切片为愈伤组织断裂处多，愈伤组织边缘不清晰，切片观 察，颗粒致密定义为愈伤组织直径大于3mm的颗粒，颗粒致密硬度高，愈伤组织表面光滑 状，切片观察为细胞致密，胞质密度高，愈伤组织边缘清晰，愈伤组织组织的顶层细胞结构 明显；4)、愈伤组织色泽指标(C)根据愈伤组织生长的具体情况分为五个等级，a、苍白；b、 黄白；C、黄；d、深黄；e、褐，一块愈伤组织上出现黑点，这块愈伤组织的整体色泽特征定义 为褐，愈伤组织上有出现苍白特征，这块愈伤组织整体特征将定义为苍白，愈伤组织有苍白 特征则往往和水化特征相连，愈伤组织质地变软，细胞死亡；5)、如步骤4)所描述的5个颜色指标，以R，G，B颜色系统定义如下表观察光源为日 光灯管，色温:6500度，亮度500Iux ；6)、愈伤组织水化(H):a、愈伤组织水化愈伤组织出现发白，发软，惨白死亡的现象； 切片特征为愈伤组织的表面层愈伤组织糜散；b、愈伤组织无水化愈伤组织坚硬没有出现 水软的现象，切片观察可见愈伤组织表层细胞层清晰，有明显的表层致密层结构；7)、愈伤组织有分化趋势(D):a、愈伤组织有长出根状分化的特征，切片观察为愈伤组 织表层愈伤组织的致密层变薄或消失，愈伤组织内部有跟源基发生；b、愈伤组织正常无分 化趋势切片观察愈伤组织表层有明显的致密层愈伤组织，愈伤组织内部细胞大小和结构 均勻，没有明显的区域结构，愈伤组织分化趋势使得下一步的继代开始容易褐化，有分化趋 势的愈伤组织转基因没有效率，侵染后很快死亡；8)、颗粒指标(P)的权重系数Pc= 15 ；愈伤组织色泽(C)的权重系数Cc = 25 ；愈伤组 织水化(H)的权重系数Hc = 40 ；愈伤组织分化趋势(D)的权重系数Dc = 20 ；Pc+Cc+Hc+Dc =100 ；9)、颗粒系数(P)的状态，颗粒散碎的得分系数Pl= 0 ；颗粒致密的得分系数P2 = 1， 散碎颗粒所占的比值Plp，致密颗粒所占的比值P2p ；Plp+P2p = 1 ；10)、愈伤组织色泽指标(C)的得分系数定义为C1= -1 ；C2 = 0. 75 ；C3 = 1 ;C4 = 0， 75 ；C5 = -1 ；Cl到C5分别代表苍白，黄白，黄，深黄，褐五种状态的得分系数，这5种状态所 占的比例分别定义为:Clp, C2p，C3p，C4p，C5p。C lp+C2p+C3p+C4p+C5p = 1 ；11)、愈伤组织水化指标(H)的得分系数H1= -1 ；H2 = 1，Hl为水化愈伤组织的得分 系数，H2为未水化愈伤组织的得分系数。这两种状态的愈伤组织所占比例分别定义为Hlp， H2p ；Hlp+H2p = 1 ；12)、愈伤组织分化指标(D)的得分系数D1= -1 ；D2 = 1，Dl为有分化趋势的愈伤组 织的得分系数，H2为未出现分化趋势的愈伤组织的得分系数，这两种状态的愈伤组织所占 比例分别定义为:Dlp, D2p。Dlp+D2p = 1 ；13)、愈伤组织质量得分的计算CS = (Pl*Plp+P2*P2p)*Pc+ (Cl*Clp+C2*C2p+C3*C3p+C4*(^p+C5*C5p)*Cc+(Hl*Hlp+H 2氺H2p)氺Hc+(D1氺Dlp+D2氺D2p)氺Dc ；14)步骤1 描述的CS值低于70以下愈伤组织质量较差，分化率不高，很难进行转 基因操作；得分在70-90之间的愈伤组织已经适合分化，得到高的分化率，得不到高的转化 率，很难转化成功，得分90分以上的愈伤组织适合农杆菌转化操作，也有最高的分化率。
全文摘要
本发明公开了一种水稻愈伤组织质量评价方法，其步骤是1)本评估系统以愈伤组织颗粒；2)颗粒指标；3)所描述颗粒散碎；4)愈伤组织色泽指标；5)所描述的5个颜色指标；6)愈伤组织水化；7)愈伤组织有分化趋势；8)颗粒指标的权重系数Pc＝15；9)颗粒系数的状态；10)愈伤组织色泽指标的得分系数；11)愈伤组织水化指标的得分系数；12)愈伤组织分化指标的得分系数13)愈伤组织质量得分的计算；14)描述的CS值低于70以下愈伤组织质量较差，得分90分以上的愈伤组织适合农杆菌转化操作，有最高的分化率。建立了水稻愈伤组织的评价模型，评价结果和转基因效率一致，有利于实验和生产的评估，比较和质量控制。
文档编号G01N15/02GK102081031SQ20091027296
公开日2011年6月1日 申请日期2009年11月27日 优先权日2009年11月27日
发明者李阳, 李阳生 申请人:武汉大学