药物组合物、药物筛选方法和用于治疗疟疾的方法

文档序号:6085991
专利名称:药物组合物、药物筛选方法和用于治疗疟疾的方法
技术领域
本发明适用于生产抗疟疾剂的制药领域。 现有技术疟疾是严重的人类寄生虫疾病,其致病因素是疟原虫属(Plasmodium)的原生动物。每年有大约五亿人被感染,每年引起接近二百万至三百万的的非洲儿童死亡。在巴西,自2002年以来,亚马逊行政区(Legal Amazonia)的病例数量显示了 25%的增长, 在2004年有大约46万例,而由恶性疟原虫(P. falciparum)引起的疟疾病例数的比例增长了 27%,恶性疟原虫是引起致死性最高的此类疾病的物种(Garcia CRS, Azevedo MF, Wunderlich G,Budu A,Young Jand Bannister L. G(2008)Plasmodium in the Post Genome Era :Newinsights into the molecular cell biology of the malaria parasites. International Review of Molecular and Cell Biology 266 :85-156)。虽然对控制疟疾进行了无数的努力,但是病例数仍然持续增加,这是因为寄生虫对多数可获得的抗疟疾剂产生了抗性,以及出现了杀虫剂抗性的蚊子,这使得有必要开发替代性的策略以根除此疾病。在这个意义上,最大的障碍之一是疟疾寄生虫及其与人类宿主和载体昆虫之间的相互作用的复杂性。
_4] 赫I 触白姓■其月射^L -針航側恶性疟原虫的无性周期发生于人类宿主中,感染起始于雌性疟蚊的叮咬,其通过唾液注入子孢子。最近证明,最先注入的子孢子穿过真皮,它们中仅有一少部分进入毛细血管,而其它子孢子进入淋巴管并且形成红细胞外的形式,该形式在那之前是未知的,其可能对宿主免疫系统具有重要影响(Amino R,Thiberge S,Martin B, Celli S,Shorte S, Frischknecht F & Menard R(2006)Quantitative imaging ofPlasmodium transmission from mosquito to mammal. Nat Med 12 :220-224)。一旦处于血流之中,子孢子会侵袭肝细胞并发育为红细胞外的形式,其使细胞破裂并将裂殖子释放到血液中(Mota MM, PradelG, Vanderberg JP, Hafalla JCR, Frevert U,Nussenzweig RS, Nussenzweig V & Rodriguez A(2001)Migration of Plasmodiumsporozoites through cells before infection)。裂殖子侵袭红细胞并在含虫空泡(parasitophorous vacuole)内发育,经历数个生物化学和形态学变化,所述变化基本上可通过三个阶段即环状体、滋养体和裂殖体来鉴定。红细胞破裂释放裂殖子,这允许红细胞内的周期的持续性(Bmnister LH,Hopkins JM,Fowler RE, Krishna S & Mitchell GH(2000)A brief illustrated guide to the ultrastucture of Plasmodiumfalciparum asexual blood stages. Parasitol Today 16 :427-433)0血流中的一些寄生虫发育成配子体,其为针对载体蚊子的感染形式,在载体蚊子中发生有性周期。在蚊子的肠道中发生配子体的成熟,该过程被称作配子形成,然后发生受精作用,即雄性和雌性配子结合而生成受精卵。该受精卵迁移并黏附至肠的上皮,在那里其发育成卵囊。当卵囊破裂时,其释放子孢子,子孢子进入唾液腺并且在蚊子摄食时被释放 (Ghosh A, Edwards MJ & Jacobs-Lorena M(2000)Thejourney of the malaria parasiteinto the mosquito :Hopes for the newcentury. Parasitol Today 16:196-201)。除了在宿主和载体蚊子中的寄生虫形式的极大的多样性之外,疟原虫属的几个物种的生命周期的一个重大特征是其同步性和周期性。从上世纪初开始,已经观察到在配子体形成(寄生虫的有性形式)时具有此类独特的周期性,以疟原虫属的几个物种进行的所有研究均显示在午夜出现配子体生产高峰(每M小时),其通常与蚊子摄食的时间相同。 通过这种方式,配子体的昼夜节律必然是对于载体蚊子中寄生虫有性周期的维持的重要适应性(Garcia CRS,Markus RP Madeira L(2001)Tertian and quartan fevers :temporal regulation inmalarial infection. J Biol Rhythms 16:436-443)。到目前为止,尚未鉴定出负责诱导脊椎动物宿主血流中形成配子体的信号。关于无性形式,红细胞内阶段的高度同步性引起反复发烧和打冷颤,总是以M小时倍数的时间阶段内,这与实际中的数以十亿的裂殖子同时释放至血流中是一致的。这是侵袭宿主免疫系统的重要机制,其引起了研究人员的注意,已经数十年了。在2000年,根据我们实验室进行的一项研究,Hotta等人根据体外和体内手术试验(切除松果腺)以及药理学上的(使用2-苯基-N-乙酰色胺(luzindole),其为褪黑激素拮抗剂)松果体切除的小鼠报道褪黑激素使夏氏疟原虫(P. chabaudi)和恶性疟原虫的成熟期同步。还证明,该激素在体外引起从疟原虫细胞内供应中释放Ca2+。褪黑激素对寄生虫周期的效应被磷酸脂酶C抑制剂(U73122)阻断,这说明褪黑激素的作用机理可能是通过结合G蛋白偶联受体,引起磷脂酶C的激活,并且通过IP3增加细胞内Ca2+水平(Hotta CT, Gazarini M,Beraldo FH,Varotti FP,Lopes C, Markus RP,Pozzan T & GarciaCRS(2000) Calcium-dependent modulation by melatonin of thecircadian rhythm in malarial parasites. Nature Cell Biology 2 :466-468)。宿主产生的此类激素的浓度的周期性变化可能是该寄生虫在体内的成熟同步化控制的关键信号。疟原虫的细胞内信号传导疟疾寄生虫的复杂生命周期的特征在于连续的特化的发育阶段,并且其中每个阶段对于周期连续都是必不可少的。为了确定恶性疟原虫基因组表达图谱所进行的数项微排列研究揭示寄生虫的红细胞内阶段具有转录调节的专门机制,其引起具有相关功能的基因表达的连续级联(Bozdech Z, Llina M, Pulliam BL, Wong ED,Zhu J & DeRisijU2003) The Transcriptome of the Intraerythrocytic DevelopmentalCycle of Plasmodium falciparum. PLOS Biology 1 :1-16 ;Le Roch KG, Zhou Y, Blair PL, Grainger M, Moch JK, Haynes JD, De La Vega P, Holder AA, Batalov S, Carucci DJ & Winzeler EA (2003) Discovery ofgene function by expression profiling of the malaria parasite life cycle. Science 301 :1503-1508)。此外已经证明,疟原虫生命周期的一些阶段能够响应于来自脊椎动物宿主或载体昆虫的信号,从而其细胞分化过程与该寄生虫所生存的环境同步 (Hotta CTiGazarini M,Beraldo FHiVarotti FP,Lopes C,Markus RPiPozzan T & Garcia CRS(2000) Calcium-dependent modulation by melatonin of the circadian rhythmin malarial parasites. Nature Cell Biology 2 :466-468. ;Beraldo FH, Almeida FM, da Silva AM & Garcia CRS(2005)Cyclic AMP andcalcium interplay as second messengers in melatonin—dependentregulation of Plasmodium falciparum cell cycle. J Cell Biol 170 :551-557 ;Garcia GE, Wirtz RA, Barr JR, Woolfitt & Rosenberg R(1998)Xanthurenic acid induces gametogenesis in Plasmodium,themalaria parasite. J Biol Chem 273(20) :12003-12005)。载体蚊子肠道中的配子形成可用作研究涉及环境感知和寄生虫生理应答(激活形态发生过程,其引起寄生虫细胞周期朝着形成成熟配子以进行受精的方向进展)的信号传导途径的研究的重要性的实例。黄尿酸,一种通过色氨酸代谢而从蚊子唾液腺中产生的分子,被鉴定为源自载体昆虫的因子,其能够诱导雄性配子出丝(Billker 0,LindoV, Pmico MiEtienne AEiPaxton TiDell AiRogers MiSinden RE Morris HR(1998)Identification of xanthurenic acid as the putativeinducer of malaria development in the mosquito. Nature 392 :289-292. ;Garcia GE, Wirtz RA, Barr JR, Woolfitt & Rosenberg R(1998)Xanthurenic acid induces gametogenesis in Plasmodium,the malariaparasite. J Biol Chem 273(20) :12003-12005. ;Hirai M,Yoshida S,IshiiA & Matsuoka H(2001)Characterization and identification ofexfIageIlation-inducing factor in the salivary gland of Anophelesstephensi(Diptera :Culicidae). Biochem Biophys Res Comm 287:859-864)。XA诱导的作用机理之一是出丝过程中的膜磷脂水解,从而产生IP3和DAG,从寄生虫的细胞内供应中释放钙,并增加GMPc的细胞内水平(Kawamoto F, Alejo-Blanco R, Fleck SL, Kawamoto Y& Sinden RE(1990) Possible roles of Ca2+ and cGMP as mediators ofthe exflagellation of Plasmodium berghei and Plasmodium falciparum. Mol Biochem Parasitol 42 :101-108. ;Martin SK, Jett M & ScheneiderI(1994)Correlation of phosphoinositide hydrolysis with exflagellationin the malaria microgametocyte. J Parasitol 80 :371-378. Billker 0, Dechamps S, Tewari R, Wenig G, Franke-Fayard B & Brinkmann V(2004)Calcium and calcium-dependent protein kinase regulategamete formation and mosquito transmission in a malaria parasite. Cell 117 :503-514)。此外还证明,由于此类第二信使的产生而激活效应酶,例如鸟苷酰环化酶和⑶PK4钙依赖性激酶(Muhia DK,SwalesCA, Deng W,Kelly JM & Baker DA(2001)The gametocyte-activatingfactor xanthurenic acid stimulates an increase inmembrane-associated guanylyl cyclase activity in the human malariaparasite Plasmodium falciparum. Mol Microbiol 42 :553-60.; Billker 0,Dechamps S,Tewari R,Wenig G,Franke-Fayard B & Brinkmann V(2004) Calcium and calcium-dependent protein kinase regulategamete formation and mosquito transmission in a malaria parasite. Cell 117:503-514)。CDPK4 丐依赖性蛋白激酶被鉴定为钙分子靶标之一,其将XA信号转变为雄性配子体中细胞周期进展的调节应答。关于寄生虫的无性周期,我们实验室证明由脊椎动物宿主松果腺周期性产生的褪黑激素使夏氏疟原虫和恶性疟原虫的无性期同步(Hotta CT, Gazarini M,Beraldo FH, Varotti FP, Lopes C, Markus RP, Pozzan T & Garcia CRS(2000)Calcium-dependent modulation bymelatonin of the circadian rhythm in malarial parasites. Nature CellBiology 2 :466-468. ;Hotta CT, Markus RP & Garcia CRS(2003)Melatonin and N-acetyl-serotonin cross the red blood cell membraneand evoke calcium mobilization in malarial parasites. Braz J Med BiolRes 36:1583-7)。極黑激素是能够穿过生物膜的亲脂性分子,其穿过方式为与细胞外和细胞内靶标相互作用。Hotta CT, Markus RP &Garcia CRS(2003)Melatonin and N-acetyl-serotonin cross the redblood cell membrane and evoke calcium mobilization in malarialparasites. Braz J Med Biol Res 36 :1583-7. Beraldo FH,Almeida FM,da Silva AM & Garcia CRS(2005)Cyclic AMP and calcium interplayas second messengers in melatonin—dependent regulation ofPlasmodium falciparum cell cycle. J Cell Biol 170 :551-557证明即使是在完整的感染的红细胞中,褪黑激素也能够引起夏氏疟原虫和恶性疟原虫细胞内钙供给的移动,这说明其一定能够穿过红细胞膜和含虫空泡,然后激活寄生虫膜受体。Gazarini ML,Thomas APiPozzan T &Garcia CRS(2003)Calcium signaling in a low calcium environment :how the intracellular malaria parasite solves the problem. J Cell Bioll61 :103-110证明含虫空泡是富含钙的微环境,其对于产生钙介导的细胞内信号传导的条件是必不可少的。此外还证明,色氨酸分解代谢的其它产物例如N-乙酰5-羟色胺、5-羟色胺和色胺也能够同步恶性疟原虫周期并使Ca2+移动(Beraldo,FH & Garcia CRS(2005)Products of tryptophan catabolism induce aCa2+ release and modulate the cell cycle of P. falciparum malariaparasites. J Pineal Res 39:224-230)。褪黑激素的分子内靶标之一是 Ca2+-依赖性硫醇蛋白酶(Farias SL, Gazarini ML, Melo RL, HirataIY, Juliano MA, Juliano L & Garcia CRS(2005)Cysteine-proteaseactivity elicited by Ca(2+) stimulus in Plasmodium. Mol BiochemParasitol 141:71-79)。除了第二 Ca2+信使之外, Beraldo, FH & GarciaCRS(2005)Products of tryptophan catabolism induce a Ca2+ releaseand modulate the cell cycle of P. falciparum malaria parasites. JPineal Res 39 :224-230 ;Beraldo FH, Almeida FM, da Silva AM &Garcia CRS(2005)Cyclic AMP and calcium interplay as secondmessengers in melatonin-dependent regulation of Plasmodiumfalciparum cell cycle. J Cell Biol 170 :551-557 证明褪黑激素诱导 AMPc 的增加和PKA的激活,在此事件之前是细胞内Ca2+的增加,其被磷脂酶C(U73122)抑制剂和细胞内Ca2+螯合剂BAPTA-AM阻止。事实上还证明,响应于褪黑激素而产生的AMPc也诱导Ca2+的释放,这证明疟疾寄生虫中这两个第二信使的途径之间的复杂关系(Beraldo FH, Almeida FM, da Silva AM & Garcia CRS(2005)CyclicAMP and calcium interplay as second messengers inmelatonin—dependent regulation of Plasmodium falciparum cell cycle. J Cell Biol 170 :551-557)。因此,疟原虫中褪黑激素激活的信号传导途径表明了 G蛋白偶联受体介导的信号传导(GPCRs),一旦其参与启动磷脂酶C和腺苷酰环化酶的激活,则产生 Ca2+第二信使和 cAMP (Hotta CTiGazarini MiBeraldo FHiVarotti FPiLopes C,Markus RPiPozzan T & Garcia CRS(2000)Calcium-dependent modulation bymelatonin of the circadian rhythm in malarial parasites. Nature CellBiology 2:466—468.; Beraldo FH, Almeida FM, da Silva AM & GarciaCRS (2005)Cyclic AMP and calcium interplay as second messengersin melatonin-dependent regulation of Plasmodium falciparum cellcycle. J Cell Biol 170:551-557)。数项研究已经鉴定了参与恶性疟原虫的细胞内信号传导级联的蛋白,例如腺苷酰环化酶(AC)、鸟苷酰环化酶(GC)、PKA、PKG、RACK、Ca2+-ATPase、CDPKs,钙调蛋白禾口 MAPKs(Aravind L, Iyer LM, Wellems TE & Miller LH(2003)Plasmodium biology genomicgleanings. Cell 115 :771-785. ;Baker DA & Kelly JM(2004)Purinenucleotide cyclases in the malaria parasite. TRENDS in Parasitol 20 :227-232. ;Madeira L, DeMarco R, Gazarini ML, Verjovski-Almeida S& Garcia CRS(2003)Human malaria parasites display a receptor foractivated C kinase ortholog. Biochem Biophys Res Comm 306 :995-1001. ;Ward PiEquinet LiPacker J and Doerig C (2004)Proteinkinases of the human malaria parasite Plasmodium falciparum :thekinome of a divergent eukaryote. BMC Genomics 5 79. ;Khan SM, Franke-Fayard B,Mair GR, Lasonder E, Janse CJ, Mann M &Waters AP (2005)Proteome analysis of separated male and femalegametocytes reveals novel sex-specific Plasmodium biology. Cell 121 675-687. ;Anamika,Srinivasan N & Krupa A (2005)A genomicperspective of protein kinases in Plasmodium falciparum. Proteins 58 :180-189)。然而,尽管恶性疟原虫基因组项目得出了结论(Gardner MJiHall NiFung EiWhite OiBerriman MiHyman RWiCarlton JM,PainA, Nelson KE,Bowman S,Paulsen IT,James K,Eisen JA,RutherfordK,Salzberg SL, Craig A,Kyes S,Chan MS,Nene V,Shallom SJ, SuhB, Peterson J,Angiuoli S, Pertea M,Allen JiSelengut JiHaft DiMather MWiVaidya ABiMartin DMiFairlamb AH, Fraunholz MJ,Roos DS,Ralph SA,McFadden GI,Cummings LM,Subramanian GM,Mungall C,Venter JCiCarucci DJiHoffman SLiNewbold C,DavisRW,Fraser CM & Barrell B (2002) Genome sequence of the humanmalaria parasite Plasmodium falciparum. Nature 419 498-511),但是,尚未鉴定出作用于信号传导级联的初期的蛋白或细胞外信号的受体以及对它们及其效应子之间进行调节的蛋白。考虑到知晓疟疾寄生虫的来自宿主/载体的细胞外信号的重要性(它们的自身细胞周期根据它们所处的环境而被调节),鉴定信号传导途径蛋白对于解释这种非常相关的寄生虫-宿主关系的生物学机理是必不可少的,这可以对生产抗疟疾剂作出贡献。

发明内容
本发明涉及药物组合物,其包含一种或多种与存在于疟原虫属的寄生虫中的蛇形受体(serpentine receptor)结合的化合物以及药学上可接受的赋形剂。本发明还包括药物筛选方法和用于治疗疟疾的方法。
具体实施例方式虽然蛇形受体是熟知的,但是对于恶性疟原虫而言,细胞外信号的膜受体仍然是未知的。蛇形受体是包含7个跨膜结构域的蛋白,其作用于分子识别中。G-蛋白偶联受体(GPCR),一般被称作蛇形受体或七个螺旋的受体。蛇形受体是包含7个跨膜结构域的蛋白,其作用于分子识别中,此类受体介导对数种刺激因素例如光、气味、信息素、激素、神经传递素、小肽、蛋白、脂和离子的应答(Hall RA, Premont RT &Lefkowitz RJ(1999)Heptahelical receptor signaling :beyond theG-protein paradigm. J Cell Biol 145:927-932)。
根据传统观点,GPCR经由结合鸟嘌呤核苷酸的异三聚体蛋白(G蛋白)而与例如腺苷酰环化酶或鸟苷酰环化酶、A2或C磷脂酶和离子通道的效应蛋白偶联。然而,现在证明, 很多7个螺旋的受体介导的过程不依赖于G蛋白而进行(Hall RA,Premont RT & Lefkowitz RJ(1999)Heptahelical receptor signaling :beyond the G-proteinparadigm. J Cell Biol 145 :927-932. ;Brzostowski JA & Kimmel AR(2001)Signaling at zero G G-protein-independent functions for7-TM-receptors. TRENDS Biochem Sci 26 291-297.)。GPCR是最广泛的膜受体类别,在细菌、真菌、植物和所有的后生动物生物体中都有其成员。虽然其具有包含7个跨膜结构域(7-TM)的保守性结构,但是GPCR是高度多样化的,每个家族成员在保守性跨膜区内的氨基酸水平仅有25%的同一性,在不同家族之间则有 艮{氐的才目 1以个生(Pierce KL, Premont RT & Lefkowitz RJ (2002) Seven-transmembrane receptors. Nat Rev Mol Cell Biol 3:639-50·)。因此,本发明涉及药物组合物,其包含一种或多种与存在于疟原虫属的寄生虫中的蛇形受体结合的化合物以及药学上可接受的赋形剂。蛇形受体可以属于以下家族视紫红质(家族A)、分泌素(家族B)和亲代谢型谷氨酸受体(家族C)。此外,蛇形受体可以是 G蛋白依赖性的或非依赖性的。受体可以存在于疟原虫属的以下种中恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、 夏氏疟原虫(Plasmodium chabaudi)、约氏疟原虫(Plasmodium yoelli)、间日疟原虫 (Plasmodium vivax)、三曰疱原虫(Plasmodium malariae)、伯氏疱原虫(Plasmodium berghei)。可以通过口服、胃肠外、直肠或表面途径使用药物组合物。如果经口服使用,则可以使用片剂、药丸、粉末(明胶胶囊、扁囊剂)或小丸、溶液、悬浮液、乳液、糖浆和药学上可接受的西也剂。对于胃肠外给药,优选水性或非水性溶液、悬浮液或乳液。直肠给药的组合物为栓剂或直肠胶囊。对于表面给药,可以使用例如霜、洗液、眼滴液、漱口液、鼻滴液或喷雾剂。本发明还描述了使用存在于疟原虫属的寄生虫中的蛇形受体的筛选方法和用于治疗疟疾的方法。蛇形受体可以分类为视紫红质(家族A)、分泌素(家族B)和亲代谢型谷氨酸受体(家族C)。蛇形受体可以是G蛋白依赖性的或非依赖性的。与蛇形受体结合的化合物可以是信息素、激素、神经传递素、小肽、蛋白、脂和离子。受体可以存在于疟原虫属的以下种中恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、 夏氏疟原虫(Plasmodium chabaudi)、约氏疟原虫(Plasmodium yoelli)、间日疟原虫 (Plasmodium vivax)、三曰疱原虫(Plasmodium malariae)、伯氏疱原虫(Plasmodium berghei)。筛选方法使用哺乳动物细胞中的蛇形受体的基因转染。在异源系统中表达此类基因之后,通过加入数种针对蛇形受体的潜在配体而测定细胞的钙浓度变化。以下是实施例,其是为了更好地解释本发明的范围,不是作为本发明的限制性影响的基础。实施例1 药物筛选方法
Ca21功能测定以不含血清的200 μ L DMEM将细胞清洗3次,并以不含血清的DMEM中的Fluo_4 AM(5 μ Μ)在37°C标记1小时。标记之后,以含有2mM CaCl2的200 μ L HBSS缓冲液(5. 4mM KCUO. 3mMNa2HP04,0. 4mM KH2PO4,4. 2mM NaHCO3、0. 5mM MgCl2、0. 6mMMgS04、137mM NaCU 5.6mM葡萄糖)将细胞清洗3次。共聚焦显微镜用于成像获取(激光扫描显微镜LSM 5IO-Carl Zeiss),使用LSM510软件,2. 5版。使用的物镜是40倍的(油浸)。以氩激光在 488nm激发样品,以505-530nm的带通滤波器收集所产生的荧光。测定中包括加入想要测定其应答的药物。2-「@11-碘褪黑激素结合测定将使用针对蛇形受体的候选物转染的C0S-7细胞在3000g离心5分钟并储存于-70°C直至使用。在结合缓冲液(IOmM Tris-HCl,ImMEDTA pH 7.5)中将细胞清洗2次。 将IxlO6个细胞在37°C与100pM2-[125I]-碘褪黑激素在200 μ L结合缓冲液(含有或不含 KTfiM的褪黑激素)中温育2个小时,以检测特异性结合。通过使用冰迅速冷却样品来终止反应,然后加入溶解于冷的结合缓冲液中的0. 的绵羊γ-球蛋白和ImL 的PEG 8000。通过在4°C在1800g离心30分钟回收与2-[1251]-碘褪黑激素结合的级份。弃上清, 将沉淀重悬于12%的PEG 8000和0.05% γ-球蛋白。通过再次离心回收沉淀物并在室温干燥(Conway等人,1997)。通过闪烁计数器(Tri-Carb 2100 TRPackard)检测放射活性。基因密码子优化通过商业途径(DNA 2.0)进行推定的受体的完整ORF序列的密码子优化。为了增加在哺乳动物细胞中的表达,在构建体的5’端加入Kozak共有序列(GCCGCC),并且在3’端加入FLAG表位以监视在异源系统中的表达。
权利要求
1.药物组合物,其包含一种或多种与存在于疟原虫(Plasmodium)属的寄生虫中的蛇形受体结合的化合物以及药学上可接受的赋形剂。
2.根据权利要求1的药物组合物,其中所述受体可以属于以下家族视紫红质(家族 A)、分泌素(家族B)和亲代谢型谷氨酸受体(家族C)。
3.根据权利要求1的药物组合物,其中所述蛇形受体可以是G蛋白依赖性的或非依赖性的。
4.根据权利要求1的药物组合物,其中所述化合物可以是信息素、激素、神经传递素、 小肽、蛋白、脂和离子。
5.根据权利要求1的药物组合物,其中所述受体可以存在于以下种中恶性疟原虫 (Plasmodium falciparum)、夏氏疱原虫(Plasmodiumchabaudi)、约氏疱原虫(Plasmodium yoelli)、间日疱原虫(Plasmodiumvivax)、三日疱原虫(Plasmodium malariae)、伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)。
6.药物筛选方法,其中使用存在于疟原虫属的寄生虫中的蛇形受体。
7.根据权利要求6的药物筛选方法,其中该方法使用以下技术在以针对蛇形受体的基因候选物转染的细胞中使用潜在配体筛选之后,测定钙的增加或AMPC。
8.治疗疟疾的方法,包括一种或多种与存在于疟原虫属的寄生虫中的蛇形受体结合的化合物。
9.根据权利要求8的治疗疟疾的方法,其中所述受体可以属于以下家族视紫红质 (家族A)、分泌素(家族B)和亲代谢型谷氨酸受体(家族C)。
10.根据权利要求8的治疗疟疾的方法,其中所述受体可以是G蛋白依赖性的或非依赖性的。
11.根据权利要求8的治疗疟疾的方法,其中所述化合物可以是信息素、激素、神经传递素、小肽、蛋白、脂和离子。
12.根据权利要求8的治疗疟疾的方法,其中所述受体可以存在于疟原虫属的以下种中恶性疱原虫(Plasmodium falciparum)、夏氏疱原虫(Plasmodium chabaudi)、约氏疱 J^(Plasmodium yoelli) > fS] H^eJ^^, (Plasmodium vivax) >H H ^eJ^^, (Plasmodium malariae)、伯氏疱原虫(Plasmodium berghei)。
全文摘要
本发明涉及存在于疟原虫属的寄生虫中的蛇形受体用于治疗疟疾的用途。
文档编号G01N31/00GK102171564SQ200980139052
公开日2011年8月31日 申请日期2009年10月2日 优先权日2008年10月3日
发明者B·马尔尼克, C·R·D·S·加西亚, L·M·D·席尔瓦, P·A·法沃雷托加兰特 申请人:圣保罗国情研究援助基金会, 圣保罗大学
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