专利名称：利用磁性微粒的检测方法
利用磁性微粒的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种检测抗原或抗体的检测方法，具体地说，涉及一种借助磁性微粒在微孔反应井中进行检测的检测方法。
背景技术：
利用免疫学反应原理进行检测是应用较广的一种检测方法。目前以酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)最为常用。所述 ELISA 法是通过吸附作用将抗原或抗体固定在微孔反应井的部分内壁上来检测相应的抗体或抗原；检测过程中通过反复浸泡、洗涤的物理方法去除不希望参加反应的物质。目前应用的ELISA检测方法表现出以下不足之处第一是由于使用的微孔反应井内表面积有限，与之结合的抗原或抗体相对较少，在检测过程中容易出现过多的被检物因其不能与反应井壁上相应的抗原或抗体很好结合，以至于检测结果低于被检物实际含量或实际存在的被捡物不能检测出来，检测效果较差；第二是通过浸泡、洗涤的方法去除不希望参加反应的物质效果不理想，经常出现其残留物影响反应结果的现象，并且操作比较繁琐；第三是由于与反应井壁结合的抗原或抗体通常是纯度很高的单一物质，在保存过程中容易出现其生物学活性下降，从而降低了检测的敏感性；第四是免疫反应只能在结合抗原或抗体的微孔井的部分内壁进行，浪费了大量的反应空间，反应速度慢。
发明内容本发明所解决的技术问题在于提供一种利用磁性微粒的检测方法，其可提高检测效果、简化操作过程。为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案一种利用磁性微粒的检测方法， 包括如下步骤首先，提供一微孔反应井并在该微孔反应井中加入磁性微粒、待检测物质和酶标记抗体或抗原结合物；再将所述微孔反应井置于25°C至45°C条件下保温15至60分钟；然后，将所述微孔反应井放在能产生磁力的磁力物质上1至5分钟，待微孔反应井中的磁性微粒下沉后去除微孔反应井中的液体；最后，往微孔反应井中加入与所述酶标记抗体或抗原结合物对应的底物。作为本技术方案的进一步改进，所述磁力物质为磁铁。作为本技术方案的进一步改进，所述磁性微粒为与抗原或抗体结合的磁颗粒。相较于现有技术，本发明所述的检测方法借助磁性微粒、微孔反应井和磁力物质， 能提高检测效果、简化操作过程。
具体实施方式本发明提供一种借助磁性微粒和微孔反应井建立的免疫学检测方法，有效避免现有技术中ELISA法的一些不足之处，以提高检测效果，提高检测系统稳定性，简化操作过禾呈。
本检测方法将用到如下物质磁性微粒、酶标记抗体或抗原结合物、与标记用酶对应的底物、磁力物质及微孔反应井。所述磁性微粒为与抗原或抗体结合的磁颗粒，该抗原或抗体是被检测物中的抗体或抗原。所述酶标记抗体或抗原结合物中的抗体或抗原是与被检测物中抗体或抗原相关的。所述磁力物质可产生磁力，如电磁物质或永磁物质，该磁力物质可对所述磁性微粒产生磁性吸引。所述微孔反应井用于容纳上述检测方法所需的各种物质，形成这些物质的反应容
器ο本发明所述的检测方法如下1.在所述微孔反应井中加入适量磁性微粒、适量待检测物质和适量酶标记抗体或抗原结合物；2.将所述微孔反应井置于25°C _45°C条件下保温15_60分钟，进行反应；3.再将所述微孔反应井放在磁力物质上1-5分钟，使微孔反应井中的磁性微粒受磁力物质吸引而下沉，随后去除微孔反应井中的液体；4.往微孔反应井中加入与所述酶标记抗体或抗原结合物对应的底物；5.测量在微孔反应井中液体的光吸收值或光强度；以下简要介绍利用本发明检测方法检测抗风疹病毒IgM抗体的实例，以具体说明本发明所述的检测方法。所述抗风疹病毒IgM抗体的检测过程分为两个步骤制备和检测。在所述制备过程中，先取直径100微米的磁性微粒lOOmg，用缓冲液I 50ml浸泡、 搅拌5-10分钟；将此液体放在磁力物质(如磁铁)上使磁性微粒下沉，弃液体，留取沉淀；
重复5次。然后，取5mg鼠抗人IgM单克隆抗体加入到上述沉淀物中，在容器中加入10mg/ml 的碳二亚胺1ml，室温下搅拌24小时。再加入缓冲液II 50ml浸泡、搅拌5_10分钟，将此液体放在所述磁力物质上使磁性微粒下沉，弃液体，留取沉淀；重复3次。将上述沉淀物放入含0. 吐温-20、0. 牛血清白蛋白、20%小牛血清的缓冲液II中，置-15°c -20°C条件下保存备用。
权利要求
1.一种利用磁性微粒的检测方法，包括如下步骤首先，提供一微孔反应井并在该微孔反应井中加入磁性微粒、待检测物质和酶标记抗体或抗原结合物；再将所述微孔反应井置于25°c至45°C条件下保温15至60分钟； 然后，将所述微孔反应井放在磁力物质上1至5分钟，待微孔反应井中的磁性微粒下沉后去除微孔反应井中的液体；最后，往微孔反应井中加入与所述酶标记抗体或抗原结合物对应的底物。
2.根据权利要求1所述的利用磁性微粒的检测方法，其特征在于所述磁力物质为磁铁。
3.根据权利要求1所述的利用磁性微粒的检测方法，其特征在于所述磁性微粒为与抗原或抗体结合的磁颗粒。
全文摘要
本发明提供了一种利用磁性微粒的检测方法，包括如下步骤首先，提供一微孔反应井并在该微孔反应井中加入可与抗原或抗体结合的磁性微粒、待检测物质和酶标记抗体或抗原结合物；再将所述微孔反应井置于25℃至45℃条件下保温15至60分钟；然后，将所述微孔反应井放在能产生磁力的磁力物质上1至5分钟，待微孔反应井中的磁性微粒下沉后去除微孔反应井中的液体；最后，往微孔反应井中加入前述酶标记抗体或抗原结合物对应的底物。相较于现有技术，本发明所述的检测方法借助磁性微粒、微孔反应井和磁力物质，能提高检测效果、简化操作过程。
文档编号G01N33/543GK102262154SQ201010182820
公开日2011年11月30日 申请日期2010年5月26日 优先权日2010年5月26日
发明者侯淑霞 申请人:侯淑霞