用于抑制移植物排斥的方法和组合物的制作方法

文档序号:6002089阅读:364来源:国知局
专利名称:用于抑制移植物排斥的方法和组合物的制作方法
技术领域
本发明的领域大体上是免疫学领域,尤其涉及用于治疗移植物排斥的方法和组合物。
背景技术
外科技术和免疫抑制疗法的持续发展使得器官移植成为了需要移植物的患者的特别成功的治疗选择。从1970年代环孢霉素(cyclosporine)的革命性的发现开始,免疫抑制方案得到了长足发展,并且使例如心脏、肾和骨髄等许多类型器官和组织移植物的存活率明显增加。举例来说,当前的统计学证实一年肝移植存活率超过80% (皮赖(Pillai)等人,世界胃肠病学杂志(World J Gastroenterol),15(34) :4225-4233 (2009))。手术移植器官和组织的成功在很大程度上取决于临床医师调节移植物受体的免疫应答的能力。如果移植的外来组织要存活和发挥作用,就必须控制针对所述组织的免疫应答。在移植物排斥期间,移植物受体正常作用的免疫系统将移植的器官识别为“非自身”组织,随后对移植的器官施加免疫应答。如果不加检查,那么免疫应答将产生众多最终会导致移植器官生物功能丧失或死亡的细胞和蛋白质,并且还会在移植物受体体内引起其它严重毒副作用。移植物排斥是人类体内长期移植物存活的最大障碍。T细胞在移植物排斥中起到关键作用(盖蒂A. (Gandhi,A.)等人,器官移植当代视点(Curr Opin Organ Transplant),13 :622-626 (2008))。预防移植物排斥的大多数疗法都集中在抑制T细胞活化。原生T细胞的完全活化需要两种信号(维森提F. (Vincennti,F.)等人,过敏与临床免疫学杂志(J Allergy Clin Immunol),121 (2) :299-306)。第一种信号具有抗原特异性,并且由T细胞受体与抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)上的MHC和抗原肽复合物相互作用所提供。第二种信号或共刺激信号是由APC上例如CD80和⑶86等分子与原生T细胞上的同源受体之间相互作用所提供。细胞因子(包括IL-2)的存在刺激活化过程,导致T细胞増殖。如果T细胞因此路径阻断而不能接收共刺激信号,那么其会变得无变应性并经历细胞凋亡。CD80(B7-1)和CD86 (B7-2)是共刺激分子B7超家族的成员,其各自可接合刺激性⑶28受体和抑制性CTLA-4(⑶152)受体。结合经由T细胞受体进行的信号传导,⑶28连接将增加T细胞的抗原特异性增殖;增进细胞因子产生;刺激分化和效应功能;并促进T细胞存活(兰萧(Lenshow)等人,免疫学年鉴(Annu. Rev. Immunol.), 14 :233-258 (1996);查姆博(Chambers)和埃里森(Allison),免疫学当代视点(Curr. Opin. Immunol.),9 =396-404(1997);以及雷斯梅尔(Rathmell)和汤普森(Thompson),免疫学年鉴,17 :781-828(1999))。相比之下,经由CTLA-4进行的信号传导被认为传递抑制T细胞増殖、IL-2产生和细胞周期进程的负信号(克鲁梅尔(Krummel)和埃里森(Allison),实验医学杂志(J. Exp. Med),183 :2533-2540(1996);和沃伦斯(Walunas)等人,实验医学杂志,183 :2541-2550(1996))。
当前的免疫抑制剂包括·丐调磷酸酶(calcineurin)抑制剂,例如环孢霉素和他克莫司(taciOlimus)。这些试剂抑制非T细胞独有的细胞内蛋白酶钙调磷酸酶。由于钙调磷酸酶存在于其它细胞类型中,故钙调磷酸酶抑制剂在其它组织中引起副作用。mTOR抑制剂(例如西罗莫司(sirolimus))类似地在其它组织中具有副作用,因为其抑制非T细胞特异性信号转导路径。(艾玛穆雷J. (Emamaullee, J.)等人,生物疗法专家观点(Expert Opin.Biol Ther. )9(6) :789-796 (2009))。结合于T细胞上的受体的基于抗体的试剂提供高于钙调磷酸酶抑制剂的选择性,但通常对免疫系统提供可持续数月的更有效的抑制作用。CTLA-4在T细胞活化后表达,并用于下调T细胞应答。CTLA-4结合于⑶80和⑶86配体的亲合力(avidity)高于结合⑶28,并与⑶28竞争下调T细胞活性。经显示,具有CTLA-4细胞外结构域的融合蛋白选择性防止经由CD28进行的T细胞活化(艾勒格M. (Alegre, Μ.)等人,现代药物设计(Current Pharmacoloical Design),12 :149-160)。因此,本发明ー个目的是提供用于抑制或減少移植物排斥的方法和组合物。本发明另一目的是提供用于延长同种异体移植物存活率的方法和组合物。本发明另一目的是提供用于抑制或減少移植物抗宿主疾病的方法和组合物。本发明另一目的是提供T细胞特异性免疫抑制剂。本发明另一目的是提供通过抑制原生T细胞发育成Thl、Thl7或Th22细胞中任一者来抑制移植物排斥的方法和组合物。本发明另一目的是提供通过抑制或減少促炎性分子的产生并由此抑制或減少移植物排斥来抑制移植物排斥的方法和组合物。本发明ー个目的是提供用于抑制移植物排斥的方法和组合物,其抑制T细胞增殖、减少或抑制T细胞产生促炎性分子、减少或抑制Thl、Thl7或Th22细胞分化和效应功能以及减少或抑制Thl、Thl7或Th22细胞存活。本发明另一目的是提供通过增强Treg的抑制作用来抑制移植物排斥的方法和组合物。本发明另一目的是提供通过增强Treg对Thl、Thl7和Th22路径的抑制作用以降低产生的IFN-γ、IL-17和其它发炎性分子的水平并由此抑制或减少炎症、同种异体反应性(alloreactivity)和移植物排斥来抑制移植物排斥的方法和组合物。本发明另一目的是提供通过投予直接作用于Treg的试剂以促进或增进IL-10产生,从而进一歩抑制发炎性分子的产生并由此抑制或減少移植物排斥来抑制移植物排斥的方法和组合物。本发明另一目的是提供用于抑制移植物排斥的方法和组合物,其増加或促进Treg活性、増加原生T细胞分化成Treg、増加Treg的数量或増加Treg的存活率。
本发明另一目的是提供用于调节Thl、Thl7或Th22T细胞的促炎性活性,同时增加或促进Treg活性的组合物和方法。本发明另一目的是提供用于抑制移植物排斥的组合疗法。

发明内容
本发明提供用于调节受试者的免疫应答的方法。优选实施例提供通过投予有效量的B7-H4多肽或其片段或融合蛋白,以抑制或降低免疫细胞的生物活性,或減少促炎性分子(例如促炎性细胞因子)的量来減少或抑制受试者,优选人类受试者的移植物排斥的方法和组合物。最优选的实施例是B7-H4-Ig融合蛋白。示范性促炎性分子包括(但不限干)IL-I β、TNF-a、TGF-β、IFN-Y、IL-17, IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 和 MMP。Thl、Thl7 和Th22是可作为B7-H4多肽、其融合蛋白或片段的抑制目标以抑制或减少炎症的示范性T细胞。B7-H4多肽或其片段或融合蛋白也可用于靶向分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞。此外,B7-H4多肽、其融合蛋白或片段可靶向Treg以增大对例如IL-17等发炎性分子产生的抑制作用。B7-H4多肽或者其片段或融合物也可直接作用于Treg以促进或增进 IL-10产生,从而进一歩抑制发炎性分子的产生,或增强Treg的抑制作用,并由此抑制或减少移植物排斥。B7-H4多肽或其片段或融合物作用于多种路径中的多个点。举例来说,其可抑制原生T细胞发育成Thl、Thl7、Th22或者分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞。或者,其可与Thl、Thl7、Th22和/或其它细胞相互作用以抑制或减少促炎性分子的产生,或抑制Thl、Thl7和Th22细胞的増殖。另外,其可与Treg协作以增大对Thl、Thl7和/或Th22细胞的抑制作用,由此降低产生的IFN-Y和/或IL-17的水平。其也可直接作用于Treg以促进或增进IL-10的产生,由此抑制Thl和/或Thl7路径。此外,其还可通过增进移入组织区域中Treg细胞的分化、募集和/或扩增来起作用。待处理的移植材料可以是细胞、组织、器官、肢体、手指或脚趾(digit)或身体(优选人体)的一部分。移植物通常为同种异体的或异种的。B7-H4多肽或者其片段或融合物可全身或局部投予。在一些实施例中,B7-H4多肽、其片段或融合物是在移植之前、同时或之后投予移植部位。在一个实施例中,B7-H4多肽、其片段或融合物经肠胃外(例如通过皮下注射)投予移植部位。在其它实施例中,B7-H4多肽或者其片段或融合物是离体直接投予待移植的细胞、组织或器官。在一个实施例中,在移植前、移植后或二者,移植材料与B7-H4多肽或者其片段或融合物接触。在其它实施例中,B7-H4多肽或者其片段或融合物投予免疫组织或器官,例如淋巴结或脾。也提供编码B7-H4多肽的载体。这些载体可用于在体内或离体将B7-H4局部传递到例如胰岛细胞。示范性载体是腺病毒载体。B7-H4多肽或者其片段或融合物可与ー种或ー种以上其它治疗剂组合投予,所述其它治疗剂包括(但不限干)针对其它淋巴细胞表面标记物(例如CD40)或针对细胞因子的抗体;其它融合蛋白,例如CTLA-4-Ig (Orencia )、TNFR-Ig (Enbrel );或其它免疫抑制药物、抗增殖剂、细胞毒性剂,或可能有助于免疫抑制的其它化合物。在一个实施例中,所述其它治疗剂是CTLA-4融合蛋白,例如CTLA-4Ig(阿巴西普(abatac印t))。在ー个优选实施例中,所述其它治疗剂是称为贝拉西普(belatacept)的CTLA-4-Ig融合蛋白,其含有两个在体内明显增加其与⑶86的亲合力的氨基酸取代(L104E和A29Y)。
另ー实施例提供用于治疗有需要的受试者的移植物抗宿主疾病(graft versushost disease, GVHD)的ー种或ー种以上症状的方法和组合物,其是通过投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以减轻ー种或ー种以上GVHD相关性症状实现。另ー实施例提供ー种用于治疗糖尿病的方法,其通过将产胰岛素细胞移植到有需要的受试者体内,并投予有效量B7- H4多肽、其融合物或者编码B7-H4多肽或B7-H4融合蛋白的载体以抑制或減少所述产胰岛素细胞的移植物排斥来实现。也提供一种用于抑制或減少慢性移植物排斥的方法。所述方法包括对有需要的受试者投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物,以相对于对照物抑制或減少慢性移植物排斥。


图I是诱发糖尿病并用同种异体胰岛移植治疗,并且在第O天、第2天、第4天、第6天和第8天投予B7-H4-Ig(0. 25mg)的示意性说明。图2是用B7-H4_Ig(实线)或对照物(虚线)治疗的小鼠的胰岛存活百分比与移植后天数的关系的线图。图3是移植物抗宿主疾病分析法的实验设计的示意图。使4组小鼠经历骨髄移植。第I组具有同种同基因骨髄移植物。第II组具有同种异体骨髄移植物,并在第O天、第
I天、第7天和第14天用对照IgG(O. 5mg)治疗。第III组具有同种异体骨髄移植物,并在第O天、第I天、第7天和第14天用B7-H4-Ig(0. 5mg)治疗。第IV组具有同种异体骨髄移植物,并在第O天、第I天、第7天和第14天用磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate bufferedsaline, PBS)治疗。图4A是显示图3中治疗的第II组和第III组小鼠的腹泻临床评分的柱形图。对照IgG(实心阴影)。B7-H4-Ig (空心框)。图4B是显示图3中治疗的小鼠的体重减轻百分比的柱形图。对照IgG(实心阴影)。图5是显示图3中治疗的小鼠的存活率百分比与骨髄移植后天数的关系的线图。同种同基因移植物(实心方形)、用对照IgG治疗的同种异体移植物(空心三角形)、用B7-H4-Ig治疗的同种异体移植物(实心三角形)、用磷酸盐缓冲生理盐水治疗的同种异体移植物(空心圆形)。如箭头所指示,在第O天、第I天、第7天和第14天注射O. 5mg指定蛋白质。
具体实施例方式I.定义术语“同种同基因”是指遗传上相同或密切相关的生物体、细胞、组织、器官等。术语“同种异体”是指生物体、细胞、组织、器官等来自或源自于同一物种的个体,但其中所述生物体、细胞、组织、器官等在遗传学上彼此不同。术语“异种移植物”是指供体与受体属于不同物种的移植物。术语“移植物排斥”是指移植物受体上或移植物受体中移植的细胞、组织、器官等的部分或完全破坏。术语“宿主”或“受试者”是指作为移植的细胞、组织、器官等的受体的生物体(优选所述生物体是哺乳动物)、组织、器官等。当提到移植物宿主、受试者或受体时,术语“宿主”、“受体”或“受试者”在本文中可互換使用。“在治疗上有效抑制移植物排斥的量”是指B7-H4_Ig当投予移植物受体时相对于未治疗对照抑制(部分或完全)移植物排斥的量。本文中使用的“发炎性分子”是指细胞因子、金属蛋白酶和其它分子,包括(但不限于)IL-I β、TNF- a、TGF- β、IFN- y、IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21 和 MMP。II.B7-H4和其融合蛋白A. B7-H4B7-H4是B7蛋白质家族的成员,并涉及T细胞信号传导路径。原生T细胞的完全活化需要两种信号(维森提F.等人,过敏与临床免疫学杂志,121 (2) :299-306)。第 ー种信号具有抗原特异性,并且由T细胞受体与抗原提呈细胞(APC)上的MHC和抗原肽复合物相互作用所提供。第二种信号或共刺激信号是由APC上例如CD80和CD86等分子与原生T细胞上例如CD28等同源受体之间相互作用所提供。最详尽表征的T细胞共刺激路径是B7-⑶28,其中B7-l(⑶80)和B7-2 (⑶86)各自可接合刺激性⑶28受体和抑制性CTLA-4(⑶152)受体。结合经由T细胞受体进行的信号传导,⑶28连接将增加T细胞的抗原特异性增殖;增进细胞因子产生;刺激分化和效应功能;并促进T细胞存活(兰萧等人,免疫学年鉴,14 :233-258(1996);查姆博和埃里森,免疫学当代视点,9 :396-404(1997);以及雷斯梅尔和汤普森,免疫学年鉴,17 :781-828 (1999))。相比之下,经由CTLA-4进行的信号传导被认为传递抑制T细胞増殖、IL-2产生和细胞周期进程的负信号(克鲁梅尔和埃里森,实验医学杂志,183 :2533-2540(1996);和沃伦斯等人,实验医学杂志,183 :2541-2550(1996))。B7家族的其它成员包括B7-H1 (董(Dong)等人,自然-医学(Nature Med),5 :1365-1369 (1999);和弗雷曼(Freeman)等人,实验医学杂志,192 :1-9(2000))、B7-DC (曾(Tseng)等人,实验医学杂志,193 :839-846 (2001);和拉奇曼(Latchman)等人,自然-免疫学(Nature Immunol), 2 :261-268 (2001) )、B7-H2 (王(Wang)等人,血液(Blood), 96 :2808-2813 (2000);斯瓦洛(Swallow)等人,免疫学(Immunity),
11:423-432(1999);和吉永(Yoshinaga)等人,自然(Nature), 402 :827-832 (1999))和B7-H3(查普沃(Chapoval)等人,自然-免疫学,2 :269-274 (2001))以及 B7_H4(崔(Choi)等人,免疫学杂志(J. Immunol), 171 =4650-4654(2003);西卡(Sica)等人,免疫学,18:849-861(2003);普拉萨德(Prasad)等人,免疫学,18 :863-873 (2003);和臧(Zang)等人,美国国家科学院院刊(Proc. Natl Acad Scl U. S. A. ),100 :10388-10392 (2003))。B7-H1 和B7-DC是PD-I的配体,B7-H2是ICOS的配体,且B7-H3和B7-H4此时仍为孤儿配体(orphanligand)(董(Dong)等人,免疫学研究(Tmmunol Res.), 28 :39_48 (2003))。B7-H4是T细胞应答的负调控子。人类与小鼠B7-H4共有87%氨基酸一致性,表明重要的在进化上保守的功能。人类和小鼠B7-H4mRNA在淋巴(脾和胸腺)和非淋巴器官(包括肺、肝、睾丸、卵巣、胎盘、骨骼肌、胰腺和小肠)中广泛表达,但利用免疫组织化学方法在正常人类组织中未检测到B7-H4蛋白。关于B7-H4蛋白表达的有限研究表明,B7-H4不在新分离的人类T细胞、B细胞、DC和单核细胞上表达,但其可在体外刺激后在这些细胞类型上诱导。免疫组织化学染色显示,B7-H4在肺、卵巣和头颈肿瘤中高度表达,并且逆转录酶聚合_链反放(reverse-transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)分析表明,小鼠B7-H4也在包括前列腺、肺和结肠癌在内的大量肿瘤细胞系中高度表达。使用B7-H4转染子和固定的B7-H4_Ig融合蛋白进行的功能研究证实,B7-H4传递抑制TCR介导的⑶4+和⑶8+T増殖、细胞周期进程和IL-2产生的信号。B7-1共刺激不能克服B7-H4-Ig诱导的抑制作用。与体外活性一致,B7-H4基因敲除小鼠产生自体免疫性。B.示范性B7-H4多肽和融合蛋白提供的融合蛋白含有与其它多肽偶联形成融合蛋白的B7-H4多肽。B7-H4融合多肽具有第一融合搭配物,其包含(i)与第二多肽直接融合或(ii)任选与融合第二多肽的连接肽序列融合的B7-H4蛋白的全部或一部分。融合蛋白任选含有用以使两种或两种以上融合蛋白ニ聚或多聚的结构域。肽/多肽连接子结构域可为独立结构域,或者可包含在融合蛋白其它结构域(B7-H4多肽或第二多肽)中的一者内。类似地,用以使融合蛋白ニ聚或多聚的结构域可为独立结构域,或者可包含在融合蛋白其它结构域(B7-H4多肽、第二多肽或肽/多肽连接子结构域)中的一者内。在一个实施例中,ニ聚/多聚结构域与肽/多肽连 接子结构域是相同的。本文掲示的融合蛋白具有式I :N_R「R2_R3_C其中“N”表示融合蛋白的N末端,“C”表示融合蛋白的C末端,“R/’是B7-H4多肽,“R2”是任选存在的肽/多肽连接子结构域,且“R3”是第二多肽。或者,R3可为B7-H4多肽,且R1可为第二多肽。融合蛋白可为ニ聚合或多聚合的。ニ聚或多聚反应可通过ニ聚或多聚结构域在两种或两种以上融合蛋白之间发生。或者,融合蛋白的ニ聚或多聚反应可通过化学交联发生。形成的ニ聚体或多聚体可为均ニ聚体/均多聚体或杂ニ聚体/杂多聚体。Α·Β7_Η4 多肽在一个优选实施例中,Β7-Η4多肽来自哺乳动物物种。在最优选的实施例中,Β7-Η4多肽为鼠类、非人类灵长类动物(黑猩猩(Pan troglodytes)、恒河猴(Macaca mulatto)或食蟹猴(Macaca fascicularis))或人类来源。适用的鼠类B7-H4多肽与由基因库寄存编号(GenBank Accession Number) NM_178594 或 AY280973 的核酸所编码的 B7-H4 多肽具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列一致性。适用的鼠类B7-H4多肽与根据基因库寄存编号AAH32925. I或NP 848709. 2的B7-H4多肽具有至少约80 %、85 %、90 %、95 %或100%序列一致性。适用的人类B7-H4多肽与由基因库寄存编号AK026071的核酸所编码的B7-H4多肽具有至少约80 %、85 %、90 %、95 %或100 %序列一致性。适用的人类B7-H4多肽与根据基因库寄存编号NP 078902.2或BAB 15349. I的B7-H4多肽具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列一致性。鼠类B7-H4多肽可由与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序
列一致性的核苷酸序列编码atggcttcct tggggcagat catcttttgg agtattatta acatcatcat catcctggct60ggggccatcg cactcatcat tggctttggc atttcaggca agcacttcat cacggtcacg120accttcacct cagctggaaa cattggagag gacgggaccc tgagctgcac ttttgaacct180gacatcaaac tcaacggcat cgtcatccag tggctgaaag aaggcatcaa aggtttggtc240cacgagttca aagaaggcaa agacgacctc tcacagcagc atgagatgtt cagaggccgc300acagcagtgt ttgctgatca ggtggtagtt ggcaatgctt ccctgagact gaaaaacgtg360cagctcacgg atgctggcac ctacacatgt tacatccgca cctcaaaagg caaagggaat420gcaaaccttg agtataagac cggagccttc agtatgccag agataaatgt ggactataat480gccagttcag agagtttacg ctgcgaggct cctcggtggt tcccccagcc cacagtggcc540tgggcatctc aagtcgacca aggagccaat ttctcagaag tctccaacac cagctttgag600ttgaactctg agaatgtgac catgaaggtc gtatctgtgc tctacaatgt cacaatcaac660aacacatact cctgtatgat tgaaaacgac attgccaaag ccaccgggga catcaaagtg720acagattcag aggtcaaaag gcgaagtcag ctgcagttgc tgaactctgg gccttccccg780tgtgtttttt cttctgcctt tgtggctggc tgggcactcc tatctctctc ctgttgcctg840atgctaagatg a852(SEQ ID NO :1) 鼠类B7-H4多肽可与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性MASLGQIIFff SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP60DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQVVV GNASLRLKNV120QLTDAGTYTC YIRSSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRffFPQPTVA180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TD SE VKRRSQ LQLLNSGPSP CVSSSAFVAG W ALLSLSCCL MLR283(SEQIDN0 2),
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ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR240SQLQLLNSGP SPCVFSSAFV AGWALLSLSC CLMLR275(SEQ ID NO :6)或GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK60DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ VVVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRTSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG PSPCVFSSAF240VAGWALLSLSCCLMLR
256(SEQ ID NO :7)人类B7-H4多肽可由与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性的核苷酸序列编码atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct60ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccat cacagtcact120actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct180gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc240catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg300acagcagtgt ttgctgatca agtgatagtt ggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg360caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca cttctaaagg caaggggaat420gctaaccttg agtataaaac tggagccttc agcatgccgg aagtgaatgt ggactataat480gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggct ccccgatggt tcccccagcc cacagtggtc540tgggcatccc aagttgacca gggagccaac ttctcggaag tctccaatac cagctttgag600ctgaactctg agaatgtgac catgaaggtt gtgtctgtgc tctacaatgt tacgatcaac660aacacatact cctgtatgat tgaaaatgac attgccaaag caacagggga tatcaaagtg720acagaatcgg agatcaaaag gcggagtcac ctacagctgc taaactcaaa ggcttctctg780tgtgtctctt ctttctttgc catcagctgg gcacttctgc ctctcagccc ttacctgatg840ctaaaataa849(SEQ ID NO :8)。人类B7-H4多肽可与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRffFPQPTVV180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSH LQLLNSKASL CVSSFFAISff ALLPLSPYLM LK282(SEQ ID NO:9)、MEffSffVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV60IQffLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRffFPQPT VVffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR240SHLQLLNSKA SLCVSSFFAI SffALLPLSPY LMLK274(SEQ ID NO :10)、GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQffLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120 GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVffASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT
权利要求
1.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法,其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少移植物排斥的量抑制或减少选自由以下组成的群组的免疫细胞的分化、增殖、活性或者细胞因子产生或分泌Thl、Thl7、Th22或者分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞。
2.根据权利要求I所述的方法,其中所述B7-H4蛋白抑制原生T细胞发育成Thl7、Thl或Th22细胞。
3.根据权利要求4所述的方法,其中所述B7-H4蛋白抑制所述受试者中的免疫细胞产生 INF Y。
4.根据权利要求6所述的方法,其中所述B7-H4蛋白抑制所述受试者中的免疫细胞产生 IL-17 或 IL-22。
5.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法,其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少移植物排斥的量抑制或减少选自由以下组成的群组的两种或两种以上类型的免疫细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌Thl、Thl7、Th22或者分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞。
6.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法,其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白,以有效抑制或减少移植物排斥的量增强Treg对Thl7路径的抑制作用。
7.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法,其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少所述受试者的移植物排斥的量促进或增进Treg产生IL-10。
8.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法,其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少所述受试者的移植物排斥的量增加Treg的数量,或增进移入组织区域中Treg细胞的募集或扩增。
9.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法,其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少所述受试者的移植物排斥的量抑制Thl和Thl7路径,并对Treg起作用以增强其对所述Thl7路径的抑制作用,或者促进或增进Treg对IL-IO的分泌。
10.一种用于减少受试者中细胞因子产生的方法,其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4多肽、B7-H4融合蛋白、B7-H4激动剂抗体或其片段以抑制所述受试者中一种或一种以上细胞因子的产生。
11.根据权利要求I到10中任一权利要求所述的方法,其进一步包含投予第二治疗剂。
12.根据权利要求11所述的方法,其中所述第二治疗剂选自由以下各物组成的群组糖皮质激素氟替卡松(fluticasone);沙美特罗(salmeteroal);针对IL-12、IL-6、IFN-Y、IL-23、IL-22、IL-21 和 IL-4 的抗体;维生素 D3 ;CTLA-4_Ig ;贝拉西普(belatacept);地塞米松(dexamethasone),和其组合。
13.—种抑制或减少受试者的移植物排斥的方法,其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4多肽、B7-H4融合蛋白、B7-H4激动剂抗体或其片段以借助相对于对照物有效抑制或减少所述受试者的移植物排斥的量抑制ThO细胞分化成Thl细胞、Thl7细胞或Th22细胞中的一者或一者以上。
14.根据权利要求I到13中任一权利要求所述的方法,其中所述移植物是同种异体移植物。
15.根据权利要求I到14中任一权利要求所述的方法,其中所述移植物是皮肤移植物、组织移植物、器官移植物或骨髓移植物。
16.根据权利要求I到15中任一权利要求所述的方法,其中所述B7-H4融合蛋白是在移植之前、移植之后或二者直接投予待移植的细胞、组织或器官。
17.根据权利要求I到15中任一权利要求所述的方法,其中所述B7-H4融合蛋白直接投予免疫器官。
18.—种用于治疗受试者的移植物抗宿主疾病(GVHD)的一种或一种以上症状的方法,其包含对已经接受或将要接受移植物的受试者投予有效量的B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段以减轻GVHD的一种或一种以上症状。
19.一种用于治疗糖尿病的方法,其包含将产胰岛素细胞移植到有需要的受试者中,和对所述受试者投予有效量的B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段以减轻与糖尿病相关的一种或一种以上症状。
20.一种用于抑制或减少受试者的慢性移植物排斥的方法,其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4融合蛋白以相对于对照物抑制或减少慢性移植物排斥。
21.一种用于预测患者排斥移植的可能性的方法,其包含 (a)确定所述患者体内的sH4水平; (b)将所述患者体内的sH4水平与已进行移植的一个或一个以上其它患者体内的sH4水平相比较以确定在具有(a)中确定的所述sH4水平的其它患者中移植排斥的频率。
22.—种选择移植患者的方法,其包含 (a)根据权利要求21所述的方法; (b)选择具有30%或更低排斥移植物可能性的患者。
全文摘要
本发明提供用于调节受试者的免疫应答的方法。优选实施例提供用于减少或抑制受试者,优选人类受试者的移植物排斥的方法和组合物。可以通过投予有效量的B7-H4多肽、其片段或融合物以抑制或降低免疫细胞的生物活性或减少移植物部位处促炎性分子的量来抑制或减少受试者的移植物排斥。ThI、ThI 7和Th22细胞是可作为B7-H4多肽、其融合蛋白或片段的抑制目标以抑制或减少炎症的示范性T细胞。
文档编号G01N33/68GK102666581SQ201080048847
公开日2012年9月12日 申请日期2010年8月31日 优先权日2009年8月31日
发明者琳达·刘, 索罗蒙·兰格曼 申请人:艾普利穆恩公司
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