专利名称：一种安儿宁颗粒的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物的质量检测方法，特别涉及安儿宁颗粒的质量检测方法。
背景技术：
安儿宁颗粒记载于国家药品标准，标准编号WS-10640(ZD-0640)-2002。具有清热祛风，化痰止咳的作用。用于小儿风热感冒，咳嗽有痰，发热咽痛，上呼吸道感染见上述证候
者ο小儿上呼吸道感染、感冒、咳喘是临床上的常见病、多发病，治疗方法颇多，但效果不一。安儿宁颗粒是藏医传统古验方，经藏医长期临床应用，该药具有清热解毒祛风化痰的作用，用于小儿伤风感冒、肺炎、支气管炎及其引起的咳嗽和发热等症。安儿宁颗粒剂由于效果良好，且综合考虑了小儿的生理、病理特点，经临床验证，疗效显著，无毒副作用，在临床上备受患者青睐。然而，现行安儿宁颗粒的质量检测标准包括胆酸的鉴别、胆红素的含量测定这两部分，该质量检测方法不能保证安儿宁颗粒的质量，为临床使用埋下了隐患。亟需研究一套关于安儿宁颗粒的更准确、严密的质量检测方法。
发明内容
本发明目的在于公开一种安儿宁颗粒的质量检测方法。本发明目的是通过如下方案实现的。本发明安儿宁颗粒的质量检测方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种鉴别A.取安儿宁颗粒l_3g，研细，加丙酮5-15ml，超声处理10-30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加丙酮制成每Iml各含0. 1-0. 3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-氯仿-冰醋酸(1-3 1-3 0.5-1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在IOO0C -110°C加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。B.安儿宁颗粒研细后，取粉末5-15g，加甲醇15-25ml，超声提取20-40min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水10-30ml全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取3-5次，每次10-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇勻，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每Iml甲醇溶液含0. 1-0. 3mg对照品溶液，摇勻，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶GF2M薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(3-7 2-6 1-4)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定A.胆红素照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液(70-90 5-15 5-15)为流动相；检测波长为450nm ；理论板数按胆红素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备精密称取胆红素对照品，加氯仿制成每Iml含5_15μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末3_7g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷20-30ml，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用二氯甲烷补足减失的重量，摇勻，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；安儿宁颗粒每克含胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于0. 04mg ；B.甘草酸照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 5%磷酸溶液(30-40 60-70)为流动相；检测波长为250nm;理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每Iml含0. 1-0. 3mg的溶液，即得(甘草酸重量=甘草酸铵/1.0207)；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末5_8g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；安儿宁颗粒每克含甘草酸(C42H61O16NH4)计，不得少于0. 33mg ；C.岩白菜素照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(10-30 70-90)为流动相；检测波长为275nm;理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每Iml含40-60 μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末2_4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；安儿宁颗粒每克含岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于0. 67mg。
本发明安儿宁颗粒的质量检测方法优选包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种鉴别A.取安儿宁颗粒2g，研细，加丙酮10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至lml，作为供试品溶液；另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加丙酮制成每Iml各含0. 2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-氯仿-冰醋酸O 2 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。B.安儿宁颗粒研细后，取粉末10g，加甲醇20ml，超声提取30min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水20ml全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇勻，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每Iml甲醇溶液含0. 2mg对照品溶液，摇勻，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶GF2M薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5 4 2.5)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定A.胆红素照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液(80 10 10)为流动相；检测波长为450nm;理论板数按胆红素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备精密称取胆红素对照品，加氯仿制成每Iml含10μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用二氯甲烷补足减失的重量，摇勻，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；安儿宁颗粒每克含胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于0. 04mgoB.甘草酸照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 5%磷酸溶液(37 63)为流动相；检测波长为250nm;理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，即得(甘草酸重量=甘草酸铵/1.0207)；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末6. 5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测 定，即得；安儿宁颗粒每克含甘草酸(C42H61016NH4)计，不得少于0. 33mg。C.岩白菜素照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (20 80)为流动相；检测波长为275nm;理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含50y g的溶 液，即得；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶 中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀， 滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测 定，即得；安儿宁颗粒每克含岩白菜素(C14H1609)计，不得少于0. 67mg。其中，上述安儿宁颗粒的原料药组成为红花30-70重量份 白檀香 40-70重量份甘草30-70重量份 高山辣根菜30-70重量份岩白菜 30-70重量份 天竺黄 40-70重量份短管兔儿草40-70重量份 唐古特乌头40-70重量份人工牛黄 2-8重量份 蔗糖600-1200重量份。其中，上述安儿宁颗粒的原料药组成优选为红花53. 3重量份 白檀香 66. 7重量份甘草53. 3重量份 高山辣根菜53. 3重量份岩白菜 53. 3重量份 天竺黄 66. 7重量份短管兔耳草66. 7重量份 唐古特乌头66. 7重量份人工牛黄 5. 3重量份 蔗糖930重量份。其中，上述安儿宁颗粒由如下方法制备而成取红花、白檀香加3-7重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取2-4小时，收集挥发油，滤 过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加6-12重量 倍的的水，煎煮1-4次，时间为1-4小时，滤过，合并滤液，浓缩至P = 1. 02 1. 04(温度 50°C测定)的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏12-36小时，取上清液用高速管式离心机离 心，离心液继续浓缩至稠膏P = 1.07 1.09 (温度50°C测定)，喷雾干燥，即得安儿宁提 取物；取环糊精5-20重量份，溶于100体积份的40°C水中，超声1-3小时，在强力磁 力搅拌下加入1-3体积份的挥发油乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0. 3-0. 8体积份的挥 发油，强力搅拌1-6小时，冷藏12-36小时，滤过，30-50°C真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油 的环糊精包合物；取安儿宁提取物、^ -环糊精挥发油包合物和人工牛黄，混合加入蔗糖，混合均匀， 用50%乙醇溶液做润湿剂，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。
其中，上述安儿宁颗粒优选由如下方法制备而成取红花、白檀香加5重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取3小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加水煎煮2次，第一次加10重量倍的水煎煮2小时，第二次加8重量倍的水煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至P = 1.02 1.04(温度50°C测定)的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏M小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至稠膏P = 1.07 1.09(温度50°C测定)，喷雾干燥，即得安儿宁提取物；取β-环糊精10重量份，溶于100体积份的40°C水中，超声2小时，在强力磁力搅拌下加入2体积份的挥发油乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0. 5体积份的挥发油，强力搅拌2小时，冷藏M小时，滤过，40°C真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β -环糊精包合物；取安儿宁提取物、β -环糊精挥发油包合物和人工牛黄，混合加入蔗糖，混合均勻，用50%乙醇溶液做润湿剂，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。本发明所述重量份与体积份的关系为g/ml的关系。本发明公开了一种关于安儿宁颗粒的质量检测方法，该方法包括胆酸和岩白菜素的鉴别方法，还包括甘草酸、岩白菜素和胆红素的含量测定方法。经过实验研究，本发明质量检测方法中的鉴别方法在样品的供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。用本发明所述的含量测定方法测定安儿宁颗粒中的甘草酸和岩白菜素的含量，结果表明，该方法线性关系良好，回收率试验准确度较高，具有极好的重复性和稳定性，可以准确、严密地控制安儿宁颗粒的质量。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1对各种原料药鉴别方法的研究实验按照记载于国家药品标准，标准编号为WS-10640(ZD-0640)-2002，按照安儿宁颗粒的标准制备三批安儿宁颗粒，分别对其中的各种原料药的鉴别方法进行试验，实验依据及结果如下1、参考《中国药典》2010年版一部红花质量标准红花试验，结果表明三批样品和阴性对照色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无明显斑点。故不作为本发明安儿宁颗粒质量检测方法中的一部分。2、参考《复方岩白菜素片的薄层色谱鉴别法》对岩白菜试验，结果表明三批样品和阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；阴性对照有干扰。故不作为本发明安儿宁颗粒质量检测方法中的一部分。3、参考《薄层扫描法测定清肺消炎丸中岩白菜素的含量》对岩白菜试验，结果表明三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。故作为本发明安儿宁颗粒质量检测方法中的一部分。4、参考《兔耳草药材薄层色谱鉴别与含量测定》对短管兔耳草试验，结果表明三批样品和阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；阴性对照有干扰。故不作为本发明安儿宁颗粒质量检测方法中的一部分。5、参考七味肝胆清胶囊质量标准WS_106^ ^)-06 )-2002对短管兔耳草试验，结果表明展开剂极性太小，各斑点几乎没有展开。故不作为本发明安儿宁颗粒质量检测方法中的一部分。
6、参考《地黄饮料中所含成分梓醇的鉴别》对短管兔耳草试验，结果表明三批样品和阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；阴性对照有干扰。故不作为本发明安儿宁颗粒质量检测方法中的一部分。7、参考《中国药典》2010年版一部天竺黄质量标准对天竺黄试验，结果表明阴性有干扰。故不作为本发明安儿宁颗粒质量检测方法中的一部分。8、参考《中国药典》2010年版一部甘草质量标准对甘草试验，结果表明未见甘草酸铵有明显斑点，甘草对照药材所显斑点，供试品和阴性对照相应位置处也有相同的斑点，故阴性有干扰。故不作为本发明安儿宁颗粒质量检测方法中的一部分。9、参考《复方甘草合剂中甘草的薄层鉴别》对甘草试验，结果表明供试品和阴性对照在甘草酸铵相应位置处也有相同的斑点，故阴性有干扰。故不作为本发明安儿宁颗粒质量检测方法中的一部分。实验例2 HPLC法测定安儿宁颗粒中甘草酸的含量1.仪器、试药和供试样品仪器高效液相色谱仪日立L-7110泵，L-7420紫外检测器；岛津LC-20AT泵，SPD-20A检测器；岛津AUW220D电子天平 对照品甘草酸铵对照品样品安儿宁颗粒(按照记载于中成药地方标准上升国家药品标准部分中的安儿宁颗粒的标准制备)2.流动相的选择参考甘草含量测定项，拟选用乙腈-0. 5%磷酸溶液(37 63)为流动相，在此条件下，甘草酸铵与其它相邻峰分离度较大，峰形较好。3.检测波长的选择取甘草酸铵对照品溶液，于200-400nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定250nm为检测波长。4.对照品溶液的制备参考甘草含量测定方法，确定对照品溶液的制备方法为精密称取甘草酸铵对照品适量，加70%乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液即得。(甘草酸重量=甘草酸铵重量/1. 0207)5.供试品溶液的制备取安儿宁颗粒研细后粉末4. 0g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70%乙醇25ml，称定重量，超声处理30min，放冷后，用70 %乙醇补足减失的重量，摇勻，过滤，即得。6.系统适用性试验及阴性干扰的考察在上述色谱条件下，分别精密吸取空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，结果表明，供试品色谱中甘草酸铵与其相邻色谱峰的分离度大于1. 5，且阴性对照无干扰。7.标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取甘草酸铵对照品贮备液溶液(0. 3614mg/ml) Iml、2ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置IOml容量瓶中，70 %乙醇稀释至刻度，摇勻，各精密进样10μ 1，以峰面积㈧对对照品浓度(C)进行线性回归，得回归方程=A = 7175. 9C+43512，相关系数:R = 0. 9993。结果表明在36. 14ug/ml 361. 40ug/ml范围内，甘草酸铵的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。8.精密度试验分别精密吸取甘草酸铵对照品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD = 0. 80%。结果表明，仪器精密度良好。9.稳定性试验供试品溶液制备完成后，精密吸取10μ 1，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察8小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD = 0. 90%。结果表明供试品中胆红素在8小时内测定结果稳定。10.重复性试验取安儿宁颗粒，重复测定6次，计算样品中甘草酸的含量。结果甘草酸平均含量为0. 43mg/g, RSD = 0. 99%。表明分析方法重复性良好。11.回收率试验精密称取同一批安儿宁颗粒样品6份，精密加入甘草酸铵对照品，测定其含量，计算回收率，结果如下。甘草酸平均回收率为99.2%，RSD = 1.07%。表明该测定方法测定结果准确。表1回收率试验结果
权利要求
1. 一种安儿宁颗粒的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种鉴别A.取安儿宁颗粒l_3g，研细，加丙酮5-15ml，超声处理10-30分钟，滤过，滤液浓缩至lml，作为供试品溶液；另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加丙酮制成每Iml各含0. 1-0. 3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-氯仿-冰醋酸(1-3 1-3 0.5-1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100°C-11(TC加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；B.安儿宁颗粒研细后，取粉末5-15g，加甲醇15-25ml，超声提取20-40min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水10-30ml全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取3-5次，每次10-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇勻，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每Iml甲醇溶液含0. 1-0. 3mg对照品溶液，摇勻，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μ1，分别点于同一硅胶GF2M薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(3-7 2-6 1-4)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯2Mnm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定A.胆红素照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液(70-90 5-15 5-15)为流动相；检测波长为450nm ；理论板数按胆红素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备精密称取胆红素对照品，加氯仿制成每Iml含5-15 μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末3-7g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷20-30ml，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用二氯甲烷补足减失的重量，摇勻，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；安儿宁颗粒每克含胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于0. (Mmg ；B.甘草酸照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 5%磷酸溶液(30-40 60-70)为流动相；检测波长为250nm;理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每Iml含0. 1-0. 3mg的溶液，即得(甘草酸重量=甘草酸铵/1.0207)；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末5-8g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；安儿宁颗粒每克含甘草酸(C42H61O16NH4)计，不得少于0. 33mg ；C.岩白菜素照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(10-30 70-90)为流动相；检测波长为275nm;理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每Iml含40-60μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末2-4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；安儿宁颗粒每克含岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于0.67mg。
2.如权利要求1所述的安儿宁颗粒的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种鉴别A.取安儿宁颗粒2g，研细，加丙酮10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至lml，作为供试品溶液；另取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加丙酮制成每Iml各含0. 2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-氯仿-冰醋酸O 2 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；B.安儿宁颗粒研细后，取粉末10g，加甲醇20ml，超声提取30min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水20ml全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇勻，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每Iml甲醇溶液含0. 2mg对照品溶液，摇勻，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μ 1，分别点于同一硅胶GF2M薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5 4 2.5)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定A.胆红素照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液(80 10 10)为流动相；检测波长为450nm;理论板数按胆红素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备精密称取胆红素对照品，加氯仿制成每Iml含10μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精 密加入二氯甲烷25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用二氯甲烷补足减失的重量，摇 匀，滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 yl，注入液相色谱仪，测定，即得;安儿宁颗粒每克含胆红素(C33H36N406)计，不得少于0. 04mg ；B.甘草酸照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 5%磷酸 溶液(37 63)为流动相；检测波长为250nm ;理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000 ； 对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1ml含0. 2mg的溶液，即 得(甘草酸重量=甘草酸铵/I. 0207)；供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末6. 5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中， 精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10U1，注入液相色谱仪，测定，即得;安儿宁颗粒每克含甘草酸(C42H61016NH4)计，不得少于0. 33mg ；C.岩白菜素照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (20 80)为流动相；检测波长为275nm;理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含50y g的溶液，即得;供试品溶液的制备安儿宁颗粒研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精 密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过， 即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得;安儿宁颗粒每克含岩白菜素(C14H1609)计，不得少于0. 67mg。
3.如权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于其中所述的安儿宁颗粒的原料 药组成为红花30-70重量份 白檀香 40-70重量份甘草30-70重量份 高山辣根菜30-70重量份岩白菜 30-70重量份 天竺黄 40-70重量份 短管兔儿草40-70重量份 唐古特乌头40-70重量份 人工牛黄 2-8重量份 蔗糖600-1200重量份。
4.如权利要求3所述的质量检测方法，其特征在于其中所述的安儿宁颗粒的原料药组 成为红花53. 3重量份 白檀香 66. 7重量份甘草53. 3重量份 高山辣根菜53. 3重量份岩白菜 53. 3重量份天竺黄 66. 7重量份短管兔耳草66. 7重量份唐古特乌头66. 7重量份人工牛黄 5. 3重量份蔗糖930重量份。
5.如权利要求3所述的质量检测方法，其特征在于其中所述的安儿宁颗粒由如下方法制备而成取红花、白檀香加3-7重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取2-4小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加6-12重量倍的的水，煎煮1-4次，时间为1-4小时，滤过，合并滤液，浓缩至50°C下测定P =1.02 1.04的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏12-36小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至50°C下测定P = 1. 07 1. 09的稠膏，喷雾干燥，即得安儿宁提取物；取β-环糊精5-20重量份，溶于100体积份的40°C水中，超声1-3小时，在强力磁力搅拌下加入1-3体积份的挥发油乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0. 3-0. 8体积份的挥发油，强力搅拌1-6小时，冷藏12-36小时，滤过，30-50°C真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物；取安儿宁提取物、β -环糊精挥发油包合物和人工牛黄，混合加入蔗糖，混合均勻，用50%乙醇溶液做润湿剂，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。
6.如权利要求4所述的质量检测方法，其特征在于其中所述的安儿宁颗粒由如下方法制备而成取红花、白檀香加3-7重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取2-4小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加6-12重量倍的的水，煎煮1-4次，时间为1-4小时，滤过，合并滤液，浓缩至50°C下测定P = 1.02 1.04的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏12-36小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至50°C下测定P = 1. 07 1. 09的稠膏，喷雾干燥，即得安儿宁提取物；取β-环糊精5-20重量份，溶于100体积份的40°C水中，超声1-3小时，在强力磁力搅拌下加入1-3体积份的挥发油乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0. 3-0. 8体积份的挥发油，强力搅拌1-6小时，冷藏12-36小时，滤过，30-50°C真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物；取安儿宁提取物、β -环糊精挥发油包合物和人工牛黄，混合加入蔗糖，混合均勻，用50%乙醇溶液做润湿剂，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。
7.如权利要求5或6所述的质量检测方法，其特征在于其中所述的安儿宁颗粒由如下方法制备而成取红花、白檀香加5重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取3小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加水煎煮2次，第一次加10重量倍的水煎煮2小时，第二次加8重量倍的水煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至50°C下测定P =1.02 1.04的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏M小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至50°C下测定P = 1.07 1.09的稠膏，喷雾干燥，即得安儿宁提取物；取β -环糊精10重量份，溶于100体积份的40°C水中，超声2小时，在强力磁力搅拌下加入2体积份的挥发油乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0. 5体积份的挥发油，强力搅拌2小时，冷藏M小时，滤过，40°C真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物；取安儿宁提取物、β -环糊精挥发油包合物和人工牛黄，混合加入蔗糖，混合均勻，用50%乙醇溶液做润湿剂，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。
全文摘要
本发明公开了一种关于安儿宁颗粒的质量检测方法，该方法包括胆酸和岩白菜素的鉴别方法，还包括甘草酸、岩白菜素和胆红素的含量测定方法。经过实验研究，本发明质量检测方法中的鉴别方法在样品的供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。用本发明所述的含量测定方法测定安儿宁颗粒中的甘草酸和岩白菜素的含量，结果表明，该方法线性关系良好，回收率试验准确度较高，具有极好的重复性和稳定性，可以准确、严密地控制安儿宁颗粒的质量。
文档编号G01N30/02GK102579861SQ20111000943
公开日2012年7月18日 申请日期2011年1月17日 优先权日2011年1月17日
发明者孙绪丁, 张义智, 李丽, 李怀平, 马振元 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司