专利名称：一种检测多种常见氨基酸的液相色谱方法
技术领域：
本发明属于分析化学领域，涉及常见氨基酸的液相色谱检测方法，具体涉及一种检测多种常见氨基酸的液相色谱方法及用途。
背景技术：
已知氨基酸(Amino acid)为含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称，其示生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。现有技术公开了氨基连在α-碳上的为α-氨基酸；天然氨基酸均为α-氨基酸。其中，常见的20种L-α-氨基酸包括(I)精氨酸，(2)天冬酰胺，(3)谷氨酰胺，(4)丝氨酸，(5)天冬氨酸，
(6)谷氨酸，(7)苏氨酸，(8)甘氨酸，(9)丙氨酸，(10)脯氨酸，(11)甲硫氨酸，(12)缬氨酸，(13)苯丙氨酸，(14)色氨酸，(15)异亮氨酸，(16)亮氨酸，(17)组氨酸，(18)半胱氨酸，(19)赖氨酸，(20)酪氨酸，它们的结构通式为
权利要求
1.一种检测多种常见氨基酸的液相色谱方法，其特征在于，其包括步骤将待测样品经过样品预处理后，加入反应溶剂及衍生化试剂进行衍生化反应，然后采用高效液相色谱法测定20种常见氨基酸衍生物的浓度，确定氨基酸的含量。
2.按权利要求I所述的检测多种常见氨基酸的液相色谱方法，其特征在于，所述的反应试剂为不含有活泼胺基的有机溶剂，选自乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃、甲苯、苯或乙醚。
3.按权利要求I所述的检测多种常见氨基酸的液相色谱方法，其特征在于，所述的样品预处理是，取适量待测中性水溶液样品，加入乙腈稀释或沉淀蛋白。
4.按权利要求I所述的检测多种常见氨基酸的液相色谱方 法，其特征在于，所述的样品选自植物天然提取物、药品、保健食品或饲料；或血浆、尿液、脑脊液、生物组织材料。
5.按权利要求I所述的检测多种常见氨基酸的液相色谱方法，其特征在于，按下述步骤测定动植物天然提取物、药品、保健食品或饲料中20种常见氨基酸浓度 定量分取动植物天然提取物样品，加入定量的反应试剂混匀，再加入硼酸盐缓冲液及过量的衍生化试剂进行反应，涡旋混匀，放置一段时间后，用液相色谱法测定氨基酸衍生物的浓度； 所述的衍生化试剂为9-氯甲酸芴甲酯，其分子式为FMOC-C1，结构式如通式(I )，
6.按权利要求I所述的检测多种常见氨基酸的液相色谱方法，其特征在于，按下述步骤测定血浆、尿液、脑脊液、生物组织材料中20种常见氨基酸浓度， 定量称取待测样品，加入定量的蛋白沉淀试剂，涡旋混匀，高速离心，取上清液，加入硼酸盐缓冲液及过量的衍生化试剂反应，涡旋混匀，放置一段时间后，用液相色谱法测定氨基酸衍生物的浓度； 所述的蛋白沉淀试剂选自乙腈或者甲醇； 所述的高效液相色谱法，是采用紫外检测器测定20种常见氨基酸衍生物的峰面积，用标准曲线校正方程换算成氨基酸的浓度；其中，液相色谱柱采用通用型，填料选自十八烷基键合相硅胶或辛烷基键合相硅胶；流动相由乙腈和50 mM pH值为4. 15的乙酸钠缓冲液组成，梯度洗脱，检测波长为UV 263nm。
7.按权利要求5或6的方法，其特征在于，所述的20种常见氨基酸的线性范围为O.17 98. 40 μ g/mL。
8.按权利要求5或6的方法，其特征在于，所述的20种常见氨基酸的最低检测限为O.05 O. 13 μ g/mL，其中，进样量为20 μ L0
9.权利要求I的检测多种常见氨基酸的液相色谱方法在测定中药板蓝根中氨基酸浓度中的用途。
全文摘要
本发明属分析化学领域，涉及一种检测常见氨基酸的液相色谱方法以及其在中药板蓝根中的应用。本发明是将待测样品经过样品预处理后，加入反应溶剂及衍生化试剂进行衍生化反应，然后采用高效液相色谱法测定20种常见氨基酸的浓度。本发明的方法采用通用型的液相色谱柱和紫外检测器对氨基酸进行高效液相色谱测定，并能排除其他物质对氨基酸的干扰。本发明可用于动植物天然提取物、药品、保健食品、饲料以及血浆、尿液、脑脊液、生物组织等生物材料中氨基酸浓度的定量测定，且也可准确测定中药板蓝根中氨基酸的含量。
文档编号G01N30/06GK102621250SQ20111003284
公开日2012年8月1日 申请日期2011年1月30日 优先权日2011年1月30日
发明者周威, 段更利 申请人:复旦大学