专利名称：毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测酱油中各种防腐剂含量的方法，尤其是一种毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法。
背景技术：
酱油是一种富含营养、味道鲜美的调味品，受到微生物的污染时可能发生腐败变质，因此，生产厂家会添加一些食用防腐剂来抑制可能形成的腐败，在酱油中常用的防腐剂有苯甲酸、山梨酸以及对羟基苯甲酸酯类等。国家标准对防腐剂的限量作了明确规定，在安全使用范围内，防腐剂对人体无毒副作用，但过量食用对人体有一定毒性。目前有关的检测标准为GB/T 5009. 29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》和GB/T5009. 31-2003《食品中对羟基苯甲酸酯类的测定》，如果直接采用标准方法进行酱油中各种防腐剂含量的测定，一份样品要用两种方法分别进行预处理和采用不同的仪器条件，费时费力。而且经实践发现， 在直接采用该标准对酱油类产品进行检测时，加标回收率较低，测定结果不稳定，并且在对较为浓稠的老抽类样品进行萃取时还容易因乳化现象的发生而难以分层进行后续操作。因此直接采用该标准中的气相色谱法对酱油类产品特别是老抽类样品进行检测时，精密度与准确度均不够理想，这是由于采用外标法定量，无论是样品处理还是仪器条件都可能导致误差的产生，繁琐的测定步骤增加了操作误差的发生几率，上机测定更是要求必须具有相当高的仪器性能与配置，例如需配置自动进样器来确保准确控制进样量等。
发明内容
为克服了现有技术的不足，本发明提供了一种毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，该方法可同时测定酱油中的苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸以及尼泊金酯类等防腐剂的含量，操作简便易行，能有效减少操作误差、以及仪器条件等因素对测定结果的影响，结果准确可靠。本发明的目的是通过以下技术措施来实现一种毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其包括以下步骤(1)称取酱油样品；(2)在样品中加入内标物溶液，然后依次进行酸化、乙醚提取，净化除水和浓缩处理，得到样品溶液；(3)取步骤O)中的样品溶液进行气相色谱分析，获得色谱分析数据；(4)将步骤(3)的获得的色谱分析数据与预定防腐剂标准数据比对，得到酱油中各种防腐剂的含量。本发明步骤(1)中可根据不同酱油类别称取所述的酱油样品的用量。其中，生抽类酱油推荐称取量在0. 5 2. 5g之间。由于老抽类酱油采用乙醚提取时，易出现乳化，导致无法达到有效提取防腐剂的目的，因而在本发明所述的步骤(1)中如样品是老抽类酱油时，需对老抽类酱油进行预处理在老抽类酱油样品中加入氯化钠溶液稀释1 2. 5倍。本发明所述的步骤( 推荐使用以下具体操作将酱油样品置于具塞容器中，准确加入0. 3 0. 7ml内标溶液，再加入0. 3 0. 7ml盐酸溶液，混勻，用20 40ml乙醚分 2次萃取，合并两次上层溶液；加入3 5ml硫酸氢钠溶液，洗涤净化，然后去除下层溶液， 然后向上层溶液中加入3 7g无水硫酸钠除水后，吹氮浓缩，再用丙酮稀释，备用。所述的具塞容器可以采用具塞量筒、具塞试管或比色管。本发明所述的步骤C3)推荐的色谱条件为所述的毛细管色谱柱采用极性毛细管色谱柱或非极性毛细管色谱柱，要求能对各待测组分与内标物质同时实现良好分离；恒温 (柱温约200 220°C)或适当的程序升温均可；恒流或恒压均可，手动或自动进样均可，载气为高纯氮气。所述的极性毛细管色谱柱可以采用HP-20M、DB-WAX或者PEG-20M等，且长度在30m 以上。在本发明中所述的内标物溶液推荐采用脂肪酸酯的丙酮溶液，要求内标峰位于待测组分峰之间，无覆盖。选用酯类物质的丙酮溶液作内标比用酸类物质更稳定，在冷藏条件下可保存较长时间不变质。所述的脂肪酸酯的丙酮溶液浓度在2 3g/L之间。所述的脂肪酸酯可以是碳数为16 M的脂肪酸甲酯或其它酯类的丙酮溶液，本发明所述步骤中预定防腐剂标准数据是通过用加有内标物溶液的0. 1 2. Og/L的各种待测防腐剂组分的系列标准溶液，在设定的气相色谱条件下测得防腐剂的校正因子。本发明所述的乙醚必须经过碘化钾溶液检查，不得含有过氧化物，否则容易造成山梨酸测定结果偏低。本发明的优点在于采用内标法，有效减少了因进样量、溶剂损失、待测样品的浓度等各种因素造成的误差，即使测定条件略有变化也不会对结果产生影响，若采用外标法定量，则对仪器用具和人员操作的要求很高。该方法操作简便，利用一般的检测仪器与用具，就能获得较为理想的测定结果，样品预处理时间也比标准方法大大缩短，成本相对较低，易于推广。而且极性固定相恒温分离的条件还能用于对食用植物油的脂肪酸组成常规分析，可在同一台仪器上实现对两个检测项目的交替测定，提高了仪器的利用率。
图1是本发明实施例一的毛细管气相色谱色谱图。图2是本发明实施例二的毛细管气相色谱色谱图。
具体实施例方式为了更好地理解发明的实质，下面用实施例来详细说明发明的技术内容，但本发明的内容并不局限于此。实施例一1.色谱条件配置FID检测器的气相色谱仪；
毛细管色谱柱为DB-WAX (30m X0. 32mm X0. 25 μ m)柱温210°C，汽化室与检测室均为230°C手动进样Ι.ΟμΙ载气为高纯氮气，柱头压0.07Mpa，分流比100 12.校正因子测定配制标准溶液精确称取苯甲酸、山梨酸各0. 2g，用丙酮溶解并定容至IOOml ；配制内标溶液精确称取十七烷酸甲酯0. 2g，用丙酮溶解并定容至IOOml ；配制标准使用溶液取适量标准溶液与内标溶液混合，内标浓度为0. 4g/L，标准物质浓度则分别为0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Og/L。在上述色谱条件下，用系列标准使用溶液进样，以峰面积比和浓度比绘制标准曲线，获得苯甲酸与山梨酸的校正因子，建立相应的内标分析方法。3.样品处理称取老抽样品1. Og,精确至0. OOlg,再加入1. 5g氯化钠溶液O00g/L)，置于25ml 具塞试管中，准确加入0. 5ml内标溶液，再加入0. 5ml盐酸溶液(1+1)，混勻，用30ml乙醚分 2次萃取，每次振摇lmin，将上层溶液并入另一个50ml具塞试管中。加入細1硫酸氢钠溶液O0g/L)，充分振荡lmin，用尖嘴吸管吸除下层，重复此步骤一次。加入5g无水硫酸钠， 充分振荡，将溶液倾入圆底烧瓶中，置于45°C水浴上吹氮浓缩至约0. 5ml，沿壁加入2. Oml 丙酮，移入2ml样品瓶中，供上机用。4.样品测定在与标准使用溶液相同的色谱条件下，选取相应的内标分析方法，进样测定，从色谱工作站读取测定结果，如图1所示。实施例二1.色谱条件配置FID检测器的气相色谱仪；毛细管色谱柱为DB-WAX (30m X0. 32mm X0. 25 μ m)柱温210°C，汽化室与检测室温为230°C手动进样0. 5 μ 1载气为高纯氮气，柱头压0.07Mpa，分流比100 12.校正因子测定配制标准溶液精确称取苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯各0. 2g，用丙酮溶解并定容至100ml ；配制内标溶液精确称取十七烷酸甲酯0. 2g，用丙酮溶解并定容至100ml ；配制标准使用溶液取适量标准溶液与内标溶液混合，内标浓度为0. 4g/L，苯甲酸与山梨酸的浓度则分别为0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0g/L，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯的浓度则分别为0. 05,0. 1,0. 15,0. 2,0. 25g/L。在上述色谱条件下，用系列标准使用溶液进样，以峰面积比和浓度比绘制标准曲线，获得苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯的校正因子，建立相应的内标分析方法。3.样品处理
称取生抽样品2. 5g，精确至0. OOlg，置于25ml具塞试管中，准确加入0. 5ml内标溶液，再加入0. 5ml盐酸溶液(1+1)，混勻，用25ml乙醚分2次萃取，每次振摇lmin，将上层溶液并入另一个50ml具塞试管中。加入5ml硫酸氢钠溶液O0g/L)，充分振荡lmin，用尖嘴吸管吸除下层，重复此步骤一次。加入5g无水硫酸钠，充分振荡，将溶液倾入圆底烧瓶中， 置于45°C水浴上吹氮浓缩至约0. 5ml，沿壁加入2. Oml丙酮，移入2ml样品瓶中，供上机用。4.样品测定在与标准使用溶液相同的色谱条件下，选取相应的内标分析方法，进样测定，从色谱工作站读取测定结果，如图2所示。以上对本发明所提供的方法进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式
及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
权利要求
1.一种毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，其包括以下步骤(1)称取酱油样品；(2)在样品中加入内标物溶液，然后依次进行酸化、乙醚提取，净化除水和浓缩处理，得到样品溶液；(3)取步骤O)中的样品溶液进行气相色谱分析，获得色谱分析数据；(4)将步骤(3)的获得的色谱分析数据与预定防腐剂标准数据比对，得到酱油中各种防腐剂的含量。
2.根据权利要求1所述的毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，所述的步骤(1)中根据不同酱油类别称取所述的酱油样品的用量。
3.根据权利要求1所述的毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，所述的步骤(1)中的酱油是老抽类酱油时，需对老抽类酱油进行预处理。
4.根据权利要求3所述的毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，所述的预处理为在老抽类酱油样品中加入氯化钠溶液稀释1 2. 5倍。
5.根据权利要求1所述的毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，所述的步骤( 的具体操作将酱油样品置于具塞容器中，准确加入0. 3 0. 7ml内标溶液，再加入0. 3 0. 7ml盐酸溶液，混勻，用20 40ml乙醚分2次萃取，合并两次上层溶液；加入3 5ml硫酸氢钠溶液，洗涤净化，然后去除下层溶液，然后向上层溶液中加入3 7g无水硫酸钠除水后，吹氮浓缩，再用丙酮稀释，备用。
6.根据权利要求1所述的毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，所述的步骤(3)的色谱条件为所述的毛细管色谱柱采用极性毛细管色谱柱或非极性毛细管色谱柱，要求能对各待测组分与内标物质同时实现良好分离；恒温或适当的程序升温；恒流或恒压，手动或自动进样，载气为高纯氮气。
7.根据权利要求6所述的毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，所述的极性毛细管色谱柱采用HP-20M、DB-WAX或者PEG-20M，且长度在30m 以上。
8.根据权利要求1所述的毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，所述的步骤O)中的内标物溶液采用脂肪酸酯的丙酮溶液。
9.根据权利要求8所述的毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，所述的脂肪酸酯的丙酮溶液浓度在2 3g/L之间。
10.根据权利要求8所述的毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其特征是，所述的脂肪酸酯为碳数为16 M的脂肪酸甲酯。
全文摘要
本发明公开了一种毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其包括以下步骤(1)称取酱油样品；(2)在样品中加入内标物溶液，然后依次进行酸化、乙醚提取，净化除水和浓缩处理，得到样品溶液；(3)取步骤(2)中的样品溶液进行气相色谱分析，获得色谱分析数据；(4)将步骤(3)的获得的色谱分析数据与预定防腐剂标准数据比对，得到酱油中各种防腐剂的含量。该方法可同时测定酱油中的苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸以及尼泊金酯类等防腐剂的含量，操作简便易行，能有效减少操作误差、以及仪器条件等因素对测定结果的影响，结果准确可靠。
文档编号G01N30/06GK102323367SQ20111014092
公开日2012年1月18日 申请日期2011年5月27日 优先权日2011年5月27日
发明者刘占, 张庆宇, 曾亚丽, 李婕, 杨明泉, 樊瑞, 陈穗 申请人:广东美味鲜调味食品有限公司