专利名称：检测白酒中罗汉果浸泡液成分的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测白酒中罗汉果浸泡液成分的方法，具体是一种利用HPLC 法测定白酒中罗汉果甜苷V的含量的方法，属于分析化学技术领域。
背景技术：
国家和原轻工部所颁布的关于白酒标准中规定，以茅台为代表的酱香型白酒，存放时间需在3年以上，颜色呈微黄，这是因为长时间存放以后，其中某些微量物质会发生颜色的变化，而其它白酒必须为无色透明液体。但由于陈放的酒比新酿造的酒味道芳香、甜味甘醇，加上部分企业大肆宣传陈年老酒的商业炒作行为，致使许多消费者盲目跟风，错误地认为只有酒体呈现微黄才是真的陈酒。为了迎合消费者的这种错误心理，有些生产厂商就在酒中投放添加剂，据调查，目前大多数小型白酒生产厂家通过添加色素，而一些有条件的大企业主要通过向酒中添加罗汉果浸泡液的方式使酒体呈现微黄色。罗汉果是我国广西特产中药，为葫芦科植物罗汉果[Simitia grosvenorii (Swingle) C. Jeffrey]的果实[1]，其主要化学成分为非糖甜味物质。目前对罗汉果的研究与开发主要集中在甜苷上，其中葫芦素烷型三萜皂苷类罗汉果甜苷V (Mogroside V)是甜苷中主要甜味成分，占总甜苷量的30% 40%[2_3]。罗汉果甜苷V因具有甜度高，热量低， 色泽浅，水溶性及稳定性好，食用安全等优点，我国已于1996年批准该产品为食品添加剂， 可作为甜味剂，部分或全部代替蔗糖而广泛用于各种食品[4]。罗汉果甜苷V作为罗汉果中最主要成分，已有部分学者对其进行了研究，建立了罗汉果中罗汉果甜苷V含量的测定方法，以此作为罗汉果药材的质量控制方法[5_1(|]。因此， 在现有技术的这些方法的基础上，可以结合白酒样品的处理新方法及特定的检测方法的调整，通过检测白酒中罗汉果甜苷V的方式达到判定白酒中是否添加罗汉果浸泡液的目的。参考文献国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部KS].北京化学工业出版社，2005:147.黎海彬，王邕，李俊芳等.罗汉果的化学成分与应用研究[J].食品研究与开发，2006，27(2) :27.肖刚，王勤.罗汉果研究进展[J].上海中医药杂志，2006，40(11): 71-73.Takemoto T, Arihara S, Nakajima T, et al. Studies on the constituents of Fructus Momordicae. I. On the sweep principle [J]. Yakugaku Zasshi, 1983， 103(11):1151-1154.欧莹，陈金月，覃荣灵.HPLC测定罗汉果中罗汉果甜苷V的含量[J].广西中医学院学报，2007，10 (4) 85-86.李典鹏，黄永林，刘金磊等.HPLC法测定罗汉果中罗汉果苷IIE、苷III的含量 [J].天然产物研究与开发，2006，18:850-853.周兢，王梦月，李晓波等.HPLC法测定罗汉果中罗汉果苷V和11-氧化罗汉果苷 V [J].中草药，2007，38 O) :196-198.梁宇锋，林永春.分光光度法测定罗汉降糖颗粒中罗汉果甜苷含量[J].牡丹江医学院学报，2009，30 (2) 37-38.黄丽婕，苏小建，何星存等.固相萃取-高效液相色谱法快速测定罗汉果甜甙V 的含量[J].食品研究与开发，2008, 29 (10) :84-87.马少妹.罗汉果甜苷的HPLC法分析[J].福建分析测试，2006，15(4):3-6.
发明内容
本发明的技术目的在于提供一种检测白酒中罗汉果浸泡液成分的方法，以实现通过检测白酒中罗汉果甜苷V的方式达到判定白酒中是否添加罗汉果浸泡液的目的，并且该检测方法准确、快速、高效。为了实现本发明的技术目的，本发明的技术方案如下。一种检测白酒中罗汉果浸泡液成分的方法，其特征在于采用Waters 510高效液相色谱仪检测白酒中的罗汉果甜苷V ；且包括以下步骤
(1)检测；具体操作条件为固定相为规格ym、4.6X250mm的W^elch Materials Column-XB-C18液相色谱柱；流动相为Vi睛V水=77:23的溶液；流动相流速1. 0 mL/min ；采用紫外检测器；柱温25°C ；检测波长203 nm ；进样量20 μ L ；
(2)确定罗汉果甜苷V含量将步骤(1)检测得到的峰面积值y按照y=4804.2χ-21419 的公式计算出χ值即样品中罗汉果甜苷V的浓度μ g/mL。其中，本发明所述的进样样品的处理方法是准确量取白酒样品溶液100 mL，水浴蒸干后用甲醇定容至1 mL，经0. 45 μ m微孔过滤膜过滤。本发明的有益效果在于
本发明对罗汉果甜苷V标准溶液进行紫外波长扫描，发现罗汉果甜苷V标准溶液在203 nm处有较强的吸收峰，所以选择203 nm为罗汉果甜苷V的检测波长；本发明通过实验得到该方法白酒中罗汉果甜苷V标准曲线方程为y=4804. 2x-21419, R2=0. 9983，结果表明罗汉果甜苷V进样量在0. 4 20 μ g范围内与峰面积具有良好的线性关系；通过计算，得到回收率范围在97. 5% 110. 6%，经反复测定，得到RSD为2. 56% (n=6)，表明该方法具有良好的精密度；本发明通过实验测得，白酒样品溶液中罗汉果甜苷V的平均含量为27. 72 μ g/ mL，在果中平均含量为0. 8048%,结果RSD为1. 78% (n=5),实验表明该方法具有良好的重现性。且通过实验证得，白酒样品溶液中罗汉果甜苷V在48 h内稳定。
图1为空白白酒的高效液相色谱图。图2为罗汉果甜苷V标准曲线图。图3为白酒中罗汉果甜苷V含量测定HPLC色谱图。
具体实施例方式实施例1
本实施例说明标准曲线的制作方法。
白酒样品为自配，是将无水乙醇溶液与水按50:50(V/V)配制而成。罗汉果干燥果实购自宿迁某药店同一产地同一批罗汉果药材。罗汉果甜苷V标准品(MogrosideV)，彡98%,深圳时得佳科技有限公司；乙腈、甲醇均为国产色谱纯试剂。仪器电子分析天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；SCQ-2201超声波清洗器，上海声彦超声波仪器有限公司；Waters 510高效液相色谱仪，美国Waters公司。标准溶液的制作方法
(1) 1000 μ g/mL罗汉果甜苷V标准储备液精确称取50.0 mg罗汉果甜苷V，用白酒溶解后定容至50 mL,配制成浓度为1000 μ g/mL的罗汉果甜苷V标准储备液。(2)系列浓度罗汉果甜苷V标准溶液从1000 μ g/mL的罗汉果甜苷V标准储备液中准确吸取2、5、10 mL溶液，分别用白酒定容至100 mL，配制成20、50、100 μ g/mL的罗汉果甜苷V标准溶液。(3) 200,500 μ g/mL罗汉果甜苷V标准溶液从1000 μ g/mL的罗汉果甜苷V标准储备液中准确吸取2、5 mL溶液，分别用白酒定容至10 mL,配制成200、500 μ g/mL的罗汉果甜苷V标准溶液。标准曲线的制作
采用Waters 510高效液相色谱仪检测白酒中的罗汉果甜苷V。具体操作条件为=Welch Materials Column-XB_C18 (5 μ m, 4. 6X250 mm)色谱柱；流动相:V 乙睛:V 水=77:23 ；流速 1. 0 mL/min ；紫外检测器；柱温:25°C ；检测波长:203 nm ；进样量20 μ L0Α、按照本发明所述的检测方法得到的空白白酒的高效液相色谱图如图1所示。从图1空白白酒(未加罗汉果甜苷V)的高效液相色谱图可以看出，除了在4. 6 min 处有溶剂峰以外，其它时间图线基本在基线附近，图像平稳清晰，无其他峰的出现。由于罗汉果甜苷V的保留时间为1广12 min，所以空白酒样不含罗汉果甜苷V。B、将1000、500、200、100、50、20 μ g/mL的罗汉果甜苷V标准溶液，均按上述进行测定，得相应谱图。以罗汉果甜苷V浓度为横坐标，对应峰面积为纵坐标作图，即得附图2 所示的罗汉果甜苷V标准曲线。根据罗汉果甜苷V浓度和峰面积的线性关系，可以建立标准曲线，并求出回归方程为y=4804.h-21419，R2=O. 9983。结果表明罗汉果甜苷V进样量在0. 4 20 Pg范围内与峰面积具有良好的线性关系。实施例2
本实施例说明罗汉果甜苷V回收率计算与精密度实验。对1000、500、200、100、50、20 μ g/mL不同浓度的罗汉果甜苷V酒样按实施例1的方法进行处理和测定，对照罗汉果甜苷V标准曲线得各实测值，与加标值进行比较，即可进行回收率计算，得到的结果如表1。表1回收率数据
权利要求
1.一种检测白酒中罗汉果浸泡液成分的方法，其特征在于采用Waters 510高效液相色谱仪检测白酒中的罗汉果甜苷V ；且包括以下步骤(1)检测；具体操作条件为固定相为规格ym、4.6X250mm的W^elch Materials Column-XB-C18液相色谱柱；流动相为Vi睛V水=77:23的溶液；流动相流速1. 0 mL/min ；采用紫外检测器；柱温25°C ；检测波长203 nm ；进样量20 μ L ；(2)确定罗汉果甜苷V含量将步骤(1)检测得到的峰面积值y按照y=4804.2χ-21419 的公式计算出χ值即样品中罗汉果甜苷V的浓度μ g/mL。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的进样样品的处理方法是准确量取白酒样品溶液100 mL，水浴蒸干后用甲醇定容至1 mL，经0.45 ym微孔过滤膜过滤。
全文摘要
本发明涉及一种检测白酒中罗汉果浸泡液成分的方法，属于分析化学技术领域。本发明用WelchMaterialsColumn-XB-C18(5μm,4.6×250mm)色谱柱，以乙睛－水(77:23)为流动相，流速为1mL/min，紫外检测器，检测波长为203nm，柱温25℃。罗汉果甜苷V进样量在0.4~20μg线性关系良好(R2=0.9983)，回收率范围在97.5%~110.6%，RSD为2.56%(n=6)。该方法操作简便、测定快速、结果准确，同时具有良好的精密度、重现性和稳定性，可作为白酒中罗汉果浸泡液的检测方法。
文档编号G01N1/28GK102253157SQ20111017061
公开日2011年11月23日 申请日期2011年6月23日 优先权日2011年6月23日
发明者姜雪, 徐燕, 曹玉发, 李建 申请人:宿迁市产品质量监督检验所