专利名称：芪鹰颗粒的检测方法
技术领域：
本发明涉及中药领域的的检测方法，特别涉及芪鹰颗粒中黄芪和丹参的含量的检测方法。
背景技术：
芪鹰颗粒是在新疆医科大学附属中医医院医院临床常用汤剂络必通的基础上开发研制的口服制剂。原处方来源于总结了历代医家对消渴病及并发症的理论论述、方药记载，及新疆地方药的特点，结合现代药理研究组方，经过临床有经验的医师十多年临床运用所得。原方功效为益气养阴，活血化瘀、解毒降浊。主治糖尿病周围神经病变属于气阴两虚、 痰瘀阻滞证型者等。在临床用于对糖尿病周围神经病变属于气阴两虚、痰瘀阻滞证型等疾病的治疗，取得很好的疗效。但由于原剂型为汤剂，患者使用中存在诸多不便；根据现代药理学研究结果，对原处方及工艺进行改进，经过现代工艺提取，研制成临床疗效确切、使用安全，起效迅速的中药新药——芪鹰颗粒，用于治疗糖尿病周围神经病变等疾病。但目前实践中尚不存在能够方便、准确检测芪鹰颗粒中主要原料含量的切实可行的方法，不利于芪鹰颗粒产品质量的稳定性和可控性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种芪鹰颗粒的检测方法，通过该检测方法有效地检测芪鹰颗粒中主要原料的含量，有利于提高产品的稳定性和可控性。本发明的目的是通过如下技术方案实现
一种芪鹰颗粒的检测方法，所述芪鹰颗粒的原料主要包括黄芪、丹参、黄精、鹰嘴豆、蝉蜕和乳糖，所述检测方法包括含量测定，所述含量测定为采用高效液相色谱法对颗粒中的黄芪和丹参的含量进行测定。所述黄芪的含量测定方法优选包括以下步骤
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为35 65的乙腈-水为流动相，柱温25°C，用蒸发光散射检测器检测，获得的理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000 ；
对照品溶液的制备以甲醇为溶剂，配置浓度为0. 0516-1. 032mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液；
供试品溶液的制备将适量芪鹰颗粒溶于甲醇中，经超声提取60分钟以上，回收提取溶剂浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，用氨试剂洗涤正丁醇液，蒸干正丁醇，残渣加甲醇溶解，移至容量瓶中，加甲醇至刻度，制备芪鹰颗粒的甲醇溶液；
测定分别精密吸取相同体积量的对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，所吸取的体积量为10_20μ 1，进行测定，获得供试品溶液中的黄芪甲苷，并折算出所测试的芪鹰颗粒中的黄芪甲苷含量，以此作为黄芪含量的判断指标。所述丹参的含量测定方法优选包括以下步骤
4色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为30 10 1 59的甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，柱温35°C，检测波长为286nm，获得的理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；
对照品溶液的制备以75%甲醇为溶剂，配置浓度为14-70 μ g/ml的丹酚酸B溶液； 供试品溶液的制备将芪鹰颗粒研细，称取适量细粉，溶于75%甲醇溶液中，超声处理 30分钟以上，移至容量瓶中，加75%甲醇至刻度，摇勻，静置，取上层清液用孔径为0. 45 μ m 的微孔滤膜过滤，即得；
测定分别精密吸取相同体积量的对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，所吸取的体积量为10-20μ 1，进行测定，获得供试品溶液中的丹酚酸B，并折算出所测试的芪鹰颗粒中的丹酚酸B含量，以此作为丹参含量的判断指标。所述含量测定的指标为芪鹰颗粒每袋含丹参以丹酚酸B计，不得少于35. 0毫克， 含黄芪以黄芪甲苷计，不得少于1. 0毫克，本品每袋按7. 5g计。所述检测方法还可以包括薄层色谱鉴别，所述薄层色谱鉴别为采用色谱法对颗粒中是否含有有效成分进行鉴别，所述薄层色谱鉴别所针对的有效成分为黄芪和丹参。所述薄层色谱鉴别可以包括以下步骤根据薄层色谱鉴别所针对的有效成分制备所需的供试品溶液和对照品溶液；吸取上述各溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂展开、去除、晾干；观察供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置处，是否具有相同颜色的荧光斑点。所述黄芪的薄层色谱鉴别法优选包括以下步骤取芪鹰颗粒，加乙醇，回流30分钟，过滤，蒸干滤液，残渣加0. 3%氢氧化钠溶液溶解，过滤，采用稀盐酸调pH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸过滤，蒸干滤液，残渣加乙酸乙酯溶解，制得供试品溶液；另取黄芪对照品，同法制得对照品溶液；吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为10 1的三氯甲烷-甲醇混合液为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，是否显相同的荧光斑点；
所述丹参的薄层色谱鉴别优选包括以下步骤取芪鹰颗粒，加乙醚振摇，静置1小时， 过滤，蒸干滤液，残渣加乙酸乙酯溶解，得到供试品溶液；另取丹参对照品，同法制得丹参对照品溶液；另取丹参酮II A对照品，加入乙酸乙酯制得丹参酮II A对照品溶液；吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19 1的甲苯-乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，检视在与对照品色谱相应的位置上，是否显相同颜色的斑点。所述检测方法还可以包括性状检测，所述性状检测的方法为目测、鼻嗅及口尝。所述检测方法还可以包括颗粒检测，所述颗粒检测包括对所述芪鹰颗粒的粒度、 水分、溶解性、装量差异和微生物限度进行检测。本发明通过建立准确度高、重现性好和稳定性强的检测方法，能够有效地检测出芪鹰颗粒中黄芪和丹参这两种主要原料的含量；通过对提取方法、步骤、工艺参数和药剂的优化，保证了提取效果，提高了对相应成分的提取率，排除了中药种各种复杂成分的干扰， 同时通过液相色谱的采用，可以使检测更为精确和准确，保证了实验的有效性和可靠性，根据申请人的多种提取方法的对比实验，相对于常见的多种提取方法，本申请各实施例中的特定提取步骤、参数和药剂下，可以更好地避免因提取率低等因素造成的检测数据下降的现象；所用判断指标合理，能够有效地反应出原料黄芪和丹参的用量和品质是否符合要求， 为控制芪鹰颗粒的质量提供了依据，有助于促使芪鹰颗粒的质量稳定、可控、高效和安全。
图1黄芪甲苷的线性关系图； 图2黄芪甲苷对照品溶液的HPLC色谱图； 图3黄芪供试品溶液的HPLC色谱图； 图4黄芪阴性供试品溶液的HPLC色谱图； 图5丹酚酸B线性关系图； 图6丹酚酸B对照品HPLC色谱图； 图7丹参供试品HPLC色谱图； 图8丹参阴性样品HPLC色谱图。
具体实施例方式实施例1
(1)取芪鹰颗粒适量，采用目测、鼻嗅及口尝对其进行检测，本品为黄棕色至棕色的颗粒，气香、味甜、微苦；
(2)对芪鹰颗粒进行颗粒检测，所述颗粒检测包括溶化性、粒度、水分、装量差异和微生物限度五个项目进行检测，检测结果应符合《中国药典》2010年版一部附录I C颗粒剂的各项规定。(3)黄芪的薄层色谱鉴别法取芪鹰颗粒，加乙醇，回流30分钟，过滤，蒸干滤液， 残渣加0. 3%氢氧化钠溶液溶解，过滤，稀盐酸调pH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸过滤，蒸干滤液。残渣加乙酸乙酯溶解，制得供试品溶液；另取黄芪对照药材，同法制得对照药材溶液；吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以比例为10 1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；
(4)丹参的薄层色谱鉴别法取芪鹰颗粒，加乙醚振摇，静置1小时，过滤，蒸干滤液，残渣加乙酸乙酯溶解，得到供试品溶液；另取丹参对照药材，同法制得丹参对照药材溶液；另取丹参酮II A对照品，加入乙酸乙酯制得丹参酮II A对照品溶液；吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19 1的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与丹参酮II A对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。(5)黄芪的含量测定照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为35 65的乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品0.01-0. 5g，用甲醇溶液溶解并稀释，配置每Iml中含1. 032mg的黄芪甲苷对照品溶液；
供试品溶液的制备精密称取所述芪鹰颗粒4-8g，置于锥形瓶中，加甲醇100ml，超声提取1小时，回收提取溶液浓缩至干，残渣加水10-20ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取若干次，合并正丁醇液，用氨试剂洗涤，弃去氨液，蒸干正丁醇，残渣加甲醇溶解，移至5ml或IOml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得；
测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得； 所述芪鹰颗粒每袋含黄芪甲苷C41H68O14不得低于1. Omg，本品每袋按7. 5g计。(6)丹参的含量测定
照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为30 10 1 59的甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，检测波长为286nm， 理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；
对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品0. 5-lg，加入75%甲醇制成每Iml含 50 μ g丹酚酸B的溶液，即得；
供试品溶液的制备取所述芪鹰颗粒l_2g，研细，精密称取细粉0. 3-0. 5g，置50ml容量瓶中，加甲醇约45ml，超声处理30分钟，放置冷却，加75%甲醇稀释溶液至刻度，摇勻，静置， 取上清液用孔径为0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，即得；
测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各IOy 1，注入液相色谱仪，测定，即得， 所述芪鹰颗粒每袋含丹参以丹酚酸BC36H3tlO16计，不得少于35. Omg0实施例2
(1)取芪鹰颗粒适量，采用目测、鼻嗅及口尝对其进行检测，本品为黄棕色至棕色的颗粒，气香、味甜、微苦；
(2)对芪鹰颗粒进行颗粒检测，所述颗粒检测包括溶化性、粒度、水分、装量差异和微生物限度五个项目进行检测，检测结果应符合《中国药典》2010年版一部附录I C颗粒剂的各项规定；
(3)黄芪的薄层色谱鉴别法取芪鹰颗粒，加乙醇，回流30分钟，过滤，蒸干滤液，残渣加0. 3%氢氧化钠溶液溶解，过滤，稀盐酸调ρΗ至5—6，用乙酸乙酯振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸过滤，蒸干滤液。残渣加乙酸乙酯溶解，制得供试品溶液；另取黄芪对照药材，同法制得对照药材溶液；吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以比例为10 1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；
(4)丹参的薄层色谱鉴别法取芪鹰颗粒，加乙醚振摇，静置1小时，过滤，蒸干滤液，残渣加乙酸乙酯溶解，得到供试品溶液；另取丹参对照药材，同法制得丹参对照药材溶液；另取丹参酮II A对照品，加入乙酸乙酯制得丹参酮II A对照品溶液；吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19 1的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与丹参酮II A对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。(5)黄芪的含量测定
照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为35 65的乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品10. 3aiig，置于IOml容量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml中含1. 032mg的黄芪甲苷对照品溶液；
供试品溶液的制备取所述芪鹰颗粒适量，精密称取4g，置于锥形瓶中，加甲醇100ml，超声提取1小时，回收提取溶液浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试剂洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，蒸干正丁醇，残渣加甲醇溶解，移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得；
测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得； 所述芪鹰颗粒每袋含黄芪甲苷C41H68O14不得低于1. Omg0(6)丹参的含量测定
照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为30 10 1 59的甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，检测波长为286nm， 理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；
对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对品0. 5-lmg,加入75%甲醇制成每Iml含50 μ g 的溶液，即得；
供试品溶液的制备取所述芪鹰颗粒约lg，研细，精密称取细粉0. 3g，置50ml容量瓶中，加甲醇约45ml，超声处理30分钟，放置冷却，加75%甲醇稀释溶液至刻度，摇勻，静置，取上清液用孔径为0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，即得；
测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得， 所述芪鹰颗粒每袋含丹参以丹酚酸BC36H3tlO16计，不得少于35. Omg0实施例3
(1)取芪鹰颗粒适量，采用目测、鼻嗅及口尝对其进行检测，本品为黄棕色至棕色的颗粒，气香、味甜、微苦；
(2)对芪鹰颗粒进行颗粒检测，所述颗粒检测包括溶化性、粒度、水分、装量差异和微生物限度五个项目进行检测，检测结果应符合《中国药典》2010年版一部附录I C颗粒剂的各项规定。(3)黄芪的薄层色谱鉴别法取芪鹰颗粒，加乙醇，回流30分钟，过滤，蒸干滤液， 残渣加0. 3%氢氧化钠溶液溶解，过滤，稀盐酸调ρΗ至5—6，用乙酸乙酯振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸过滤，蒸干滤液。残渣加乙酸乙酯溶解，制得供试品溶液；另取黄芪对照药材，同法制得对照药材溶液；吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为10 1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；
(4)丹参的薄层色谱鉴别法取芪鹰颗粒，加乙醚振摇，静置1小时，过滤，蒸干滤液，残渣加乙酸乙酯溶解，得到供试品溶液；另取丹参对照药材，同法制得丹参对照药材溶液；另取丹参酮II A对照品，加入乙酸乙酯制得丹参酮II A对照品溶液；吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19 1的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与丹参酮II A对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。(5)黄芪的含量测定
照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为35 65的乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品51. 6mg，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml中含1. 032mg的黄芪甲苷对照品溶液；
供试品溶液的制备取所述芪鹰颗粒适量，精密称取8g，置于锥形瓶中，加甲醇100ml， 超声提取1小时，回收提取溶液浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试剂洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，蒸干正丁醇，残渣加甲醇溶解，移至IOml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得；
测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得； 所述芪鹰颗粒每袋含黄芪甲苷C41H68O14不得低于1. Omg0(6)丹参的含量测定
照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为30 10 1 59的甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，检测波长为286nm， 理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；
对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对品0. 5-lmg,加入75%甲醇制成每Iml含50 μ g 的溶液，即得；
供试品溶液的制备取所述芪鹰颗粒约2g，研细，精密称取细粉0. 6g，置IOOml容量瓶中，加甲醇约90ml，超声处理30分钟，放置冷却，加75%甲醇稀释溶液至刻度，摇勻，静置，取上清液用孔径为0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，即得；
测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得， 所述芪鹰颗粒每袋含丹参以丹酚酸BC36H3tlO16计，不得少于35. Omg0实施例4
(1)取芪鹰颗粒适量，采用目测、鼻嗅及口尝对其进行检测，本品为黄棕色至棕色的颗粒，气香、味甜、微苦；
(2)对芪鹰颗粒进行颗粒检测，所述颗粒检测包括溶化性、粒度、水分、装量差异和微生物限度五个项目进行检测，检测结果应符合《中国药典》2010年版一部附录I C颗粒剂的各项规定；
(3)黄芪的薄层色谱鉴别法取芪鹰颗粒，加乙醇，回流30分钟，过滤，蒸干滤液，残渣加0. 3%氢氧化钠溶液溶解，过滤，稀盐酸调ρΗ至5-6，用乙酸乙酯振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸过滤，蒸干滤液。残渣加乙酸乙酯溶解，制得供试品溶液； 另取黄芪对照药材，同法制得对照药材溶液；吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为10 1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；
(4)丹参的薄层色谱鉴别法取芪鹰颗粒，加乙醚振摇，静置1小时，过滤，蒸干滤液，残渣加乙酸乙酯溶解，得到供试品溶液；另取丹参对照药材，同法制得丹参对照药材溶液；另取丹参酮II A对照品，加入乙酸乙酯制得丹参酮II A对照品溶液；吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19 1的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与丹参酮II A对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。(5)黄芪的含量测定
照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为35 65的乙腈-水为流动相，蒸发光散射检测器检测，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品10. 3aiig，置于IOml容量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml中含1. 032mg的黄芪甲苷对照品溶液；
供试品溶液的制备取所述芪鹰颗粒适量，精密称取8g，置于锥形瓶中，加甲醇100ml， 超声提取1小时，回收提取溶液浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试剂洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，蒸干正丁醇，残渣加甲醇溶解，移至IOml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得；
测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得； 所述芪鹰颗粒每袋含黄芪甲苷C41H68O14不得低于1. Omg0(6)丹参的含量测定
照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为30 10 1 59的甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，检测波长为286nm， 理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；
对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对品2. 5mg，移至50ml容量瓶，加入75%甲醇溶解并稀释至刻度，制成每Iml含50 μ g的溶液，即得；
供试品溶液的制备取所述芪鹰颗粒约lg，研细，精密称取细粉0. 3g，置50ml容量瓶中，加甲醇约45ml，超声处理30分钟，放置冷却，加75%甲醇稀释溶液至刻度，摇勻，静置，取上清液用孔径为0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，即得；
测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得， 所述芪鹰颗粒每袋含丹参以丹酚酸BC36H3tlO16计，不得少于35. Omg0下述实验例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1黄芪含量测定准确度试验 1. 1仪器与试药
仪器SPD-10AVP型高效液相色谱仪(日本岛津制造所)，包括LC-10ADVP高压泵， CT0-10ASVP柱温箱；ELSD 2000蒸发光散射检测器(美国奥泰公司);BS110S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；KQ-100DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；研究用供试品由新疆西部加斯特药业有限公司生产(批号1、2、3)。对照品黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为110781-20061。乙腈为美国Fisher公司产色谱纯，其它试剂均为国产分析纯。1. 2色谱条件实验条件选择 (1)色谱柱
色谱柱:Diamonsil ODS (250 X 4. 6mm，5Mm)；漂移管温度105°C ；载气流量3. OL/min ； 流动相乙腈-水(35:65);流速1. OOml/min ；柱温室温。在选定条件下，黄芪甲苷峰理论塔板数应大于2500，与其它峰的分离度应大于1. 5。(2)流动相的选择
以乙腈-水为流动相，逐步调整其比例，反复试验，得出，当以乙腈-水(35 68)时， 黄芪甲苷的保留时间适中，对称因子、分离度和理论板数均符合要求。1.3对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品10. 3aiig，置IOml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻， 即得每Iml中含1. 032mg的黄芪甲苷对照品溶液。1.4供试品溶液的制备
供试品制备方法为取颗粒适量，精密称取4g，置锥形瓶中，加甲醇100 ml，超声提取 45分钟，提取液回收溶剂浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，既得。1.5方法学验证
采用标准添加法测定回收率。精密称取供试品2g，共10份，分别置锥形瓶中，第一份作为空白回收，其余分三组，每组分别加入浓度为0. 258mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液各1ml、 2ml,2. 5ml，照供试品的制备项下的方法处理后，在含量测定色谱条件下，进样20μ1，记录峰面积，用外标法计算回收率，结果见表1。表1黄芪甲苷回收率测定结果
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试验表明黄芪甲苷平均回收率为97. 99% (n=9), RSD (%)为2. 08% (η=9)，本发明中黄芪含量的测定方法具有良好的回收率。实验例2黄芪含量测定方法精密度试验
同一批供试品在含量测定色谱条件下重复进样5次，结果见表2。表2重复性实验结果
定B:敷 I ι334eRSD% 1WS <tng/|) I 0 1859β 1 P3CI 5^20蘭0 1936,72 I
试验表明黄芪甲苷浓度的1.84%，本发明中黄芪含量的测定方法具有良好的精密度。 实验例3黄芪含量测定方法线性试验
11精密吸取上述黄芪甲苷对照品贮备液(1. 032mg/ml)0. 5,1,2. 5,5, IOml分别置IOml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，制成含黄芪甲苷浓度为0. 0516,0. 1032,0. 258,0.516, 1.032 mg/ml的对照品系列溶液。从中分别精密吸取10μ1，注入液相色谱仪，记录峰面积。 以进样浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得标准曲线方程为y =2332748 χ- 126928，r=0. 9991。结果见表 3。
表3黄芪甲苷线性关系实验结果
权利要求
1.一种芪鹰颗粒的检测方法，所述芪鹰颗粒的原料主要包括黄芪、丹参、黄精、鹰嘴豆、 蝉蜕和乳糖，其特征在于所述检测方法包括含量测定，所述含量测定为采用高效液相色谱法对颗粒中的黄芪和丹参的主要的或典型的有效成分含量进行测定，并以此分别作为黄芪和丹参含量的判断指标。
2.根据权利要求1所述的芪鹰颗粒的检测方法，其特征在于所述黄芪的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为35 65的乙腈-水为流动相，柱温25°C，用蒸发光散射检测器检测，获得的理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000 ；对照品溶液的制备以甲醇为溶剂，配置浓度为0. 0516-1. 032mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液；供试品溶液的制备将适量芪鹰颗粒溶于甲醇中，经超声提取60分钟以上，回收提取溶剂浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，用氨试剂洗涤正丁醇液，蒸干正丁醇，残渣加甲醇溶解，移至容量瓶中，加甲醇至刻度，制备芪鹰颗粒的甲醇溶液；测定分别精密吸取相同体积量的对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，所吸取的体积量为10_20μ 1，进行测定，获得供试品溶液中的黄芪甲苷，并折算出所测试的芪鹰颗粒中的黄芪甲苷含量，以此作为黄芪含量的判断指标。
3.根据权利要求2所述的芪鹰颗粒的检测方法，其特征在于所述丹参的含量测定方法包括以下步骤色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以比例为30 10 1 59的甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，柱温35°C，检测波长为^6nm，获得的理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备以75%甲醇为溶剂，配置浓度为14-70 μ g/ml的丹酚酸B溶液；供试品溶液的制备将芪鹰颗粒研细，称取适量细粉，溶于75%甲醇溶液中，超声处理 30分钟以上，移至容量瓶中，加75%甲醇至刻度，摇勻，静置，取上层清液用孔径为0.45μπι 的微孔滤膜过滤，即得；测定分别精密吸取相同体积量的对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，所吸取的体积量为10_20μ 1，进行测定，获得供试品溶液中的丹酚酸B，并折算出所测试的芪鹰颗粒中的丹酚酸B含量，以此作为丹参含量的判断指标。
4.根据权利要求3所述的芪鹰颗粒的检测方法，其特征在于每袋芪鹰颗粒的丹参含量以丹酚酸B计不得少于35. 0毫克，黄芪含量以黄芪甲苷计不得少于1. 0毫克。
5.根据权利要求1、2、3、或4所述的芪鹰颗粒的检测方法，其特征在于所述检测方法还包括薄层色谱鉴别，所述薄层色谱鉴别为采用色谱法对颗粒中是否含有黄芪和丹参进行鉴别。
6.根据权利要求5所述的芪鹰颗粒的检测方法，其特征在于所述薄层色谱鉴别包括以下步骤根据薄层色谱鉴别所针对黄芪和丹参，制备所需的供试品溶液和对照品溶液；吸取上述各溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂展开、去除、晾干；观察供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置处，是否具有相同颜色的荧光斑点。
7.根据权利要求6所述的芪鹰颗粒的检测方法，其特征在于所述黄芪的薄层色谱鉴别法包括以下步骤取芪鹰颗粒，加乙醇，回流30分钟，过滤，蒸干滤液，残渣加0. 3%氢氧化钠溶液溶解，过滤，采用稀盐酸调PH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸过滤，蒸干滤液，残渣加乙酸乙酯溶解，制得供试品溶液；另取黄芪药材，同法制得对照药材溶液；吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为 10 1的三氯甲烷-甲醇混合液为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，是否显相同的荧光斑点。
8.根据权利要求7所述的芪鹰颗粒的检测方法，其特征在于所述丹参的薄层色谱鉴别法包括以下步骤取芪鹰颗粒，加乙醚振摇，静置1小时，过滤，蒸干滤液，残渣加乙酸乙酯溶解，得到供试品溶液；另取丹参药材，同法制得丹参对照药材溶液；另取丹参酮II A对照品，加入乙酸乙酯制得丹参酮II A对照品溶液；吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19 1的甲苯-乙酸乙酯混合液为展开剂，展开，取出，晾干，检视硅胶 G薄层板上在与对照药材色谱相应的位置上，是否显相同颜色的斑点；检视在与丹参酮II A 对照品色谱相应的位置上，是否显相同的暗红色斑点。
9.根据权利要求8所述的芪鹰颗粒的检测方法，其特征在于所述检测方法还包括性状检测，所述性状检测的方法为目测、鼻嗅及口尝。
10.根据权利要求9所述的芪鹰颗粒的检测方法，其特征在于所述检测方法还包括颗粒检测，所述颗粒检测包括对所述芪鹰颗粒的粒度、水分、溶解性、装量差异和微生物限度进行检测。
全文摘要
本发明涉及一种芪鹰颗粒的检测方法，所述芪鹰颗粒的原料主要包括黄芪、丹参、黄精、鹰嘴豆、蝉蜕和乳糖，所述检测方法包括含量测定，所述含量测定为采用高效液相色谱法对颗粒中的黄芪和丹参进行含量测定，每袋芪鹰颗粒含丹参以丹酚酸BC36H30016计，不得少于35.0mg，含黄芪以黄芪甲苷C41H68014计，不得少于1.0mg；所述检测方法还可以包括薄层色谱鉴别、性状检测和颗粒检测，本发明通过建立准确度高、重现性好和稳定性强的检测方法，能够有效地控制芪鹰颗粒的质量，使芪鹰颗粒的质量稳定、可控、高效和安全。
文档编号G01N30/02GK102353731SQ20111019092
公开日2012年2月15日 申请日期2011年7月8日 优先权日2011年7月8日
发明者张卫兵, 李林葆, 胡晓灵 申请人:山西太行药业股份有限公司