专利名称：如意珍宝制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明属于药物的检测方法，尤其涉及如意珍宝制剂的质量检测方法。
背景技术：
如意珍宝制剂为藏族传统经验方，处方源自第司·桑结嘉措著的《藏医医诀补遗》，是藏医用来治疗各种神经疾病的首选药物。如意珍宝丸记载于中成药地方标准上升国家药品标准部分，标准编号WS3-BC-0314-95。原料药组成为珍珠母100g、红花100g、肉豆蔻40g、香旱芹40g、荜茇30g、肉桂50g、水牛角40g、人工麝香2g、沉香100g、螃蟹50g、 豆蔻40g、檀香80g、诃子130g、乳香60g、黄葵子50g、牛黄2g、石灰华100g、丁香40g、余甘子130g、黑种草子40g、高良姜80g、木香80g、短穗兔耳草150g、金礞石30g、毛诃子(去核) 100g、草果30g、降香330g、甘草膏40g、决明子60g、藏木香80g三十味，具有清热，醒脑开窍，舒筋通络，干黄水作用。主要用于瘟热、陈旧热症、白脉病，四肢麻木，瘫痪，口眼歪斜，神志不清，痹症，痛风，肢体强直，关节不利。对白脉病有良效。属独家品种、医保品种、国家中药保护品种。如意珍宝丸原标准(标准号WS3-BC-0314-95)质量检测方法只有显微鉴别，无药材的鉴别及含量测定项，不能全面的反映药物的质量，并且技术含量低，不能有效的控制产
品质量。
发明内容
本发明的目的在于为克服现有技术的不足，提供一种如意珍宝制剂的质量检测方法，可增强该药的有效性、质量可控性及稳定性。为解决上述技术问题，本发明的技术方案为如意珍宝制剂的质量检测方法，通过测定制剂中红花、荜茇、牛黄含量的方法，控制如意珍宝制剂的质量。本发明的如意珍宝制剂可以为胶囊剂、颗料剂或片剂等剂型，都适用于本发明的检测方法。本发明的如意珍宝制剂的成分为珍珠母100g、沉香100g、石灰华100g、金礞石30g、红花100g、螃蟹50g、丁香40g、毛诃子(去核)100g、肉豆蔻40g、豆蔻40g、余甘子 130g、草果30g、香旱芹40g、檀香80g、黑种草子40g、降香330g、荜茇30g、诃子130g、高良姜 80g、甘草膏40g、肉桂50g、乳香60g、木香80g、决明子60g、水牛角40g、黄葵子50g、短穗兔耳草150g、藏木香80g、麝香2g、牛黄2g。采用高效液相色谱法，测定红花中羟基红花黄色素A的含量确定红花的含量，荜茇中胡椒碱的含量确定荜茇的含量，测定牛黄中胆酸的含量确定牛黄的含量。测定红花中羟基红花黄色素A的检测方法
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为1%冰醋酸水溶液为流动相，甲醇-1%冰醋酸水溶液的体积比为20-30:80-70 ；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加水制成每Iml含0. 08-0. 20mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备本品或本品内容物研细后，取粉末3-5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即
得；
HPLC法测定如意珍宝丸中羟基红花黄色素A的含量 1.仪器、试药和供试样品
仪器高效液相色谱仪日立L-2100泵，日立检测器L-MOO检测器；岛津AuW220D电
子天平
对照品羟基红花黄色素A对照品，批号111637-200905。样品如意珍宝丸(青海金诃藏药药业股份有限公司)，批号090501、090502、 090503。流动相选择
研究发现，以甲醇-体积百分比1%冰醋酸体系适宜比例为流动相，均能达到很好的色谱分离效果。其中以甲醇-1%冰醋酸体积比为流动相为最优，相对保留时间i;3min
左右ο3.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μ 1， 注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中羟基红花黄色素A与其相邻色谱峰的分离度大于1. 5，且阴性对照无干扰。见图l-a、l-b、l-c。4.对照品制备
取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每Iml含 0. 13mg的溶液，即得。5.供试品制备
有关文献RP—HPLC测定如意珍宝丸中红花黄色素A的含量中供试品处理方法为水浸泡一小时后离心，本法采用加水后，超声提取的方法更加简便，准确，节省时间。具体方法如下
本品研细后，取粉末4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。提取方法选择表
超声浸泡羟基红花黄色素A含量(mg/丸)0. 2140. 210
结果表明超声较浸泡提取更加充分，故选择超声为供试品处理方法提取溶剂选择表
水20%甲醇羟基红花黄色素A含量(mg/丸)0. 2140. 213
结果表明水与20%甲醇提取效果基本一致，考虑安全性及简便性，选择水为提取溶剂。
提取时间选择表
超声时间(min)203040羟基红花黄色素A含量(mg/丸)0. 2130. 2140. 214
结果表明羟基红花黄色素A在20min时已经基本提取完毕，为了保证供试品提取完全选择30min为提取时间。
6.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取羟基红花黄色素A对照品贮备液溶液(0. 271mg/ml) lml、3 ml,5 ml,8ml, 10ml，分别置IOml容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇勻，各精密进样10μ 1，以峰面积(A) 对对照品浓度(C)进行线性回归，得回归方程A = 5176. 4C + 15072，相关系数R=O. 9999。 结果表明在27. Wg/m广27lPg/ml范围内，羟基红花黄色素A的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。
羟基红花黄色素A标准曲线结果
序号..，.！浓度 Qife.mlp峰面积(A)27.1-157947*1S 1.3+，434600-^135715282^4-'216.8-1133 2 334-'.ι·.·"271-'1421SS6 '回归方程A = 5176. 4C + 15072 相关系数:R=0. 9999,见图2。7.精密度试验
分别精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，各连续测定6次， 记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD=L 00%。结果表明，仪器精密度良好。
精密度试验结果
No-·--X ‘·ISOie V！714653^·2711032-712252,'τι ι- ^λ τ,3ι η η ^4.'711582^5‘70515SP6<;·7M65 和 8.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μ 1，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD=O. 42%。结果表明供试品中羟基红花黄色素A在6小时内测定结果稳定。样品稳定性试验结果
权利要求
1.一种如意珍宝制剂的质量检测方法，其特征在于通过测定制剂中红花、荜茇、牛黄含量的方法，通过定性鉴别木香、降香、丁香、荜茇、红花、决明子、没食子酸的方法，检测和控制如意珍宝制剂的质量。
2.根据权利要求1所述的如意珍宝制剂的质量检测方法，其特征在于采用以下含量测定方法的一种或几种采用高效液相色谱法，测定红花中羟基红花黄色素A的含量确定红花的含量，测定荜茇中胡椒碱的含量确定荜茇的含量，测定牛黄中胆酸的含量确定牛黄的含量。
3.根据权利要求2所述的一种如意珍宝制剂的质量检测方法，其特征在于测定红花中羟基红花黄色素A的检测方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为1%冰醋酸水溶液为流动相，甲醇体积百分比为1%冰醋酸水溶液的体积比为 20-30 80-70 ；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加水制成每Iml含0. 08-0. 20mg的溶液，即得；供试品溶液的制备本品或本品内容物研细后，取粉末3-5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用水补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
4.根据权利要求2所述的一种如意珍宝制剂的质量检测方法，其特征在于荜茇中胡椒碱的含量检测方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相，甲醇水的体积份数比为80-60:20-40 ；检测波长为343nm ；理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500 ；对照品溶液的制备取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每 Iml含10-30μδ的溶液，即得；供试品溶液的制备本品或本品内容物研细后，取粉末2-4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
5.根据权利要求2所述的一种如意珍宝制剂的质量检测方法，其特征在于牛黄中胆酸的含量的检测方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积比为 1%冰醋酸为流动相，甲醇体积百分比为1%冰醋酸水溶液的体积份数比为90-60:10-40 ； 用蒸发光散射检测器，理论板数按胆酸峰计算应不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 1-0. 4mg的溶液，即得；供试品溶液的制备本品或本品内容研细后，取粉末10_20g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液25ml，400C以下减压回收，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液10μ 1、20μ1，供试品溶液10μ1，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
6.根据权利要求1所述的如意珍宝制剂的质量检测方法，其特征在于包括下列一种或几种鉴别方法木香的鉴别取本品粉末1. 0 2. 0g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取木香对照药材0. 5g，加甲醇IOml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液， 照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶液及对照品溶液各5 μ L，点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷为展开剂，二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷的体积比为5 15 :0. 5 1. 5 0. 5 1. 5，展开，取出，晾干，喷以重量体积百分比为香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；降香的鉴别取本品粉末1. 5 2. 5g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取降香对照药材lg，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇为展开剂，三氯甲烷-甲醇的体积比为15 30 :0. 5 1.5，展开，取出，晾干，喷以重量体积百分比为1%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；丁香的鉴别取本品粉末2. 0 3. 0g，加二氯甲烷10ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取丁香对照药材0. lg，加二氯甲烷10ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液，另取丁香酚对照品适量，加二氯甲烷制成每Iml含 5 μ 1的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各15 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-沸程60-90°C石油醚为展开剂，醋酸乙酯-沸程60-90°C 石油醚的体积比为0.5 1.5 8 10，展开，取出，晾干，喷以体积百分百分比为香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；红花的鉴别取本品粉末2. 0 3. 0g，加乙醚10ml，密塞，冷浸30min，时时振摇，滤过， 药渣加体积份数比80%的丙酮水溶液10ml，超声处理20min，静置，上清液作为供试品溶液， 另取红花对照药材0. 4g，加乙醚10ml，密塞，冷浸30min，时时振摇，滤过，药渣加体积份数比80%的丙酮水溶液10ml，超声处理20min，静置，上清液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μ1和对照药材溶液5μ1，点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇上层溶液为展开剂，醋酸乙酯-甲酸-7jC -甲醇的体积比为10 14 2 :2 4 :0. 2 0. 5，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；荜茇的鉴别取本品粉末2. 0 3. 0g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为供试品溶液；另取荜茇对照药材0. 5g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为对照药材溶液；另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各8 μ L，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯为展开剂，环己烷-醋酸乙酯的体积比为6 9 :3 6，展开，取出，晾干， 喷以体积百分比为10%的硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；决明子的鉴别取本品粉末3 6g，加甲醇25ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，再加Iml盐酸，置水浴上加热30min，立即冷却，用乙醚提取2次，每次 20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μ1、对照品溶液2μ1，分别点于同一硅胶H薄层板上，以沸程为60-90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，沸程为60-90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸的体积比为12 18:4 6 0. 8 1. 2，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；没食子酸的鉴别取本品粉末2 3g，加无水乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为供试品溶液，另取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸的体积份数比为5 7 :3 5 0.8 1.2，展开，取出，晾干，喷以重量体积百分比为三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
全文摘要
本发明公开了一种关于如意珍宝制剂的质量检测方法，该方法包括木香、降香、丁香、荜茇、红花、决明子、没食子酸的定性鉴别方法，还包括红花中红花黄色素A、荜茇中胡椒碱、牛黄中胆酸的含量测定方法。经过试验研究，本发明质量检测方法中的鉴别方法在样品的供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，方法简便可行，特征性强。用本发明所述的含量测定方法测定如意珍宝制剂中的羟基红花黄色素A、胡椒碱、胆酸的含量，结果表明，方法线性关系良好，回收率试验准确度较高，具有极好的重复性和稳定性，可以准确、严密地控制如意珍宝制剂的质量。
文档编号G01N30/02GK102353733SQ20111019170
公开日2012年2月15日 申请日期2011年7月11日 优先权日2011年7月11日
发明者刘玉芹, 周忠山, 孙绪丁, 李丽, 王悦, 马振元 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司