简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法

文档序号:6102697阅读:600来源:国知局
专利名称:简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法
技术领域
本发明涉及一种细胞学检查方法,具体地说,是一种用于胸腹水、尿液、痰液、支气管刷检标本、妇科体检、宫颈癌普查及筛查人群中宫颈癌前病变等的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法。
背景技术
液基薄层细胞检测技术是当今世界上先进的一种宫颈癌细胞学检查技术,它改变了常规宫颈涂片采取细胞的方法,标本采集后立即放入细胞保存液中.经自动细胞制片机处理,通过比重液离心后,将保存液中的粘液、红细胞、炎性细胞分离,收集余下的宫颈上皮细胞制成超薄层均勻细胞于载玻璃片上,经HE染色即可制成高质量制片。目前美国赛迪公司生产的全自动膜式液基超薄细胞制备系统新柏氏TCT2000处理器及其配套的专用试剂细胞保存液(PreserveCyt Solution)被誉为液基细胞学检测的金标准,但其设备和试剂价格昂贵,一人检查一次费用约180元。中国专利CN1967196B于2006年9月14日公开了一种简易薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,其中步骤包括用宫颈管细胞刷及刮板收集样本、样本置于液基细胞保存液中、加入液基细胞处理液、振荡、离心分离、取弃上清液、加样枪吸取沉淀物样本、涂片、薄片烘干、95%的乙醇浸泡或喷雾固定、洗涤、染色。虽然该发明成本低廉,方法简便,易于普及推广,适用于大批量妇科普查、体检和基层医院的细胞学检查,其低廉的收费可降低患者负担,但其涂片质量达不到进口技术水准,敏感性仅为91. 6 %。因此已知的薄层液基细胞学细胞涂片制备方法存在着上述种种不便和问题。

发明内容
本发明的目的,在于提出一种使用相配套的保存液、粘附分离液、粘液分解液和自然沉降装置,根据细胞比重的不同,把干扰诊断的有形成分隔离在分离液中丢弃,让需观察的细胞有效沉降在载玻璃片上的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法。本发明的另一目的,在于提出一种不需配备价格昂贵的配套设备,操作简便,一次制片数量不受限制的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法。本发明的又一目的,在于提出一种可以达到或超过进口试剂效果,又降低医疗费用,使医疗资源和资金匮乏的边远地区也可以使用最新的液基薄层细胞制片技术及进行大批量基层体检的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法。为实现上述目的,本发明的技术解决方案是一种简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,用于妇科标本,胸腹水标本和痰、尿液等体液标本,其特征在于包括以下步骤a、标本预处理把妇科标本连同保存瓶放在振荡器上震荡2 10分钟,吸取保存瓶里的中底层细胞作样本;或者胸腹水标本和尿体液标本使标本稍静置后弃上清液,留底部100 150毫升,混勻后取40 50毫升以2000转/分离心10分钟,取离心管底部1/3液体加入保存瓶作样本;或者痰标本加粘液分解液5 10毫升后放在振荡器上震荡2 10分钟,取分解后的液体痰加入保存瓶作样本(避开吸取食物沉渣);b、取普通离心管加入5毫升粘附分离液,后沿离心管壁缓慢加入经步骤a标本预处理后的等量样本;C、将步骤b的样本混和物置于离心机中以1200 2000转/分离心5 10分钟,
根据离心后沉淀物量弃离心管中上清液,然后混勻待用;d、将写有编号的玻璃片放入制片配套设备自然沉降装置固定座的长槽中,玻璃片紧贴于固定座的长槽底边,固定后玻璃片磨砂端不超出底托外面,预防制片时损坏;e、将沉降管一端竖立放在玻璃片上,使沉降管按顺时针方向旋转,手感沉降管拧紧到位,且置于在固定座的长槽中间;f、将步骤c的离心后留取的底部样本混勻后加入沉降管中,如果发现沉降管与玻璃片之间有少许渗漏时,可将沉降管再拧紧少许,直到无渗漏为至;g、静置自然沉降15 30分钟后,倒掉上层多余的分离液液体,将沉降管按逆时针方向旋转,去除沉降管,取下玻璃片即可;h、对杂质多的标本可用冲洗液漂洗将玻璃片上沾有影响阅片的杂质洗掉,目测可明显看到玻璃片上有薄薄均勻的一层细胞;i、稍干立即将玻璃片在95%酒精中固定10分钟以上即可根据诊断需要用水洗涤,再进行巴氏染色,HE染色或免疫组织化学染色后阅片。本发明的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法还可以采用以下的技术措施来进一步实现。前述的方法,其中所述步骤a中,液基细胞保存液包含固定细胞作用的甲醛与乙醇,防腐剂双乙酸钠,抗凝剂枸橼酸钠,缓冲剂氯化钠,氯化钾及碳酸氢钠,螯合剂EDTA和溶解红细胞的冰醋酸。前述的方法,其中粘液分解液包含氯化钠,氯化钾,氯化钙,碳酸氢钠,还原剂二硫苏糖醇,甲醛,双乙酸钠和冰醋酸。前述的方法,其中所述步骤b中,粘附分离液包含乙醇,氯化钠,EDTA,碳酸氢钠和冰醋酸。前述的方法,其中所述步骤d中,制片配套设备自然沉降装置,可以单独使用,或者多个组合使用,组合使用时可将固定座插装在固定板上,以便整批操作。前述的方法,其中所述步骤d中,玻璃片不需进行涂层处理。前述的方法,其中所述操作步骤中的标本废液集中放入废液瓶,中和后可以无生物危害性、无甲醛排放。采用上述技术方案后,本发明的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法具有以下优点1、能在第一时间就对离体标本进行固定保存,保持细胞形态,提高诊断准确率;2、将收集的细胞保存液,通过比重液离心后,经自然沉淀将标本中的粘液、血液和炎性细胞分离,收集余下的细胞制成直径为13mm超薄层细胞于载玻璃片上,制片清晰,提高阅片准确性;
3、所用设备简单,操作方法便捷,大幅度提高工作效率,一次制片数量多少不受场地和标本数量的限制,可以按照实际工作需要,随意组合、拆分固定座。4、可以重复制片,制片质量高,可以达到甚至超越目前进口试剂制片方法的水平。
具体实施例方式以下通过具体实施例进一步说明本发明。实施例1用妇科标本制作薄层液基细胞学细胞涂片的方法a、标本预处理把妇科标本(连保存瓶)放在振荡器上震荡5分钟,吸取保存瓶里的中底层细胞 10毫升,混勻后取5毫升作样本;液基细胞保存液包含固定细胞作用的甲醛与乙醇,防腐剂双乙酸钠,抗凝剂枸橼酸钠,缓冲剂氯化钠,氯化钾及碳酸氢钠,螯合剂EDTA和溶解红细胞的冰醋酸。b、取普通离心管加入5毫升粘附分离液,后沿离心管壁缓慢加入经步骤a标本预处理后的等量样本;粘附分离液包含乙醇,氯化钠,EDTA,碳酸氢钠和冰醋酸。C、将步骤b的样本混和物置于离心机中以1500转/分离心10分钟,根据离心后沉淀物量弃离心管中上清液,然后混勻待用;d、将写有编号的玻璃片放入制片配套设备自然沉降装置固定座的长槽中,玻璃片紧贴于固定座的长槽底边,固定后玻璃片磨砂端不超出底托外面,预防制片时损坏;玻璃片不需进行涂层处理;制片配套设备自然沉降装置固定座,可以单独使用,或者多个组合使用,组合使用时可将固定座插装在固定板上,以便整批操作。e、将沉降管一端竖立放在玻璃片上,使沉降管按顺时针方向旋转,手感沉降管拧紧到位,且置于在固定座的长槽中间;f、将步骤c的离心后留取的底部样本混勻后加入沉降管中,如果发现沉降管与玻璃片之间有少许渗漏时,可将沉降管再拧紧少许,直到无渗漏为至;g、静置自然沉降30分钟后,倒掉上层多余的分离液液体,将沉降管按逆时针方向旋转,去除沉降管,取下玻璃片即可;h、对杂质多的标本可用冲洗液漂洗将玻璃片上沾有影响阅片的杂质洗掉,目测可明显看到玻璃片上有薄薄均勻的一层细胞;i、稍干立即将玻璃片在95%酒精中固定10分钟即可根据诊断需要用水洗涤,再进行巴氏染色后阅片。在本实施例方法中所用设备简单,操作方法便捷,大幅度提高工作效率和提高诊断准确率,制片清晰,提高阅片准确性。实施例2用妇科标本制作薄层液基细胞学细胞涂片的方法a、标本预处理把妇科标本(连保存瓶)放在振荡器上震荡5分钟,使标本稍静置后弃上清液,留底部10毫升,混勻后取5毫升作样本;液基细胞保存液包含固定细胞作用的甲醛与乙醇,防腐剂双乙酸钠,抗凝剂枸橼酸钠,缓冲剂氯化钠,氯化钾及碳酸氢钠,螯合剂EDTA和溶解红细胞的冰醋酸。用于妇科标本量较少,连保存液一般在15 20毫升。b、取普通离心管加入5毫升粘附分离液,后沿离心管壁缓慢加入经步骤a标本预处理后的等量样本;粘附分离液包含乙醇,氯化钠,EDTA,碳酸氢钠和冰醋酸。C、将步骤b的样本混和物置于离心机中以1800转/分离心8分钟,根据离心后沉淀物量弃离心管中上清液,然后混勻待用;d、将写有编号的玻璃片放入制片配套设备自然沉降装置固定座的长槽中,玻璃片紧贴于固定座的长槽底边,固定后玻璃片磨砂端不超出底托外面,预防制片时损坏;玻璃片不需进行涂层处理;制片配套设备自然沉降装置,可以单独使用,或者多个组合使用,组合使用时可将固定座插装在固定板上,以便整批操作。e、将沉降管一端竖立放在玻璃片上,使沉降管按顺时针方向旋转,手感沉降管拧紧到位,且置于在固定座的长槽中间;f、将步骤c的离心后留取的底部样本混勻后加入沉降管中,如果发现沉降管与玻璃片之间有少许渗漏时,可将沉降管再拧紧少许,直到无渗漏为至;g、静置自然沉降15分钟后,倒掉上层多余的分离液液体,将沉降管按逆时针方向旋转,去除沉降管,取下玻璃片即可;h、对杂质多的标本可用冲洗液漂洗将玻璃片上沾有影响阅片的杂质洗掉,目测可明显看到玻璃片上有薄薄均勻的一层细胞;i、稍干立即将玻璃片在95%酒精中固定10分钟即可根据诊断需要用水洗涤,再进行HE染色后阅片。在本实施例方法中所用设备简单,一次制片数量多少不受场地和标本数量的限制,可以按照实际工作需要,随意组合、拆分固定座,提高阅片准确性。实施例3用妇科标本制作薄层液基细胞学细胞涂片的方法a、标本预处理把妇科标本(连保存瓶)放在振荡器上震荡10分钟,混勻后取10毫升作样本;液基细胞保存液包含固定细胞作用的甲醛与乙醇,防腐剂双乙酸钠,抗凝剂枸橼酸钠,缓冲剂氯化钠,氯化钾及碳酸氢钠,螯合剂EDTA和溶解红细胞的冰醋酸。b、取普通离心管加入5毫升粘附分离液,后沿离心管壁缓慢加入经步骤a标本预处理后的等量样本;粘附分离液包含乙醇,氯化钠,EDTA,碳酸氢钠和冰醋酸。C、将步骤b的样本混和物置于离心机中以2000转/分离心5分钟,根据离心后沉淀物量弃离心管中上清液,然后混勻待用;d、将写有编号的玻璃片放入制片配套设备自然沉降装置固定座的长槽中,玻璃片紧贴于固定座的长槽底边,固定后玻璃片磨砂端不超出底托外面,预防制片时损坏;玻璃片不需进行涂层处理;制片配套设备自然沉降装置固定座,可以单独使用,或者多个组合使用,组合使用时可将固定座插装在固定板上,以便整批操作。e、将沉降管一端竖立放在玻璃片上,使沉降管按顺时针方向旋转,手感沉降管拧紧到位,且置于在固定座的长槽中间;f、将步骤c的离心后留取的底部样本混勻后加入沉降管中,如果发现沉降管与玻璃片之间有少许渗漏时,可将沉降管再拧紧少许,直到无渗漏为至;
g、静置自然沉降15分钟后,倒掉上层多余的分离液液体,将沉降管按逆时针方向旋转,去除沉降管,取下玻璃片即可;h、对杂质多的标本可用冲洗液漂洗将玻璃片上沾有影响阅片的杂质洗掉,目测可明显看到玻璃片上有薄薄均勻的一层细胞;i、稍干立即将玻璃片在95%酒精中固定10分钟即可根据诊断需要用水洗涤,再进行免疫组织化学染色后阅片。在本实施例方法中所用设备简单,可以重复制片,制片质量高,可以达到甚至超越目前进口试剂制片方法的水平。实施例4用痰标本制作薄层液基细胞学细胞涂片的方法除在a标本预处理步骤中在痰标本中先加入5毫升粘液分解液外,其余同实施例 2。在本实施例方法中可把干扰诊断的有形成分隔离在分离液中丢弃,提高制片质量。实施例5用尿液标本制作薄层液基细胞学细胞涂片的方法a、标本预处理尿液标本使标本稍静置后弃上清液,留底部150毫升,混勻后取50毫升以2000转 /分离心10分钟,取离心管底部1/3液体加入保存瓶作样本;液基细胞保存液包含固定细胞作用的甲醛与乙醇,防腐剂双乙酸钠,抗凝剂枸橼酸钠,缓冲剂氯化钠,氯化钾及碳酸氢钠,螯合剂EDTA和溶解红细胞的冰醋酸。b、取普通离心管加入5毫升粘附分离液,后沿离心管壁缓慢加入经步骤a标本预处理后的等量样本;粘附分离液包含乙醇,氯化钠,EDTA,碳酸氢钠和冰醋酸。C、将步骤b的样本混和物置于离心机中以1500转/分离心5分钟,根据离心后沉淀物量弃离心管中上清液,然后混勻待用;d、将写有编号的玻璃片放入制片配套设备自然沉降装置固定座的长槽中,玻璃片紧贴于固定座的长槽底边,固定后玻璃片磨砂端不超出底托外面,预防制片时损坏;玻璃片不需进行涂层处理;制片配套设备自然沉降装置固定座,可以单独使用,或者多个组合使用,组合使用时可将固定座插装在固定板上,以便整批操作。e、将沉降管一端竖立放在玻璃片上,使沉降管按顺时针方向旋转,手感沉降管拧紧到位,且置于在固定座的长槽中间;f、将步骤c的离心后留取的底部样本混勻后加入沉降管中,如果发现沉降管与玻璃片之间有少许渗漏时,可将沉降管再拧紧少许,直到无渗漏为至;g、静置自然沉降20分钟后,倒掉上层多余的分离液液体,将沉降管按逆时针方向旋转,去除沉降管,取下玻璃片即可;h、对杂质多的标本可用冲洗液漂洗将玻璃片上沾有影响阅片的杂质洗掉,目测可明显看到玻璃片上有薄薄均勻的一层细胞;i、稍干立即将玻璃片在95%酒精中固定10分钟即可根据诊断需要用水洗涤,再进行免疫组织化学染色后阅片。在本实施例方法中所用设备简单,可以重复制片,制片质量高,可以达到甚至超越目前进口试剂制片方法的水平。
以上实施例仅供说明本发明之用,而非对本发明的限制,有关技术领域的技术人员,在不脱离本发明的精神和范围的情况下,还可以作出各种变换或变化。因此,所有等同的技术方案也应该属于本发明的范畴,应由各权利要求限定。
权利要求
1. 一种简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,用于妇科标本,胸腹水标本和痰、 尿体液标本,其特征在于包括以下步骤a、标本预处理把妇科标本连同保存瓶放在振荡器上震荡2 10分钟,吸取保存瓶里的中底层细胞作样本;或者胸腹水标本和尿体液标本使标本稍静置后弃上清液,留底部100 150毫升,混勻后取40 50毫升以2000转/分离心10分钟,取离心管底部1/3液体加入保存瓶作样本;或者痰标本加粘液分解液5 10毫升后放在振荡器上震荡2 10分钟,取分解后的液体痰加入保存瓶作样本;b、取普通离心管加入5毫升粘附分离液,沿离心管壁缓慢加入经步骤a标本预处理后的上述等量样本;C、将步骤b的样本混和物置于离心机中以1200 2000转/分离心5 10分钟,根据离心后沉淀物量弃离心管中上清液,然后混勻待用;d、将写有编号的玻璃片放入制片配套设备自然沉降装置固定座的长槽中,玻璃片紧贴于固定座的长槽底边,固定后玻璃片磨砂端不超出底托外面,预防制片时损坏;e、将沉降管一端竖立放在玻璃片上,使沉降管按顺时针方向旋转,手感沉降管拧紧到位,且置于在固定座的长槽中间;f、将步骤c的离心后留取的底部样本混勻后加入沉降管中,如果发现沉降管与玻璃片之间有少许渗漏时,可将沉降管再拧紧少许,直到无渗漏为至;g、静置自然沉降15 30分钟后,倒掉上层多余的分离液液体,将沉降管按逆时针方向旋转,去除沉降管,取下玻璃片即可;h、对杂质多的标本可用冲洗液漂洗将玻璃片上沾有影响阅片的杂质洗掉,目测可明显看到玻璃片上有薄薄均勻的一层细胞;i、稍干立即将玻璃片在95%酒精中固定10分钟以上即可根据诊断需要用水洗涤,再进行巴氏染色,HE染色或免疫组织化学染色后阅片。
2.如权利要求1所述的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,其特征在于,所述步骤a中,液基细胞保存液包含固定细胞作用的甲醛与乙醇,防腐剂双乙酸钠,抗凝剂枸橼酸钠,缓冲剂氯化钠,氯化钾及碳酸氢钠,螯合剂EDTA和溶解红细胞的冰醋酸。
3.如权利要求1所述的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,其特征在于,所述步骤a中,粘液分解液包含氯化钠,氯化钾,氯化钙,碳酸氢钠,还原剂二硫苏糖醇,甲醛, 双乙酸钠和冰醋酸。
4.如权利要求1所述的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,其特征在于,所述步骤b中,粘附分离液包含乙醇,氯化钠,EDTA,碳酸氢钠和冰醋酸。
5.如权利要求1所述的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,其特征在于,所述步骤d中,制片配套设备自然沉降装置,可以单独使用,或者多个组合使用,组合使用时可将固定座插装在固定板上,以便整批操作。
6.如权利要求1所述的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,其特征在于,所述步骤d中,玻璃片不需进行涂层处理。
7.如权利要求1所述的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,其特征在于,所述操作步骤中的标本废液集中放入废液瓶,中和后可以无生物危害性、无甲醛排放。
全文摘要
一种简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法,其特征在于包括以下步骤a标本预处理,b取普通离心管加入5毫升粘附分离液,c样本混和物离心后沉淀弃离心管中上清液,待用,d将写有编号的玻璃片放入制片配套设备自然沉降装置固定座的长槽中;e将沉降管放在玻璃片上,f将步骤c的离心后留取的底部样本混匀后加入沉降管中;g静置自然沉降15~30分钟,h标本可用冲洗液漂洗;i在95%酒精中固定10分钟,再进行巴氏染色,HE染色或免疫组织化学染色后阅片。本发明的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法具有经自然沉淀将标本中的粘液、血液和炎性细胞分离,制片清晰和提高诊断准确率的优点。
文档编号G01N1/28GK102393318SQ20111024035
公开日2012年3月28日 申请日期2011年8月19日 优先权日2011年8月19日
发明者张一心, 张一意, 张雪云 申请人:张一心, 张雪云
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1