专利名称：灯盏细辛酚原料药和制剂标准指纹图谱、建立方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药从药材到原料药再到制剂标准指纹图谱的建立方法，尤其涉及一种灯盏细辛酚原料药和制剂标准指纹图谱、及其建立方法，及由该方法获得的标准指纹图谱及其在原料药和制剂工艺质量控制方面的应用。
背景技术：
中药指纹图谱是指某种中药材或其原料药、制剂中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有十分明确的情况下，指纹图谱的建立对于有效控制中药材及其原料药、制剂的质量具有重要的意义。目前，有关灯盏细辛药材的指纹图谱研究已有报道。如谢培山主编的《中药色谱指 纹图谱》(人民卫生出版社，2005年2月第I版)一书对灯盏细辛药材的HPLC色谱指纹图谱研究进行了详细阐述。书中通过对48批来自云南各地的样品进行HPLC指纹图谱分析，建立了灯盏细辛药材的HPLC指纹图谱，形成了指纹图谱的共有模式，为灯盏细辛药材的质量分析奠定了良好的基础。该研究所述指纹图谱有21个特征指纹峰，但其仅指认了其中14个，指认率仅达到67%，在对灯盏细辛药材的基础物质认识上存在一定缺陷；且其仅针对灯盏细辛药材进行，没有涉及灯盏细辛的深加工产物，以致其应用范围受到限制，不能在灯盏细辛酚原料药及制剂生产过程中很好的进行工艺和质量控制。
发明内容
因此，本发明的目的是针对目前仅有灯盏细辛药材的指纹图谱及对该图谱中特征指纹峰指认率较低(67% )，不能很好地实现从灯盏细辛药材到灯盏细辛酚原料药及制剂的工艺、质量的不足，提供一种指认率达到95%的灯盏细辛药材指纹图谱，及灯盏细辛酚原料药和制剂的指纹图谱的建立方法及获得的标准指纹图谱，从而实现从灯盏细辛药材到灯盏细辛酚原料药及制剂的工艺、质量全过程监控，便于对灯盏细辛药材、灯盏细辛酚原料药和制剂基础物质进行确认、生产工艺和质量优劣作出评价，并为后续的工艺改进和完善提供标准指征。针对上述目的，本发明的技术方案如下一方面，本发明提供一种灯盏细辛药材及灯盏细辛酚原料药再到制剂的标准指纹图谱的建立方法，包括以下步骤取野黄芩苷适量溶于甲醇中作为参照物溶液；再分别取灯盏细辛药材、灯盏细辛酚原料药和制剂制成供试品溶液；然后分别用高效液相色谱仪测试而得。优选地，所述高效液相色谱仪测试采用DAD检测器，于波长270nm和330nm检测。优选地，所述灯盏细辛药材用甲醇提取后，用甲醇溶解，过滤，得到灯盏细辛药材供试品溶液，再用高效液相色谱仪测试得到灯盏细辛药材的标准指纹图谱，优选地，所述用于溶解的甲醇溶液为体积比为60%的甲醇溶液。优选地，所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱中含有21个主要特征指纹峰，有I号峰焦袂康酸葡萄糖苷、2号峰焦袂康酸、3号峰原儿茶酸、4号峰绿原酸+对羟基苯甲酸、5号峰未知、6号峰咖啡酸+多舌飞蓬苷、7号峰丁香酸、8号峰灯盏花苷、9号峰野黄芩苷、10号峰3，4-二咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5- 二咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5-二咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯乙、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-二咖啡酰基奎宁酸、16号峰6_羟基山奈酚、17号峰高黄芩素、18号峰1，3，5_三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5_三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯乙乙酯。其中，I号峰焦袂康酸葡萄糖苷、8号峰灯盏花苷、16号峰6_羟基山奈酚、18号峰1，3，5_三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、21号峰飞蓬酯乙乙酯，为本发明在谢培山对灯盏细辛药材的HPLC色谱指纹图谱研究基础上进一步指认出的6个基础物质，灯盏细辛药材标准指纹图谱特征指纹峰指认率达到95%。优选地，所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱如图Ia所示。优选地，所述灯盏细辛酚原料药溶于甲醇，得到灯盏细辛酚原料药供试品溶液，再用高效液相色谱仪测试得到灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱。优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中含有11个与所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱共有的主要特征指纹峰，所述11个特征指纹峰全部来源于灯盏细辛药材，包括9号峰野黄芩苷、10号峰3，4-二咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5-二咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5-二咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯乙、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-二咖啡酰基奎宁酸、18号峰1，3，5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯乙乙酯。优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中各主要特征指纹峰所占总峰面积的百分比分别为，9号峰39. 79%,10号峰0. 95%,11号峰32. 39%Λ2号峰5. 90%,13 号峰6. 48%、14 号峰1. 51 %、15 号峰8. 16%、18 号峰0. 55%、19 号峰0. 33%、20 号峰1. 30%及 21 号峰0. 42%。优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱如图2a所示。优选地，所述灯盏细辛酚制剂溶于甲醇，得到灯盏细辛酚制剂供试品溶液，再用高效液相色谱仪测试得到灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱。优选地，所述灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱中含有11个与所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱共有的主要特征指纹峰，所述11个特征指纹峰全部来源于灯盏细辛药材，且与灯盏细辛酚原料药中11个特征指纹峰完全相同，包括9号峰野黄芩苷、10号峰3，
4-二咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5_二咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5_ 二咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯乙、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-二咖啡酰基奎宁酸、18号峰1，3，
5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯乙乙酯。优选地，所述灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱中各主要特征指纹峰所占总峰面积 的百分比分别为，9号峰37. 10%、10号峰1. 68%、11号峰26. 75%、12号峰8. 20%、13号峰6. 44 %、14 号峰1· 31 %、15 号峰8. 65 %、18 号峰I. 26 %、19 号峰0. 83%,20 号峰3. 15%及 21 号峰0. 58%。优选地，所述灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱如图3a所示。另一方面，本发明提供一种由上述方法制得的灯盏细辛药材及灯盏细辛酚原料药及制剂的标准指纹图谱。优选地，所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱中含有21个主要特征指纹峰，有I号峰焦袂康酸葡萄糖苷、2号峰焦袂康酸、3号峰原儿茶酸、4号峰绿原酸+对羟基苯甲酸、5号峰未知、6号峰咖啡酸+多舌飞蓬苷、7号峰丁香酸、8号峰灯盏花苷、9号峰野黄芩苷、10号峰3，4-二咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5- 二咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5- 二咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯乙、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5_ 二咖啡酰基奎宁酸、16号峰6_羟基山奈酚、17号峰高黄芩素、18号峰1，3，5_三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5_三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯乙乙酯。其中，I号峰焦袂康酸葡萄糖苷、8号峰灯盏花苷、16号峰6_羟基山奈酚、18号峰1，3，5_三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、21号峰飞蓬酯乙乙酯，为本发明在谢培山对灯盏细辛药材的HPLC色谱指纹图谱研究基础上进一步指认出的6个基础物质。优选地，所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱如图Ia所示。 优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中含有11个与所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱共有的主要特征指纹峰，所述11个特征指纹峰全部来源于灯盏细辛药材，包括9号峰野黄芩苷、10号峰3，4-二咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5-二咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5-二咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯乙、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-二咖啡酰基奎宁酸、18号峰1，3，5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯乙乙酯。优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中共有的各主要特征指纹峰所占总峰面积的百分比分别为，9号峰39. 79%UO号峰0. 95%,11号峰32. 39%,12号峰5. 90%,13 号峰6. 48%,14 号峰1. 51%,15 号峰8. 16%、18 号峰0. 55%,19 号峰O. 33%,20 号峰1· 30%及 21 号峰0· 42%。优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱如图2a所示。优选地，所述灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱中含有11个与所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱共有的主要特征指纹峰，所述11个特征指纹峰全部来源于灯盏细辛药材，且与灯盏细辛酚原料药中11个特征指纹峰完全相同，包括9号峰野黄芩苷、10号峰3，
4-二咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5_二咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5_ 二咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯乙、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-二咖啡酰基奎宁酸、18号峰1，3，
5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯乙乙酯。优选地，所述灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱中共有的各主要特征指纹峰所占总峰面积的百分比分别为，9号峰37. 10%,10号峰1.68%,11号峰26. 75%,12号峰8. 20 %、13 号峰6· 44 %、14 号峰L 31 %、15 号峰8· 65 %、18 号峰L 26 %、19 号峰O. 83%,20 号峰3. 15%及 21 号峰0· 58%。优选地，所述灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱如图3a所示。再一方面，本发明提供一种从灯盏细辛药材到灯盏细辛酚原料药再到制剂的标准指纹图谱，及其在灯盏细辛酚原料药和制剂生产中药材投料筛选、提取加工工艺和质量控制方面的应用。本发明所述的灯盏细辛药材标准指纹图谱，其21个特征指纹峰包含了灯盏细辛酚原料药及制剂中明确的5个活性成分峰(9号峰野黄芩苷、11号峰3，5_ 二咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5- 二咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯乙、15号峰4，5-二咖啡酰基奎宁酸)，不同批次药材指纹图谱相似度> O. 9方可投料；从灯盏细辛药材到灯盏细辛酚原料药再到制剂标准指纹图谱，灯盏细辛酚原料药和制剂特征指纹峰全部来源于药材，提取和生产过程未引入其他杂质，表现出明确的亲缘关系和极高的相关性；灯盏细辛酚原料药提取和制剂生产时，药材中1-8号杂质峰全部去除、9-15号活性成分峰全部保留、16-21号峰去除率大于90. O %，保证了原料药和制剂质量及药理活性；灯盏细辛酚原料药和制剂标准指纹图谱特征指纹峰及其峰面积，确定了灯盏细辛酚所含11个基础物质及各基础物质比例，便于原料药和制剂质量控制，保证其稳定性、均一性。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中
图I为灯盏细辛药材的标准指纹图谱及21批灯盏细辛药材指纹图谱比对的图谱，图中图Ia为灯盏细辛药材的标准指纹图谱，图Ib为21批灯盏细辛药材指纹图谱相似度评价叠加图(取中位数)；图2为灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱及10批灯盏细辛酚原料药指纹图谱比对的图谱，图中图2a为灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱，图2b为10批灯盏细辛酚原料药指纹图谱相似度评价叠加图(取中位数)；图3为灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱及10批灯盏细辛酚制剂指纹图谱比对的图谱，图中图3a为灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱，图3b为10批灯盏细辛酚制剂指纹图谱相似度评价叠加图(取中位数)。
具体实施例方式实施例I :灯盏细辛药材标准指纹图谱津立I、色谱条件与系统适用性Agilent 1100 Series高效液相色谱仪；ZorbaxSB-C18(4. 6mmX250mm,5ym)色谱柱；以乙腈-甲醇-甲酸为流动相；检测波长270nm、330nm ;理论塔板数按野黄芩苷峰计算应不低于6000。2、参照物溶液的制备取野黄芩苷对照品适量，配制成O. 4mg/mL的甲醇溶液，即得。3、供试品溶液的制备取灯盏细辛药材O. 50g，用甲醇加热回流提取，提取液蒸干后用60%甲醇溶解并定容至10mL，经O. 45 μ m滤膜过滤，即得。4、测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5 μ L，注入液相色谱仪，测定即得。5、灯盏细辛药材标准指纹图谱建立根据21批样品42个测试数据，灯盏细辛药材标准指纹图谱有21个主要特征指纹峰，具有图Ia和表1-1中所示的指纹图谱特征，该图谱的指认率达到95%，其中包含灯盏细辛酚原料及制剂明确的5个活性成分峰(9号峰野黄芩苷、11号峰3，5_ 二咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5- 二咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯乙、15号峰4，5-二咖啡酰基奎宁酸)。不同批次灯盏细辛药材指纹图谱与灯盏细辛药材标准指纹图谱采用国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004B)计算，相似度应>0.9。表1-1灯盏细辛药材主要特征指纹峰表
峰号成分名称^ax ( nm )
1焦袂康酸葡萄糖苷262
2焦袂康酸270
3原儿茶酸260
绿原酸326
4
对羟基苯曱酸256
5未知一咖啡酸326
多舌飞蓬苷324
7丁香酸276
8灯盏花苷328 9(s) 野黄芩苷(灯盏乙素)334
103,4-二咖啡酰基查宁酸326
113,5-二咖啡酰基查宁酸331
121,5-二咖啡酰基查宁酸332
13飞蓬酯乙330
14灯盏曱素336
154,5-二咖啡酰基查宁酸330
166-羟基山奈酚一
17高黄芩素338
181,3,5-三咖啡酰基查宁酸一
193,4,5-三咖啡酰基查宁酸一
20芹菜素340
21飞蓬酯乙乙酯一6、21批灯盏细辛药材样品指纹图谱采集灯盏细辛药材样品21批，分别制成供试品溶液，每批平行测定2次，分析42组数据，直观观察所测得的指纹图谱，全貌无明显变化；分别用相似度计算，在同台仪器上测得的指纹图谱与其所得共有模式图谱的相似度，按中位数计算，20批药材相似度大于0.9,1批药材相似度在O. 8-0. 9之间；按平均数计算，15批药材相似度大于O. 9，6批药材相似度在O. 8-0. 9之间。分析各批次色谱峰的相似度评价具体见表1-2及图lb。表1-221批灯盏细辛药材样品主要特征指纹图谱相似度计算结果批号中位数-I中位数-2平均值平均数-I平均数-2平均值
200608010.964 0.9140.939 0.901 0.896 0.898
200608020.960 0.9120.936 0.901 0.899 0.900
200608030.962 0.9780.970 0.968 0.985 0.976
200608040.937 0.9320.934 0.899 0.925 0.912
200608050.955 0.9180.936 0.924 0.926 0.925
200608060.9520.8980.9250.8990.8950.897
200612280.9520.9660.9590.9330.9770.955
20061207010.8840.9050.8940.9220.9350.928
20061207020.9710.9820.9760.9760.9900.983
20061207030.9700.9760.9730.9800.9870.983
20061207040.9710.9240.9470.9640.9340.949
20061207050.9170.8850.9010.9180.9140.916
20061207060.9310.9020.9160.9300.9290.929 200704260.9650.9730.9690.9100.9660.938
200705010.9720.9740.9730.9670.9820.974
200705020.9900.9850.9870.9750.9830.979
200705030.9740.8870.9300.8820.8810.881
200705040.9620.8880.9250.8890.8960.892
200705050.9740.8840.9290.8790.8730.876 200705150.9630.9670.9650.9710.9800.975 200706010.9510.8680.9090.8510.8480.849实施例2 :灯盏细辛酚原料药标准指纹图谱建立I、色谱条件与系统适用性Agilent 1100 Series高效液相色谱仪；ZorbaxSB-C18(4. 6mmX250mm,5um)色谱柱；以乙腈-甲醇-甲酸为流动相；检测波长270nm、330nm ;理论塔板数按野黄芩苷峰计算应不低于6000。2、参照物溶液的制备取野黄芩苷对照品适量，加甲醇制成O. 4mg/mL的溶液，即得。3、供试品溶液的制备精密称取适量供试品配制成lmg/mL的甲醇溶液，即得。4、测定法精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5 μ L，分别注入液相色谱仪，测定即得。
5、灯盏细辛酚原料药标准指纹图谱建立(I)根据10批样品20个测试数据，形成灯盏细辛酚原料药指纹图谱的共有模式。(2)灯盏细辛酚原料药标准指纹图谱中共有11个与所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱共有的主要特征指纹峰，分别为，9号峰(S):野黄芩苷、10号峰3，4-二咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5-二咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5-二咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯乙、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-二咖啡酰基奎宁酸、18号峰1，3，5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯乙乙酯。(3)各主要特征指纹峰相对保留时间、相对峰面积和所占总峰面积比例见表2-1。与参照物相应的峰为S峰(9号峰)，11号峰单峰面积百分比大于20%，11、12号峰未达基线分离，合并计算该组峰的总峰面积，其差值不得大于±20% ;其余各特征指纹峰面积百分比均小于10%，对其差值不作要求。特征指纹峰面积百分比之和不得小于95%，非特征指 纹峰面积百分比之和小于5%。表2-1灯盏细辛酚原料药指纹图谱检测标准
保留时间相对保留时间相对峰面积占总峰面叙
峰T-
(min)(大约)标准值允许限(％) 上限下限标准值允许限上限下限比(％)
9(s)26.5971.000<±10 1.00 1.00 1.000 S 峰一 一39.79
1028.3031.064<±10 1.17 0.96 0.025 不作要求一 一0.95
1129.9611.126<±10 1.24 1.01 0.79332.39
<±20%1.1290.753
1230.8421.160<±101.28 1.040.1485.90
1335.0681.324<±101.46 1.190.157不作要求一一6.48
1439.5451.489<±101.64 1.340.039不作要求一一1.51
1540.9361.540<±101.69 1.390.204不作要求一一8.16
1853.5271.955〈士 102.151.760.013不作要求一一0.55
1954.2461.975<±102.17 1.780.007不作要求一一0.33
2055.1051.995<±102.19 1.800.031不作要求一一1.30
2155.8282.010<±102.211.810.009不作要求一一0.42 合计97.78灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱如图2a所示。不同批次灯盏细辛酚原料药指纹图谱与灯盏细辛酚原料药标准指纹图谱共有模式采用国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004B)计算，相似度应彡O. 9。6、方法学分析(I)稳定性①相似度取同一批号样品的供试品溶液，分别在O、1. 5、3. O、4. 5、9. O、10. 5h测定，直观观察指纹图谱的全貌无明显变化，用相似度计算，在同台仪器上测得的指纹图谱与其共有模式图谱的相似度在O. 999-1. OOO之间，RSD为O. 045%，表明供试品溶液的成分在10. 5h内稳定。结果见表2-2和图2b。表2-2灯盏细辛酚原料药指纹图谱相似度计算稳定性试验结果
权利要求
1.ー种灯盏细辛药材及灯盏细辛酚原料药和制剂的标准指纹图谱的建立方法，包括以下步骤取野黄芩苷适量溶于甲醇中作为參照物溶液；再分别取灯盏细辛药材、灯盏细辛酚原料药和制剂制成供试品溶液；最后分别吸取參照物溶液和供试样品溶液用高效液相色谱仪测试而得，优选地，所述高效液相色谱仪测试采用DAD检测器，于波长270nm和330nm检测。
2.根据权利要求I所述的标准指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述灯盏细辛药材用甲醇提取后，用甲醇溶液溶解，过滤，得到灯盏细辛药材供试品溶液，再用高效液相色谱仪测试得到灯盏细辛药材的 标准指纹图谱，优选地，所述用于溶解的甲醇溶液为体积比为60%的甲醇溶液。
3.根据权利要求2所述的标准指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱中含有21个主要特征指纹峰，有I号峰焦袂康酸葡萄糖苷、2号峰焦袂康酸、3号峰原儿茶酸、4号峰绿原酸+对轻基苯甲酸、5号峰未知、6号峰咖Π非酸+多舌飞蓬苷、7号峰丁香酸、8号峰灯盖花苷、9号峰野黄岑苷、10号峰3,4- ニ咖Π非酰基奎宁酸、11号峰3，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酷こ、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、16号峰6_羟基山奈酚、17号峰高黄芩素、18号峰1，3，5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5_三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯ここ酷； 优选地，所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱如图Ia所示。
4.根据权利要求I至3任一项所述的标准指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述灯盏细辛酚原料药溶于甲醇，得到灯盏细辛酚原料药供试品溶液，再用高效液相色谱仪测试得到灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱。
5.根据权利要求4所述的标准指纹图谱的建立方法，其特征在干，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中含有含有11个与所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱共有的主要特征指纹峰，所述11个特征指纹峰全部来源于灯盏细辛药材，包括9号峰野黄芩苷、10号峰3，4-ニ咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯こ、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、18号峰1，3，5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酷ここ酷； 优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中各主要特征指纹峰所占总峰面积的百分比分别为，9号峰39. 39%、10号峰0. 95%、11号峰32. 39%、12号峰5. 90%、13号峰6. 48%,14 号峰1. 51%,15 号峰8. 16%,18 号峰0. 55%,19 号峰0. 33%,20 号峰I. 30%及 21 号峰0. 42% ； 更优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱如图2a所示。
6.根据权利要求I至5任一项所述的标准指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述灯盏细辛酚制剂溶于甲醇，得到灯盏细辛酚制剂供试品溶液，再用高效液相色谱仪测试得到灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱。
7.根据权利要求6所述的标准指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱中含有11个与所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱共有的主要特征指纹峰，所述11个特征指纹峰全部来源于灯盏细辛药材，且与灯盏细辛酚原料药中11个特征指纹峰完全相同，包括9号峰野黄芩苷、10号峰3，4-ニ咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5_ ニ咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5_ ニ咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯こ、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、18号峰1，3，5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5_三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯ここ酷； 优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中各主要特征指纹峰所占总峰面积的百分比分别为，9号峰37. 10%,10号峰1. 68%,11号峰26. 75%,12号峰8. 20%,13号峰6. 44%,14 号峰1. 31%,15 号峰8. 65%,18 号峰1. 26%,19 号峰0. 83%,20 号峰.3.15%及 21 号峰0. 58% ； 更优选地，所述灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱如图3a所示。
8.一种由权利要求I至7任一项所述的方法制得的灯盏细辛药材及灯盏细辛酚原料药和制剂的标准指纹图谱。
9.根据权利要求8所述的标准指纹图谱，其特征在干，所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱中含有21个主要特征指纹峰，有I号峰焦袂康酸葡萄糖苷、2号峰焦袂康酸、3号峰原儿茶酸、4号峰绿原酸+对轻基苯甲酸、5号峰未知、6号峰咖Π非酸+多舌飞蓬苷、7号峰丁香酸、8号峰灯盏花苷、9号峰野黄芩苷、10号峰3，4-ニ咖啡酰基奎宁酸、11号峰.3,5- ニ咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5- ニ咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯こ、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5_ニ咖啡酰基奎宁酸、16号峰6_羟基山奈酚、17号峰高黄芩素、18号峰1，3，5_三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5_三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯ここ酷； 优选地，所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱如图Ia所示。
10.根据权利要求8所述的标准指纹图谱，其特征在于，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中含有11个与所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱共有的主要特征指纹峰，所述.11个特征指纹峰全部来源于灯盏细辛药材，包括9号峰野黄芩苷、10号峰3，4_ニ咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酷こ、14号峰灯盏甲素、15号峰4，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、18号峰1，3，5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯ここ酷； 优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中主要特征指纹峰所占总峰面积的百分比为，9 号峰39. 39 %、10 号峰0. 95 %、11 号峰32. 39 %、12 号峰5. 90 %、13 号峰6. 48%,14 号峰1. 51%,15 号峰8. 16%,18 号峰0. 55%,19 号峰0. 33%,20 号峰I.30%及 21 号峰0. 42% ； 更优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱如图2a所示。
11.根据权利要求8所述的标准指纹图谱，其特征在于，所述灯盏细辛酚制剂的标准指纹图谱中含有11个与所述灯盏细辛药材的标准指纹图谱共有的主要特征指纹峰，所述11个特征指纹峰全部来源于灯盏细辛药材，且与灯盏细辛酚原料药中11个特征指纹峰完全相同，包括9号峰野黄芩苷、10号峰3，4-ニ咖啡酰基奎宁酸、11号峰3，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、12号峰1，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、13号峰飞蓬酯こ、14号峰灯盏甲素、15号峰.4，5-ニ咖啡酰基奎宁酸、18号峰1，3，5-三咖啡酰基奎宁酸、19号峰3，4，5-三咖啡酰基奎宁酸、20号峰芹菜素、21号峰飞蓬酯ここ酷； 优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱中主要特征指纹峰所占总峰面积的百分比为，9号峰37. 10 %,10号峰1· 68 %,11号峰26· 75 %,12号峰8· 20 %Λ3号峰6. 44%,14 号峰1. 31%,15 号峰8. 65%,18 号峰1. 26%,19 号峰0. 83%,20 号峰3. 15%及 21 号峰0. 58% ； 更优选地，所述灯盏细辛酚原料药的标准指纹图谱如图3a所示。
12.根据权利要求8至11任一项所述的标准指纹图谱在灯盏细辛药材及灯盏细辛酚原料药和制剂检测中的应用； 优选地，所述应用包括应用于灯盏细辛药材投料优化筛选、应用于灯盏细辛酚原料药及制剂基础物质及比例确定、应用于灯盏细辛酚原料药及制剂エ艺指导、应用于灯盏细辛酚原料药及制剂质量控制。
全文摘要
本发明提供一种灯盏细辛酚原料药和制剂标准指纹图谱、建立方法及应用，包括灯盏细辛药材及灯盏细辛酚原料药和制剂标准指纹图谱及其特征指纹峰的确定，以及所述标准指纹图谱在灯盏细辛酚原料药和制剂生产中药材投料筛选、提取加工工艺和质量控制方面的应用，从而实现从灯盏细辛药材到灯盏细辛酚原料药再到制剂的工艺、质量全过程监控，便于对灯盏细辛药材、灯盏细辛酚原料药和制剂基础物质进行确认、生产工艺和质量优劣作出评价，并为后续的工艺改进和完善提供标准指征。
文档编号G01N30/88GK102650626SQ20111031530
公开日2012年8月29日 申请日期2011年10月17日 优先权日2011年10月17日
发明者孙汉董, 王海燕, 罗晓星, 胡志祥, 赵勤实, 龙祥 申请人:云南施普瑞生物工程有限公司