专利名称：一种新的亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种药物检测方法，特别涉及一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量测定检测方法。具体的讲是一种新的采用HPLC仪器的方法检测亚硫酸氢钠穿心莲内酯含量的方法。
背景技术：
亚硫酸氢钠穿心莲内酯为一种抗菌消炎药物，已有产品上市销售。现有亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量测定方法采用紫外分光光度法，此法对样品配制操作要求很高，温度、 时间的细微差异都对测定结果有很大的影响，同一个样品，不同的测定人员测定，结果都有很大差异，而且此法专属性很差，亚硫酸氢钠穿心莲内酯有关杂质亦有紫外吸收，因此准确度很差。
文献有报道用HPLC检测亚硫酸氢钠穿心莲内酯含量的方法，若采用该方法检测并使用DAD检测器进行全波长扫描，可发现其主峰的峰纯度不高，显示有杂质峰包含在主峰内，因此，含量测定结果亦不理想。
本发明经过筛选，找到一种灵敏度高，杂质和主成分亚硫酸氢钠穿心莲内酯的分离度高的高效液相色谱检测法，和现有技术相比，操作简单，重现性好，峰纯度高，准确性好，为亚硫酸氢钠穿心莲内酯后续的一些研究工作开展创造有利条件。
发明内容
本发明提供一种灵敏度高，杂质和主成分亚硫酸氢钠穿心莲内酯的分离度高的亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量测定方法，该方法包括以下步骤
步骤1，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品溶液；
步骤2，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液；
步骤3，将上述溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱步骤4，根据色谱图计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量。
其中步骤1所述的对照品溶液的配制方法如下
精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品，加水制成0. 01-2mg/ml的溶液；优选的， 配制成0. 1-lmg/ml的溶液，更优选的是0. 1-0. 5mg/ml的溶液，最优选的是0. 2mg/ml的溶液。
其中步骤1所述的供试品溶液的配制方法如下
精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品，加水制成0. 01-2mg/ml的溶液；优选的， 配制成0. 1-lmg/ml的溶液，更优选的是0. 1-0. 5mg/ml的溶液，最优选的是0. 2mg/ml的溶液。
其中步骤3，吸取供试品和对照品溶液，注入液相色谱仪检测，进样量10 μ 1，其中的色谱条件为
色谱柱安捷伦ZORBAX XDBC18 柱，4. 6mm* 150mm,柱温 20°C -40°C，流动相 A 相0.001-0. 2mol/L磷酸二氢钾溶液；B相甲醇，两者体积比例为A相55-95 B相45_5，优选 A相60-70 B相40-30，最优选A相65 B相35，梯度方式为恒流，检测波长200-M0nm， 优选 220nm。流速 lml/min ；
本发明优选的色谱条件为柱温30°C，流动相A相0. 01-0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液；两者体积比例为A相60-70 B相40-30，
本发明更优选的色谱条件为柱温30°C，流动相A相0.02mol/L磷酸二氢钾溶液；两者体积比例为A相65 B相35，检测波长220nm。
本发明所述亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品可以从市场购买得到，亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品为工业化生产得到的未知含量的亚硫酸氢钠穿心莲内酯产品。
通过以上方法得到对照品和供试品的色谱图，用峰面积归一化法计算可以得到供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量。
本发明的含量测定方法是经过对色谱条件的充分摸索和筛选得到的，属于最优选的方法。
以下的一些试验可以表明本发明上述的检测方法的可行性、准确性和可靠性。
一 专属性试验
取亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药适量，精密称定，加水溶解制成约0. 2mg/ml的供试品溶液，按照上述方法进行测定；取硫酸氢钠穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加水溶解制成约O.aiig/ml的对照品溶液。按照上述方法进行测定。测定图谱如
图1、图2。
以上实验图谱检测表明，采用该方法测定亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量，杂质分离度良好，峰对称性良好，无明显干扰。
二 精密度试验
取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，进样量为 10 μ 1，主峰峰面积的RSD值为0. 42%，结果见如表1。
表1 精密度试验结果
No.主峰面积119022222189262331886666418828475188022861890166均值1889125权利要求
1.一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤步骤1，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品溶液；步骤2，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液；步骤3，将上述溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图；步骤4，根据色谱图计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤1或2所述的对照品溶液和供试品溶液的配制方法如下精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品或供试品，加水制成0. 01-2mg/ml的溶液。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤1或2所述的对照品溶液和供试品溶液的配制方法如下精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品或供试品，加水制成0. 1-0. 5mg/ml的溶液。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤1或2所述的对照品溶液和供试品溶液的配制方法如下精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品或供试品，加水制成0. 2mg/ml的溶液。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤3所述吸取供试品和对照品溶液，注入液相色谱仪检测，其中的进样量为10μ 1。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤3所述吸取供试品和对照品溶液，注入液相色谱仪检测，色谱仪的色谱条件为色谱柱安捷伦ZORBAX XDBC18柱， 4. 6mm* 150mm,柱温20°C -40°C，流动相A相0. 001-0. 2mol/L磷酸二氢钾溶液；B相甲醇， 两者体积比例为A相55-95 B相45-5，梯度方式为恒流，检测波长200-M0nm ；流速Iml/mirio
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，柱温30°C，流动相A相0.01-0. 05mol/ L磷酸二氢钾溶液；两者体积比例为A相60-70 B相40-30。
8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，柱温30°C，流动相A相0.05mol/L磷酸二氢钾溶液；两者体积比例为A相65 B相35，检测波长220nm。
9.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品和供试品各适量，分别加水制成0. lmg/ml的溶液；吸取供试品和对照品溶液各适量，注入液相色谱仪检测，进样量10 μ 1，色谱柱安捷伦ZORBAX XDBC18柱，4. 6mm*150mm，柱温 25°C，流动相A相:0.01mol/L磷酸二氢钾溶液；B相甲醇，比例为A相55 B相45，梯度方式为恒流，检测波长210nm，峰面积归一化法计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量。
10.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品和供试品各适量，分别加水制成0. 2mg/ml的溶液；吸取供试品和对照品溶液各适量， 注入液相色谱仪检测，进样量10 μ 1，色谱柱安捷伦Z0RBAXXDBC18柱，4. 6mm*150mm，柱温 30°C，流动相A相:0. 02mol/L磷酸二氢钾溶液；B相甲醇，比例为A相65 B相35，梯度方式为恒流，检测波长220nm，峰面积归一化法计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量。
全文摘要
本发明涉及一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量检测方法，步骤如下称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品和供试样品各适量，分别加水制成一定浓度的溶液；吸取样品和对照品溶液各适量，注入液相色谱仪检测，流动相A相磷酸二氢钾溶液；B相甲醇，峰面积归一化法计算含量。
文档编号G01N30/02GK102507771SQ20111032986
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月26日 优先权日2011年10月26日
发明者吴凌云 申请人:无锡济民可信山禾药业股份有限公司