血栓烷B₂酶联免疫测定试剂盒的制作方法

专利名称：血栓烷B₂酶联免疫测定试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于酶联免疫测定试剂盒，具体的涉及一种血栓烷化酶联免疫测定试剂
品.ο
背景技术：
血栓烷A2是血小板花生四烯酸代谢的主要产物，也可产生于肺、肾等组织，血栓烷 A2是机体最强的促血小板聚集物质与血管收缩物质。血栓烷4 (以下简称TXB2)是血栓烷 A2的稳定的代谢产物。在动脉粥样硬化、血栓栓塞性疾病、糖尿病与肿瘤转移等疾病中，血浆TX&含量增高。在先天性血小板花生四烯酸代谢障碍性疾病或服用阿司匹林类非留体抗炎药物后，血小板TXB2生成明显减少。

发明内容
本发明的目的在于提供一种血栓烷B2酶联免疫测定试剂盒。为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现 本发明的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒，包括
1)已包被TXB2-牛血清白蛋白连接物酶标板，-20°c保存；
2)明胶；
准品，4°C保存；
4)抗体TXB2-IgG, 4°C保存；
5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物，-20°C保存；
6)邻苯二胺；
7)稀释液，用前用蒸馏水作1:20稀释；
8)底物液，用前用蒸馏水作1:5稀释。本发明的检测原理如下
抗原(TXB2-BSA)包被固相载体，与游离抗原(标准品或待测样品)竞争性地与一定量得抗体结合，洗涤后加过量酶标抗体，再加底物显色。根据显色程度(0D值)即可从标准曲线上推算出待测样品TX&含量。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果
1、本发明的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒合具有良好的特异性，可有效测定人和动物的血浆、血细胞、体液或组织中的TXB2的浓度；
2、本发明的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒合在动脉粥样硬化、血栓栓塞性疾病、糖尿病与肿瘤转移等疾病中的鉴别诊断灵敏度高，可保证良好的线性关系；
3、本发明的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒合在-20°C条件下可可保存6个月。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术技术方案，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例。
具体实施例方式一种血栓烷4酶联免疫测定试剂盒，其包括
1)已包被TXB2-牛血清白蛋白连接物酶标板，-20°c保存；
2)明胶，Ig/瓶；
3)TXB2 标准品，1600pg/ml，4°C保存；
4)抗体TXB2-IgG, lml，滴度为 1:2000，4°C保存；
5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物(GARIgG-HRP)，100ug/ml,_20°C保存；
6)邻苯二胺(0PD)，15mg/瓶;
7)稀释液(PBS)，0.2M，用前用蒸馏水作1:20稀释；
8)底物液化吐作『2)，0.1M，用前用蒸馏水作1:5稀释。利用本发明的血栓烷4酶联免疫测定试剂盒的检测步骤如下 1、一次反应
将准品用0. 1%明胶倍比稀释成8个浓度:1. 25、2. 5、5、10、20、40、80和160 pg/0. 1ml，用 0. 1% 明胶(PBS 配制)将抗 TXB2-IgG 作 1:10 稀释。零标准(BO)孔加稀释液IOOul，标准(ST)孔加TXB2标准品IOOul，样品(SMP)孔加待测样品IOOul。各孔均加抗体TXB2-IgGlOOul (ΤΑ孔除外)。37 °C 2hr 或室温下 4hr。tween-PBS稀释液洗板5次。2、二次反应
用0. 1%明胶(稀释液配制)12ml将GARIgG-HRP稀释，各孔均加200ul (ΤΑ孔除外)。 37 °C 2hr或室温下4hr。tween-PBS 洗板 5 次。3、反应测定
用底物液新鲜配制OPD-H2A基质(OPD浓度lmg/ml，每毫升底物液中加入0. 5微升30% H2O2),每孔注入200ul。37°C放置20min或至显色较好时，用3M硫酸50ul终止反应。置室温lOmin，在酶标检测仪上测定OD49tl,以TA孔调零。4、计算
权利要求
1.血栓烷4酶联免疫测定试剂盒，其特征在于，包括1)已包被TXB2-牛血清白蛋白连接物酶标板；2)明胶；3)TXB2标准品；4)抗体TXB2-IgG;5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物；6)邻苯二胺；7)稀释液;8)底物液。
2.根据权利要求1所述的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述明胶为 Ig/ 瓶。
3.根据权利要求ι所述的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述TX&标准品为 1600pg/ml。
4.根据权利要求1所述的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述抗体 TXB2-IgG 为 1ml，滴度为 1:2000。
5.根据权利要求1所述的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述羊抗兔 IgG-辣根过氧化物酶结合物为100ug/ml。
6.根据权利要求1所述的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述邻苯二胺为15mg/瓶。
7.根据权利要求1所述的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒，其特征在于稀释液为 0. 2M。
8.根据权利要求1至7中任意一项所述的血栓烷化酶联免疫测定试剂盒，其特征在于底物液为0. IM0
全文摘要
本发明公开了一种血栓烷B2酶联免疫测定试剂盒，其包括已包被TXB2-牛血清白蛋白连接物酶标；明胶；TXB2标准品；抗体TXB2-IgG；羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物；邻苯二胺；稀释液和底物液。本发明的血栓烷B2酶联免疫测定试剂盒合具有良好的特异性，可有效测定人和动物的血浆、血细胞、体液或组织中的TXB2的浓度。
文档编号G01N33/543GK102520156SQ20111042006
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者何杨, 王兆钺, 阮长耿, 陈德春 申请人:苏州博赛生物医药有限公司, 苏州大学, 苏州苏大赛尔免疫生物技术有限公司