专利名称：十五味乳鹏制剂的检测方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药制剂的检测方法。
背景技术：
十五味乳鹏丸是藏医传统验方，处方由贝噶、宽筋藤、决明子、渣驯膏、黄葵子、藏菖蒲、巴夏嘎、儿茶、诃子(去核)、安息香、毛诃子、铁棒锤(制)、木香、余甘子、麝香十五味药材组成。可消炎止痛，干黄水，用于关节红肿疼痛，发痒，痛风，黄水积聚。目前使用的十五味乳鹏丸记载于《中华人民共和国卫生部药品标准1995年版藏
药第一册藏药名毕琼久埃日布拼音名Shiwuwei Rupeng Wan书页号C1_199标准编号WS3-BC-0196-9处方贝噶150g、宽筋藤150g、决明子120g、渣驯膏75g、黄葵子120g、藏菖蒲 120g、巴夏嘎110g、儿茶75g、诃子150g、安息香60g、毛诃子150g、铁棒锤75g、木香150g、麝香1.5g、余甘子150g。制法以上十五味，除渣驯膏、麝香外，其余粉碎成细粉，过筛，加入人工麝香细粉，混勻，用渣驯膏加适量水泛丸，阴干即得。性状本品为棕褐色水丸；气微香，味苦。检查应符合丸剂项下有关的各项规定(附录8页)。功能与主治消炎止痛，干黄水。用于关节红肿疼痛，发痒，痛风，黄水积聚。用法与用量一次2 4丸，一日2次。规格每10丸重3g。贮藏密闭，置阴凉干燥处目前尚未有十五味乳鹏制剂的检测方法，也没有对方中的毒性成分进行含量检测的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种十五味乳鹏制剂的检测方法，所述检测方法具有专属性强、重现性好、操作简便等优点。为实现上述目的，本发明的技术方案为一种十五味乳鹏制剂的检测方法，该制剂原料药组成为乳香150g、宽筋藤150g、 决明子120g、渣驯膏75g、黄葵子120g、藏菖蒲120g、巴夏嘎110g、儿茶75g、去核的诃子 150g、安息香/苦奎那布60g、毛诃子150g、铁棒锤(制)75g、木香/川木香150g、麝香/人工麝香1. 5g、余甘子150g ；该方法包括下述鉴别和/或检查方法的一种或几种过薄层层析对制剂中的川木香、决明子、藏菖蒲进行定性鉴别，以及检查制剂中乌头碱含量。具体地，川木香的定性鉴别包括
la)制备川木香供试品溶液、川木香对照药材溶液、不含川木香的阴性样品溶液；2a)按照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤la)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液并点样于同一硅胶G薄层板上；3a)以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2a)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，薄层色谱中，在与川木香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；决明子的定性鉴别包括lb)制备决明子供试品溶液、决明子对照药材溶液、不含决明子的阴性样品溶液；2b)按照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤lb)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液并点样于同一硅胶G薄层板上；3b)以石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层液为展开剂，将步骤2b)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，紫外光灯下检视，薄层色谱中，在与决明子对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点；藏菖蒲的定性鉴别包括Ic)制备藏菖蒲供试品溶液、藏菖蒲对照药材溶液、不含藏菖蒲的阴性样品溶液；2c)按照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取骤Ic)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液并点样于同一硅胶GF254薄层板上；3c)以石油醚-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2c)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与藏菖蒲对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的暗斑点；乌头碱含量检查包括Id)制备乌头碱供试品溶液、乌头碱对照品溶液；2d)按照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Id) 所获得的供试品溶液，乌头碱对照品溶液并点样于同一硅胶G薄层板上；3d)以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，将步骤2d)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以稀碘化铋钾试液，薄层色谱中，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。所述川木香、决明子、藏菖蒲以及乌头碱的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液的制备方法包括(1)川木香取所述十五味乳鹏制剂，研细，加丙酮，超声处理，滤过，滤液浓缩，作为川木香的供试品溶液；另取川木香对照药材，同法制成川木香对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含川木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含川木香的阴性样品溶液；(2)决明子取所述十五味乳鹏制剂，研细，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加2. 5mol/ L硫酸溶液，超声处理，再加三氯甲烷，加热回流，冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层， 酸液用三氯甲烷提取，加无水硫酸钠适量脱水，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇使溶解，作为决明子的供试品溶液；另取决明子对照药材，同法制成决明子对照药材溶液；按处方比例及
7制备工艺，配置不含决明子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含决明子的阴性样品溶液；(3)藏菖蒲取所述十五味乳鹏制剂，加甲醇，超声，滤过，滤液浓缩，作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材，同法制成藏菖蒲对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液；(4)乌头碱取所述十五味乳鹏制剂，研细，加氨试液，搅勻，放置，加乙醚，振摇，放置，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇使溶解，作为乌头碱含量检测的供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成溶液，作为乌头碱对照品溶液。优选地，所述方法包括以下步骤a)川木香的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂1 3重量份，研细，加丙酮10 30体积份，超声处理 10 30分钟，滤过，滤液浓缩约1 3体积份，作为川木香的供试品溶液；另取川木香对照药材0. 1 0. 8重量份，同法制成川木香对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含川木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含川木香的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VIB试验，吸取上述三种溶液各0. 003 0. 007体积份，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10 20 2 8 0.5 2的环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40min，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；b)决明子的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂1 3重量份，研细，加甲醇10 30体积份，加热回流 20 45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2. 5mol/L硫酸溶液10 30体积份，超声处理3 8 分钟，再加三氯甲烷10 30体积份，加热回流20 45分钟，冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1 3次，每次5 15体积份，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠适量脱水，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 3体积份使溶解，作为决明子的供试品溶液；另取决明子对照药材0. 1 0. Sg,同法制成决明子对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含决明子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含决明子的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液0.005 0. 02体积份、对照药材溶液0. 003 0. 007体积份和阴性样品溶液0. 005 0. 02体积份， 分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比10 20 2 8 0. 5 2，沸点为60°C 90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层液为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40min，展开， 取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点；c)藏菖蒲的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂1 3重量份，加甲醇10 30体积份，超声10 30分钟， 滤过，滤液浓缩至约1 3体积份，作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材0. 1 0. 8重量份，同法制成藏菖蒲对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液；照薄层色谱法 《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液0. 005 0. 02体积份、对照药材溶液0. 003 0. 007体积份和阴性样品溶液0. 005 0. 02体积份，分别点样于同一硅胶 GF254薄层板上，以体积比为5 15 0.5 4，沸点为60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40min，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的暗斑点；d)乌头碱含量检查取所述十五味乳鹏制剂3 8重量份，研细，加氨试液0. 5 2体积份，搅勻，放置 1 3小时，加乙醚10 20体积份，振摇0. 5 2小时，放置18 30小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 3体积份使溶解，作为乌头碱的供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每体积份含0. 0005 0. 002重量份的溶液，作为乌头碱对照品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液0. 005 0. 03体积份，乌头碱对照品溶液0. 0015 0. 015体积份，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2 8 1 3 0.5 2的环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40min，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；薄层供试品色谱中，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。更优选地，所述方法包括以下步骤i)川木香的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂2g，研细，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩约anl，作为川木香的供试品溶液；另取川木香对照药材0. 5g，同法制成川木香对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含川木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含川木香的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验， 吸取上述三种溶液各5 μ 1，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15 5 1的环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20min，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点；ii)决明子的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂2g，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干， 残渣加2. 5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理5分钟，再加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟， 冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取2次，每次IOml，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠适量脱水，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为决明子的供试品溶液；另取决明子对照药材0. 5g，同法制成决明子对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含决明子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含决明子的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10 μ 1、 对照药材溶液5μ 1和阴性样品溶液10μ 1，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比 15 5 1，沸点为60°C 90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层液为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20min，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点；iii)藏菖蒲的定性鉴别
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取所述十五味乳鹏制剂2g，加甲醇20ml，超声20分钟，滤过，滤液浓缩至约^iil, 作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材0. 5g，同法制成藏菖蒲对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液5 10 μ 1、对照药材溶液5 μ 1和阴性样品溶液5 10 μ 1，分别点样于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10 2，沸点为60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20min，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的暗斑点；iv)乌头碱含量检查取所述十五味乳鹏制剂5g，研细，加氨试液1ml，搅勻，放置2小时，加乙醚15ml， 振摇1小时，放置M小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为乌头碱的供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为乌头碱对照品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液20 μ 1、 10 μ 1，乌头碱对照品溶液10 μ 1、5 μ 1、2. 5 μ 1，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5 2 1的环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20min，展开， 取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；薄层色谱中，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。上述十五味乳鹏制剂的剂型可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或散剂。制备方法为取所述十五味乳鹏制剂，粉碎成细粉，过筛，混勻，加适量水制丸，阴干即得；或取所述十五味乳鹏制剂，粉碎成细粉，过筛，混勻，混勻，按药剂学常规方法，加入常规辅料，制成临床上接受的口服制剂。本发明针对十五味乳鹏制剂的组成成分，对指标性成分川木香、决明子、藏菖蒲的存在进行检测，并检测制剂中的毒性成分乌头碱的含量，以达到对制剂的质量进行控制的目的。本发明的检测方法根据实际检测需要，对现有的检测方法的检测条件进行了筛选，确定了较佳的十五味乳鹏制剂的检测方法，该检测方法具有灵敏、重现性好和专属性强的特
点ο
图1是十五味乳鹏制剂中川木香薄层层析检测图；其中，从左到右样品顺序为川木香的供试品溶液1、川木香的供试品溶液2、川木香的供试品溶液3、川木香的供试品溶液4、川木香对照药材溶液、不含川木香的阴性样品溶液；其中，展开剂为环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯(15 5 1)，显色剂为5%香草醛硫酸。图2是十五味乳鹏制剂中决明子薄层层析检测图；其中，从左到右样品顺序为决明子的供试品溶液1、决明子的供试品溶液2、决明子的供试品溶液3、决明子的供试品溶液4、决明子对照药材溶液、决明子对照药材溶液、不含决明子的阴性样品溶液；其中，展开剂为石油醚(60°C 90°C)_甲酸乙酯-甲酸(15 5 1)的上层液，紫外光灯(365nm)下检视。图3是十五味乳鹏制剂中藏菖蒲薄层层析检测图；其中从左到右样品顺序为藏菖蒲的供试品溶液1、藏菖蒲的供试品溶液2、藏菖蒲的供试品溶液3、藏菖蒲的供试品溶液4、藏菖蒲对照药材溶液、藏菖蒲对照药材溶液、不含藏菖蒲的阴性对照液；其中，展开剂为石油醚(60°C 90°C)_乙酸乙酯(10 2)，紫外光灯QMnm)下检视。图4是十五味乳鹏制剂中乌头碱含量检测图；其中从左到右样品顺序为乌头碱含量检测的供试品溶液1(点样量10μ 1)、 乌头碱含量检测的供试品溶液2(点样量10 μ 1)、乌头碱含量检测的供试品溶液3(点样量10 μ 1)、乌头碱对照品溶液1(点样量5 μ 1)、乌头碱对照品溶液2 (点样量10μ 1)、乌头碱含量检测的供试品溶液4(点样量20 μ 1)、乌头碱含量检测的供试品溶液5(点样量20 μ 1)、乌头碱含量检测的供试品溶液6 (点样量20 μ 1)、乌头碱对照品溶液(点样量 2. 5 μ 1)、乌头碱对照品溶液(点样量2. 5 μ 1)；其中，展开剂为环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(5 2 1)，显色剂为稀碘化铋试液； 日光下检视。
具体实施例方式下述用于各成分检测的制剂在各检测方法下均简称为“供试品”，应理解为其指按照各检测方法要求制备的供试品，例如在川木香方法中所述的供试品为“川木香的供试
π ”
ΡΠ O实施例1十五味乳鹏制剂的制备将乳香150g、宽筋藤150g、决明子120g、渣驯膏75g、黄葵子120g、藏菖蒲120g、 巴夏嘎110g、儿茶75g、去核的诃子150g、安息香/苦奎那布60g、毛诃子150g、铁棒锤 (制)75g、木香/川木香150g、麝香/人工麝香1. 5g、余甘子150g，除渣驯膏、麝香或人工麝香外，其余粉碎成细粉，过筛，加入麝香或人工麝香细粉，混勻，用渣驯膏加适量水制丸，阴干即得。或以上十五味，除麝香或人工麝香外，其余粉碎成细粉，过筛，加入麝香或人工麝香细粉，混勻，按药剂学常规方法，加入常规辅料，制成临床上接受的口服制剂颗粒剂、丸剂、 胶囊剂、片剂或散剂。用法与用量日服用量为1. 2-2. 4g生药量，一日2次。实施例2十五味乳鹏制剂中川木香的薄层层析条件的筛选实验⑴仪器乳钵、电子秤、具塞锥形瓶、移液管、超声波提取仪、漏斗、滤纸、蒸发皿、点样器、硅胶G板、层析缸、喷雾瓶、电吹风。(2)对照药材川木香对照药材(批号1091-200001)，购自中国药品生物制品检定所。(3)试剂乙醚、环己烷、丙酮、石油醚(60°C 90°C )、甲酸乙酯、甲酸、乙酸乙酯、二氯甲烷、 5%香草醛硫酸。
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(4)检验方法提取溶剂的选择分别采用乙醚和丙酮为提取溶剂；提取方法的选择分别采用超声处理和加热回流；展开剂的选择分别以环己烷-丙酮(10 3)、石油醚(60°C 90°C )-甲酸乙酯-甲酸(15 5 0. 5)、石油醚(60°C 90°C )_乙酸乙酯(9 1)、环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯(15 5 1)为展开剂。(5)分别选择以上不同提取溶剂、提取方法和展开剂进行试验，结果如下
权利要求
1.一种十五味乳鹏制剂的检测方法，该制剂原料药组成为乳香150重量份、宽筋藤 150重量份、决明子120重量份、渣驯膏75重量份、黄葵子120重量份、藏菖蒲120重量份、 巴夏嘎110重量份、儿茶75重量份、去核的诃子150重量份、安息香/苦奎那布60重量份、 毛诃子150重量份、铁棒锤(制)75重量份、木香/川木香150重量份、麝香/人工麝香1. 5 重量份、余甘子150重量份；该方法包括下述鉴别和/或检查方法的一种或几种通过薄层层析对制剂中的川木香、决明子、藏菖蒲进行定性鉴别，以及检查制剂中乌头碱含量。
2.如权利要求1所述的检测方法，其中，川木香的定性鉴别包括la)制备川木香供试品溶液、川木香对照药材溶液、不含川木香的阴性样品溶液； 2a)按照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤la)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3a)以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2a)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，薄层色谱中，在与川木香对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点； 决明子的定性鉴别包括lb)制备决明子供试品溶液、决明子对照药材溶液、不含决明子的阴性样品溶液； 2b)按照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤lb)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3b)以石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层液为展开剂，将步骤2b)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，紫外光灯下检视，薄层色谱中，在与决明子对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点； 藏菖蒲的定性鉴别包括Ic)制备藏菖蒲供试品溶液、藏菖蒲对照药材溶液、不含藏菖蒲的阴性样品溶液； 2c)按照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取骤(Ic)所获得的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶GF254薄层板上；3c)以石油醚-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2c)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、 展开、取出、晾干，紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与藏菖蒲对照药材色谱相应的位置上， 供试品色谱显相同颜色的暗斑点； 乌头碱含量检查包括Id)制备乌头碱供试品溶液、乌头碱对照品溶液；2d)按照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Id)所获得的供试品溶液，乌头碱对照品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3d)以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，将步骤2d)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以稀碘化铋钾试液，薄层色谱中，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。
3.如权利要求2所述的检测方法，其中所述川木香、决明子、藏菖蒲以及乌头碱的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液的制备方法包括(1)川木香的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十五味乳鹏制剂，研细，加丙酮，超声处理，滤过，滤液浓缩，作为川木香的供试品溶液；另取川木香对照药材，同法制成川木香对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含川木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含川木香的阴性样品溶液；(2)决明子的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十五味乳鹏制剂，研细，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加2. 5mol/L硫酸溶液，超声处理，再加三氯甲烷，加热回流，冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取，加无水硫酸钠适量脱水，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇使溶解，作为决明子的供试品溶液；另取决明子对照药材，同法制成决明子对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含决明子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含决明子的阴性样品溶液；(3)藏菖蒲的供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液取所述十五味乳鹏制剂，加甲醇，超声，滤过，滤液浓缩，作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材，同法制成藏菖蒲对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液；(4)乌头碱的供试品溶液、对照药品溶液取所述十五味乳鹏制剂，研细，加氨试液，搅勻，放置，加乙醚，振摇，放置，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇使溶解，作为乌头碱含量检测的供试品溶液；另取乌头碱对照品适量， 加无水乙醇制成溶液，作为乌头碱对照品溶液。
4.如权利要求1至3任一项所述的检测方法，包括以下步骤a)川木香的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂1 3重量份，研细，加丙酮10 30体积份，超声处理10 30分钟，滤过，滤液浓缩约1 3体积份，作为川木香的供试品溶液；另取川木香对照药材 0. 1 0. 8重量份，同法制成川木香对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含川木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含川木香的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VIB试验，吸取上述三种溶液各0. 003 0. 007体积份， 分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10 20 2 8 0.5 2的环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40min，展开，取出，晾干，喷以5% 香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上， 供试品色谱显相同颜色的斑点；b)决明子的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂1 3重量份，研细，加甲醇10 30体积份，加热回流20 45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2. 5mol/L硫酸溶液10 30体积份，超声处理3 8分钟， 再加三氯甲烷10 30体积份，加热回流20 45分钟，冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1 3次，每次5 15体积份，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠适量脱水，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 3体积份使溶解，作为决明子的供试品溶液；另取决明子对照药材0. 1 0. Sg,同法制成决明子对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含决明子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含决明子的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液0. 005 0. 02体积份、对照药材溶液0. 003 0. 007体积份和阴性样品溶液0. 005 0. 02体积份，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比10 20 2 8 0. 5 2，沸点为60°C 90°C 石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层液为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40min，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点；c)藏菖蒲的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂1 3重量份，加甲醇10 30体积份，超声10 30分钟，滤过，滤液浓缩至约1 3体积份，作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材0. 1 0.8 重量份，同法制成藏菖蒲对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液0. 005 0. 02体积份、对照药材溶液 0. 003 0. 007体积份和阴性样品溶液0. 005 0. 02体积份，分别点样于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为5 15 0.5 4，沸点为60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0 40min，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；薄层色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的暗斑点；d)乌头碱含量检查取所述十五味乳鹏制剂3 8重量份，研细，加氨试液0. 5 2体积份，搅勻，放置1 3小时，加乙醚10 20体积份，振摇0. 5 2小时，放置18 30小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 3体积份使溶解，作为乌头碱的供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，力口无水乙醇制成每体积份含0. 0005 0. 002重量份的溶液，作为乌头碱对照品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液0. 005 0. 03体积份， 乌头碱对照品溶液0. 0015 0. 015体积份，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为 2 8 1 3 0.5 2的环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和 0 40min，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；薄层供试品色谱中，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。
5.如权利要求4所述的检测方法，包括以下步骤i)川木香的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂2g，研细，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩约 anl，作为川木香的供试品溶液；另取川木香对照药材0. 5g，同法制成川木香对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含川木香的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含川木香的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验， 吸取上述三种溶液各5 μ 1，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15 5 1的环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20min，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点； )决明子的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂2g，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2. 5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理5分钟，再加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，冷却， 移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取2次，每次IOml，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠适量脱水，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为决明子的供试品溶液；另取决明子对照药材0. 5g，同法制成决明子对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含决明子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含决明子的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10 μ 1、对照药材溶液5μ1和阴性样品溶液10μ1，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比15 5 1， 沸点为60°C 90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层液为展开剂，薄层板置展开缸中饱和 20min，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的荧光斑点；iii)藏菖蒲的定性鉴别取所述十五味乳鹏制剂2g，加甲醇20ml，超声20分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为藏菖蒲的供试品溶液；另取藏菖蒲对照药材0. 5g，同法制成藏菖蒲对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含藏菖蒲的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含藏菖蒲的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液5 10 μ 1、对照药材溶液5 μ 1和阴性样品溶液5 10 μ 1，分别点样于同一硅胶GF254 薄层板上，以体积比为10 2，沸点为60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20min，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的暗斑点；iv)乌头碱含量检查取所述十五味乳鹏制剂5g，研细，加氨试液1ml，搅勻，放置2小时，加乙醚15ml，振摇 1小时，放置M小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为乌头碱的供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为乌头碱对照品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液20 μ 1、 10 μ 1，乌头碱对照品溶液10 μ 1、5 μ 1、2. 5 μ 1，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5 2 1的环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20min，展开， 取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；薄层色谱中，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。
6.如权利要求1至5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述十五味乳鹏制剂的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或散剂。
7.如权利要求1至6任一项所述的检测方法，其特征在于，取所述重量份的原料药，粉碎成细粉，过筛，混勻，加适量水制丸，阴干即得；或取所述重量份的原料药，粉碎成细粉，过筛，混勻，混勻，按药剂学常规方法，加入常规辅料，制成临床上接受的口服制剂。
全文摘要
本发明涉及十五味乳鹏制剂的检测方法，包括下述检测方法的一种或几种通过薄层层析检测制剂中川木香、决明子、藏菖蒲，以及检测制剂中乌头碱含量。
文档编号G01N30/90GK102520113SQ20111042729
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月16日 优先权日2011年12月16日
发明者张国霞, 李波, 陈丽娟 申请人:西藏奇正藏药股份有限公司