专利名称：一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料，具体涉及柱色谱法来测试或分析材料。
背景技术：
动物药饮片或矿物药饮片是经过加工炮制后的可直接用于中医临床的中药，动物药或矿物药配方颗粒是将单味动物药或矿物药根据一定制备工艺制备的制剂。很多动物药饮片或矿物药饮片中存在钙和磷，如，醋龟甲、鹿角霜、钟乳石。现代研究表明，钙和磷是构成骨骼、牙齿的重要成分，维护神经与肌肉正常活动，促进身体内各种酶的活动。它既是身体的构造者，又是身体的调节者，对人体生命活动有十分重要的作用。如果机体缺乏这些元素，将会引起一系列疾病，例儿童佝偻病、成年人软骨病、中老年人骨质疏松等。由于动物药或矿物药的质量受来源、产地等的影响较大，因此，应选择合适的方法，以控制其质量，对建立饮片及其制剂的质量控制方法有重要意义。
在动物药及矿物药中，钙和磷的主要存在形式为碳酸钙、氧化钙或磷酸钙等。在现有技术中，对于钙的测定多采用EDTA-钙黄绿素法和原子发射光谱法；磷的测定多采用磷钼蓝光度法和等离子发射光谱法。但是，EDTA-钙黄绿素法，磷钼蓝光度法步骤繁琐，且准确性不高，原子发射光谱法前处理步骤多，排除干扰困难。现有的技术多采用分别测定钙和磷的含量，控制动物药饮片和矿物药饮片的质量，工作周期较长。发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种使用同一色谱条件同时定量检测动物或矿物中药中钙和磷含量的高效液相色谱-蒸发光散射法。
本发明解决上述技术问题的技术方案是
一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，该方法包括以下步骤
(1)配制待检动物或矿物中药的进样液取动物或矿物中药的灰粉，加入浓度为 lmol/L盐酸溶液溶解配制成含药物0. 200 0. 300mg/ml待检进样液；
配制标准品进样液将无水氯化钙(CaCl2)与磷酸(H3PO4)混合后用浓度为 0. 01mol/L盐酸溶液稀释，得到氯化钙浓度为0. 100 0. 300mg/ml和磷酸浓度为0. 027 0. 081mg/ml的一系列标准品进样液；
将待检动物或矿物中药进样液和每一标准品进样液分别按以下方法进行高效液相色谱检测
按进样量为10μ 1，对规格为250mmX4. 6mm i. d.，5 μ m的液相色谱柱Prevail C18进样，控制柱温度为15 40°C，接着用由体积配比为A相95 100%和B相0 5% 组成的流动相以0. 3 0. 8ml/min的流速进行洗脱，同时采用蒸发光散射检测洗脱液，控制蒸发光散射检器的漂移管温度为110°C 120°C，氮气流速为2. 0 3. 5L/min，获得待检动物或矿物中药的高效液相色谱图和一系列标准品的高效液相色谱(2)将待检动物或矿物中药进样液的高效相液相图谱与所得每一标准品进样液的高效相液图谱比较，与标准品进样液的高效相液图谱中保留时间相同的相应成分的特征峰即是与该成分相同物质的特征峰；根据峰面积以随行标准曲线计算动物或矿物中药中钙和磷的含量；
上述步骤中，所述的流动相的A相是浓度为0.7%的三氟乙酸溶液、浓度为的三氯乙酸溶液或浓度为2%的甲酸溶液；所述的流动相的B相是甲醇或乙腈。
本发明所述的测定方法，其中所述的动物或矿物中药是各种动物或矿物药材加工炮制后的饮片，如，醋鳖甲、醋龟甲、鹿角霜、生龙骨、牡蛎、石决明、煅瓦楞子、珍珠母、海蛤壳、紫贝齿等，或者是所述饮片制成的配方颗粒。
本发明所述的测定方法，其中所述的动物或矿物中药的灰粉采用以下方法制备 先精密称取样品粉末，置800°C马弗炉中灰化他，取灰分即得。本发明所述的测定方法，其中所述的配制待检动物或矿物中药进样液的步骤还包括加入所述的盐酸溶液稀释后的过滤步骤。
本发明所述的测定方法，其中，所述的流动相的体积配比最好是A相98%，B相 2% ；所述的流动相A相的pH值为1 2，最好是pH值为1 ；所述的流动相B相最好是乙腈； 所述的流动相的流速最好是0. 5ml/min。
本发明所述的测定方法，其中，所述的液相色谱柱的温度最好控制为25°C，所述的蒸发光散射检测器的漂移管温度最好是115°C，所述的氮气流量最好是2. 5L/min。
本发明所述的测定方法，其中所述的根据应峰面积以随行标准曲线计算动物或矿物中药中钙和磷含量的方法是本领域普通技术人员所熟知的方法，具体计算过程如下
(1)分别计算标准品进样液的高效液相色谱图中氯化钙和磷酸的峰面积，然后分别取自然对数并进行线性回归得到y = ax+b的线性方程，其中，y为进样浓度的自然对数， X为峰面积的自然对数，a和b为常数；
(2)分别计算待检动物或矿物中药进样液的高相液相图谱中与标准品进样液的高效液相色谱图中相应成分的保留时间相同的特征峰的峰面积并分别取自然对数，然后分别代入步骤(1)所得到的方程y = ax+b中，分别算出待检动物或矿物中药进样液中氯化钙和磷酸的浓度；
(3)根据无水氯化钙和磷酸的化学分子式，利用下述公式(I )分别算出钙与磷的含量
权利要求
1.一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，该方法包括以下步骤组成(1)配制待检动物或矿物中药进样液取动物或矿物中药的灰粉，加入浓度为lmol/L 盐酸溶液溶解配制成含药物0. 200 0. 300mg/ml待检动物或矿物中药进样液；配制标准品进样液将无水氯化钙与磷酸混合后用浓度为0. 01mol/L盐酸溶液稀释， 得到氯化钙浓度为0. 100 0. 300mg/ml和磷酸浓度为0. 027 0. 081mg/ml的一系列标准品进样液；将待检动物或矿物中药进样液和每一标准品进样液分别按以下方法进行高效液相色谱检测按进样量为10 μ 1，对规格为250mmX 4. 6mm i. d.，5 μ m的液相色谱柱I^revail C18进样，控制柱温度为15 40°C，接着用由体积配比为A相95 100%和B相0 5%组成的流动相以0. 3 0. 8ml/min的流速进行洗脱，同时采用蒸发光散射检测洗脱液，控制蒸发光散射检器的漂移管温度为110°C 120°C，氮气流速为2. 0 3. 5L/min，获得待检动物或矿物中药的高效液相色谱图和一系列标准品的高效液相色谱图；(2)将待检动物或矿物中药进样液的高效相液相图谱与所得每一标准品进样液的高效相液图谱比较，与标准品进样液的高效相液图谱中保留时间相同的相应成分的特征峰即是与该成分相同物质的特征峰；根据峰面积以随行标准曲线计算动物或矿物中药中钙和磷的含量；上述步骤中，所述的流动相的A相是浓度为0.7%的三氟乙酸溶液、浓度为的三氯乙酸溶液或浓度为2%的甲酸溶液；所述的流动相的B相是甲醇或乙腈。
2.根据权利要求1所述的一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，其特征在于，所述的配制待检样品进样液的步骤还包括加入所述的盐酸溶液稀释后的过滤步骤。
3.根据权利要求1或2所述的一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，其特征在于，所述的动物或矿物中药的灰粉由以下方法制得先精密称取样品的粉末，置800°C马弗炉中灰化他，取灰分即得。
4.根据权利要求3所述的一种动物或矿物中药中钙和磷含量的测定方法，其特征在于所述的动物或矿物中药为配方颗粒。
全文摘要
本发明涉及借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料，具体涉及一种测定动物或矿物中药中钙和磷含量的分析方法，该方法包括以下步骤组成取动物或矿物中药的灰粉，加入浓度为1mol/L盐酸溶液溶解配制成含药物0.200～0.300mg/ml待检进样液；将无水氯化钙与磷酸混合后用浓度为0.01mol/L盐酸溶液稀释，得到氯化钙浓度为0.100～0.300mg/ml和磷酸浓度为0.027～0.081mg/ml的一系列标准品进样液；然后将待检进样液和每一标准品进样液分别进行高效液相色谱检测，获得待检动物或矿物中药高效液相色谱图和一系列标准品的高效液相色谱图；再将待检动物或矿物中药进样液的高效相液相图谱与所得每一标准品进样液的高效相液图谱比较确定特征峰；最后根据峰面积以随行标准曲线计算动物或矿物中药中钙和磷的含量。
文档编号G01N30/88GK102539601SQ20111044268
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月24日 优先权日2011年12月24日
发明者刘晖晖, 张辉, 王新雨, 谭晓梅, 谭沛, 陈飞龙 申请人:华润三九医药股份有限公司, 南方医科大学