专利名称：一种检测阿维菌素残留的硒标试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及的是检测试纸，具体的是一种检测阿维菌素残留的硒标试纸。
背景技术：
阿维菌素(Avermectin，以下简称AVM)是一类具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的十六元大环内酯化合物，1976年由日本科学家大村智和美国Merck公司首次制备。AVM属于昆虫神经毒剂，主要干扰害虫神经生理活动，刺激释放C2氨基丁酸，抑制神经传导，使害虫麻痹中毒而死，具触杀和胃毒作用，无内吸性，是目前应用最广泛的抗寄生虫药物，被广泛的应用于农作物疾病防治和畜禽的健康养殖。AVM虽然属于微生物源农药，但其具有极强的脂溶性，不论以何种途径给药均能很好地被吸收，可广泛分布于全身组织，体内持续时间长，因而消除缓慢。按世界卫生组织的分类标准，AVM属于高毒农药，其中，大鼠致死中量为10mg/kg，在农产品及食品中残留将直接影响人们身体健康，甚至可能引起食物中毒。因此，美国、欧盟、食品法典委员会(CAC)和中国等均制定了 AVM的最高残留限量。联合国CAC和许多国家对该类化合物的残留限量为 IOy g/kg。我国农业部规定在所用牛肌肉和奶中最高残留量是10μ g/kg，脂肪中的最高残留量40 μ g/kg，肝中的最高残留量为100 μ g/kg ；所用食品猪和羊的肌肉、脂肪最高残留限量为20 μ g/kg，肝的最高残留限量为15μ g/kg，并将检测农兽药中AVM类药物的残留量列为残留监控重点。目前，AVM残留检测的方法主要有薄层色谱法(TLC)，气相色谱法(GC)，高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)，高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)，气-质联用法 (HPLC-MS )，液-质联用法(LC-MS )，毛细管电泳法(CE )，酶联免疫法(ELISA)等。这些方法存在着仪器设备复杂，操作步骤多，过程繁琐，检测时间长、运行费用高，需要在实验室进行， 并且要求专门的技术人员等问题。因此，需要发明一种灵敏度高，并且使用方便，无需专业人员操作的检测阿维菌素残留的装置。
发明内容本实用新型的发明目的是针对上述问题提供一种检测阿维菌素残留的硒标试纸， 解决目前检测阿维菌素的方法过于复杂，操作步骤太多，并且要求有专业的人员操作等问题。本实用新型通过以下技术方案来实现一种检测阿维菌素残留的硒标试纸，该试纸包括塑料底板、微孔滤膜、醋酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和滤纸，塑料底板上依次贴有微孔滤膜、醋酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和滤纸；所述的醋酸纤维素膜上有AVM单克隆抗体I，玻璃纤维素膜上有胶体硒颗粒标记的AVM单克隆抗体I，硝酸纤维素膜上有AVM单克隆抗体II条带。上述的硝酸纤维素膜上还有羊抗鼠IgG条带，AVM单克隆抗体II条带和羊抗鼠IgG 条带平行设置，且AVM单克隆抗体II条带位于胶体硒颗粒标记的AVM单克隆抗体I和羊抗鼠IgG条带之间。采用上述技术方案的积极效果本实用新型利用抗原抗体反应和免疫层析技术的原理，将AVM单克隆抗体制备到试纸上，通过AVM单克隆抗体会与AVM结合的特性，利用一定量的AVM单克隆抗体除去一部分AVM，多余的AVM通过胶体硒颗粒显色，检测出AVM的含量；同时，增加了羊抗鼠IgG条带，可以灵敏地检测出本实用新型是否失效，方便使用。
图1是本实用新型的俯视图；图2是本实用新型的装配示意图。图中1塑料底板、2微孔滤膜、3醋酸纤维素膜、4玻璃纤维素膜、5硝酸纤维素膜、 6滤纸、7 AVM单克隆抗体II条带、8羊抗鼠IgG条带。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型作进一步说明图1是本实用新型的俯视图，图2是本实用新型的装配示意图，结合图1、图2所示，一种检测阿维菌素残留的硒标试纸，该试纸包括塑料底板1、微孔滤膜2、醋酸纤维素膜 3、玻璃纤维素膜4、硝酸纤维素膜5和滤纸6，塑料底板1上依次贴有微孔滤膜2、醋酸纤维素膜3、玻璃纤维素膜4、硝酸纤维素膜5和滤纸6。微孔滤膜2是用于加样的，滤纸6主要用于吸取多余液体。醋酸纤维素膜3上有AVM单克隆抗体I，利用抗原抗体反应，如果待测溶液中含有AVM的话，AVM会和AVM单克隆抗体I相结合。玻璃纤维素膜4上有胶体硒颗粒标记的AVM单克隆抗体I，在AVM和AVM单克隆抗体I相结合以后，多余的AVM则会和胶体硒颗粒标记的AVM单克隆抗体I结合。硝酸纤维素膜5上有AVM单克隆抗体II条带7，由于AVM单克隆抗体II被喷涂成条带状，这样AVM和胶体硒颗粒标记的AVM单克隆抗体I结合后形成的复合物会继续和AVM单克隆抗体II结合，从而在AVM单克隆抗体II条带7处发生沉积，产生显色，从而证明待测溶液中有过量的AVM。为了能够随时检测出试纸是否失效，在AVM单克隆抗体II条带7不显色的情况下判断出是因为待测溶液中不含有过量的AVM，还是由于试纸失效导致胶体金颗粒标记的 AVM单克隆抗体I消失，在硝酸纤维素膜5上还设置有羊抗鼠IgG条带8，AVM单克隆抗体II 条带7和羊抗鼠IgG条带8平行设置，且AVM单克隆抗体II条带7位于胶体硒颗粒标记的 AVM单克隆抗体I和羊抗鼠IgG条带8之间。因为AVM单克隆抗体I和AVM单克隆抗体II 均来源于小鼠，因此羊抗鼠IgG是可以和AVM单克隆抗体I和AVM单克隆抗体II相互结合的，由于AVM单克隆抗体I还标记有胶体硒颗粒，当标记有胶体硒颗粒的AVM单克隆抗体I 和羊抗鼠IgG相结合时，会在羊抗鼠IgG条带8处发生沉积，从而显色。在正常情况上，试纸上有一定量的标记有胶体硒颗粒的AVM单克隆抗体I，不管待测液体中是否含有AVM，或者AVM的含量是否超量，标记有胶体硒颗粒的AVM单克隆抗体I都会和羊抗鼠IgG相结合， 从而使羊抗鼠IgG条带8处显色；如果试纸已经失效了，即没有标记有胶体硒颗粒的AVM单克隆抗体I时，羊抗鼠IgG条带8也就不会发生显色反应了，此时，提醒实验人员需要重新更换试纸进行检测。当该试纸条用来检测样品时，把预处理过的样品滴于该试纸条的微孔滤膜2处， 样品由于毛细作用进行侧向层析，经过醋酸纤维素膜3，醋酸纤维素膜3上的AVM单克隆抗体I的含量预先设定，假设浓度为1. 0 μ g/L，若样品中AVM含量超过1. 0 μ g/L，则AVM就会首先跟结合在醋酸纤维素膜3上的AVM单克隆抗体I结合，而超量的AVM则与玻璃纤维素膜4上的胶体硒标记的单克隆抗体I结合，形成Ag-Ab I -胶体硒复合物，继续渗移，然后与硝酸纤维素膜5上的AVM单克隆抗体II结合，形成Ab II -Ag-Ab I -胶体硒复合物，从而在AVM单克隆抗体II条带7处发生沉积，呈肉眼可见的条带。然后继续渗移，由于AVM单克隆抗体I和AVM单克隆抗体II均来源于小鼠，当遇到羊抗鼠IgG条带8时，会和羊抗鼠IgG 发生结合，胶体硒标记的AVM单克隆抗体I在羊抗鼠IgG条带8处呈现肉眼可见的条带。若样品中AVM含量低于或等于1. 0 μ g/L，则AVM会被醋酸纤维素膜3上的AVM单克隆抗体I完全中和，使AVM丧失与胶体硒标记的AVM单克隆抗体I及硝酸纤维素膜5上固定的AVM单克隆抗体II进一步结合的能力，AVM单克隆抗体II条带7不会显色。无论样品中是否有AVM，胶体硒标记的AVM单克隆抗体I均会在毛细作用下同羊抗鼠IgG结合，使羊抗鼠IgG条带8显色。检测中，如果AVM单克隆抗体II条带7和羊抗鼠IgG条带8均显色，证明待测溶液中含有超过预定量的AVM ；如果AVM单克隆抗体II条带7不显色，羊抗鼠IgG条带7显色， 证明待测溶液中不含有AVM或者是AVM的含量小于预定量；如果AVM单克隆抗体II条带7 和羊抗鼠IgG条带8均不显色，证明试纸条已经失效，需要重新更换试纸进行检测。
权利要求1.一种检测阿维菌素残留的硒标试纸，其特征在于该试纸包括塑料底板(1)、微孔滤膜(2)、醋酸纤维素膜(3)、玻璃纤维素膜(4)、硝酸纤维素膜(5)和滤纸(6)，塑料底板(1) 上依次贴有微孔滤膜(2)、醋酸纤维素膜(3)、玻璃纤维素膜(4)、硝酸纤维素膜(5)和滤纸 (6)；所述的醋酸纤维素膜(3)上有AVM单克隆抗体I，玻璃纤维素膜(4)上有胶体硒颗粒标记的AVM单克隆抗体I，硝酸纤维素膜(5)上有AVM单克隆抗体II条带(7)。
2.根据权利要求1所述的一种检测阿维菌素残留的硒标试纸，其特征在于所述的硝酸纤维素膜(5)上还有羊抗鼠IgG条带(8)，AVM单克隆抗体II条带(7)和羊抗鼠IgG条带 (8)平行设置，且AVM单克隆抗体II条带(7)位于胶体硒颗粒标记的AVM单克隆抗体I和羊抗鼠IgG条带(8)之间。
专利摘要本实用新型涉及的是一种检测阿维菌素残留的硒标试纸，包括塑料底板(1)、微孔滤膜(2)、醋酸纤维素膜(3)、玻璃纤维素膜(4)、硝酸纤维素膜(5)和滤纸(6)，塑料底板(1)上依次贴有微孔滤膜(2)、醋酸纤维素膜(3)、玻璃纤维素膜(4)、硝酸纤维素膜(5)和滤纸(6)；所述的醋酸纤维素膜(3)上有AVM单克隆抗体Ⅰ，玻璃纤维素膜(4)上有胶体硒颗粒标记的AVM单克隆抗体Ⅰ，硝酸纤维素膜(5)上有AVM单克隆抗体Ⅱ条带(7)。本实用新型利用抗原抗体反应和免疫层析技术的原理，通过AVM单克隆抗体会与AVM结合的特性，利用一定量的AVM单克隆抗体除去一部分AVM，多余的AVM通过胶体硒颗粒显色，检测出AVM的含量。
文档编号G01N33/577GK202330436SQ20112043715
公开日2012年7月11日 申请日期2011年11月8日 优先权日2011年11月8日
发明者张爽, 晏磊 申请人:黑龙江八一农垦大学