分离/检测柱及其试剂盒的制作方法

专利名称：分离/检测柱及其试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有两个固定相的分离/检测柱及其试剂盒，所述两个固定相的 对紫外线或着色剂的光学响应性和分离样品中的组分的能力二者均不同。
背景技术：
作为快速精炼少量样品的装置，市售可得分离/检测(分离-检测)柱(快速管)， 其为填充有浸溃了荧光指示剂的硅胶的聚乙烯管柱。通过使样品与柱的末端连接并且在柱 中填充洗脱液，该分离/检测柱可容易分离样品中的少量化合物。在该分离/检测柱中，通 过照射紫外线可检查分离状态，并且通过切断管可容易提取已分离的化合物。此外，与制备 TLC或其它棒状柱的情况不同，该分离/检测柱不使用固定剂等助剂，因此可防止助剂对样 品的影响。
一种已知的分离剂为含有多糖衍生物(例如多糖苯基氨基甲酸酯衍生物)的分离 剂，其可用于分离光学异构体，但是含有多糖衍生物的一些分离剂具有紫外响应性。在上述 分离/检测柱的情况下，当通过照射紫外线检查化合物的分离时，不能使用具有紫外响应 性的分离剂，因此，就使用具有紫外响应性的分离剂的分离/检测而言，上述分离/检测柱 仍必须被考虑。
发明概述 本发明要解决的问题本发明的一个目的是提供一种可检测通过分离剂分离的样品中的组分的分离/检测 柱，所述分离剂具有与所述组分相同的光学响应性。
解决问题的方式本发明人发现，在柱管中，将不具有分离样品的分离能力但是具有紫外响应性的分离 剂层与具有不同的紫外响应性和分离样品的分离能力的分离剂层的下游侧连接，从而使通 过后一种分离剂分离的组分很好地被检测，因此本发明人完成本发明。
换言之，本发明提供一种分离/检测柱，所述柱具有柱状或管状的具有液体渗透 性的第一和第二固定相，其中第一和第二固定相的末端连接使得液体可渗透；和在第一和 第二固定相的轴向渗透的流动相，其中第一固定相具有分离样品中的组分的分离能力和对 紫外线或着色剂的光学响应性，所述光学响应性与该组分的光学响应性相同，和第二固定 相具有不同于所述组分的光学响应性。
本发明还提供分离/检测柱，其中第二固定相不具有分离能力。
本发明还提供分离/检测柱，其中第一和第二固定相分别由在柱管中的粒状填料 形成的填充层、具有液体渗透性的柱状体或具有液体渗透性的分离剂层形成，所述分离剂 层在不具有液体渗透性的柱状或管状支持体的周面上形成。
本发明还提供分离/检测柱，其中柱状体的形状为圆柱形，并且支持体的形状为 圆柱形或圆管状。
本发明还提供分离/检测柱，其中第一固定相含有用于光学异构体的分离剂，而第二固定相不含用于光学异构体的分离剂。
本发明还提供一种分离/检测试剂盒，所述试剂盒包含柱管，所述柱管具有光透 性；第一粒状填料，所述第一粒状填料具有分离样品中的组分的分离能力和对紫外线或着 色剂的光学响应性，所述光学响应性与该组分的光学响应性相同；和第二粒状填料，所述第 二粒状填料具有不同于所述组分的光学响应性。
本发明还提供一种分离/检测试剂盒，所述试剂盒包含柱管；第一粒状填料，所 述第一粒状填料具有分离样品中的组分的分离能力和对紫外线或着色剂的光学响应性，所 述光学响应性与该组分的光学响应性相同；和第二圆柱体和第二薄层层析棒中的一个或二 者，其可与柱管连接，使得液体自由渗透，其中第二圆柱体具有不同于所述组分的光学响应 性和液体渗透性，和第二薄层层析棒具有不具有液体渗透性的圆柱形或圆管状支持体和第 二分离剂层，所述第二分离剂层在支持体的周面上形成并且具有不同于所述组分的光学响 应性和液体渗透性。
本发明还提供一种分离/检测试剂盒，所述试剂盒包含第一圆柱体和第一薄层 层析棒中的一个或二者，所述第一圆柱体具有液体渗透性、分离样品中的组分的分离能力 和对紫外线或着色剂的光学响应性，所述光学响应性与该组分的光学响应性相同，所述第 一薄层层析棒具有不具有液体渗透性的圆柱形支持体和在支持体的周面上形成的第一分 离剂层；柱管，所述柱管具有光透性并且与第一圆柱体或第一薄层层析棒连接，使得液体自 由渗透；和第二粒状填料，所述第二粒状填料具有不同于所述组分的光学响应性，其中第一 分离剂层具有分离能力、与所述组分相同的光学响应性和液体渗透性。
本发明还提供一种分离/检测试剂盒，所述试剂盒包含第一柱状体和第一薄层 层析棒中的一个或二者，所述第一柱状体具有液体渗透性、分离样品中的组分的分离能力 和对紫外线或着色剂的光学响应性，所述光学响应性与该组分的光学响应性相同，所述第 一薄层层析棒具有不具有液体渗透性的柱状或管状支持体和在支持体的周面上形成的第 一分离剂层；第二柱状体和第二薄层层析棒中的一个或二者，所述第二柱状体具有不同于 所述组分的光学响应性和液体渗透性，所述第二薄层层析棒具有不具有液体渗透性的柱状 或管状支持体和在支持体的周面上形成的第二分离剂层；和连接件，所述连接件连接第一 柱状体或第一薄层层析棒和第二柱状体或第二薄层层析棒，使得液体自由渗透，其中第一 分离剂层具有分离能力、与所述组分相同的光学响应性和液体渗透性，和第二分离剂层具 有不同于所述组分的光学响应性和液体渗透性。
本发明还提供分离/检测试剂盒，其中第二填料、第二圆柱体、第二分离剂层或第 二柱状体不具有分离能力。
本发明还提供分离/检测试剂盒，其中第二柱状体的形状为圆柱形，并且支持体 的形状为圆柱形或圆管状。
本发明还提供分离/检测试剂盒，其中第一填料、圆柱体、柱状体或分离剂层含有 用于光学异构体的分离剂，而第二填料、圆柱体、柱状体或分离剂不含用于光学异构体的分 离剂。
本发明还提供分离/检测柱或分离/检测试剂盒，其中所述用于光学异构体的分 离剂为多糖衍生物。
本发明还提供分离/检测柱或分离/检测试剂盒，其中所述多糖衍生物由多糖与芳族酯基、芳族氨基甲酰基和芳族醚基中的任一种构成，所述基团与多糖的羟基或氨基部 分或完全置换。
本发明的有益效果由于形成第一和第二固定相，本发明可提供一种可检测通过分离剂分离的样品中的组 分的分离/检测柱，所述分离剂具有与所述组分相同的光学响应性。
附图简述

图1为描述本发明的连接件的第一实施例的图；图2为描述本发明的连接件的第二实施例的图；图3为描述本发明的连接件的第三实施例的图；图4为描述用于本发明的一个实施方案的分离/检测柱的图；和 图5为描述使用图4中的分离/检测柱通过光学分离t-SO检测提余液组分的状态的图。发明内容
本发明的分离/检测柱具有第一和第二固定相，第一和第二固定相具有液体渗透 性和柱状或管状形状。本文的液体渗透性是指使液体从固定相的一端渗透到另一端的特 性，同时在相对于固定相的轴向的截面方向上润湿固定相的整个区域(当固定相垂直于轴 取剖面时，固定相的截面的整个区域)。
第一固定相具有对紫外线或着色剂的光学响应性和分离样品中的组分的分离能 力。此处“对紫外线的光学响应性””是指光发射(例如紫外线引起的荧光)或紫外线的吸 收。“对着色剂的光学响应性”是指通过着色剂产生的着色。“分离样品中的组分的分离能 力”是指对于样品中的组分之中的至少两种组分呈现不同的吸附。
第一固定相的光学响应性与样品中的组分的光学响应性相同。“相同的光学响应 性”此处是指一种光学响应性与另一种光学响应性通过颜色或亮度在光学上不能区别。
第二固定相具有不同于所述组分的光学响应性(即，第一固定相的光学响应性) 的光学响应性。“不同的光学响应性”是指对紫外线的照射或着色剂的着色处理的一种光 学响应与另一种光学响应足够不同，通过颜色或亮度在光学上可区别。“对紫外线的光学 响应性的差别”是指，例如照射紫外线时发射不同颜色的光、紫外线引起发射光与吸收紫外 线、紫外线引起发射光与对紫外线没有响应，或吸收紫外线与对紫外线没有响应。“对着色 剂的光学响应性的差别”是指，例如着色剂显现颜色与着色剂不着色，和着色剂显现不同的 颜色。
第一和第二固定相分别可由在柱管中的粒状填料形成的填充层(下文中称为“填 充型固定相”)，具有液体渗透性的柱状体(下文中称为“一体型固定相”)，或在不具有液体 渗透性的柱状或管状支持体的周面上形成的具有液体渗透性的分离剂层(下文中称为“薄 层型固定相”)构成。
填充型固定相可通过在柱管中填充填料来构成。作为第一固定相的填充型固定相 可通过将第一填料填充到柱管中构成，第一填料含有具有与样品中的组分相同的光学响应 性和分离能力的分离剂。
对于第一填料，可使用由具有光学响应性和分离能力的分离剂形成的颗粒，由具有光学响应性的粒状载体和被载体负载并且具有分离能力的分离剂构成的颗粒，或由不具有光学响应性的粒状载体和被这些载体负载并且具有光学响应性和分离能力的分离剂构成的颗粒。
分离剂至少具有分离能力。如果载体不具有光学响应性，则除了分离能力以外，分离剂还具有光学响应性。不具有光学响应性的分离剂，例如不具有紫外响应性的分离剂的实例为不含芳族基团的分离剂。具有紫外响应性的分离剂的实例为含有芳族基团的分离剂。分离剂根据在样品中待分离的组分适当地确定。例如，在分离光学异构体的情况下，用于光学异构体的分离剂用作分离剂。
对于分离剂，可使用具有光学响应性的低分子分离剂和高分子分离剂二者。低分子分离剂的实例为配体交换类型分离剂、电荷转移(η-η)类型分离剂、氢键类型分离剂、包含类型分离剂、离子键类型分离剂、插入类型分离剂、冠醚或它们的衍生物、以及环糊精或它们的衍生物。高分子分离剂的实例为多糖衍生物、聚酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、蛋白质和酒石酸衍生物。
已知各种分离剂作为用于光学异构体的分离剂，但是当考虑通用性时，由于多糖衍生物的分离性能，优选多糖衍生物。该多糖衍生物可为由多糖与芳族酯基、芳族氨基甲酰基和芳族醚基中的一个构成的化合物，所述基团与多糖的羟基或氨基部分或完全置换，并且该化合物的实例为纤维素苯基氨基甲酸酯衍生物、纤维素苯基酯衍生物、直链淀粉苯基氨基甲酸酯衍生物和直链淀粉苯基酯衍生物。这些衍生物的苯基可具有一个或多个选自碳数量为1-20的烃和卤素的取代基。多糖芳族酯衍生物的一个具体实例为纤维素三(4-甲基苯甲酸酯)。多糖芳族氨基甲酰基衍生物的一个具体实例为直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。多糖芳族醚衍生物的一个具体实例为纤维素三苄基醚。
对于载体，使用不具有分离能力的物质。在第一填料的情况下，如果分离剂不具有与样品中的组分相同的光学响应性，则载体具有该光学响应性。不具有光学响应性的载体， 例如不具有紫外响应性的载体的实例为不含芳族基团的载体，而具有光学响应性的载体， 例如具有紫外响应性的载体的实例为含有芳族基团的载体。
就改进分离性能而言，对于载体，优选使用多孔材料。载体的表面可在不具有分离能力的范围内进行修饰。载体的实例为交联聚苯乙烯、 交联丙烯酸类聚合物、包括环氧聚合物在内的合成聚合物、纤维素和交联纤维素(为通过交联加强的纤维素)、包括交联琼脂糖、交联葡聚糖和交联甘露聚糖在内的多糖，以及无机物质例如氧化铝、硅胶、中孔硅胶、沸石、硅藻土、熔融二氧化硅、粘土材料、氧化锆和金属。
作为第一固定相的一体型固定相可通过具有与所述组分相同的光学响应性、液体渗透性和分离能力的第一柱状体形成。该第一柱状体由至少在表面上具有分离剂的柱状多孔材料构成。这样的多孔材料可为通过使在柱中填充的第一填料的颗粒粘结、分离剂形成的柱状多孔材料或者载体形成的柱状多孔材料及其负载的分离剂形成的多孔材料。
在通过使第一填料的颗粒粘结形成的多孔材料的情况下，基于在日本专利申请公布号H4-93336中公开的方法，将可溶于第一填料不能溶解于其中的溶剂的塑料颗粒与第一填料混合，通过加热和加压处理将得到的混合物模塑，并通过溶剂处理将可溶的塑料从得到的模塑体中除去。通过分离剂产生的柱状多孔材料也可使用上述方法形成。
载体形成的柱状多孔材料可通过使载体颗粒粘结或通过使用载体使柱状体多孔化而形成。如果载体颗粒为聚合物或有机化合物(例如多糖)，则多孔材料可通过使用上述 方法使载体颗粒粘结而形成。使用在日本专利公布号3397255和日本专利公布号3317749 中公开的方法，即溶胶-凝胶方法，可通过用载体使柱状体多孔化而形成多孔材料。
使用已知的方法，例如载体物理吸收分离剂或使分离剂与载体化学结合，将分离 剂负载于载体形成的柱状多孔材料上，以修饰或改进多孔材料的孔的表面。
当检测分离时，就在固定相的整个截面中液体渗透的速度均一化而言，优选柱状 体为圆柱体。
作为第一固定相的薄层型固定相可通过具有液体渗透性的分离剂层形成，该分离 剂层在不具有液体渗透性的柱状或管状支持体的周面上形成。支持体的非液体渗透性此处 是指在相对于支持体的轴向的支持体的整个截面(当支持体垂直于轴取剖面时，支持体的 截面的整个区域)中支持体不渗透液体的特性。支持体的实例为由玻璃、金属、合成树脂或 通过连接合成树脂片材处理成排斥液体的纸制成的柱状体或管。就以均匀的厚度容易形成 分离剂，和容易与具有不同形式的固定相连接而言，优选支持体为圆柱形或圆管状。
分离剂层在支持体的周面上形成。根据支持体的形式，分离剂层可在支持体的外 周面或内周面上形成。分离剂层具有液体渗透性。该分离剂层可通过第一填料的层或至少 在表面上具有分离剂并且具有液体渗透性的片材形成。就当分离/检测时允许流动相以适 当的速度移动而言，优选分离剂层的厚度为O. 005-5 _，如果该厚度为0.01-3 mm则更好， 而如果该厚度为O. 1-1 _则甚至更好。该薄层型固定相的形成视需要，例如可通过在支持 体的周面上涂布含有粘合剂等其它组分的分离剂浆料，或者围绕支持体的周面放置在表面 上具有分离剂的液体可渗透的片材。
作为第二固定相的填充型固定相可通过将具有不同于第一固定相的光学响应性 的第二填料填充到柱管中形成。上述分离剂中光学响应性不同于在第一固定相中的分离剂 的粒状分离剂或粒状载体可用于第二填料。作为第二固定相的一体型固定相可通过具有不 同于第一固定相的光学响应性和液体渗透性的第二柱状体形成。除了使用光学响应性不同 于第一固定相的分离剂的分离剂之外，第二柱状体可采用与第一柱状体相同的方式形成， 并且可由载体形成的柱状多孔材料构成。作为第二固定相的薄层型固定相可通过在支持体 的周面上形成具有不同于第一固定相的光学响应性的液体可渗透的层而形成。该层的形成 例如可通过，在支持体的周面上涂布光学响应性不同于第一固定相中的分离剂的粒状分离 剂，在支持体的周面上涂布载体的浆料，或围绕支持体的周面放置不具有分离剂的液体可 渗透的片材。
第二固定相可具有或可不具有分离能力。就允许在第二固定相中进一步分离组分 而言，优选第二固定相具有分离能力，因为例如可进行来自第一固定相的期望的组分的斑 点的进一步分析，在除去第二固定相之后的提取操作和其后的分析可能更容易。就精确检 测在第一固定相中的分离状态而言，优选第二固定相不具有分离能力，由于例如，在第一固 定相中分离的组分的检测和制备分离和在第一固定相中分离剂的Rf值的精确测量变得更 容易。
就检查在第二固定相中的斑点而言，优选第二固定相不具有光学响应性，并且进 一步优选第二固定相具有与样品中的组分或第一固定相的光学响应性显著不同的光学响 应性。例如，如果第一固定相含有用于光学异构体的分离剂，则优选第二固定相不含用于光学异构体的分离剂，而如果第一固定相的组分或固定相吸收紫外线，则优选第二固定相对紫外线不具有响应性，并且通过用紫外线照射而发射光。可形成以此方式调节了光学特性的第二固定相，例如，通过在不具有紫外响应性的固定相上涂布因受紫外线照射而发射荧光的突光剂。
如果仅包括第一固定相，则柱管可具有或可不具有光透性。光透性此处是指允许检查在第二固定相上的斑点的光学特性(例如着色、光发射、吸光度)的透明性。如果包括第二固定相，则柱管具有光透性。
就观察在分离操作期间的状态例如流动相的位置和状态以及斑点的状态而言，优选柱管具有允许检查至少这些状态的透明性。对于该柱管，可使用石英玻璃管和由氟树脂例如PFA (四氟乙烯-全氟烷基乙烯基醚共聚物)制成的管。柱管可具有在轴向起透镜作用的厚度，且就使得斑点的视觉观察更容易而言，优选放大斑点的该柱管。
柱管的长度应为适当表现填料的分离能力的长度，并且就观察组分的分离而言， 优选柱管长，但是就容易处理和容易检测/分离操作而言，优选柱管短。因此，优选用于第一或第二固定相的柱管的长度为2-50 cm，如果该长度为3-30 cm则更好，如果该长度为 3-20 cm则甚至更好。
就快速分离组分而言，优选柱管薄，而就容易检测组分及其制备性分离而言，优选柱管厚。因此，优选柱管的内径为O. 1-10 mm，如果该内径为O. 1-8 mm则更好，而如果内径为O. 1-5 mm则甚至更好。
就分离组分而言，优选填料的粒径小，而就快速分离组分而言，优选组分的粒径大。因此，优选填料的粒径为O. 5-50 μ m，如果粒径为1-30 μ m则更好，而如果粒径为1_20 μ m则甚至更好。填料的粒径可简单地为代表填料的颗粒大小的值，并且可为平均粒径或者可为目录值(catalog value)。填料的粒径可例如通过激光衍射方法和散射方法确定。
第一固定相和第二固定相的末端彼此连接，使得液体自由渗透。“液体自由渗透” 是指在轴向在固定相的整个截面(与固定相的轴垂直相交的固定相截面)中液体从第一固定相渗透到第二固定相。第一和第二固定相可直接连接，或者可经由用于连接两个固定相的连接件连接，使得液体自由渗透，或者可经由具有液体渗透性的间隔物连接。第一和第二固定相各自可为上述填充型固定相或一体型固定相或薄层型固定相。
如果第一和第二固定相为填充型固定相，则该分离/检测柱可由以下形成具有光透性的柱管，含有分离剂并被填充到柱管一端中的填料，和不含分离剂并被填充到柱管另一端中的填料或粒状载体。优选在柱管的中心设置间隔物。该间隔物的实例为比填料更粗糙的颗粒，例如脱脂棉、纤维块(例如，玻璃棉)、滤纸、玻璃过滤器和海沙。
如果第一和第二固定相中的一个为填充型固定相而另一个为一体型固定相，则该分离/检测柱可通过将形成填充型固定相的柱管与一体型固定相直接或`经由间隔物或经由连接件连接而形成。为了使填充型固定相与一体型固定相直接连接，例如，将一体型固定相插入填充`型固定相的柱管的一端中。
连接件的实例为与第一固定相的末端和第二固定相的末端二者相互配合的连接件，或者围绕第一固定相的一端和第二固定相的一端的外周面放置的粘着剂材料。
连接管的实例为由不具有液体渗透性并且外插到第一固定相的末端和第二固定相的末端中的合成树脂圆形管11构成的连接件，如图1所示；由不具有液体渗透性并且外插到第一固定相的末端和第二固定相的末端中的圆形管12和设置在圆形管12的内周面的 中心部分的液体渗透材料13 (例如陶瓷纸或玻璃棉)构成的连接件，如图2所示；和由非 液体可渗透的圆柱体14和涂布圆柱体14的外周面的液体可渗透的材料15构成、以便内插 到柱管或圆管状支持体中的连接件，如图3所示。
图1中的连接件可适宜用于连接填充型固定相、连接一体型固定相或连接填充型 固定相与一体型固定相。图2中的连接件可适宜用于连接各自在支持体的外周面上具有分 离剂层的薄层型固定相，或者连接该薄层型固定相与另一种类型的固定相。图3中的连接 件可适宜用于连接各自在圆管状支持体的内周面上具有分离剂层的薄层型固定相，或连接 该薄层型固定相与填充型固定相。
图示的连接件均具有圆管状或圆柱形形状，但是也可具有不是圆形但是与一体型 固定相或填充型固定相的截面形状匹配的截面形状，或者可具有在一端截面形状为圆形而 在另一端截面形状不是圆形(例如多边形)的管状或柱状形式。
如果第一和第二固定相中的一个为填充型固定相而另一个为薄层型固定相，则该 分离/检测柱的形成可通过将形成填充型固定相的柱管和构成薄层型固定相的具有分离 剂层的支持体直接或经由间隔物或经由连接件连接，就和连接填充型固定相和一体型固定 相的情况一样。
如果第一和第二固定相均为一体型固定相，则分离/检测柱的形成可通过经由连 接件将构成第一和第二固定相的相应的一体型固定相连接。这些一体型固定相可插入柱管 中，并且在柱管中直接连接，或经由间隔物连接。
如果第一和第二固定相中的一个为一体型固定相而另一个为薄层型固定相，则分 离/检测柱的形成可通过将一体型固定相和构成薄层型固定相的具有分离剂层的支持体 直接或经由连接件连接。
如果第一和第二固定相均为薄层型固定相，则分离/检测柱的形成可通过在支 持体的周面的一端上形成含有分离剂的液体可渗透的第一分离剂层，和在与第一分离剂层 相邻的支持体的周面的另一端上形成由不含分离剂的填料或粒状载体构成的液体可渗透 的第二分离剂层。
如果第一和第二固定相均为填充型固定相或均为薄层型固定相，则该分离/检测 柱的形成也可通过使用第一柱管或第一支持体形成第一固定相，使用第二柱管或第二支 持体形成第二固定相，和分别将相应的柱管或支持体经由连接件连接。
如果第一和第二固定相均为薄层型固定相，则分离/检测柱的形成也可通过使 用用于第一和第二固定相的支持体中的一个的柱状支持体，和使用用于另一个支持体的外 插到柱状支持体中的管状支持体，并且如果在管状支持体的内周面上形成分离剂层，则将 这些支持体直接连接。
第一固定相的长度和第二固定相的长度可相同或不同，只要在各固定相中适当地 表现分离能力即可。如果第一固定相具有足以分离化合物的长度，并且第二固定相具有足 以检测组分的长度，则这是足够的。例如，优选第一固定相的长度为1-40 cm，如果长度为1.5-25 cm则更好,而如果长度为2-18 cm则甚至更好。优选第二固定相的长度为1_40 cm, 如果长度为1.5-25 cm则更好,而如果长度为2-18 cm则甚至更好。
在本发明的分离/检测柱中，在轴向将流动相进料至第一和第二固定相。本发明的分离/检测柱可用于分离样品中的组分，这是通过在第一固定相的一端连接样品，视需 要干燥连接的样品，将流动相从第一固定相的一端进料到第二固定相的另一端，以通过第 一固定相分离样品中的组分，和允许至少一种分离的组分到达第二固定相，或者在第二固 定相中进一步分离组分。通过照射紫外线到第二固定相上，或通过使用着色剂进行着色处 理，本发明的分离/检测柱也可用于检测到达第二固定相的组分。通过提取部分或全部含 有到达第二固定相的组分的第二固定相和视需要提取组分，本发明的分离/检测柱也可用 于制备性分离到达第二固定相的组分。
水、盐溶液、有机溶剂或其混合溶剂可用于流动相。可使用一种类型或两种或更多 种类型的有机溶剂。盐的实例为硫酸铜溶液或高氯酸盐。醇(例如甲醇、乙醇和异丙醇)或 烃(例如己烷)可用于有机溶剂。适量的酸和碱可混合用于流动相。就稳定待检测的组分 而言，乙酸、丙酸和四氟乙酸例如可用于酸，而二乙基胺、单乙醇胺和三乙胺例如可用于碱。
在使用着色剂通过光学响应性在第二固定相中检测组分的情况下，已知的技术可 用于着色剂及其着色处理。着色剂的实例为茴香醛溶液、磷钥酸溶液、碘、茚三酮溶液、高锰 酸钾溶液、DNPH溶液、氯化锰溶液和溴甲酚绿溶液。着色处理的实例为通过涂布、喷雾或暴 露使着色剂附着于第二固定相和视需要加热第二固定相以显色的处理。
在本发明的分离/检测柱中，就流动相在固定相的轴向的均一液体渗透而言，优 选第一和第二固定相为圆柱形或圆管状。在填充型固定相的情况下，通过放液填充填料、在 分离剂溶液中浸没多孔材料或通过在支持体上涂布分离剂的浆料，可容易形成允许像这样 的均一液体渗透的固定相。
在填充型固定相或通过在分离剂或载体的圆柱体中形成敞开式(open-cell)泡 沫而构成多孔材料的一体型固定相的情况下，可不使用形成相所需的助剂(例如用于形成 薄层层析板中分离层的粘合剂)地形成固定相，因此可防止助剂对分离的影响。该固定相 也容易形成和用于其它检测/分离设备，例如薄层层析板，因此其可操作性优良。
本发明包括可构造上述本发明的分离/检测柱的试剂盒。该分离/检测试剂盒可 为包括以下的分离/检测试剂盒柱管，所述柱管具有光透性；第一填料，所述第一填料具 有分离样品中的组分的分离能力和与所述组分相同的光学响应性；和第二填料，所述第二 填料具有不同于第一分离剂的光学响应性，并且可具有分离能力。在该分离/检测试剂盒 中，本发明的分离/检测柱的形成是通过填充第一填料到柱的一端中和填充第二填料到 柱的另一端中，使得与第一填料层相邻或经由间隔物。由于分离/检测试剂盒可自由设定 用于分离/检测柱的填料的类型和固定相的长度，当考虑分离条件时，该分离/检测试剂盒 是有效的。
分离/检测试剂盒也可为包括以下的分离/检测试剂盒柱管、第一填料，以及与 柱管连接使得液体自由渗透的第二圆柱体和第二薄层层析棒中的一个或二者。第二圆柱体 为具有不同于第一填料的光学响应性的光学响应性并且可具有分离能力的一体型固定相。 第二薄层层析棒具有不具有液体渗透性的柱状或管状支持体和在该支持体的外周面或内 周面上形成的分离剂层，其中该分离剂层是具有不同于第一填料的光学响应性的光学响应 性并且可具有分离能力的元件，并且构成薄层型固定相。在该分离/检测试剂盒中，第一固 定相可通过填充第一填料到柱管中形成。本发明的分离/检测柱可通过将第二圆柱体或第 二薄层层析棒插入到柱管的末端中而形成。由于该分离/检测试剂盒可自由设定用于分离/检测柱的第一填料的类型，并且容易连接第一固定相和第二固定相，例如考虑分离条件， 可有效利用该分离/检测试剂盒。
薄层层析棒包括分离剂层在外周面上形成的柱状或管状支持体形式和分离剂层 在内周面上形成的管状支持体形式。对于柱状支持体，例如可使用截面形状为多边形或圆 形的棒，而对于管状支持体，例如可使用截面形状为多边形的管、柱管或具有与柱管相同尺 寸的管。
分离/检测试剂盒可为包括以下的分离/检测试剂盒第一圆柱体和第一薄层层 析棒中的一个或二者、与第一圆柱体和/或第一薄层层析棒连接使得液体自由渗透的具有 光透性的柱管、和第二填料。第一圆柱体为一体型固定相，其具有液体渗透性，具有分离样 品中的组分的分离能力，并且具有与所述组分的光学响应性相同的光学响应性。第一薄层 层析棒具有支持体和在支持体的外周面或内周面上形成的分离剂层，其中分离剂层为具有 液体渗透性、分离样品中的组分的分离功能和与所述组分的光学响应性相同的光学响应性 的元件，并且构成薄层型固定相。在该分离/检测试剂盒中，第二固定相可通过填充第二填 料到柱管中形成。本发明的分离/检测柱可通过将第一圆柱体或第一薄层层析棒插入到柱 管的末端中而形成。该分离/检测试剂盒有效用于制备性分离组分，例如因为在分离/检测 柱中第二固定相为填充型固定相，并且包含任意斑点的固定相部分可作为粒状填料提取。
分离/检测试剂盒可为包括以下的分离/检测试剂盒第一柱状体和第一薄层层 析棒中的一个或二者，第二柱状体和第二薄层层析棒中的一个或二者，和连接第一柱状体 或第一薄层层析棒和第二柱状体或第二薄层层析棒使得液体自由渗透的连接件。在该分离 /检测试剂盒中，本发明的分离/检测柱可通过连接第一柱状体或第一薄层层析棒和第二 柱状体或第二薄层层析棒而形成。由于在分离/检测柱中第一和第二固定相可容易连接， 该分离/检测试剂盒对容易检测分离是有效的。
分离/检测试剂盒可为包括以下的分离/检测试剂盒不需要具有光透性的第一 柱管；第一填料；具有光透性的第二柱管；第二填料；和连接这些柱管使得液体自由渗透的 连接件。在该分离/检测试剂盒中，本发明的分离/检测柱可通过将其中填充第一填料的 第一柱管和其中填充第二填料的第二柱管经由连接件连接而形成。该分离/检测试剂盒可 通过再次填充填料而多次在一个柱管中形成各固定相，并且可容易连接这些固定相，因此， 就容易形成各填充型固定相，和在使用分离/检测柱后控制废物的产生而言，其非常有效。
分离/检测试剂盒可包括圆柱形或圆管状固定相；截面形状为非圆形例如多边 形的柱状或管状固定相；和连接这些固定相使得液体自由渗透的连接件。该分离/检测试 剂盒可形成其中将具有不同截面形状的固定相连接的分离/检测柱。截面形状为非圆形的 固定相例如通过对圆管状柱的侧面加压而形成，该圆管状柱通过填充填料到柱管中形成。 截面形状为椭圆形的柱可提高填充密度并且使得填充均匀，就进一步改进分离能力而言是 优选的，而就容易产生毛细管现象、减少待填充的填料的量，和使得更容易从侧面视觉观察 斑点而言，优选截面形状为椭圆形或长方形的固定相。该分离/检测试剂盒可形成具有对 于固定相中的一个具有上述优点的固定相的分离/检测柱。
分离/检测试剂盒可包括多个试剂盒的组成元件作为一个试剂盒。分离/检测试 剂盒可包括可用于构造和使用分离/检测柱的其它组成元件。这些其它元件的实例为上 述连接件、柱管的端盖、连接柱管和流动相的管的管接头、分离/检测柱的底座、在分离/检测时容纳分离/检测柱和流动相的容器、以及视需要插入柱管或连接件中的上述间隔物。
分离/检测试剂盒可包括分离剂不同的两种或更多种类型的填料、圆柱体、柱状体和薄层层析棒，并且可包括尺寸、材料和物理性质不同的两种或更多种类型的柱管、圆柱体、柱状体和薄层层析棒。就考虑分离/检测柱的分离条件而言，该分离/检测试剂盒非常有效。实施例
现在描述本发明的一个实施例，但是本发明不局限于以下实施例。
图4显示本实施例的一个分离/检测柱。
图4中的分离/检测柱包括具有紫外透明性的管1、在管I的一端中填充的第一填料层2、在管I的另一端中填充的第二填料层3、设置在第一和第二填料层2和3之间并且具有液体渗透性的间隔物4，和插入管I的另一端中的端盖5。
管I为由聚四氟乙烯制成的管。管I的外径为3臟，管I的内径为I臟，管I的长度为6 cm。
第一填料层2 为 Daicel Chemical Industries, Ltd.制造的 Chiralpak AD (Daicel Chemical Industries,Ltd.的注册商标)(下文中称为“AD填料”)的层。AD填料的粒径为20 μ m。第一填料层2的填料长度为3 cm。
第二填料层3为硅胶层。该硅胶含有含锰的硅酸锌作为荧光剂。硅胶的粒径为15 μ m。第二填料层3的填充长度为3 cm。
间隔物4和端盖5分别由石英棉制成。间隔物4的填充长度为4 mm。
如下形成图4中的分离/检测柱将端盖5插入管I的另一端上，通过放液从管I 的一端填充硅胶，从管I的一端插入间隔物4以停止第二填料层的一端侧，和通过放液从管 I的一端填充AD填料直至达到管I的一端。
样品溶液附着于管I的一端，即第一填料层2的一端。样品溶液为反式苗氧化物 (t-SO)溶液。该样品溶液的溶剂为含有1:9体积比的正己烷和异丙醇的混合溶剂，样品的浓度为10，000质量ppm。通过直接在样品溶液中浸没分离/检测柱的一端，进行样品溶液的附着。例如，可通过使用Pasteur移液管将样品溶液从分离/检测柱的一端滴入第一填料层2中，进行样品溶液的附着。
然后，将约O. 05 mL展开剂(流动相)从分离/检测柱的一端滴入第一填料层2 中，使得展开剂渗透至第一填料层2中。展开剂为含有9:1体积比的正己烷和异丙醇的混合溶剂。渗透后，将分离/检测柱放置在含有展开剂的容器中，使得分离/检测柱的一端浸没在展开剂中，使样品在第一和第二填料层2和3中展开。
通过使展开剂展开直至通过毛细管现象到达端盖5，并照射紫外线到第二填料层 3上，观察到如在图5中阴影部分所示的荧光，并且观察到通过第一填料层2分离的t-SO的提余液组分(几乎不被AD填料吸收的组分)的斑点作为不发射荧光的区域。
工业适用性近年来，需要进一步开发有效的药 物组分和作为其原料的可用光学异构体，并且还需要开发更准确地检查光学异构体和分离光学异构体的技术。根据本发明，可使用柱层析容易进行通过具有紫外响应性的分离剂(例如使用多糖衍生物的用于光学异构体的分离剂)进行的光学分离，并且可容易提供用于液相层析条件的初始设定和优化的有用材料。因此， 由于本发明，可预期进一步开发涉及通过层析分离的技术，例如开发更有用的光学异构体 和建立用于光学异构体的更具生产性的制造方法。
附图标记说明 I管2第一填料层 3第二填料层 4间隔物 5 端盖11、12圆形管 13、15液体渗透材料 14圆柱体。
权利要求
1.一种分离/检测柱，所述分离/检测柱具有柱状或管状的具有液体渗透性的第一和第二固定相，其中第一和第二固定相的末端彼此连接使得液体可渗透；和在第一和第二固定相的轴向上渗透的流动相，其中第一固定相具有分离样品中的组分的分离能力和对紫外线或着色剂的光学响应性，所述光学响应性与该组分的光学响应性相同，和第二固定相具有不同于所述组分的光学响应性。
2.权利要求1的分离/检测柱，其中第二固定相不具有分离能力。
3.权利要求1或2的分离/检测柱，其中第一和第二固定相分别由柱管中的粒状填料形成的填充层、具有液体渗透性的柱状体或具有液体渗透性的分离剂层形成，所述分离剂层在不具有液体渗透性的柱状或管状支持体的周面上形成。
4.权利要求3的分离/检测柱，其中柱状体的形状为圆柱形，并且支持体的形状为圆柱形或圆管状。
5.权利要求1-4中任一项的分离/检测柱，其中第一固定相含有用于光学异构体的分离剂，而第二固定相不含用于光学异构体的分离剂。
6.权利要求5的分离/检测柱，其中所述用于光学异构体的分离剂为多糖衍生物。
7.权利要求6的分离/检测柱，其中所述多糖衍生物由多糖与芳族酯基、芳族氨基甲酰基和芳族醚基中的任一种构成，所述基团与多糖的羟基或氨基部分或完全置换。
8.一种分离/检测试剂盒，所述分离/检测试剂盒包括柱管，所述柱管具有光透性；第一粒状填料，所述第一粒状填料具有分离样品中的组分的分离能力和对紫外线或着色剂的光学响应性，所述光学响应性与该组分的光学响应性相同；和第二粒状填料，所述第二粒状填料具有不同于所述组分的光学响应性。
9.权利要求8的分离/检测试剂盒,其中第二填料不具有分离能力。
10.权利要求9的分离/检测试剂盒,其中第一填料含有用于光学异构体的分离剂，而第二填料不含用于光学异构体的分离剂。
11.一种分离/检测试剂盒，所述分离/检测试剂盒包括柱管；第一粒状填料，所述第一粒状填料具有分离样品中的组分的分离能力和对紫外线或着色剂的光学响应性，所述光学响应性与该组分的光学响应性相同；和第二圆柱体和第二薄层层析棒中的一个或二者，其可与柱管连接，使得液体自由渗透，其中第二圆柱体具有不同于所述组分的光学响应性和液体渗透性，和第二薄层层析棒具有不具有液体渗透性的圆柱形或圆管状支持体和第二分离剂层，所述第二分离剂层在支持体的周面上形成，并且具有不同于所述组分的光学响应性和液体渗透性。
12.权利要求11的分离/检测试剂盒，其中第二圆柱体和第二分离剂层不具有分离能力。
13.权利要求12的分离/检测试剂盒，其中第一填料含有用于光学异构体的分离剂，而第二分离剂层不含用于光学异构体的分离剂。
14.一种分离/检测试剂盒，所述分离/检测试剂盒包括第一圆柱体和第一薄层层析棒中的一个或二者，所述第一圆柱体具有液体渗透性、分离样品中的组分的分离能力和对紫外线或着色剂的光学响应性，所述光学响应性与该组分的光学响应性相同，所述第一薄层层析棒具有不具有液体渗透性的圆柱形支持体和在支持体的周面上形成的第一分离剂层；柱管，所述柱管具有光透性，并且与第一圆柱体或第一薄层层析棒连接，使得液体自由渗透；和第二粒状填料，所述第二粒状填料具有不同于所述组分的光学响应性，其中所述第一分离剂层具有分离能力、与所述组分相同的光学响应性和液体渗透性。
15.权利要求14的分离/检测试剂盒,其中第二填料不具有分离能力。
16.权利要求15的分离/检测试剂盒,其中第一圆柱体和第一分离剂层含有用于光学异构体的分离剂，而第二填料不含用于光学异构体的分离剂。
17.一种分离/检测试剂盒，所述分离/检测试剂盒包括第一柱状体和第一薄层层析棒中的一个或二者，所述第一柱状体具有液体渗透性、分离样品中的组分的分离能力和对紫外线或着色剂的光学响应性，所述光学响应性与该组分的光学响应性相同，所述第一薄层层析棒具有不具有液体渗透性的柱状或管状支持体和在支持体的周面上形成的第一分离剂层；第二柱状体和第二薄层层析棒中的一个或二者，所述第二柱状体具有不同于所述组分的光学响应性和液体渗透性，所述第二薄层层析棒具有不具有液体渗透性的柱状或管状支持体和在支持体的周面上形成的第二分离剂层；和连接件，所述连接件连接第一柱状体或第一薄层层析棒与第二柱状体或第二薄层层析棒，使得液体自由渗透，其中所述第一分离剂层具有分离能力、与所述组分相同的光学响应性和液体渗透性，和所述第二分离剂层具有不同于所述组分的光学响应性和液体渗透性。
18.权利要求11的分离/检测试剂盒，其中所述第二柱状体和第二分离剂层不具有分离能力。
19.权利要求11或14的分离/检测试剂盒，其中所述第二柱状体的形状为圆柱形，所述支持体的形状为圆柱形或圆管状。
20.权利要求18或19的分离/检测试剂盒，其中所述第一柱状体和第一分离剂层含有用于光学异构体的分离剂，而所述第二柱状体和第二分离剂层不含用于光学异构体的分离剂。
21.权利要求10、13、16和20中任一项的分离/检测试剂盒，其中所述用于光学异构体的分离剂为多糖衍生物。
22.权利要求21的分离/检测试剂盒,其中所述多糖衍生物由多糖与芳族酯基、芳族氨基甲酰基和芳族醚基中的任一种构成，所述基团与多糖的羟基或氨基部分或完全置换。
全文摘要
公开了一种可检测通过分离剂分离的组分的分离/检测柱，所述分离剂具有与样品中的组分相同的光学响应性。分离/检测柱如下构成用具有分离样品中的组分的分离能力和紫外响应性的第一填料填充的具有紫外透明性的管(1)的一端；中间的由石英棉组成的间隔物(4)；用具有不同于第一填料的紫外响应性并且不具有前述分离能力的第二填料填充的管(1)的另一端；以及插入所述管(1)的另一端内的由石英棉组成的端盖(5)。
文档编号G01N30/88GK103038633SQ201180033859
公开日2013年4月10日 申请日期2011年7月8日 优先权日2010年7月8日
发明者蓑田稔治, 池田勇 申请人:株式会社大赛璐