专利名称：一种美汉草挥发油成分的分离鉴定和用途的制作方法
一种美汉草挥发油成分的分离鉴定和用途技术领域
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种美汉草挥发油成分的分离鉴定和用途。
背景技术：
美汉草为唇形科(Labiatae)龙头草属(Meehania)植物芝麻花Meehania urticifolia(Miq.)Makino的干燥地上部分，别名荨麻叶龙头草，芝麻花(辽宁)、美汉花， 异名水升麻(四川)，为多年生草本植物，分布于通化、浑江、柳河、集安、抚松、靖宇、蛟河、 舒兰、安图、敦化、长白朝鲜族自治区、通化县等地，朝鲜、日本也有分布。美汉草味辛、苦、性微寒，全草入药，可作为民间药，具有清热解表，利水消肿等功效。用于感冒发热，泻痢腹痛， 肝炎，胆囊炎，小便不利，蛇咬伤等症。在民间作美汉草药用，全草可入药，作为寒药，具有发表清热，利湿解毒等功效，其天然资源极为丰富，且蕴含量大。
目前，关于美汉草挥发油的研究鲜见报道，未对美汉草挥发油做过抑菌研究。因此，本发明采用水蒸气蒸馏法对药用植物美汉草挥发油进行了提取，利用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪器分离和鉴定，并对美汉草发油进行了抑菌试验。
本发明的美汉草挥发油对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌具有抑制作用，这种抑菌作用具有积极的应用价值。发明内容
1、一种美汉草挥发油成分的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤
步骤(1)称取干燥的美汉草粗粉100g，经粉碎后置玻璃容器中，加500ml-600ml 蒸馏水浸泡后超声lh，温度为30°C，功率为80W ；
步骤O)将(1)中美汉草粗粉与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取4_5h，获得上面浮有挥发油的水溶液；
步骤(3)将( 中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使美汉草挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰箱4°C保存备用；
步骤将步骤(3)中所得美汉草挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为19. 922%的石竹烯、8. 018%的荜澄茄油萜、6. 179%的α -杜松醇、6. 173%的篮桉醇和5. 191%的石竹烯。
2、美汉草挥发油抑制大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌。
根据本发明，本发明中的“ ％，，是重量百分比。
具体实施方式
本发明所述的一种美汉草挥发油成分的分离鉴定和用途包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。3
实施例1
1、一种美汉草挥发油成分的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤
步骤(1)称取干燥的美汉草粗粉100g，经粉碎后置玻璃容器中，加500ml蒸馏水浸泡Mi后超声lh，温度为30°C，功率为80W;
步骤O)将(1)中美汉草粗粉与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取4-5h，获得上面浮有挥发油的水溶液；
步骤(3)将( 中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使美汉草挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰箱4°C保存备用；
步骤将步骤(3)中所得美汉草挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为19. 922%的石竹烯、8. 018%的荜澄茄油萜、6. 179%的α -杜松醇、6. 173%的篮桉醇和5. 191%的石竹烯。
步骤(5)将(3)中美汉草挥发油进行抑菌试验，美汉草挥发油对大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。
实施例2
1、一种美汉草挥发油成分的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤
步骤(1)称取干燥的美汉草粗粉100g，经粉碎后置玻璃容器中，加600ml蒸馏水浸泡他后超声lh，温度为30°C，功率为80W;
步骤O)将(1)中美汉草粗粉与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取4-5h，获得上面浮有挥发油的水溶液；
步骤(3)将( 中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使美汉草挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰箱4°C保存备用；
步骤(4):将步骤(3)中所得美汉草挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为19. 922%的石竹烯、8. 018%的荜澄茄油萜、6. 179%的α -杜松醇、6. 173%的篮桉醇和5. 191%的石竹烯。
步骤(5)将(3)中美汉草挥发油进行抑菌试验，美汉草挥发油对大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。
药理试验美汉草挥发油的抑菌作用
1实验材料
大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌和金黄色葡萄球菌均来自于美国菌种保藏中心(ATCC)，37°C在蛋白胨牛肉汤中培养12h。
培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。菌的活化与培养时用液体培养基，组成为牛肉膏蛋白胨氯化钠蒸馏水(3 10 5 1000)。菌的保存及抑菌实验时用固体培养基，组成为牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水(3 10 5 22 1000)。
2实验方法
2. 1培养基的配制
取牛肉膏0. 6g、蛋白胨2g、氯化钠lg、蒸馏水200ml，混合并搅拌使其完全溶解，配成液体培养基。用量筒量取液体培养基，将其平均分装在10个50ml的三角瓶内，每瓶20ml。取牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂22g、蒸馏水1000ml，混合后将其置于电炉子上加热，使琼脂完全溶解，配成固体培养基。用量筒量取固体培养基，将其平均分装在5个150ml 的三角瓶内，每瓶100ml。三角瓶瓶口均用棉塞塞紧并用牛皮纸包扎。
2. 2 灭菌
将配好的固体培养基、液体培养基均放入高压灭菌锅中灭菌，温度上升到121°C 时，开始计时20min。培养皿、量筒、镊子、剪刀、6mm滤纸片(放在小烧杯中)、滴管、氨瓶等实验器材均放入烘箱中170°C灭菌池。实验前用75%乙醇擦拭超净工作台并紫外灭菌20min。 37°C恒温培养箱在使用前需用75%乙醇擦拭灭菌。
2. 3菌的培养与查菌
将5个菌种在超净工作台上、酒精灯环境下倒入装有液体培养基的三角瓶中，每种菌培养两份。将这10个三角瓶放入摇床37°C摇菌他。显微镜做镜检后开始查菌，记录数据并计算菌浓度，若5个中方格总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则Iml菌液中总菌数= A/5 X 25 X 10000 X 13 = 50000AB
2. 4样品液及滤纸片的制备
将美汉草挥发油配制成5mg/ml的溶液(可加0 4 μ L 二甲基亚砜助容)，按 1 2η 稀释成 2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.625mg/ml、0.3125mg/ml 的溶液。将滤纸片用打孔器打成直径为6mm的圆片，在超净工作台将滤纸片放进各梯度样品中浸泡池。
2. 5有菌琼脂平板的制备
将稀释好的菌液与固体培养基混合并摇晃均勻，此时菌的浓度应达到 3. 6X 108CFU/ml。将有菌培养基依次倒入各培养皿中，晃动培养皿使培养基均勻地铺在培养皿底部，冷却至凝固。
2. 6抑菌实验方法
用记号笔在有菌琼脂平板上标号，将浸泡好的滤纸片用镊子夹出，放入写相应对照编号的培养皿中，每个样品做三个平行，放入37。C恒温培养箱培养。
记录。
3实验结果抑菌效果用抑菌圈直径DD表示(单位mm)。在抑菌实验结束后的第1^^2413^^4 观察菌的生长情况，测量抑菌圈直径并表1美汉草挥发油的抑菌活性菌种挥发油链霉素大肠杆菌932链球菌1230沙门氏菌935巴氏菌1031金黄色葡萄球菌1330结果表明美汉草挥发油对大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。
通过具体实施实例说明美汉草挥发油可作为天然抗菌剂用于食品、药品行业，代替有毒副作用的合成抗菌剂。5
表2美汉草挥发油化学成分的分析结果
权利要求
1.一种美汉草挥发油成分的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤步骤(1)称取干燥的美汉草粗粉100g，经粉碎后置玻璃容器中，加500ml-600ml蒸馏水浸泡后超声lh，温度为30°C，功率为80W ；步骤O)将(1)中美汉草粗粉与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取4-5h，获得上面浮有挥发油的水溶液；步骤(3)将O)中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器， 使美汉草挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，放入冰箱4°C保存备用；步骤将步骤(3)中所得美汉草挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为19. 922%的石竹烯、8. 018%的荜澄茄油萜、6. 179%的α-杜松醇、 6. 173%的篮桉醇和5. 191%的石竹烯。
2.如权利要求1所述的一种美汉草挥发油在制备抑制大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌的抑制剂中的用途。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种美汉草挥发油成分的分离鉴定和用途。采用水蒸气蒸馏法提取美汉草挥发油，所得美汉草挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为19.922％的石竹烯、8.018％的荜澄茄油萜、6.179％的α-杜松醇、6.173％的篮桉醇和5.191％的石竹烯。本发明美汉草挥发油对大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用，可开发为天然抗菌剂应用于食品、药品行业，制备出具有抑菌作用的各种形式的产品。
文档编号G01N30/12GK102520096SQ20121000990
公开日2012年6月27日 申请日期2012年1月1日 优先权日2012年1月1日
发明者侯欣池, 张崇禧, 张成城, 李小叶, 郑友兰 申请人:山东大学威海分校