专利名称：一种测定血浆或尿液中d-山梨醇浓度的方法
技术领域：
本发明是一种药物分析技术，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法。
背景技术：
肝功能性血流量是指流经肝血窦并发挥功能的那部分肝血流，目前只有通过清除率的方法来测定。在临床上，D-山梨醇清除率可反映肝总血流量，其改变能可靠的反映肝血流量的变化，从而反映肝储备功能。所以，D-山梨醇肝清除率是肝硬化疾病治疗中选择治疗方式、评价的治疗效果的可靠指标。通过测定D-山梨醇的血浆浓度和尿液浓度可以计算山梨醇的整体清除率和肾清除率，由于山梨醇无肝、肾外清除(以肝清除为主)，故山梨醇肝的清除率即为整体清除率与肾清除率之差。目前关于生物样本中D-山梨醇的测定方法，主要为酶分光光度法，这种方法存在灵敏度低、定量不准确、操作繁琐等缺陷。
发明内容
发明目的本发明的目的在于提供一种测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法。技术方案本发明的目的是通过如下的方案实现的一种测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，采用液质联用系统测定，包括以下步骤(I)血浆或尿液样品预处理；(2) D-山梨醇进行液相色谱分离；(3)质谱测定；(4)计
笪上述测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，步骤(I)血浆或尿液样品预处理取给予过D-山梨醇的犬或人的血浆或尿液样品，加入定量的甲醇或乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀；步骤(2) D-山梨醇进行液相色谱分离色谱条件中色谱柱为汉邦Lichrospher NH2柱；流动相体积比为70 30的甲醇-水溶液；流速0. 6-1. OmL ^irT1,分流比I : 3 ;柱温30-40°C ;洗脱方式为等度洗脱；步骤(3)质谱测定，条件为离子源电喷雾离子化电离源ESI ;离子检测方式选择性离子检测SM ;离子极性负离子；毛细管电压3. OKV ;离子源温度80-120°C ;脱溶剂温度340-36(TC ;脱溶剂气380L/h ;锥孔气30L/h ;脱溶剂气和锥孔气均为高纯氮气；检测对象的离子选择通道D-山梨醇，[M-H]-，m/z 180. 9, Dwell 0. 2, Cone 30;内标替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0, Dwell 0. 2, Cone 30;步骤⑷计算采用内标法，以D-山梨醇和内标替硝唑的峰面积比值代入标准曲线方程计算D-山梨醇浓度。上述测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，步骤(2) D-山梨醇进行液相色谱分离色谱条件中色谱柱为汉邦Lichrospher NH2柱；流动相体积比为70 30的甲醇-水溶液；流速0. 8mL mirT1，分流比I : 3 ;柱温35°C ;洗脱方式为等度洗脱；步骤(3)质谱测定，条件为离子源电喷雾离子化电离源ESI ;离子检测方式选择性离子检测SIM ;离子极性负离子；毛细管电压3. OKV ;离子源温度10(TC ;脱溶剂温度350°C ;脱溶剂气380L/h ;锥孔气30L/h ;脱溶剂气和锥孔气均为高纯氮气；检测对象的离子选择通道=D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9，Dwell 0. 2，Cone 30 ;内标替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0, Dwell 0. 2, Cone 30。上述测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，步骤⑴中，血浆样品取血浆100 Ii L,加入900 V- L甲醇沉淀，振荡lmin, 12000rpm离心IOmin,取上清50 u L,加入50 u L甲醇、400 u L浓度为2. 174ug* mL—1的替硝唑甲醇内标溶液，混匀；尿样品取尿液10 u L，加入甲醇990 y L，振荡lmin，12000rpm离心lOmin，取上清50 y L，加入950 y L浓度为
2.174ug* mL—1的替硝唑甲醇内标溶液，混匀。上述测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，步骤(2)中色谱条件中色谱柱长度为250mm,内径为4. 6mm,粒径为5 y m。上述测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，步骤(I)中D-山梨醇给予和血浆或尿液样品取样方法为静脉持续滴注5% D-山梨醇溶液3h,给药量为150mg kg_S于滴注后3h采集外周静脉血3ml，注入肝素管内，制备血浆或收集滴注后3h内尿液，计量、备测。上述测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，所述血浆或尿液为犬或人的血浆或尿液。有益效果(I)预处理方法简便一步有机溶媒蛋白沉淀法，适用于常规测定。(2)专属性强采用Lichrospher NH2色谱柱作为固定相，甲醇和水的混合液作为流动相，等度洗脱，D-山梨醇保留时间为4. 83min左右，内标替硝唑保留时间为4. 13min左右，6. 5分钟完成测定，内源性物质不干扰二者的测定。(3)灵敏度高血浆最低定量限为I. 25 yg 尿液最低定量限为0. 125ug. mL' (4)本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为山梨醇的临床血尿药物浓度测定提供依据，具有临床应用的前景。本方法的血浆标准曲线线性范围为I. 25 125ii g mL—1，尿液标准曲线线性范围为0. 125 12. g mL—1，日内和日间精密度RSD均小于5%。
图I为犬空白血浆的质谱2为犬空白血浆加入标准品后的质谱3为犬给予D-山梨醇后血浆样品的质谱4为甲醇的质谱5为甲醇加入标准品的质谱6为犬给予D-山梨醇后尿样品的质谱图注图中离子选择通道I为D-山梨醇，[M-H]-，m/z 180. 9，保留时间为4. 83min左右；离子选择通道2为内标替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0，保留时间为4. 13min左右。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。实施例I :犬血浆中D-山梨醇浓度的测定一、实验材料与仪器D-山梨醇对照品 购于中国药品生物制品检定所；批号100555-200306替硝唑对照品(内标)购于中国药品生物制品检定所；批号100336-200402试验用水超纯水；甲醇色谱纯(Merck Company)。ZQ2000LC/MS液质联用仪(美国Waters公司，所配高效液相仪为Waters 2695)；Masslynx 4. 0数据处理系统；WH_2微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂);AE240电子天平(上海梅特勒-托利多有限公司)；Millipore Drict_Q5纯水机(法国Millipore公司);Biofuge PrimoR冷冻高速离心机(德国Heraeus公司)。二、液质条件I.液相色谱条件色谱柱汉邦LichrospherNH2 柱(dp 5mm, 250mm ID X 4. 6mm);流动相甲醇-水溶液(70 30, v/v);流速0. SmLiirT1 (分流比 I 3);柱温35°C。2.质谱条件离子源电喷雾离子化电离源ESI ;离子检测方式选择性离子检测SIM ;离子极性负离子；毛细管电压3. OKV ;离子源温度100°C ;脱溶剂温度350°C ;脱溶剂气380L/h ;锥孔气30L/h ;脱溶剂气和锥孔气均为高纯氮气；检测对象的离子选择通道D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9, Dwell 0. 2，Cone 30;内标替硝唑，[M-H]-, m/z246. 0, Dwell 0.2，Cone 30o三、实验过程I. D-山梨醇标准溶液的配制精密称取D-山梨醇13. 96mg，置于IOmL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得I. 396mg HiL-1D-山梨醇的储备液。精密量取适量储备液以甲醇依次稀释，配成浓度分别为2. 5、5、10、25、50、100、250 ii g m^1的D-山梨醇标准溶液。 2.犬血浆样品的处理取3只犬静脉持续滴注5% D-山梨醇溶液3h,给药量为150mg kg'于滴注后3h采集外周静脉血3ml，注入肝素管内备测，制备血浆，取犬血浆100 y L，处理方法为加入900 V- L甲醇沉淀，振荡lmin, 12000rpm离心IOmin,取上清50 u L,加入50 u L甲醇、400 u L替硝唑甲醇溶液(内标，2. 174 u g -mr1)，混匀，5 U L进样(见图3)，计算D-山梨醇和内标峰面积的比值fl，代入标准曲线计算浓度，再乘以相应的稀释倍数(10)，得血浆中D-山梨醇的浓度。若浓度超出标准曲线范围，则样品再稀释一定倍数进样。3.专属性取没有给予过D-山梨醇的犬空白血浆100 U L,加入900 U L甲醇沉淀，振荡lmin，12000rpm离心lOmin,取上清液备用。取本上清液50 y L,加入甲醇450 y L,混勻，5ii L进样(见图I)。另取本上清液50 iiL，加入D-山梨醇标准溶液50 iiL，加入400 ii L替硝唑甲醇溶液(内标，2. 174ug* mr1)，混匀，5 ii L进样(见图2)。
结果显示，在本实验所采用的LC-MS条件下，血浆样品无杂峰对检测组分造成干扰，D-山梨醇保留时间在4. 83min左右，内标替硝唑保留时间在4. 13min左右。D-山梨醇和内标互不干扰，峰形良好，基线平稳。4.线性试验犬血浆标准曲线取没有给予过D-山梨醇的犬空白血浆适量，按体积比I : 9加入甲醇沉淀，振荡lmin, 12000rpm离心IOmin,取上清液备用。分别取不同浓度的D-山梨醇标准溶液50 u L，加入空白血浆处理后的上清液50 u L，配成含D-山梨醇的浓度分别为
I.25、2. 5、5、12. 5、25、50、125 ii g 的含药血浆样品，加入400 y L替硝唑甲醇溶液(内标，2. 174 u g -mr1)，混匀，5 L进样。计算D-山梨醇和内标峰面积的比值f I，以峰面积比值H对血药浓度C作回归计算，得回归方程fl = 0. 9646XC+0. 1192 (r = 0. 9994), D-山梨醇血浆浓度在I. 25 ~ 125 ug .mL—1范围内线性关系良好。最低定量限为I. 25 Ug .mL—1。5.准确度和精密度按照犬血浆标准曲线方法配制含D-山梨醇浓度为2. 5,12. 5,50ug mL—1的低、中、高的含D-山梨醇血浆样品，按“犬血浆样品的处理”处理方法分别处理。连续做3天，每天每个浓度各做5份样品，计算D-山梨醇峰面积As和内标峰面积Ai的比值f，代入当天的血浆标准曲线中求得D-山梨醇实测浓度，由实测浓度计算日内、日间精密度和相对标准偏差(RSD)，实测浓度与加入浓度的比值即为准确度。结果显示，日内和日间精密度RSD均小于5%，准确度符合要求。6.测定结果上述3只给予过D-山梨醇的犬血浆中D-山梨醇含量分别为70. 0,60. 2、65.4ug* mL'实施例2 :犬尿液中D-山梨醇浓度的测定一、实验材料与仪器D-山梨醇对照品购于中国药品生物制品检定所公司；批号100555-200306替硝唑对照品(内标)购于中国药品生物制品检定所；批号100336-200402试验用水超纯水；甲醇色谱纯(Merck Company)。ZQ2000LC/MS液质联用仪(美国Waters公司，所配高效液相仪为Waters 2695)；Masslynx 4. 0数据处理系统；WH_2微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂)；AE240电子天平(上海梅特勒-托利多有限公司)；Millipore Drict_Q5纯水机(法国Millipore公司);Biofuge PrimoR冷冻高速离心机(德国Heraeus公司)。二、液质条件1.液相色谱条件色谱柱汉邦LichrospherNH2 柱(dp 5mm, 250mm ID X 4. 6mm);流动相甲醇-水溶液(70 30, v/v);流速0. SmLiirT1 (分流比 I 3);柱温35°C。2.质谱条件离子源电喷雾离子化电离源ESI ;离子检测方式选择性离子检测SIM ;离子极性负离子；毛细管电压3. OKV ;离子源温度100°C ;脱溶剂温度350°C ;脱溶剂气380L/h ;锥孔气30L/h ;脱溶剂气和锥孔气均为高纯氮气；检测对象的离子选择通道D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9, Dwell 0. 2，Cone 30;内标替硝唑，[M-H]-, m/z246. 0, Dwell 0.2，Cone 30o
三、实验过程I. D-山梨醇标准溶液的配制精密称取D-山梨醇13. 96mg，置于IOmL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇勻，即得I. 396mg HiL-1D-山梨醇的储备液。精密量取适量储备液以以甲醇依次稀释，配成浓度分别为2. 5、5、10、25、50、100、250 ii g mL_1的D-山梨醇标准溶液。2.犬尿样品的处理取3只犬静脉持续滴注5% D-山梨醇溶液3h，给药量为150mg kg'收集滴注后3h内尿液，计量、备测，取给予过D-山梨醇的犬尿液lOyL，处理方法为加入甲醇990 V- L,振荡lmin, 12000rpm离心IOmin,取上清50 u L,加入950 u L替硝唑甲醇溶液(内标，2. 174ug* mr1)，混匀，5 u L进样，计算D-山梨醇和内标峰面积的比值f2，代入标准曲线计算浓度，再乘以相应的稀释倍数(100)，得尿样品中D-山梨醇的浓度(见图6)。若浓 度超出标准曲线范围，则样品再稀释一定倍数进样。3.线性试验犬尿液标准曲线分别取不同浓度的D-山梨醇标准溶液50ii L，加入950 ii L替硝唑甲醇溶液(内标，2. nAiig.mr1)，配成含D-山梨醇的浓度分别为0. 125,0. 25、
0.5,1. 25,2. 5,5,12. 5u g m^1的含药尿液样品，混匀，5 y L进样。计算D-山梨醇和内标峰面积的比值f2，以峰面积比值f2对尿药浓度C作回归计算，得回归方程f2 =
0.4395 X C-0. 07559 (r = 0. 9992)，D-山梨醇尿液浓度在 0. 125 12. g .mL-1 范围内线性关系良好。最低定量限为0. 125 ii g mL'4.专属性由于尿样品是稀释了 1000倍进行测定的，基质效应可以忽略，因此尿样品专属性试验用甲醇作介质进行检测(见图4，图5)。结果显示，在本实验所采用的LC-MS条件下，尿样品无杂峰对检测组分造成干扰，D-山梨醇保留时间在4. 83min左右，内标替硝唑保留时间在4. 13min左右。D-山梨醇和内标互不干扰，峰形良好，基线平稳。5.准确度和精密度按照犬尿液标准曲线方法配制含D-山梨醇浓度为0. 25,1. 25、5y g mL—1的低、中、高含D-山梨醇尿样，按“犬尿样品的处理”处理方法分别处理。连续做3天，每天每个浓度各做5份样品，计算D-山梨醇峰面积As和内标峰面积Ai的比值f，代入当天的尿液标准曲线中求得D-山梨醇实测浓度，由实测浓度计算日内、日间精密度和相对标准偏差(RSD)，实测浓度与加入浓度的比值即为准确度。结果显示，日内和日间精密度RSD均小于5%，准确度符合要求。6.测定结果上述3只给予过D-山梨醇的犬尿液中D-山梨醇的含量分别为3. 60,4. 98、5. 39 u g mL 1O实施例3 :犬血浆中D-山梨醇浓度的测定参照实施例I,取3只犬静脉持续滴注5 % D-山梨醇溶液3h,给药量为150mg kg'于滴注后3h采集外周静脉血3ml,注入肝素管内备测,制备血衆,样品处理中采用乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，其余条件相同，进行测定，结果犬血浆中D-山梨醇的含量分别为 53. 1、88. 2、54. 4ii g mL'实施例4 :犬尿液中D-山梨醇浓度的测定参照实施例2,取3只犬静脉持续滴注5 % D-山梨醇溶液3h,给药量为150mg * kg-1.,收集滴注后3h内尿液，计量、备测，样品处理中采用乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，其余条件相同，进行测定，结果犬尿液中D-山梨醇的含量分别为3. 87,4. 96、
5.96 u g mL、实施例5 :人血浆中D-山梨醇浓度的测定
参照实施例1，3个人静脉持续滴注5% D-山梨醇溶液3h，给药量为150mg kg'于滴注后3h采集外周静脉血3ml，注入肝素管内备测，制备血浆，样品处理中采用甲醇蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，其余条件相同，进行测定，结果人血浆中D-山梨醇的含量分别为74. 1、61. 5、64. I u g mL、实施例6 :人尿液中D-山梨醇浓度的测定参照实施例2，3个人静脉持续滴注5% D-山梨醇溶液3h，给药量为150mg kg'收集滴注后3h内尿液，计量、备测，样品处理中采用甲醇蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，其余条件相同，进行测定，结果人尿液中D-山梨醇的含量分别为3. 68,4. 96,5. 59 u g mL'实施例7 :人血浆中D-山梨醇浓度的测定参照实施例1，3个人静脉持续滴注5% D-山梨醇溶液3h，给药量为150mg kg'于滴注后3h采集外周静脉血3ml，注入肝素管内备测，制备血浆，样品处理中采用乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，其余条件相同，进行测定，结果人血浆中D-山梨醇的含量分别为62. 7、64. 2、55. 7 u g mL 1 实施例8 :人尿液中D-山梨醇浓度的测定参照实施例2，3个人静脉持续滴注5 % D-山梨醇溶液3h，给药量为150mg kg'收集滴注后3h内尿液，计量、备测，样品处理中采用乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，其余条件相同，进行测定，结果人尿液中D-山梨醇的含量分别为3. 76,4. 43,5. 63 u g mL'实施例9 :犬血浆中D-山梨醇浓度的测定参照实施例I,取3只犬静脉持续滴注5 % D-山梨醇溶液3h,给药量为150mg kg-1。于滴注后3h采集外周静脉血3ml，注入肝素管内备测，制备血浆，样品处理中采用乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，液相色谱分离条件中流速为0. 6mL mirT1，柱温为30°C ；质谱测定，条件中离子源温度为80°C;脱溶剂温度340°C;其余条件相同，进行测定，结果犬血浆中D-山梨醇的含量分别为63. 8、82. 1、59. g mL'实施例10 :犬尿液中D-山梨醇浓度的测定参照实施例2,取3只犬静脉持续滴注5 % D-山梨醇溶液3h,给药量为150mg Ag'收集滴注后3h内尿液，计量、备测，样品处理中采用乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，液相色谱分离条件中流速为I. OmL 柱温为40°C;质谱测定，条件中离子源温度为120°C ;脱溶剂温度360°C ;其余条件相同，进行测定，结果犬尿液中D-山梨醇的含量分别为 3. 75,4. 53,5. 62 u g mL'实施例11 :人血浆中D-山梨醇浓度的测定参照实施例1，3个人静脉持续滴注5% D-山梨醇溶液3h，给药量为150mg kg'于滴注后3h采集外周静脉血3ml，注入肝素管内备测，制备血浆，样品处理中采用乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，液相色谱分离条件中流速为0. 6mL iin'柱温为30°C ;质谱测定，条件中离子源温度为80°C;脱溶剂温度340°C;其余条件相同，进行测定，结果人血浆中D-山梨醇的含量分别为73. 8、89. 1、69. g mL'实施例12 :人尿液中D-山梨醇浓度的测定参照实施例2，3个人静脉持续滴注5 % D-山梨醇溶液3h，给药量为150mg kg'收集滴注后3h内尿液，计量、备测，样品处理中采用乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，液相色谱分离条件中流速为I. OmL柱温为40°C ;质谱测定，条件中离子源温度为120°C ;脱 溶剂温度360°C ;其余条件相同，进行测定，结果人尿液中D-山梨醇的含量分别为5. 75、4. 83、5. 92 u g mL 1O
权利要求
1.一种测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，其特征在于采用液质联用系统测定，包括以下步骤(I)血浆或尿液样品预处理；(2)D-山梨醇进行液相色谱分离；(3)质谱测定；⑷计算。
2.根据权利要求I中测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，其特征在于 步骤(I)血浆或尿液样品预处理取给予过D-山梨醇的犬或人的血浆或尿液样品，力口入定量的甲醇或乙腈蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀； 步骤(2)D-山梨醇进行液相色谱分离色谱条件中色谱柱为汉邦LichrospherNH2柱；流动相体积比为70 30的甲醇-水溶液；流速0. 6-1. OmL mirT1，分流比I : 3 ;柱温30-40°C ;洗脱方式为等度洗脱； 步骤(3)质谱测定，条件为离子源电喷雾离子化电离源ESI ;离子检测方式选择性离子检测SM ;离子极性负离子；毛细管电压3. OKV ;离子源温度80-120°C ;脱溶剂温度340-36(TC ;脱溶剂气380L/h ;锥孔气30L/h ;脱溶剂气和锥孔气均为高纯氮气；检测对象的离子选择通道=D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9，DwellO. 2，Cone 30 ;内标替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0, Dwell 0. 2, Cone 30; 步骤⑷计算采用内标法，以D-山梨醇和内标替硝唑的峰面积比值代入标准曲线方程计算D-山梨醇浓度。
3.根据权利要求2中测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，其特征在于 步骤(2)D-山梨醇进行液相色谱分离色谱条件中色谱柱为汉邦LichrospherNH2柱；流动相体积比为70 30的甲醇-水溶液；流速0. 8mL分流比I : 3 ;柱温35°C;洗脱方式为等度洗脱； 步骤(3)质谱测定，条件为离子源电喷雾离子化电离源ESI ;离子检测方式选择性离子检测SIM ;离子极性负离子；毛细管电压3. OKV ;离子源温度100C ;脱溶剂温度3500C ;脱溶剂气380L/h ;锥孔气30L/h ;脱溶剂气和锥孔气均为高纯氮气；检测对象的离子选择通道D-山梨醇，[M-H]-, m/z 180. 9, Dwell 0. 2，Cone 30;内标替硝唑，[M-H]-, m/z 246. 0，Dwell 0. 2，Cone 30。
4.根据权利要求2中测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，其特征在于步骤(I)中，血衆样品取血衆100 V- L,加入900ii L甲醇沉淀，振荡lmin, 12000rpm离心IOmin,取上清50iiL，加入50iiL甲醇、400iiL浓度为2. 174ug*mr1的替硝唑甲醇内标溶液，混匀；尿样品取尿液10 V- L,加入甲醇990 V- L,振荡lmin, 12000rpm离心IOmin,取上清50 u L,加入950 u L浓度为2. 174ug* mL—1的替硝唑甲醇内标溶液，混匀。
5.根据权利要求2中测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，其特征在于步骤(2)中色谱条件中色谱柱长度为250mm,内径为4. 6mm,粒径为5 y m。
6.根据权利要求2中测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，其特征在于步骤(I)中D-山梨醇给予和血浆或尿液样品取样方法为静脉持续滴注5% D-山梨醇溶液3h，给药量为150mg Ag'于滴注后3h采集外周静脉血3ml,注入肝素管内，制备血衆或收集滴注后3h内尿液，计量、备测。
7.根据权利要求I中测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，其特征在于所述血浆或尿液为人或犬的血衆或尿液。
全文摘要
本发明公开了一种测定血浆或尿液中D-山梨醇浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的有机溶媒蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测，本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，适合于测定血浆或尿液中D-山梨醇的浓度。
文档编号G01N30/88GK102621267SQ20121010466
公开日2012年8月1日 申请日期2012年4月9日 优先权日2012年4月9日
发明者储继红, 刘史佳, 吴婷, 居文政, 张军, 李长印, 许美娟 申请人:江苏省中医院