专利名称：Bdnf酶联免疫测定试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于酶联免疫测定试剂盒，具体的涉及ー种BDNF酶联免疫测定试剂盒。
背景技术：
脑源性神经营养因子，Brain-derivedneurotrophic factor,简称BDNF,是一个分泌性蛋白。最初发现在脑组织中。后来在其它组织中如视网膜，神经组织，肾和前列腺中。申请人首次发现BDNF在骨髄源间充质干细胞(MSC)中也有表达。申请人还首次 发现BDNF在来源于骨髓增生异常综合症的MSC中表达比来源于正常人MSC中的表达明显增高。提示BDNF可用于MDS的临床诊断.
发明内容
本发明的目的在于提供ー种BDNF酶联免疫测定试剂盒，可准确测定人血浆和体液中的BDNF的浓度。为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现
BDNF酶联免疫測定试剂盒，其包括
O已包被BDNF-牛血清白蛋白连接物酶标板，_20°C保存；
2)明月交；
3)BDNF标准品，4°C保存；
4)抗体BDNF-IgG，4°C保存；
5)兔抗鼠IgG-辣根过氧化物酶结合物，_20°C保存；
6)邻苯ニ胺；
7)稀释液，用前用蒸馏水作1:10稀释；
8)底物液，用前用蒸馏水作1:10稀释。本发明的检测原理如下
固定在载体上的抗原(BDNF-BSA)与游离在溶液中的抗原(病人血浆标本)与随后加入的抗体发生竞争性结合，洗涤后加入酶标抗体，经洗涤再加底物显色。根据显色程度(0D值)即可从标准曲线上推算出待测样品BDNF含量。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果
1、本发明的BDNF酶联免疫測定试剂盒合具有良好的特异性，可准确测定人血浆和体液中的BDNF的浓度；
2、本发明的BDNF酶联免疫測定试剂盒合在MDS的鉴别诊断灵敏度高，可保证良好的线性关系；
3、本发明的BDNF酶联免疫測定试剂盒合在_20°C条件下可以.保存6个月。上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术技术方案，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例。
具体实施例方式ー种BDNF酶联免疫测定试剂盒，其包括
O已包被BDNF-牛血清白蛋白连接物酶标板，_20°C保存；
2)明胶，I. 5g/瓶；
3) BDNF 标准品，2000 pg/ml，4 V 保存；
4)抗体BDNF-IgG，2 ml，滴度为 1:1000，4°C 保存;
5)兔抗鼠IgG-辣根过氧化物酶结合物，200ug/ml, _20°C保存；
6)邻苯ニ胺(OPD)，20mg/瓶;
7)稀释液(PBS)，0.I M，用前用蒸馏水作1:10稀释；
8)底物液(Buffer2)，0.2M，用前用蒸馏水作1:10稀释。利用本发明的BDNF酶联免疫測定试剂盒的检测步骤如下
I、一次反应
将BDNF标准品用O. 1%明胶倍比稀释成8个浓度:1、2、4、8、16、32、64和128 pg/0. 1ml，用O. 1%明胶(PBS配制)将抗BDNF-IgG作1:10稀释。零标准(BO)孔加稀释液lOOul，标准(ST)孔加BDNF标准品lOOul，样品(SMP)孔加待测样品lOOul。各孔均加抗体BDNF-IgGlOOul。37 °C Ihr 或室温下 3hr。tween-20/PBS 稀释液洗板 3 次。2、二次反应
用0. 1%明胶(稀释液配制)12 ml将兔抗鼠IgG-HRP稀释，各孔均加IOOul (TA孔除外)。370C Ihr或室温下3hr。tween-20/PBS 洗板 3 次。3、反应测定
用底物液新鲜配制OPD-H2O2基质(0PD浓度lmg/ml，每毫升底物液中加入0. 5微升30%H2O2),每孔注入lOOul。室温放置20min或至显色较好时，用3M硫酸20ul终止反应。置室温lOmin，在酶标检测仪上测定OD49tl,以TA孔调零。4、计算
权利要求
1.BDNF酶联免疫测定试剂盒，其特征在于，包括 O已包被BDNF-牛血清白蛋白连接物酶标板； 2)明月交； 3)BDNF标准品； 4)抗体BDNF-IgG ； 5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物； 6)邻苯ニ胺； 7)稀释液; 8)底物液。
2.根据权利要求I所述的BDNF酶联免疫測定试剂盒，其特征在于所述明胶为I.5克/瓶。
3.根据权利要求I所述的BDNF酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述BDNF标准品为 2000 pg/mlο
4.根据权利要求I所述的BDNF酶联免疫測定试剂盒，其特征在于所述抗体BDNF-IgG 为 2 ml，滴度为 1:1000。
5.根据权利要求I所述的BDNF酶联免疫測定试剂盒，其特征在干所述兔抗鼠IgG-辣根过氧化物酶结合物为200 ug/ml。
6.根据权利要求I所述的BDNF酶联免疫測定试剂盒，其特征在于所述邻苯ニ胺为20mg/ 瓶。
7.根据权利要求I所述的BDNF酶联免疫測定试剂盒，其特征在于稀释液为O.1M。
8.根据权利要求I至7中任意一项所述的BDNF酶联免疫測定试剂盒，其特征在于底物液为O. 2M。
全文摘要
本发明公开了一种BDNF酶联免疫检测试剂盒，其包括已包被BDNF-牛血清白蛋白连接物酶标；明胶；BDNF标准品；单克隆抗体BDNF-IgG；兔抗鼠IgG-辣根过氧化物酶结合物；邻苯二胺；稀释液和底物液。本发明的BDNF酶联免疫测定试剂盒合具有良好的特异性，可准确测定人血浆和体液中的BDNF的浓度。
文档编号G01N33/68GK102645542SQ20121011653
公开日2012年8月22日 申请日期2012年4月20日 优先权日2012年4月20日
发明者吴庆宇, 唐晓文, 宋耀华 申请人:苏州大学