专利名称：用表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法
技术领域：
本发明涉及分析化学领域，具体是用表面增强拉曼光谱測定胱氨酸的方法。
背景技术：
胱氨酸是氨基酸类药物，有促进机体细胞氧化和还原功能，增加白血球和阻止病原菌发育等作用，主要用于继发性脱发症、慢性肝炎的治疗。因此，药物的质量监控具有十分重要的意义。目前，检测胱氨酸的方法主要有单扫描极谱法，原子吸收光谱法，滴定法，比色法，荧光光谱法，分光光度法，化学发光法，溶出伏安法，共振散射光谱法等。这些测定胱氨酸的方法当中，有的操作复杂，有的灵敏度不够，因此寻求一种灵敏的方法十分必要。表面增强拉曼光谱是ー种非常有效的探測界面特性和分子间相互作用、表征表面分子吸附行为和分子结构的工具，具有快速、灵敏、信息丰富、选择性高等特点。近年来，表面增强拉曼光谱被广泛地应用于表面吸附、电化学和催化反应、化学和生物传感器、生物医学检测及痕量分析等领域，并对表面增强拉曼光谱活性基底、增强机理、探针分子、检测技术等方面进行了研究，取得了较好的结果。但表面增强拉曼光谱定量分析的研究报道不多，这与重现性好、稳定性好的表面增强拉曼光谱活性基底不多有夫。纳米银溶胶基底具有生物相容性好、制备简便、价格低廉、表面增强拉曼光谱活性高等特点，但聚集纳米银溶胶基底稳定性和重现性有待改善。2-巯基吡啶分子具有较强的表面增强拉曼光谱活性，可以作为表面增强拉曼光谱的探针分子。基于纳米银ー2-巯基吡啶表面增强拉曼光谱測定胱氨酸的方法尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是为克服现有技术的不足，而提供ー种用表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法。该方法选择性好、稳定性好、灵敏度高，操作简便，试剂易得。实现本发明的目的技术方案是在pH 6. 6的磷酸氢ニ钠-磷酸ニ氢钠缓冲溶液中，纳米银分散均匀，加入2-巯基吡啶溶液时，拉曼信号极弱；但当加入氯化钠溶液后，纳米银发生聚集，2-巯基吡啶吸附在纳米银聚集体表面产生表面增强拉曼散射效应。在选定条件下，2-巯基吡啶浓度与表面增强拉曼强度增强值呈良好线性关系。当有胱氨酸存在吋，可导致2-巯基吡啶分子的表面增强拉曼散射峰強度线性减弱，据此可建立測定胱氨酸的定量分析方法。用表面增强拉曼光谱測定胱氨酸的方法，包括如下步骤
(O制备已知浓度的胱氨酸标准测试体系于5 mL刻度试管中，依次加入350 1000 19.9 mg/L纳米银溶液、30 200 μ 0.2 mo I/L pH 6.6的磷酸氢ニ钠-磷酸ニ氢钠缓冲溶液，10 100 μ 1·0Χ1(Γ5 mol/L 2-巯基吡啶溶液、10 60 μ 2. OXlO-5 mol/L胱氨酸，20 100 μ 2.0 mol/L氯化钠溶液，摇匀，用二次蒸馏水定容到2. O mL，置于超声波仪超声15分钟；
(2)按步骤(I)的方法不加胱氨酸制备空白对照体系；(3)取上述体系的溶液分别置于石英比色皿中，在拉曼光谱仪上，设定仪器參数，扫描获得体系的表面增强拉曼光谱，測定1002 cm-1处的表面增强拉曼散射峰強度值为I，同时測定空白对照体系的表面增强拉曼散射峰強度值为Jtl，计算△/ =I0- I'
(4)以ΛJ对胱氨酸的浓度关系做工作曲线；
(5) 依照步骤(I)的方法制备待检测样品分析溶液，其中加入的胱氨酸标准溶液替换为被测样品溶液，并按步骤(3)的方法測定被测样品分析溶液的表面增强拉曼散射峰强度值
为i样品，计算样品=Aゴ样品；
(6)依据步骤(4)的工作曲线，计算出被测样品中胱氨酸的含量。所述的胱氨酸标准溶液配制方法是每100毫克胱氨酸标准品加O. I mol/L盐酸溶液10 mL使溶解，再用二次蒸馏水稀释至需要的浓度。本发明的优点是
与已有的方法相比，本測定方法的仪器简单，选择性好、稳定性好、灵敏度高，操作简便，试剂易得。
图I为本发明具体实施方式
中的部分表面增强拉曼散射光谱图。图中，a:是空白对照体系，含有7. 46 mg/L纳米银溶液-pH 6.6磷酸氢ニ钠-磷酸ニ氢钠缓冲溶液-2. O X 10_7 mol/L 2-巯基吡啶溶液-O. 07 mol/L氯化钠溶液；b :标准测试体系，含有7. 46 mg/L纳米银溶液-pH 6.6磷酸氢ニ钠-磷酸ニ氢钠缓冲溶液-2. O X 10_7 mol/L 2-巯基吡啶溶液-O. 07 mol/L氯化钠溶液-2. O X 10_7 mol/L胱氨酸标准溶液；c :标准测试体系，含有7. 46 mg/L纳米银溶液-pH 6.6磷酸氢ニ钠-磷酸ニ氢钠缓冲溶液-2. OX 10_7 mol/L 2-巯基吡啶溶液-O. 07 mol/L氯化钠溶液-6. OX 10_7 mol/L胱氨酸标准溶液。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进ー步的阐述。实施例
用表面增强拉曼光谱測定胱氨酸的方法，包括如下步骤
(1)胱氨酸标准测试体系制备在5mL刻度试管中，依次加入750 μ 19.9 mg/L纳米银溶液，100 μ 0.2 mol/L pH 6.6的磷酸氢ニ钠-磷酸ニ氢钠缓冲溶液，40 μ I. 0Χ10_5mol/L 2-巯基吡啶溶液，10、20、30、50、60 μ 2. OXlO-5 mol/L 胱氨酸，70 μ 2. O mol/L氯化钠溶液，摇匀，用二次蒸馏水定容到2. O mL，置于超声波仪超声15分钟；
(2)按步骤(I)的方法不加胱氨酸制备空白对照体系；
(3)取上述体系的溶液分别置于石英比色皿中，在DXRsmart拉曼光谱仪上，设定仪器參数，扫描获得体系的表面增强拉曼散射光谱，測定1002 cm—1处的表面增强拉曼散射峰强度值为/，同时测定空白对照体系的表面增强拉曼散射峰強度值为Z0,计算Λ J =I0- I'
(4)以ΛJ对胱氨酸的浓度关系做工作曲线，获得工作曲线为Λ/=1. 38 C+51.2，胱氨酸浓度C的单位为mol/L，线性范围为I. OX 10_7 6. OX 10_7 mol/L ；
(5)制备两个样品测试体系取规格为50mg的胱氨酸片20片,称定重量为I. 3262 g,研细，称取O. 0652g两份，置于100 mL容量瓶中，按每IOOmg胱氨酸加入10 mL O. I mol/L盐酸溶液，振摇，使胱氨酸溶解，再用二次蒸馏水稀释至100 mL，混匀；移取I. O mL，置于10mL容量瓶中，再用二次蒸馏水稀释至10 mL，混匀；再移取O. 2 mL，依照步骤(I)的方法制备待检测样品分析溶液，其中加入的胱氨酸标准溶液替换为被测样品，并按步骤(3)的方法测定被测样品分析溶液的表面增强拉曼散射峰強度值为，计算NI關ニI0-I關;
(6)依据步骤(4)的工作曲线，计算出被测样品中胱氨酸的含量为99. 89%，99. 92%。
权利要求
1.用表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法，其特征是包括如下步骤 (1)制备胱氨酸的标准测试体系于5mL刻度试管中，依次加入350 1000 ML 19. 9mg/L纳米银溶液、30 200 ML 0.2 mo I/L pH 6.6的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液，10 100 ML LOXKT5 mol/L 2-巯基吡啶溶液、10 60 ML 2. OXKT5 mol/L胱氨酸，20 100 ML 2.0 mol/L氯化钠溶液，摇匀，用二次蒸馏水定容到2. 0 mL，置于超声波仪超声15分钟； (2)按步骤(I)的方法不加胱氨酸制备空白对照体系； (3)取上述体系的溶液分别置于石英比色皿中，在拉曼光谱仪上，设定仪器参数，扫描获得体系的表面增强拉曼光谱，测定1002 cm-1处的表面增强拉曼散射峰强度值为I，同时测定空白对照体系的表面增强拉曼散射峰强度值为Jtl，计算△/ =I0- I' (4)以AJ对胱氨酸的浓度关系做工作曲线； (5)依照步骤(I)的方法制备待检测样品分析溶液，其中加入的胱氨酸标准溶液替换为被测样品溶液，并按步骤(3)的方法测定被测样品分析溶液的表面增强拉曼散射峰强度值为I样品，计算A J样品=A-J样品； (6)依据步骤(4)的工作曲线，计算出被测样品中胱氨酸的含量。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征是所述的胱氨酸标准溶液配制方法是每100毫克胱氨酸标准品加0.1 mol/L盐酸溶液10 mL使溶解，再用二次蒸馏水稀释至需要的浓度。
全文摘要
本发明公开了一种用表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法，包括如下步骤1、制备已知浓度胱氨酸的分析溶液，测定其1002cm-1处的表面增强拉曼散射峰强度值为I；2、制备不含胱氨酸的空白对照体系，亦测定其表面增强拉曼散射峰强度值为I0；3、计算ΔI=I0-I；4、以ΔI对胱氨酸的浓度C做工作曲线；5、制备被测样品分析溶液，测定其表面增强拉曼散射峰强度值为I样品，计算ΔI样品=I0-I样品；6、依据工作曲线，计算出被测样品中的胱氨酸的浓度。本发明与已有的方法相比，本测定方法操作简便，试剂易得，灵敏度高，选择性好。
文档编号G01N21/65GK102661943SQ201210123459
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月25日 优先权日2012年4月25日
发明者梁爱惠, 蒋治良, 韦燕燕 申请人:广西师范大学