专利名称：多肽类提取物的特征图谱测定方法
技术领域：
本发明涉及一种多肽类提取物的质量控制方法，具体涉及一种多肽类提取物的特征图谱测定方法。
背景技术：
多组分生化药的主要成分包括多肽，氨基酸，核酸等物质，这些物质在紫外光区，在一定的色谱条件下，其中各个色谱峰的相对保留时间等参数具有一定的特征性。同时，目前对于多组分生化药的质量分析和控制的手段还很落后，质量标准还不完善，对于它的鉴别 还多采用茚三酮显色反应，茚三酮反应是指在加热条件下，氨基酸或多肽与茚三酮反应生成紫色化合物的反应，此反应虽然具有灵敏度高的优点，但在应用时却不能够区分不同来源的肽，无法准确反映现有多组分生化药的质量状况。为此，我们将特征图谱方法应用到多组分生化药的鉴别中，从而更全面有效地对此类产品进行质量控制。
发明内容
本发明的目的是提供一种多肽类提取物的特征图谱测定方法，该方法中供试品特征图谱与标准特征图谱相似度经计算大于0. 8，本方法能够区分不同来源的多肽，对于提高此类产品的质量标准，保证药品质量，保障患者用药安全都有重要的意义。上述的目的通过以下的技术方案实现
一种多肽类提取物的特征图谱测定方法，该方法包括如下步骤
(1)取不少于3批的多肽类提取物，加水配成Iml含有多肽类提取物5mg浓度，精密吸取IW注入液相色谱仪，按照指定色谱条件进行试验，将生成的图谱导入中药色谱特征图谱相似度评价系统，得到标准特征图谱；
(2)取对照品和供试品加水配成适宜浓度的溶液，各精密吸取1W，分别注入液相色谱仪，按所述的指定色谱条件测定，记录得供试品特征图谱；
(3 )通过将供试品特征图谱和标准特征图谱进行相似度比较进行测定。所述的多肽类提取物的特征图谱测定方法，所述的指定色谱条件为高效液相色谱法测定，色谱柱选择C8，C18，ACQUITYULC HSS T3或同类型BH!柱，流动相A : 1%。 1%三氟乙酸水溶液，流动相B :水、乙腈或甲醇、三氟乙酸或甲酸的比例为40(Tl00 =100^400 (Tl梯度洗脱，检测波长为21(T390nm，柱温2(T55°C，理论塔板数按对照品峰计算应不低于5000。所述的多肽类提取物的特征图谱测定方法，所述的梯度洗脱为0到4. 5分钟流动相A体积比为98%，流动相B的体积比为2% ；4. 5到7. 5分钟流动相A体积比由98%线性下降到70%，流动相B体积比由2%线性上升到30% ；7. 5到8分钟流动相A体积比由70%线性上升到98%，流动相B体积比由30%线性下降到2% ；8到10分钟维持上述比例进行洗脱，总洗脱时间为10分钟；流速为0. 2^0. 7ml/min。所述的多肽类提取物的特征图谱测定方法，供试品特征图谱与标准特征图谱相似度大于0. 8。有益效果本发明能够对不同来源的多肽，尤其是从动物骨骼，内脏，腺体提取的动物源性多肽进行区分，依据此方法可以进一步提高多组分生化药的质量标准，对多组分生化药的质量起到一定的控制作用。
附图I是标准特征图谱。其中参数设置为积分参数峰宽4. 90阈值4. 80积分时间I. (T5. 0 相似度计算参数自动匹配时间漂移1.0
具体实施例方式 实施例I:
一种多肽类提取物的特征图谱测定方法，该方法包括如下步骤
(1)取不少于3批的多肽类提取物，加水配成适宜浓度，精密吸取IW注入液相色谱仪，按照一定色谱条件进行试验，将生成的图谱导入中药色谱特征图谱相似度评价系统，得到标准特征图谱；
(2)取对照品和供试品加水配成适宜浓度的溶液，各精密吸取1W，分别注入液相色谱仪，按一定的色谱条件测定，记录得供试品特征图谱；
(3 )将供试品特征图谱和标准特征图谱进行相似度比较。所述的多肽类提取物的特征图谱测定方法，所述的一定的色谱条件为高效液相色谱法测定，色谱柱可以选择C8，C18，ACQUITYULC HSS T3或同类型册H柱，流动相A :1%。 1%三氟乙酸水溶液，流动相B :水、乙腈或甲醇、三氟乙酸或甲酸的比例为40(T100 100^400 :(Tl梯度洗脱，检测波长为21(T390nm，柱温2(T55°C，理论塔板数按对照品峰计算应不低于5000。实施例2:
所述的多肽类提取物的特征图谱测定方法，取不少于3批的注射用骨肽I成品，按时实施例I所述的一定的色谱条件进行测定，将生成的图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004，I. OA版)，生成标准特征图谱。取制作标准特征图谱以外的注射用骨肽I成品，按下面的试验方法试验，
对照品溶液取黄嘌呤对照品适量，精密称定，加水制成每Iml中含黄嘌呤约3. 6 ii g的溶液。供试品溶液取本品,加水制成每Iml含多肽类物质约5mg的溶液，作为供试品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定。色谱条件与系统适用性试验仪器Waters ACQUITY UPLC ;用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱(ACQUITY UPLC HSS T3或同类型册H柱);流动相A : 1%。三氟乙酸水溶液，流动相B :水乙腈三氟乙酸(400 :100 :0. 5)，超声15分钟；按表I进行线性梯度洗脱，流速为每分钟0. 3ml ;检测波长为257nm ;柱温37°C ;采样速率5点/秒。理论塔板数按黄嘌呤峰计算应不低于5000。表I梯度洗脱表
时间(分钟) I流动相A(%) I流动相B(%) I曲线0 4. 598~26
4. 5 7. 5 丨98 70丨2 30丨权利要求
1.一种多肽类提取物的特征图谱测定方法，其特征是该方法包括如下步骤 (1)取不少于3批的多肽类提取物，加水配成Iml含有多肽类提取物5mg浓度，精密吸取 μ 注入液相色谱仪，按照指定色谱条件进行试验，将生成的图谱导入中药色谱特征图谱相似度评价系统，得到标准特征图谱； (2)取对照品和供试品加水配成适宜浓度的溶液，各精密吸取 μ ，分别注入液相色谱仪，按所述的指定色谱条件测定，记录得供试品特征图谱； (3 )通过将供试品特征图谱和标准特征图谱进行相似度比较进行测定。
2.根据权利要求I所述的多肽类提取物的特征图谱测定方法，其特征是所述的指定色谱条件为高效液相色谱法测定，色谱柱选择C8，C18，ACQUITYULC HSS Τ3或同类型BEH柱，流动相A :1%。 1%三氟乙酸水溶液，流动相B:水、乙腈或甲醇、三氟乙酸或甲酸的比例为400 100 =100^400 :0 1梯度洗脱，检测波长为21(T390nm，柱温20 55°C，理论塔板数按对照品峰计算应不低于5000。
3.根据权利要求2所述的多肽类提取物的特征图谱测定方法，其特征是所述的梯度洗脱为O到4. 5分钟流动相A体积比为98%，流动相B的体积比为2% ；4. 5到7. 5分钟流动相A体积比由98%线性下降到70%，流动相B体积比由2%线性上升到30% ；7. 5到8分钟流动相A体积比由70%线性上升到98%，流动相B体积比由30%线性下降到2% ；8到10分钟维持上述比例进行洗脱，总洗脱时间为10分钟；流速为O. 2^0. 7ml/min。
4.根据权利要求I或2或3所述的多肽类提取物的特征图谱测定方法，其特征是供试品特征图谱与标准特征图谱相似度大于O. 8。
全文摘要
一种多肽类提取物的特征图谱测定方法。目前，对于多组分生化药的质量分析和控制的手段还很落后，它的鉴别还多采用茚三酮显色反应，此反应不能区分不同来源的肽，无法准确反映现有多组分生化药的质量状况。本发明包括(1)取不少于3批的多肽类提取物，加水配成适宜浓度，精密吸取1μl注入液相色谱仪，按照一定色谱条件进行试验，将生成的图谱导入中药色谱特征图谱相似度评价系统，得到标准特征图谱；(2)取对照品和供试品加水配成适宜浓度的溶液，各精密吸取1μl，分别注入液相色谱仪，按一定的色谱条件测定，记录得供试品特征图谱；(3)将供试品特征图谱和标准特征图谱进行相似度比较。本发明的方法用于多肽类提取物的特征图谱测定。
文档编号G01N30/02GK102680602SQ20121016400
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月24日 优先权日2012年5月24日
发明者尹桂香 申请人:尹桂香